Hath1在非黏液性结肠腺癌发病中的抑癌基因作用

目的：探讨Hath1基因在结肠腺癌发病中的潜在作用。方法：从48例非黏液性结肠腺癌患者的标本中取材,石蜡切片染色后观察正常结肠黏膜、癌旁黏膜和结肠腺癌组织中杯状细胞数量的变化;用定量实时逆转录PCR、免疫组织化学和Western blotting分别检测这3种组织中Hath1基因和Muc2基因的mRNA和蛋白表达。将Hath1基因转化至HT29人结肠癌细胞中,然后随机挑选3个转化了Hath1基因的克隆,用定量实时逆转录PCR检测Hath1和Muc2的mRNA表达,用Western blotting检测Hath1、Muc2、cyclin D1和p27蛋白的表达;通过软琼脂克隆形成实验和裸鼠移植实验,观察将Hath1基因转化到HT29细胞后, HT29细胞增殖能力的变化。结果：在非黏液性结肠腺癌组织中未发现杯状细胞,并且Hath1基因和Muc2基因的mRNA和蛋白表达均显著下调（P<0.05）;在HT29 细胞中,Hath1基因下调cyclin D1蛋白的表达（P<0.05）,上调p27（P<0.05）和Muc2（P<0.01）蛋白的表达;过表达Hath1基因的HT29细胞在体外的克隆形成显著受到抑制（P<0.01）,移植至裸鼠时移植肿瘤的体积显著缩小（P<0.01）。 结论：Hath1基因表达的下调可能与非黏液性结肠腺癌的发生有关,Hath1基因在非黏液性结肠腺癌的发生中可能起着抑癌基因的作用。     

Hath1基因抑制结肠癌细胞的增殖

目的 研究Hath1基因对结肠癌细胞增殖的影响.方法 将重组质粒pcDNA3.1(+)-Hath1转化至HT29结肠癌细胞中,随机挑选3个过表达Hath1的HT29细胞克隆,通过定量实时RT-PCR方法 检测Ham1 mRNA、Muc2 mRNA的表达:Western blotting检测Hath1、Muc2、cyclinD1和p27表达;通过软琼脂克隆形成实验和裸鼠移植实验,观察Hath1基因对HT29细胞增殖能力的影响.结果 Hath1基因可上调p27和下调cyclinD1的表达,抑制HT29细胞的增殖.结论 Hath1基因可能在结肠癌的发病中扮演抗癌基因的作用.     

Hath1基因真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

目的：构建携带Hath1基因的真核表达载体并转染神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）,观察其在SH-SY5Y细胞中的表达。方法： 从人全血中提取DNA,克隆Hath1基因,同时扩增色荧光蛋白（GFP）gfp基因;利用引物GFP-R和Hath1-F扩增融合基因gfp-Hath1,克隆至pMD18-T中;经Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ限制性内切酶酶切,构建重组表达质粒pCDNA3.1(+)::gfp-Hath1;转染SH-SY5Y细胞。结果：PCR扩增,融合基因gfp-Hath1扩增条带大小为2 023 bp,表明成功扩增gfp-Hath1融合基因。经双酶切鉴定,成功构建真核表达质粒pCDNA3.1(+)::gfp-Hath1。采用间接免疫荧光技术在荧光显微镜下观察到5H-SY5Y细胞中有GFP表达。结论：本研究成功地使Hath1基因在SH-SY5Y细胞中得到表达,为转染耳蜗组织的实验及探索治疗耳聋新方法奠定基础。     

Hath1、P27和CyclinD1基因在恶性肿瘤中的表达及相关性研究

癌症是一种基因疾病,正常人体内有原癌基因和抑癌基因,几乎所有的癌基因、抑癌基因的功能效应最终都是从不同的途径汇聚到细胞周期机制上.CyclinD1和P27分别是细胞周期的正负调控因子,对G1/S关键性限制点进行调控.Hath1是一个新发现的抑癌基因,研究发现在结肠癌细胞中Hath1可能通过上调P27的表达和下调Cyclin D1的表达来抑制结肠癌细胞的增殖,因此Hath1可能在其他肿瘤中也可能通过同样方式达到抑制癌细胞的增殖,但国内外尚无相关报道.为此本文就Hath1、P27和CyclinD1基因在肿瘤中的表达及相互关系的研究现状作一综述.     

Hath1基因在增生性息肉与锯齿状腺瘤/息肉中的表达及鉴别意义

目的 探讨Hath1基因在不同病变组织中的表达,分析其在增生性息肉(HP)和无蒂锯齿状腺瘤/息肉(SSA/P)鉴别诊断中的意义.方法 选择2015年4月—2019年12月于成都三六三医院接受结肠镜检查的患者,对其影像资料进行回顾分析.共筛选出35例HP、63例SSA/P、3例SSA/P伴异型增生、5例传统锯齿状腺瘤(T...     

Hath1基因的重组腺病毒转染新生小鼠耳蜗成纤维细胞的初步研究

目的检测含有人Hath1基因的重组腺病毒Ad-DsRed2-Hath1对新生小鼠耳蜗成纤维细胞的转染情况及Hath1基因在新生小鼠耳蜗成纤维细胞中的表达情况。方法培养新生小鼠耳蜗成纤维细胞,用含有目的基因Hath1的重组腺病毒Ad-DsRed2-Hath1对其进行转染,转染后24 h通过荧光显微镜观察新生小鼠耳蜗成纤维细胞的转染情况,并通过免疫荧光的方法检测Hath1基因在新生小鼠耳蜗成纤维细胞中的表达情况。结果含有人Hath1基因的重组腺病毒Ad-DsRed2-Hath1能高效转染新生小鼠耳蜗成纤维细胞,Hath1基因在新生小鼠耳蜗成纤维细胞中能有效表达。结论含有人Hath1基因的重组腺病毒Ad-DsRed2-Hath1对新生小鼠耳蜗成纤维细胞的高效转染和有效表达为研究Hath1基因转染对正常及致聋小鼠耳蜗效应的实验奠定了基础。     

结肠腺癌与正常黏膜组织RP基因mRNA表达差异分析

目的:探讨结肠腺癌与正常黏膜组织中核糖体蛋白(Ribosomal protein,RP)基因mRNA的表达差异.方法:用基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression,SAGE)方法对结肠腺癌组织及正常黏膜组织中核糖体蛋白基因mRNA的表达进行分析.结果:在结肠腺癌和正常黏膜组织中共出现了101种RP基因或RP类似基因的表达,其中有6种仅在正常黏膜中表达,有17种仅在腺癌中表达,41种RP基因在癌组织中表达明显升高.结论:在结肠腺癌和正常黏膜中均有多种RP基因表达,但两者之间存在明显差别.     

细胞周期素D1在结肠癌中的表达

目的 探讨细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ１与ｐ５３基因在结肠癌中的表达意义及其关系。方法 应用原位杂交技术和免疫组织化学技术检测结肠癌中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因ｍＲＮＡ和ｐ５３蛋白的表达。统计处理采用卡方检验。结果 发现结肠癌组织和癌旁组织中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达阳性率分别为６３．４％（４０／６３）及４４．４４％（２８／６３）,两者之间差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达程度与癌组织分化程度及临床分期有关,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与其他临床病理指标无关（Ｐ〉０．０５）。ｐ５３蛋白在结肠癌中阳性率为３８．０９％（２４／６３）,ｐ５３阳性的患者其ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达较之ｐ５３阴性者为高,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。结论 ｃｙｃｌｉｎＤ１的过表达及ｐ５３突变在结肠癌的癌变     

真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达术

目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1，并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板，经PCR获得Hath1-cDNA，将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoI、EcoRI双酶切，酶切产物琼脂糖凝胶电泳，割胶纯化，前者回收1065bp片断，后者回收大片断，再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接，转化感受态DH5q细胞，挑选单克隆，提取质粒，将所提取的质粒双酶切鉴定并测序。再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体Lipofectarnine^TM2000转染HEK293T细胞，观测其转染情况和目的基因的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1，该质粒能有效地转染HEK293T细胞，目的基因能有效表达。结论pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础。     

结肠息肉患者正常结肠黏膜上基因表达的改变

目的：与正常结肠黏膜相比较，结肠癌组织中许多基因的表达水平发生了变化。作最近报道了对于结肠癌患与非结肠癌患、有结肠癌家族史与无结肠癌家族史个体间，其大致正常的结肠黏膜基因也存在这种差别。该报道了对无结肠癌的结肠息肉患的研究。这些患在横结肠、升结肠、降结肠、乙状结肠或直肠上存在息肉。方法：以有或无结肠癌病史或家族史的结肠息肉患作为研究对象，从其外观正常的直肠乙状结肠黏膜处获取活组织标本，以无结肠息肉或无明确的结肠癌病史或家族史的患作为对照，比较两组患黏膜活检组织的基因表达谱。全面分析与以前研究中相同的15个基因的表达水平。结粜：不管是否有结肠癌病史或家族史，结肠息肉患组与对照组之间，其外观大致正常的直肠乙状结肠黏膜的基因表达存在显差异。结论：形态学大致正常的结肠黏膜，其基因表达模式的改变与腺瘤样息肉的发生有关。这些变化是否可以用来预测结肠癌发生的风险性尚需前瞻性研究确定。     

MicroRNA-21在扩张型心肌病患者血清中表达下调

目的 本文主要探讨血清microRNA(miR)-21/155/181a/18b在具有失代偿性心力衰竭症状的扩张型心肌病(扩心病)患者中的表达水平.方法 收集40例扩心病患者和30名健康对照者,通过实时免疫荧光定量PCR反应检测血清miRNA.分析miR-21等miRNA和其他临床指标如N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、超敏C-反应蛋白(hsCRP)、左室射血分数(LVEF％)、左室舒张末期内径(LVEDD)之间的相关性.结果 血清miR-21在扩心病患者中的相对表达量低于健康对照组(P＜0.01).在所有的试验者中,血清miR-21与LVEF％呈正相关,与LVEDD呈负相关(P＜0.001).结论 与健康对照者相比,血清心肌重构相关的miR-21在失代偿性心力衰竭的扩心病患者中表达下调,并与疾病的严重程度相关.     

可溶性大肠癌相关蛋白SCAP47的分离与鉴定

目的该研究通过差异显示技术确定大肠癌相关蛋白，以此制备相关抗体，枸建了大肠癌细胞磁选分离系统。方法提取大肠癌及自身正常对照组织可溶性蛋白，行SDS—PAGE电泳，分析癌与对照组织的差异蛋白条带，找出出现率最高的癌上调差异条带，计算分子量，并观察该条带在非大肠癌标本中的出现率，富集该蛋白并鉴定纯度。结果在分子量14KD～66KD，存在2—5条不等的蛋白差异条带，或表现为癌组织较正常组织高丰度表达，或显示正常组织较癌组织高丰度表达。大肠癌组织高丰度蛋白条带中，42例中的27例（64．3％）癌组织出现在分子量47KD（SCAP47）左右条带处。18例腺瘤中有2例（11．1％）可见到47KD蛋白条带表达，12例溃疡性结肠炎和15例胃腺癌均未见到该蛋白条带。SCAP47的表达与大肠癌病理分期和病理分化程度无明显关系。结论该研究利用SDS—PAGE技术在配对的大肠癌标本中分离到的SCAP47蛋白显示与大肠癌组织有一定的特异性相关，提示其作为大肠腺癌相关肿瘤标志物用于大肠癌诊断的可行性。     

结肠癌及结肠正常组织中Survivin、Caspase-3、Ki-67表达的免疫组化研究

[目的]检测结肠癌及正常结肠粘膜中Survivin、Caspase-3、Ki-67的表达情况。[方法]应用免疫组化方法对30例结肠癌及15例正常结肠粘膜标本进行Survivin、Caspase-3、Ki-67表达情况检测。[结果]结肠癌组织和正常粘膜中:Survivin表达强度分别为6.58±4.14、3.22±1.48;Caspase-3表达强度分别为3.47±3.43、0.89±0.76;Ki-67标记指数分别为43.86±3.51、29.63±3.95。三者在癌组织中的表达均显著高于正常结肠粘膜(P相似文献   

结肠正常黏膜和腺癌中差异表达基因的生物信息学分析

目的:系统地分析由SSH方法获得的结肠正常黏膜和腺癌的差异表达基因.方法:构建基于Linux的核酸自动分析平台,对用SSH方法获得的3个文库之一的T-N差减文库进行分析.用半定量RT-PCR对部分结果进行验证.结果:成功构建了基于Linux的核酸自动分析平台,得到了15个contigs,其中与已知基因相匹配的有13个(T-N),未与已知基因匹配或者意义未明的有2个;部分基因的半定量RT-PCR发现,人胸腺素β4(Homo Sapiens thymosin beta 4,THY)和人乙型肝炎病毒x抗原反式活化蛋白2(Homo Sapiens HbxAg transactivated protein 2,XTP)的表达从正常黏膜-腺癌有逐步增高的趋势.结论:构建基于Linux的核酸自动分析平台是系统分析核酸序列的有效方法,根据对3个文库的系统分析结果,为进一步阐明结肠肿瘤分子机制提供了许多有价值的信息.     

SiRNA-CD147降低HeLa中survivin表达的研究

目的研究下调CD147表达后宫颈癌细胞系HeLa细胞中survivin表达及凋亡的变化。方法设计、合成两对CD147编码基因的反向重复序列,运用瞬间转染方法抑制HeLa中CD147表达,应用RT-PCR、Western blotting方法检测干扰后CD147、survivin、Bim及caspase-3表达改变,流式细胞术检测干扰后肿瘤细胞的凋亡情况。结果 SiR-NA sequence 1、2均有效抑制CD147基因表达（P〈0.05）,干扰后的survivin表达明显下降,干扰后caspase-3mRNA水平升高（P〈0.05）,活性caspase-3蛋白及Bim水平增高（P〈0.05）,肿瘤细胞凋亡增加,以细胞早期凋亡改变最为明显（P〈0.05）。结论沉默CD147基因表达可下调HeLa细胞中survivin的表达,诱导肿瘤细胞凋亡。