槲皮素通过促进Nrf2转位拮抗人肝细胞酒精性氧化损伤

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧化酶(HO-1)对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应及相关信号通路。方法乙醇(100 mmol/L)孵育的人原代肝细胞经槲皮素(100μmol/L)处理24h后,测定细胞HO-1活性、Nrf2转位表达及细胞相应的氧化损伤程度;在此基础上,联合应用HO-1及各(MAPK)通路抑制剂,观察上述指标的变化。结果槲皮素处理使HO-1进一步升高,并明显减轻乙醇孵育所导致的细胞GSH耗竭、MDA升高及胞内门冬氨酸转氨酶(AST)与乳酸脱氢酶(LDH)的释放;HO-1诱导剂血红素也具有类似的效应,而HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ及p38与细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)抑制剂(SB203580与PD98059)则明显抑制了Nrf2的转位活化及槲皮素的保护效应。结论槲皮素通过诱导HO-1保护肝细胞免受酒精性氧化损伤,其信号通路与p38及ERK活化促使Nrf2转位入核启动HO-1表达有关。     

槲皮素对酒精性肝损伤的防护作用及其与I型血红素氧化酶关系的研究

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用及其与I型血红素氧化酶(HO-1)的关系。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。分别在酒精染毒前、后及同时用50μmol/L槲皮素作用,作用结束后检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;槲皮素预作用同时加入HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ),作用结束后测上述指标。结果酒精暴露前2 h经50μmol/L槲皮素干预,肝细胞LDH、AST和MDA水平较酒精组明显降低,GSH、SOD和CAT水平较酒精组明显升高;槲皮素预干预同时加ZnPPⅨ可抑制HO-1活性,LDH、AST和MDA水平较未加有明显升高,而GSH、SOD和CAT水平则明显降低。结论槲皮素预干预对肝细胞酒精性氧化损伤具有防护作用,其保护效应可能通过HO-1介导。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞HO-1蛋白表达及活性的影响

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞中I型血红素氧化酶(HO-1)蛋白表达及酶活性的影响。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。用不同剂量(25、50、100、200 mol/L)槲皮素作用大鼠原代肝细胞12 h,或用50 mol/L槲皮素作用肝细胞不同时间(2～12 h)后,提取肝细胞微粒体,检测HO-1酶活性变化,并用WesternBlot方法检测HO-1蛋白表达水平的变化。结果大鼠原代肝细胞经50～200 mol/L槲皮素处理12 h,或用50 mol/L槲皮素处理4～12 h后,HO-1蛋白表达水平和酶活性与对照组比较明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够诱导大鼠原代肝细胞的HO-1蛋白表达,提高肝细胞内HO-1的酶活性。     

胆红素的抗氧化作用及血红素加氧酶对胆红素的调控作用

目的在间二硝基苯(m-DNB)诱导的大鼠氧化损伤的基础上,观察胆红素、血红素加氧酶的变化,并分析两者在抗氧化方面的作用和意义。方法用5,10,20 mg/kg的m-DNB染毒大鼠后,分别于2周和4周测定大鼠血清胆红素(bilirubin,BR)含量及肝脏微粒体血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)活力及血清GSSG/GSH比值。另用一定量的m-DNB加锌卟啉(ZnPP)或血红素(heme)染毒,1周后测定大鼠血清BR含量、HO活力和GSSG/GSH比值。结果染毒2周时,各染毒组BR含量和HO活力均明显上升,且与m-DNB剂量呈显著正相关(P<0.01),染毒4周时,BR含量明显降低,仅在高剂量组仍高于对照组,低、中剂量组回落至正常水平,但与m-DNB仍呈显著相关(P<0.01);HO活力在低、中剂量组进一步升高,而高剂量组回落至正常水平。同时,m-DNB ZnPP组和m-DNB heme组HO活力显著低于对照组和m-DNB染毒组(P<0.05),BR水平高于对照组而低于m-DNB染毒组(P<0.05),GSSG/GSH比值高于对照组和m-DNB染毒组(P<0.05)。结论BR和HO两者均具有抗氧化作用,提示,HO在机体氧化应激时对胆红素可能具有双相调控作用。     

槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞的保护作用

目的研究大鼠肝细胞对槲皮素的吸收以及吸收后对氧化应激损伤的作用。方法用高效液相色谱法（HPLC）测定原代培养的大鼠肝细胞对槲皮素的吸收。于培养液中加入过氧化氢诱导肝细胞氧化应激，观察槲皮素预处理后，氧化应激肝细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放量、培养液总抗氧化能力（T-AOC）、细胞匀浆脂质过氧化终产物丙二醛（MDA）含量以及细胞凋亡率的变化。结果大鼠肝细胞对槲皮素有一定量的吸收，24小时达到高峰。过氧化氢可导致大鼠肝细胞损伤，培养液中LDH活性增加、T-AOC增强，细胞匀浆的MDA含量增加，细胞凋亡率增高。槲皮素预处理能减少氧化应激肝细胞LDH的释放，进一步增强T-AOC，降低MDA含量，并降低细胞凋亡率。结论大鼠肝细胞对槲皮素有一定量的吸收，槲皮素预处理对氧化应激肝细胞有一定的保护作用。     

急性酒精性肝损伤与肝细胞凋亡的研究

目的研究急性酒精性肝损伤肝细胞凋亡,探讨其发病机制。方法将30只大鼠随机分成酒精组(20只),对照组(10只)。给酒精组大鼠按体重15 g/kg 47.5%酒精一次性灌胃,给对照组大鼠按体重15 g/kg生理盐水一次性灌胃。灌胃后48 h处死大鼠,用光镜、TUNEL、电镜检查肝组织。结果酒精组肝损伤、肝细胞凋亡检出率均为100%,凋亡肝细胞核数占肝细胞核总数的46.8%。生理盐水组未发现肝损伤病变,仅3例个别视野近肝小叶中央静脉处见单个凋亡细胞。结论肝细胞凋亡与急性酒精性肝损伤有一定的关系。     

槲皮素固体分散体对小鼠四氯化碳急性肝损伤氧化应激的影响

目的 研究槲皮素固体分散体对小鼠四氯化碳(CCl4)急性肝损伤氧化应激的影响.方法 槲皮素固体分散体给予小鼠连续灌胃7d,通过腹腔注射CCl4诱导小鼠急性肝损伤,计算肝指数,测定小鼠血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)水平及肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,观察肝组织病理学变化.结果 槲皮素固体分散体能降低CCl4致肝损伤小鼠肝指数,降低血清中GPT和GOT水平,提高肝组织中SOD和GSH-Px活性,降低MDA含量,明显改善肝组织损伤程度.结论 槲皮素固体分散体对小鼠CCl4急性肝损伤具有保护作用,并能减轻小鼠肝损伤氧化应激反应.     

槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞代谢组的影响

目的探讨槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞代谢的影响。方法用无血清培养液原代培养大鼠肝细胞,以H2O2诱导氧化应激。培养细胞分为空白对照组(仅用培养液培养)、槲皮素组(以20μmol/L槲皮素处理肝细胞24h)、H2O2组(以8.8mmol/LH2O2作用6h诱导细胞产生氧化应激)、槲皮素+H2O2组(先用20μmol/L槲皮素预处理24h后,再用8.8mmol/LH2O2诱导氧化应激)4组。实验结束后,收集各组培养液,离心,以核磁共振谱仪检测培养液中代谢物的变化情况。结果与空白对照组比较,最显著的变化包括:(1)槲皮素和槲皮素+H2O2组二甲胺含量增加;(2)H2O2、槲皮素和槲皮素+H2O2组乙酸含量增加,丙酮酸含量减少。其次的变化包括:(1)槲皮素组乳酸减少,谷胺酰胺增加;(2)H2O2组乳酸、牛磺酸增加,组氨酸减少;(3)槲皮素+H2O2组乳酸、牛磺酸和谷胺酰胺增加,组氨酸减少。结论槲皮素可通过加速糖酵解、促进脂肪酸氧化供能发挥抗氧化应激作用,对某些含氮化合物的代谢也具有调节作用。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

白藜芦醇诱导HO-1对酒精性肝细胞的保护作用

目的白藜芦醇(resveratrol)是非黄酮类的多酚化合物,具有多种有益的生物学效应。本研究目的观察白藜芦醇对酒精导致的人原代肝细胞损伤的保护作用及机制。方法经体外灌流、分离培养人原代肝细胞。测定白藜芦醇20μmol/L对酒精致肝细胞LDH释放率的影响。人原代肝细胞给予不同受试物(100 mmol/L酒精,20μmol/L白藜芦醇,25μmol/L Znpp9(锌原卟啉Ⅸ:zinc protoporphyrin-IX))24h,观察HO-1酶活性变化,孵育上清液AST,LDH释放水平,肝细胞内MDA,GSH含量变化。结果白藜芦醇可显著升高酒精致肝细胞LDH释放率的EC50(从700 mmol/L上升至1050 mmol/L);白藜芦醇可使肝细胞HO-1酶活性明显增加,并可显著抑制酒精导致的肝细胞AST,LDH释放,降低肝细胞内MDA水平,提高GSH含量。但是HO-1抑制剂Znpp9却明显降低了白藜芦醇对酒精导致的肝细胞损伤的保护作用。结论白藜芦醇对酒精导致的人肝细胞损伤具有保护作用,这种保护作用与其诱导的HO-1酶活性升高有关。     

槲皮素对缺血再灌注损伤肝脏的保护作用

目的 :　探讨槲皮素对大鼠缺血再灌注损伤肝脏的保护作用。方法 :　灌胃给予槲皮素及作为阳性对照的维生素 C,结扎后 3 0 min再开放肝门血管造成肝脏缺血再灌注损伤 ,分别测定血浆谷丙转氨酶 (GPT)、谷草转氨酶 (GOT)活性、丙二醛 (MDA)浓度 ,肝脏槲皮素、MDA、还原型谷胱甘肽 (GSH)含量和黄嘌呤氧化酶 (XO)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)、超氧化物歧化酶 (SOD)活性以及肝脏总抗氧化力、活性氧 (ROS)含量、DNA断裂率。结果 :　肝脏缺血再灌注后GPT、GOT活性、MDA水平升高 ,肝脏 XO活性、MDA和 ROS含量以及 DNA断裂率增加 ,而SOD、GSH- Px活性、GSH含量及总抗氧化力降低。槲皮素灌胃后肝脏中槲皮素浓度升高 ,血浆GPT、GOT活性及 MDA浓度降低 ,肝脏 ROS含量降低 ,GSH含量及总抗氧化力升高 ,SOD、GSH- Px活性有所恢复 ,对肝脏 DNA断裂发生无明显影响。维生素 C灌胃后对缺血再灌注损伤肝脏也具有保护作用。结论 :　槲皮素对大鼠缺血再灌注损伤肝脏具有明显的保护作用 ,其机制与增强肝脏抗氧化体系功能有关。     

槲皮素对小鼠腹腔巨噬细胞氧化应激反应与功能的影响

目的探讨槲皮素对巨噬细胞氧化应激反应与功能的调节作用。方法采用原代培养小鼠腹腔巨噬细胞和LPS诱导氧化应激,以20~80μmol.L-1槲皮素处理48 h,测定细胞培养上清液抗氧化力、一氧化氮(NO)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞活性氧含量(ROS)、MDA水平以及吞噬功能的变化。结果LPS对照组细胞培养上清液抗氧化力、NO浓度及LDH活性分别高于正常对照组20.6%、706.6%、27.6%;同时细胞ROS含量、NOS活性、MDA水平也分别高于正常对照组72.9%、331.3%、131.5%,细胞培养上清墨汁潴留也显著增加(A430由4.7±0.6增加到5.5±0.3,P<0.01)。施加20~80μmol.L-1的槲皮素后,与LPS对照组比较,上清抗氧化力升高31.0%~50.6%,上清NO浓度下降18.0%~87.0%,细胞ROS含量、NOS活性及MDA水平分别下降37.4%~72.1%、10.1%~25.4%、15.5%~74.8%。上清LDH活性在20~50μmol.L-1槲皮素组下降21.9%~24.3%,在80μmol.L-1槲皮素组则升高19.6%。细胞培养上清墨汁潴留减少,与正常对照组比较差异无显著性。结论一定浓度的槲皮素可增强小鼠巨噬细胞的抗氧化能力和吞噬能力,并降低氧化应激反应。     

急性酒精暴露对人原代肝细胞HO-1 mRNA表达的影响

目的 :　研究急性酒精暴露对人原代肝细胞 HO- 1 m RNA表达的影响。方法 :　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察酒精对人原代肝细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放及 GSH含量的变化 ,用 RT- PCR方法检测酒精对人原代肝细胞 HO- 1 m RNA的表达。结果 :　急性酒精暴露导致人原代肝细胞上清液中释放的 AST增加 ,并呈明显的剂量效应和时间效应关系 ;此外 ,在 1 0 0 mmol/L乙醇 2 4 h暴露下 ,肝细胞中的 GSH明显降低 ,HO- 1 m RNA表达开始明显增加 ,3～ 9h之间达到最高峰 ,随后开始降低。结论 :　在 2 5～ 1 0 0 mmol/L范围内 ,急性酒精暴露导致人原代肝细胞明显的氧化损伤 ,且影响 HO- 1 m RNA表达。     

槲皮素对高脂膳食小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨高脂膳食对小鼠以及槲皮素对高脂膳食小鼠学习记忆能力的影响。方法 60只昆明种雄性小鼠,随机分为对照组(正常膳食),高脂膳食组(含18%猪油),槲皮素低剂量组(高脂膳食+0.005%槲皮素)和槲皮素高剂量组(高脂膳食+0.01%槲皮素)。12w后进行Morris水迷宫测试小鼠的学习记忆能力,检测小鼠全血和脑组织的自由基和氧化应激指标并用荧光定量PCR检测海马脑源性神经生长因子(BDNF)的相对表达量。结果高脂膳食使小鼠的学习记忆能力显著下降(P<0.05),脑组织抗氧化能力显著降低(P<0.01),血浆和脑组织丙二醛(MDA)、自由基水平显著升高(P<0.05),海马BDNF的相对表达显著降低(P<0.05)。添加槲皮素后脑部的氧化还原状况得到显著改善(P<0.05)槲皮素高剂量组BDNF基因的相对表达量显著升高(P<0.05)。结论高脂膳食可导致慢性氧化应激,损伤小鼠的学习记忆能力。槲皮素可改善脑部氧化还原状态,增加BDNF的表达,从而改善小鼠的学习和记忆能力。[营养学报,2012,34(4):353-357]     

褪黑素降低亚硒酸钠对小鼠的肝毒性

目的研究褪黑素对亚硒酸钠致小鼠肝毒性的影响。方法 30只雄性昆明小鼠(体重18~20 g),随机分为3组,每组10只。对照组,每日灌胃生理盐水;亚硒酸钠组和亚硒酸钠+褪黑素组,每日灌胃亚硒酸钠6 mg/kg bw。2 h后,对照组和亚硒酸钠组灌胃2%的乙醇水溶液;亚硒酸钠+褪黑素组,灌胃褪黑素15 mg/kg bw(溶解在2%的乙醇水溶液)。连续6 d。检测小鼠血清转氨酶,肝脏丙二醛含量,总抗氧化能力,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力、及肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽硫转移酶活力,研究褪黑素对亚硒酸钠致肝毒性、氧化应激和调节含硒酶和二相酶的影响。结果与结论褪黑素可以减轻毒性剂量亚硒酸钠产生的氧化应激,降低亚硒酸钠的毒性,且不降低其预防癌症的疗效。