17-β雌二醇对人胚肾成纤维细胞生物特性的影响

雌激素作为一种多功能的自分泌和旁分泌激素具有生殖功能以外的重要生理作用［１］。雌激素可抑制肾小球系膜细胞合成和分泌胶原,减少系膜基质的聚集,限制肾小球硬化的发展［２］。在间质纤维化的发展过程中,肾成纤维细胞（ｋｉｄｎｅｙ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ,ＫＦＢ）的增殖起着决定性作用［３］。１７－β雌二醇（１７－β ｅｓｔｒａｄｉｏｌ,Ｅ２）对肾脏病的进展可能具有良性作用,其对ＫＦＢ的影响尚未见报道。本试验拟在细胞水平,观察Ｅ２对ＫＦＢ增生、凋亡及细胞外基质成分（ＥＣＭ）之一的纤连蛋白（Ｆｎ）表达的影响。 一…     

17—β雌二醇对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的：研究雌激素对增生性瘢痕形成的影响。方法：对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）进行体外培养,通过^3H-脯氨酸掺入法及人PCⅢ（hPCⅢ）放免试剂盒测定HSFB胶原合成含量。结果：17-β雌二醇（17-βE2）对HSFB胶原合成呈明显剂量依赖性促进（P＜0．01）;17-βE2对HSFB胶原合成的影响无明显性别差异（P＞0．05）。结论：雌激素可以促进增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成,而且无性别差异。     

17-β雌二醇、孕酮对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响

目的:研究雌性激素对增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖的影响。方法:对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)进行体外培养,利用MTT比色法及3H-TdR掺入法测定17-β雌二醇(17-βE2)、孕酮(P)对HSFB生长增殖的影响;并且对两种激素作用效果加以比较。结果:17-βE2 、P对HSFB生长增殖的抑制作用呈明显的剂量依赖性(P<0.01),17-βE2 总的抑制作用比P强(P<0.05)。结论:在体外环境中,雌性激素可抑制增生性瘢痕成纤维细胞生长增殖,且雌激素的作用效果比孕激素强。     

PRP促进光老化人皮肤成纤维细胞胶原与透明质酸合成的研究

目的体外研究人皮肤成纤维细胞（HSFs）发生光老化时,富血小板血浆（PRP）对其合成胶原与透明质酸的影响。方法使用紫外线（UVA）照射体外培养的原代人皮肤成纤维细胞,并检测光老化细胞的细胞增殖情况及细胞倍增时间。用含不同浓度PRP（10%、30%、50%）的培养液培养光老化细胞,正常培养的光老化细胞为阴性对照,原代人皮肤成纤维细胞为阳性对照。ELISA检测各组细胞外液中胶原蛋白与透明质酸含量。结果经紫外线照射后,细胞增殖减弱,加入PRP后,伴随PRP浓度的增加,细胞倍增时间缩短;ELISA检测发现,经过UVA照射的成纤维细胞COL1、COL3及透明质酸合成量,显著低于正常培养的成纤维细胞（P〈0.01）。在PRP作用后,成纤维细胞的COL1、COL3及透明质酸合成量均明显增加（P〈0.01）。结论PRP能显著促进光老化人皮肤成纤维细胞胶原与透明质酸合成,可应用于皮肤抗衰老的研究。     

PRP对人皮肤成纤维细胞增殖、体外合成胶原与透明质酸的影响

目的研究不同浓度的富血小板血浆(PRP)对人皮肤成纤维细胞(HSFs)增殖、体外合成胶原与透明质酸的影响。方法原代培养人皮肤成纤维细胞,用含不同浓度PRP(1%、5%、10%、20%、30%、50%)的培养液进行细胞培养,无血清培养液为阴性对照,含10%新生小牛血清的培养液为阳性对照。培养第3、5、7天使用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖率,应用RT-PCR测定胶原蛋白表达情况,ELISA测定透明质酸功能变化。结果 MTT检测发现所有不同浓度的PRP均有明显促进HSFs增殖的作用,与阴性对照组均有明显差异(P<0.01),且随着时间递增,增殖效果也明显增强;RT-PCR测定50%PRP浓度组及阴性、阳性对照组中目的基因COL1及COL3均显著表达,但组间差异不明显;ELISA测定实验组透明质酸功能均增强,与阴性对照组有明显差异(P<0.01),PRP浓度在30%～50%时表达效果明显增强。结论PRP对HSFs的增殖、合成胶原与透明质酸的功能有明显促进效果。     

TGF-β1对UVA照射皮肤成纤维细胞HSP70表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β1(tansforming gowth fetor-beta 1,TGF-β1)对长波紫外线(ultraviolet A,UVA)照射皮肤成纤维细胞热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达的影响.方法:通过酶联免疫法(ELISA)测定不同剂量UVA即对照组(UVA 0J/cm2)、UVA 5J/cm2、UVA 10 J/cm2、UVA 20J/cm2照射成纤维细胞上清液中HSP70的含量;选择UVA照射剂量为15J/cm2,不同剂量TGF-β1即小剂量组(UVA TGF-β1 0.1ng/m1)、中剂量组(UVA TGF-β1 1ng/m1)、大剂量组(UVA TGF-β1 10ng/m1)处理后成纤维细胞HSP70上清液中HSP70的含量.结果:UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞导致HSP70表达下降,UVA 20J/cm2照射组与对照组比较,HSPT0含量明显降低,有非常显著性差异(P＜0.01),OVA 10J/cm2照射组差异有统计学意义(P＜0.05);不同剂量TGF-β1处理后,大剂量TGF-β1,组,皮肤成纤维细胞上清液中HSP70含量明显升高,与照射组比较有非常显著性差异(P＜0.01),中剂量组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:UVA照射抑制体外培养成纤维细胞HSPT0表达,TGF-β1可提高UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞HSP70表达水平,对皮肤成纤维细胞起保护作用.     

光老化作用对体外人皮肤成纤维细胞的影响

目的 建立体外分离培养人皮肤成纤维细胞的光老化模型,观察研究中波紫外线对人皮肤成性纤维细胞的影响.方法 使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,并用免疫荧光特异性标记物鉴定证实,选择不同剂量的紫外线照射人皮肤成纤维细胞后,倒置显微镜观察细胞形态学的改变;β-半乳糖苷酶(β-gal)细胞衰老试剂盒染色;MTT检测不同剂量的紫外线照射对成纤维细胞增殖能力影响;western blot检测衰老标志物P16蛋白的表达.结果 组织块法成功分离获得人皮肤成纤维细胞,用20～60mJ/cm2 UVB单次照射后,可以成功诱导人皮肤成纤维细胞出现衰老形态学的改变,其增殖能力降至正常对照组的一半左右,β-gal染色阳性率约90%,衰老相关蛋白P16表达随时相明显升高.结论 20～60mJ/cm2中波紫外线照射人皮肤成纤维细胞可诱导人皮肤成纤维细胞衰老,为今后皮肤光老化的体外研究提供了参考.     

TGF-β1对UVA照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型，Ⅲ型胶原合成和表达的影响

目的：探讨转化生长因子-β1（tansforming gowth factor—beta 1,TGF—β1）对长波紫外线（ultraviolet A,UVA）照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成和表达的影响。方法：通过MTT法检测TGF-β1干预后成纤维细胞增殖活性,选择UVA照射剂量为15J／cm^2,联免疫法（ELISA）测定不同剂量即TGF—β1小剂量组（UVA＋TGF—β1 0．1ng／ml）、中剂量组（UVA＋TGF—β1 1ng／ml）、大剂量组（UVA＋TGF—β1 10ng／ml）处理后成纤维细胞清夜中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,半定量RT—PCR检测成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞,导致成纤维细胞增殖活性下降,给予不同剂量TGF-β1干预后,成纤维细胞增殖活性与UVA照射组比较,明显提高;成纤维细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量增加,成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达增强。结论：TGF-β1可提高UVA照射体外培养成纤维细胞增殖活性;增加UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,增强成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达,对皮肤成纤维细胞起保护作用。     

miR-200c对TGF-β1刺激后人瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

目的:观察转染mi R-200c mi mi cs对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKFs)胶原蛋白分泌的影响。方法:将mi R-200c mi mi cs用ol i gof ect ami脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,3H-脯氨酸掺入法测加入50μg/L剂量的转化生长因子(TGF-β1)刺激前后胶原蛋白水平的变化。结果:转染mi R-200c mi mi cs后,胶原蛋白分泌水平降为正常皮肤成纤维细胞表达水平;经TGF-β1刺激后,其蛋白水平仍无明显变化。结论:mi R-200c可明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原蛋白分泌,推测其机制是通过抑制TGF-β1生物学作用。     

TGF—β1表达对成纤维细胞胶原分泌影响的实验研究

目的 通过siRNA干扰成纤维细胞中TGF-β1（TGF-β1）的表达,探讨其对成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白的影响.方法 将siRNA转染兔成纤维细胞,通过RT-PCR,检测siRNA对兔TGF-β1表达的干扰效果,并选筛选出有干扰效果的siRNA.把筛选出的有最佳干扰效率的siRNA,重新转染兔成纤细胞,分别取成纤维细胞培养液行ELISA检测,观察细胞培养液中合成Ⅰ型胶原蛋白变化情况.结果 和对照组相比,siTGF-β1对成纤维细胞有明显的干扰效果;siTGF-β1转染成纤维细胞后,转染组细胞分泌Ⅰ型胶原浓度曲线明显低于空白细胞组,胶原蛋白合成明显降低.结论 siRNA可通过干扰TGF-β1的表达抑制成纤维细胞I型胶原蛋白的分泌,从而抑制瘢痕生成,为临床上尿道瘢痕的基因治疗提供了理论依据.     

UVB诱导人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原下调机制的研究

目的 观察紫外线对原代人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响并探讨其作用的分子机制.方法 使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,以不同剂量紫外线照射人皮肤成纤维细胞,倒置显微镜观察细胞形态学的改变;β-半乳糖苷酶(β-gal)细胞衰老试剂盒染色;western blot检测衰老标志物P16蛋白的表达;RT-PCR检测中波紫外线处理皮肤成纤维细胞不同时相Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变及对MMP1、MMP3的影响.结果 20～40 mJ/cm2 UVB单次照射后可以成功诱导人皮肤成纤维细胞出现衰老形态学的改变,β-gal染色阳性率达到约90%,P16蛋白表达随时相明显升高;紫外处理成纤维细胞后,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平明显降低;而MMP1、MMP3表达水平明显升高.结论 利用20～40 mJ/cm2中波紫外线照射可诱导人皮肤成纤维细胞衰老,不仅伴随Ⅰ、Ⅲ型胶原合成减少,而且通过升高MMP1、MMP3来降解已形成的Ⅰ、Ⅲ型胶原.以上数据表明,中波紫外线可以诱导人皮肤成纤维细胞衰老并在皮肤衰老过程中发挥重要作用,为了解及干预皮肤衰老过程提供了线索.     

17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732 增殖和分化的影响

采用绘制生长曲线^3H-TDR掺入、ALP、BGP的定量测定、免疫组化、原位杂交等和光镜等方法，探讨了17β-雌二醇OS-732细胞增殖和分化的影响及骨粘连蛋白（ON）mRNA表达的影响。结果显示：17β-雌二醇以剂量领带性促进OS-732细胞分化有轻微抑制作用。免疫组化实验结果表明OS-732细胞上存在ER受体，且给药后核内ER增多，为雌激素直接作用于成骨样细胞提供了一个例证。原位杂交结果表明OS-732上存在（ON）mRNA的表达，而给药后无明显变化。     

转染ANGPTL-1基因对人皮肤成纤维细胞胶原表达的影响

目的探讨重组ANGPTL-1基因转染人皮肤成纤维细胞的可行性,以及转染转染后对细胞增殖速率和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法体外重组ANGPTL-1基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人皮肤成纤维细胞,流式细胞仪检测基因表达及细胞转染效率;RT-PCR比较转染前后ANGPTL-1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果基因转染后,(63±7.1)%的被转染细胞表达目的基因;转染组ANGPTL-1 mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组明显增高(P<0.01,n=5);转染组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组均明显增高(P<0.01,n=5)。结论人皮肤成纤维细胞可作为ANGPTL-1转染的靶细胞,ANGPTL-1基因可能是促进Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的重要基因之一。     

17—β雌二醇、孕酮对增生性瘢痕成纤维细胞转化生长因子—β1合成的影响

目的 研究雌激素、孕激素对增生性瘢痕形成的影响。方法 体外培养增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）,利用免疫组化及计算机图像分析系统测定转化生长因子（TGF－β1）含量。结果 较对照组,17－β雌二醇（17－βE2）各组的HSFB胞浆内阳性信号明显加强（P＜0．05）;而孕酮（P）各组均不明显（P＞0．05）。结论 在体外,17－βE2可以明显促进增生性瘢痕成纤维细胞的TGF－β1合成,而P的作用不明显。     

高代次人皮肤成纤维细胞致肿瘤性的研究

目的 研究高代次人皮肤成纤维细胞的染色体变异性和致肿瘤性,为验证其作为组织工程肌腱种子细胞的安全性提供相应依据.方法 采用常规染色体G带处理方法分别对8个样本的第2、第10代人皮肤成纤维细胞进行核型分析,并通过裸鼠皮下致肿瘤实验对其致肿瘤性进行考察.结果 各样本、各代次的人皮肤成纤维细胞均未发现染色体核型异常改变,裸鼠皮下致肿瘤实验在观察期内均未见结节或可疑病灶产生,符合国家标准.结论 高代次(第10代以内)人皮肤成纤维细胞具有正常的染色体核型,且无致肿瘤性,作为组织工程肌腱种子细胞具有较高的安全性.     

TGF-β1对UVA照射人皮肤成纤维细胞MMP-1和MMP-3 mRNA表达的影响

目的：研究转化生长因子-β1（tansforming gowth fctot-beta1,TGF-β1）对长波紫外线（ultrayiolet A,UVA）照射人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1,MMP-1）和基质金属蛋白酶-3（matrix metalloprotein ase-3,MMP-3）mRNA表达的影响,探讨TGF-D,对皮肤成纤维细胞的光保护机制。方法：通过体外培养人皮肤成纤维细胞,加入不同浓度TGF-β1（0．1、1、10ng／m1）预处理细胞后UVA15J／cm^2照射诱导细胞光老化,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测成纤维细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定MMP-1、MMP-3 mRNA表达。结果：UVAI5J／cm^2照射前给予不同剂量TGF-β1预处理,随TGF-β1剂量增加成纤维细胞增殖活性明显提高,MMP-1、MMP-3 mRNA表达随着TGF-β1剂量增加而降低。结论：TGF-β1可提高UVA照射体外培养成纤维细胞增殖活性,减少UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞MMP-1、MMP-3 mRNA表达,减少其对胶原的降解,对UVA照射皮肤成纤维细胞起保护作用。     

自体皮肤成纤维细胞在医学美容中的应用进展

理想的软组织填充材料需达到组织相容性好、无排异、效果持久、无毒、安全的要求。而自体皮肤成纤维细胞在移植后能够较为长期的存活,且可以分泌胶原蛋白,在医学美容的除皱抗衰老、创伤修复、嫩肤方面有一定疗效。本文对成纤维细胞进行概述,并对自体皮肤成纤维细胞在医学美容中的应用优势作一综述,以期推动我国细胞领域的医学美容研究发展。     

17β-雌二醇对豚鼠胆囊平滑肌收缩的影响

目的 观察17p-雌二醇对豚鼠胆囊平滑肌的基因组和非基因组效应,初步探究其机制。方法 构建去卵巢豚鼠动物模型,皮下注射17β-雌二醇,检测各组豚鼠血清雌二醇和八肽胆囊收缩素(CCK-8)含量;采用张力换能器观察17p-雌二醇对胆囊离体肌条收缩的影响。观察17β-雌二醇对豚鼠胆囊平滑肌肌条的急性效应及可能机制。结果 与假手术组相比,去卵巢组豚鼠血清雌二醇和CCK-8含量降低(P＜0.05),离体胆囊肌条对CCK-8以及乙酰胆碱的敏感性升高(P＜0.05)。随着皮下注射17β-雌二醇时间（1、3和7 d）的延长,二者含量升高(P＜0.05),离体胆囊肌条对CCK-8和乙酰胆碱的敏感性下降(P＜0.05)。10-9～10-7 mol/L的17β-雌二醇对正常豚鼠离体胆囊肌条收缩无明显影响(P＞0.05),10 6～10 5mol/L的17β-雌二醇可以抑制胆囊肌条收缩(P＜0.05),这种抑制效应可以被尼莫地平、阿托品、地伐西匹、ICI 182,780和Y-27632等阻断剂阻断。结论 17β-雌二醇与胆囊动力相关,可以通过基因组和非基因组机制影响胆囊平滑肌的收缩。     

转化生长因子β1对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：探讨转化生长因子β1（TGFβ1）对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义。方法：采用非放射性细胞增殖检测,3H－胸腺嘧啶摄入,3H－哺氨酸摄入及DNA定量分析方法,观察TGFβ1对体外培养的生长融合后早期（24h)的病理性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的增殖活性和胶原合成的作用。结果：经TGFβ1作用后,来自瘢痕的成纤维细胞的3H－胸腺嘧啶核苷和3H－脯氨酸掺入增强（P＜0．01）,但来自正常皮肤的无明显变化（P＞0．05）。结论：在细胞生长融合后早期（24h),TGFβ1对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有正性调控作用,其在瘢痕的形成中可能具有重要作用。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响

目的研究苦参碱对人瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响.方法将苦参碱作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,分别测定其分泌胶原、Ⅲ型前胶原、细胞内胶原含量.结果苦参碱可减少瘢痕成纤维细胞分泌胶原、细胞内胶原和Ⅲ型前胶原的含量.结论苦参碱在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原的合成.