双藤痹痛凝胶膏剂对胶原诱导性关节炎模型大鼠的作用

目的:研究双藤痹痛凝胶膏剂对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的作用。方法:将48只大鼠随机分为正常对照组、空白凝胶膏剂组、阳性组伤湿止痛膏及双藤痹痛凝胶膏剂高、中、低剂量组(3cm×3cm、2cm×3cm、1cm×3cm)。除正常对照组外,其余各组采用尾根部皮下皮下注射胶原乳液免疫建立CIA模型;观察各组大鼠一般情况、体重、关节指数、足趾肿胀度及关节组织的病理学变化。结果:造模后,模型大鼠的足趾肿胀明显,与正常对照组比较,有显著性差异;初次免疫后第28天,双藤痹痛凝胶膏剂3cm×3cm、2cm×3cm、1cm×3cm各组与空白凝胶膏剂组比较,关节指数、足趾肿胀度均降低,有统计学意义;HE病理切片显示,双藤痹痛凝胶膏剂3cm×3cm、2cm×3cm剂量下可抑制CIA大鼠关节组织病理学改变。结论:成功建立CIA大鼠模型;双藤痹痛凝胶膏剂能够抑制CIA模型大鼠足趾肿胀和关节组织病理学改变,降低其关节炎指数。     

雷公藤甲素微乳凝胶对CIA大鼠T细胞相关因子调节作用研究

目的:观察雷公藤甲素微乳凝胶(TP-MBGs)外用对CIA大鼠T细胞相关因子表达水平的影响,以探究其治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法:将56只CIA模型大鼠随机分成空白组、模型组、基质组、TP灌胃组、TP微乳高剂量组、TPMBGs高、中、低剂量组,给药28 d后处理,采用ELISA法检测各组大鼠皮肤(CD1α、Ig A)、血清(IFN-γ、IL-6、TNF-α、ColⅡ、IL-10)及滑膜细胞上清液(IL-1、PGE_2、TNF-α)中相关细胞因子的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组皮肤中CD1α、血清中IFN-γ、IL-6、TNF-α和滑膜细胞上清液中IL-1、PGE2、TNF-α的表达水平明显升高;与模型组比较,TP-MBGs中剂量组血清中的TNF-α及IL-6、滑膜细胞上清液中的IL-1及TNF-α表达水平显著降低; TP-MBGs高剂量组皮肤中CD1α、血清中的TNF-α及IFN-γ、滑膜细胞上清液中的IL-1及TNF-α的表达水平显著降低。结论:雷公藤甲素微乳凝胶外用治疗类风湿性关节炎,可能通过调节皮肤免疫功能及抑制相关细胞因子的分泌,从而起到局部及全身治疗作用。     

全蝎蜈蚣对CIA大鼠外周血和小肠黏膜 T细胞亚群的影响

目的:观察全蝎蜈蚣对CIA大鼠外周血和小肠黏膜T细胞亚群的影响.方法:60只Wistar大鼠除正常组外均复制胶原免疫性关节炎后,并随机分成模型组、全蝎蜈蚣高、中、低剂量组和Ⅱ型胶原蛋白治疗组,给药40d,采用流式细胞术检测大鼠外周血和小肠黏膜T细胞亚群水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠外周血和PP结T淋巴细胞均表现为CD4*T细胞明显升高或有升高趋势,CD4+/CD8+则在外周血升高而在PP结下降(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,所有治疗组对CD3+T淋巴细胞作用不明显,全蝎蜈蚣各剂量组均可明显下调PP结CD4+,CD8+T细胞水平,升高CD4+/CD8+水平(P＜0.05或P＜0.01),同时外周血方面高、中剂量组CD4+T淋巴细胞水平及CD4+/CD8+显著下降(P＜0.05或P＜0.01),但对CD8+T淋巴细胞作用不明显.结论:全蝎蜈蚣治疗类风湿性关节炎的可能途径是调节CIA大鼠外周血和肠黏膜局部T淋巴细胞平衡.     

肝郁对哮喘大鼠辅助性T细胞17和调节性T细胞的影响

目的 研究肝郁(肝气郁结证)对哮喘大鼠辅助性T淋巴细胞17 (Th17)、调节性T细胞(Treg)、白细胞介素-17 (IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)及气道炎症反应的影响,阐明肝郁型哮喘发病的免疫机制.方法 利用中医肝郁证动物模型和西医哮喘动物模型的建模方法,建立大鼠肝郁型哮喘的病证结合模型.收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并进行细胞总数及分类计数、肺组织进行病理学观察;流式细胞术检测外周血中Th17和Treg细胞占CD4+T细胞比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中IL-17、IL-10的水平.结果 肝郁哮喘组、哮喘模型组炎性细胞总数为[(96.86±4.43)×107/L、(88.22±3.22)×107/L]、嗜酸性粒细胞比例为[(27.58±4.65)％、(22.67±2.43)％]、Th17细胞比例为[(6.86±0.98)％、(6.01±0.77)％]、IL-17水平为[(48.88±8.06) pg/ml、(43.24±6.32) pg/ml]均高于正常对照组[(30.58±2.49)×107/L、(0.78±0.12)％、(2.80±0.82)％、(24.11±3.40) pg/ml];肝郁哮喘组和哮喘模型组Treg细胞比例[(3.09±0.55)％、(3.96±0.66)％]及IL-10水平[(19.79±2.80) pg/ml、(20.29±3.12) pg/ml]均低于正常对照组[(8.02±1.26)％、(30.79±4.01) pg/ml].肝郁哮喘组炎性细胞总数(96.86±4.43)×107/L、嗜酸性粒细胞比例(27.58±4.65)％、Th17细胞比例(6.86±0.98)％、L-17水平(48.88±8.06) pg/ml均高于哮喘模型组[(88.22±3.22)×107/L、(22.67±2.43)％、(6.01±0.77)％、(43.24±6.32) pg/ml];肝郁哮喘组Treg细胞比例(3.09±0.55)％低于哮喘模型组(3.96±0.66)％;肝郁哮喘组肺组织病理学观察症状较哮喘模型组严重.结论 肝气郁结证可促进哮喘的炎症反应、Th17/Treg平衡失调和IL-17水平增加而加重哮喘.合并肝郁证是哮喘反复发作的重要内在因素之一.     

双藤痹痛凝胶膏剂对胶原诱导性关节炎模型大鼠血浆炎性因子和滑膜组织相关因子的影响

目的观察双藤痹痛凝胶膏剂对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠血浆炎性细胞因子和滑膜组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨其相关作用机制。方法大鼠尾部皮下注射胶原乳剂制作CIA模型。大鼠随机分为正常组、模型组和双藤痹痛凝胶高、低剂量组,ELISA检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β及IL-6的含量,RT-PCR检测滑膜组织TLR4、My D88、NF-κB的mRNA表达,Western blot检测滑膜组织TLR4、My D88、NF-κB的蛋白表达。结果与模型组比较,双藤痹痛凝胶高、低剂量组大鼠血浆TNF-α、IL-1β及IL-6含量显著降低,滑膜组织TLR4、My D88、NF-κB mRNA和蛋白表达明显降低。结论双藤痹痛凝胶膏剂可能是通过抑制炎症反应、调节滑膜组织TLR4/NF-κB信号通路相关靶点表达发挥抗炎作用。     

健脾清化方对自身免疫性肝炎患者外周血调节性T细胞亚群的干预作用

目的观察健脾清化方对自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血CD_4~+CD_(28)~-及CD_4~+CD_(25)~+T细胞亚群的影响。方法67例AIH患者随机分为2组,对照组33例给予基础保肝及对症支持治疗,治疗组34例在基础保肝及对症支持治疗基础上,给予健脾清化方(由泽泻、生黄芪、草决明、赤芍、荷叶组成),疗程均为6周,观察两组患者治疗前后肝功能、外周血CD_4~+CD_(28)~-及CD_4~+CD_(25)~+T细胞群的比例,ELISA法检测白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果健脾清化方可以明显降低对AIH患者外周血CD_4~+CD_(28)~-T细胞群的比例及TNF-α水平,并可提升CD_4~+CD_(25)~+T细胞群及IL-10水平,与对照组有显著差异(均P0.05)。结论健脾清化方可能通过调整AIH患者外周血CD_4~+CD_(28)~-及CD_4~+CD_(25)~+T细胞群比例改善患者整体免疫失衡状态。     

黄芪多糖对黑色素瘤小鼠调节性T细胞的作用

目的: 探讨黄芪多糖对黑色素瘤小鼠调节性T细胞(Treg)免疫活性的影响。方法: 建立B16-F10荷瘤小鼠模型,C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、环磷酰胺(CTX)组、黄芪多糖低剂量组(0.15 g·kg^-1)、黄芪多糖高剂量组(0.3 g·kg^-1)。造模后第2天开始ig给药,给药14 d后处死各组小鼠,取肿瘤称重计算抑瘤率,取脾脏制备单细胞悬液,采用流式细胞术检测小鼠脾脏中Treg的比例,通过实时定量PCR检测小鼠脾脏中转化生长因子-β (TGF-β)mRNA,白细胞介素-10(IL-10) mRNA的表达。结果: 黄芪多糖能够抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长(P<0.05),降低脾脏中Treg的比例(P<0.01),降低脾脏中TGF-β mRNA, IL-10 mRNA(P<0.05)的表达。结论: 黄芪多糖可能通过降低荷瘤鼠脾脏中Treg数目,抑制TGF-β, IL-10分泌,从而实现其抑瘤作用。     

调节性T细胞及其中医药研究

调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋regulatory T cell,Treg）是新近才被认识的一类免疫调节细胞,主要发挥抑制性免疫调节功能,在维持机体内环境的稳定、抗感染免疫、抗肿瘤免疫、诱导移植耐受及自身免疫性疾病等方面发挥重要作用,是机体维持自身耐受的重要组成部分。     

氧化苦参碱对CIA大鼠Treg和Th17细胞的作用

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对胶原诱导性关节炎大鼠Treg和Th17细胞的影响。方法构建牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导的SD大鼠关节炎模型(CIA),腹腔注射不同剂量的氧化苦参碱进行治疗。检测CIA大鼠的关节肿胀度及关节炎评分;提取脾细胞,采用RT-PCR法检测Foxp3和RORγt mRNA的转录水平,Western-blot技术测定Foxp3和RORγt的蛋白表达。结果氧化苦参碱明显降低CIA大鼠的足爪肿胀度及关节炎指数,缓解其关节滑膜的增生,促进Foxp3 mRNA的转录及其蛋白的表达而抑制RORγt mRNA的转录及其蛋白表达。结论氧化苦参碱可调节Treg和Th17细胞失衡而治疗类风湿关节炎。     

慢性乙肝外周血调节性T细胞的临床意义及辨证施治对其的影响

探讨慢性乙肝外周血调节性T细胞的临床意义及辨证施治对其的影响。方法:收集100例符合抗病毒治疗指征的慢性乙肝患者,首先根据ALT、HBV-DNA水平分为高、中、低3组,观察Treg与其的关系;然后分为观察组与对照组,观察组采用中医中药联合核苷(酸)类似物治疗,对照组仅用核苷(酸)类似物治疗,观察肝功能、HBV-DNA、Treg等指标,疗程为52周。结果:随着ALT水平的升高,Treg频率逐渐降低,其中ALT低水平组与高水平组Treg频率比较差异有统计学意义(P<0.05),随着HBV-DNA载量的升高,Treg频率逐渐升高,HBV-DNA低载量组与中载量组、高载量组Treg频率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组与对照组在肝功能复常率、HBV-DNA转阴率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前后两组组内比较Treg频率差异均有统计学意义(P<0.05),治疗后两组组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:外周血调节性T细胞在慢性乙肝中具有重要的临床意义,辨证施治对其有调节作用。     

益肾蠲痹丸对CIA大鼠辅助性T细胞相关细胞因子的影响

目的:探究益肾蠲痹丸对胶原诱导关节炎大鼠模型(CIA)辅助性T细胞分泌的细胞因子作用。方法:CIA模型大鼠按随机数字表法分为正常对照组、CIA模型组、阳性药组(甲氨喋呤)和益肾蠲痹丸治疗组4组各10只。治疗结束后采用Procarta PlexTM多因子免疫检测技术定量分析各组大鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A的含量。结果:益肾蠲痹丸能下调CIA大鼠机体IL-2、IL-6、IL-17A的表达,同时上调IL-10表达。讨论:益肾蠲痹丸可在一定程度上调节促炎细胞因子及抗炎细胞因子的平衡,其作用靶点可能与IL-2、IL-6、IL-17A及IL-10有关。     

祛风止动方对抽动障碍患儿外周血调节性T细胞的影响

目的探讨祛风止动方对抽动障碍患儿调节性T细胞(Treg)外周血表达水平的影响。方法收集抽动障碍患儿30例为治疗组,另选取健康儿童20例为对照组。治疗组给予祛风止动方每日1剂,疗程3个月。于治疗组治疗前后及对照组入组时检测受试者外周血Treg表达。结果治疗前治疗组儿童外周血Treg表达水平显著低于对照组,在学龄前(3~6岁)和学龄期(7~16岁)治疗组外周血Treg表达水平亦较对照组降低(P0.01)。治疗组学龄前和学龄期患儿治疗后外周血Treg表达水平均较治疗前出现上升趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 Treg表达水平异常与抽动障碍发病有关,祛风止动方对抽动障碍患儿外周血Treg表达有上调作用。     

蓬草除痹汤对CIA大鼠外周血T淋巴细胞亚群影响的实验研究

目的:观察蓬草除痹汤(PCCB)对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型(Collagen induce darthritis,CIA)外周血中T细胞亚群CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T的干预作用,探讨PCCB对类风湿关节炎免疫调节机制。方法:采用类风湿性关节炎(RA)模型CIA大鼠,随机分为PCCB组、雷公藤组、空白组及模型组,连续给药28d,观察大鼠致炎关节肿胀度、关节炎指数(AI)变化、用流式细胞技术观察大鼠外周血中CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T水平。结果:较模型组比,PCCB组、雷公藤组可以显著改善大鼠致炎关节肿胀度及AI(P<0.01);PCCB汤组及雷公藤组外周血中CD4+T明显降低、CD8+T明显升高(P<0.01),CD4+T/CD8+T显著降低(P<0.05)。结论:PCCB能有效改善CIA大鼠关节肿胀度、降低AI,其机制可能与调节大鼠血清中CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T水平有关,为PCCB治疗RA的临床应用奠定基础。     

丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠外周血CD4~+T细胞调节的作用研究

目的探讨丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠外周血CD4+T细胞的作用。方法采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症大鼠模型(CLP),给予丹参酮ⅡA(TanⅡA)处理,分别于治疗前及治疗后24、48、72 h各时间点取静脉血,流式细胞仪检测全血细胞中辅助性T细胞(Th1、Th2、Th17);采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血中白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 CLP组大鼠血清TNF-α、IL-17、IL-1水平和Th17比例明显高于同期Sham组(P0.05),而TanⅡA各亚组血清TNF-α、IL-17、IL-1水平和Th17比例均低于CLP同期各亚组(P0.05);CLP组大鼠血清IL-10水平和Th1/Th2比值明显低于Sham组(P0.05),而TanⅡA各亚组血清IL-10水平和Th1/Th2比值高于CLP同期各亚组(P0.05)。结论丹参酮ⅡA可能通过作用于脓毒症大鼠的外周血CD4+T细胞发挥调节免疫、改善炎症反应的作用。     

参苓白术散对溃疡性结肠炎小鼠肠道调节性T细胞免疫调节作用

目的探讨参苓白术散对溃疡性结肠炎小鼠肠道调节性T细胞免疫调节作用及机制。方法 2,4,6-三硝基苯磺酸钠(Tfipitrobenzene sulfonic acid,TNBS)制造溃疡性结肠炎小鼠模型。实验设正常对照组、TNBS模型组、高剂量参苓白术散组、中剂量参苓白术散组、低剂量参苓白术散组及地塞米松组。造模后给予参苓白术散或地塞米松治疗10 d。实验结束处死小鼠,比较各组结肠长度、ELISA法测定肠组织肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白介素10(Interleukin-10,IL-10)水平、流式细胞仪测定肠系膜淋巴结淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T比值。结果与模型组比较,高剂量参苓白术散组有效预防了TNBS结肠炎小鼠结肠长度缩短;与模型组比较,高剂量参苓白术散组明显降低肠黏膜TNF-α、IL-1β水平、显著升高肠系膜淋巴结淋巴细CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比例、增加肠道黏膜IL-10分泌水平。结论参苓白术散通过提高肠道CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量发挥肠道黏膜免疫功能。     

参芪扶正注射液联合沙利度胺对急性髓细胞白血病外周血调节性T细胞比例的影响研究

目的:探讨参芪扶正注射液联合沙利度胺对急性髓细胞白血病外周血调节性T细胞比例的影响。方法:收集医院血液科急性髓细胞白血病患者100例,随机分为实验组和对照组。分别给予相应的药物治疗,治疗结束后,对所有患者的血常规,外周血TNF-α水平、CD4~+水平、CD4~+CD25~+Treg水平以及Th17水平占CD4~+比例。结果:治疗后与对照组相比,实验组TNF-α水平较低(P0.05),CD4~+水平较高(P0.05),CD4~+CD25~+Treg水平较低(P0.05),Th17占CD4~+比例较低(P0.05)。结论:参芪扶正注射液联合沙利度胺能够降低急性髓细胞白血病患者外周血TNF-α水平、提高CD4~+水平、降低CD4~+CD25~+Treg水平,Th17水平占CD4~+比例下降改善患者免疫功能。     

甘草多糖对人外周血γδT细胞的免疫调节作用

目的:研究甘草多糖(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma polysaccharide,GP)对人外周血γδT细胞增殖、分泌细胞因子、杀伤肿瘤细胞的免疫调节作用。方法:采集正常人静脉抗凝血,加入淋巴细胞分离液,密度梯度离心法分离人单核细胞层,经IPP扩增后得到γδT细胞,采用不同质量浓度的甘草多糖(终质量浓度分别为25,50,100 mg.L-1)。CCK-8法检测甘草多糖对γδT细胞增殖的影响,ELISA法检测甘草多糖对γδT细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,CCK-8法检测甘草多糖对γδT细胞杀伤功能的影响。结果:甘草多糖能促进γδT细胞增殖,呈剂量依赖关系;甘草多糖作用后,γδT细胞分泌的IFN-γ和TNF-α明显增多(P<0.01),且呈剂量依赖关系;甘草多糖作用后,γδT细胞对肿瘤细胞HepG2的杀伤能力明显增强(P<0.05)。结论:甘草多糖能够促进人外周血γδT细胞增殖、分泌细胞因子及杀伤肿瘤细胞,这为研究甘草多糖的抗肿瘤及免疫调节机制提供了新的依据。     

温化蠲痹方对CIA大鼠外周血Th_1/Th_2细胞平衡的影响

目的：观察中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠外周血Th1/Th2细胞平衡的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法：采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。随机分为模型组、MTX组、温化蠲痹方组,另设正常对照组,各组分别给药30天后,运用ELISA法检测各组大鼠外周血Th1/Th2细胞水平。结果：与模型组比较,中药组和MTX组大鼠关节炎指数（AI）评分明显降低（P=0.000）;与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低（P=0.006;P=0.009）。与正常组比较,模型组大鼠外周血IFN-γ/IL-4比值明显升高（P=0.000）;与模型组比较,中药组和MTX组大鼠外周血IFN-γ/IL-4比值明显降低（P值均为0.000）,两组之间比较差异无显著性（P=0.642）。结论：CIA大鼠外周血Th1/Th2细胞亚群失衡,恢复CIA大鼠外周血Th1/Th2细胞平衡可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

中药对调节性T细胞免疫调节功能的研究进展

目的调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)是一类具有免疫调节功能的T淋巴细胞亚群,是抑制效应T细胞和维持自身免疫耐受的重要机制之一。许多传统中药通过对Treg的影响发挥免疫调节作用,主要表现为调节Treg的数量和功能,以及调控转录因子Foxp3和细胞因子IL-10、TGF-β等的表达。经查阅国内外相关文献,本文对以不同方式影响Treg来发挥免疫调节作用的单味中药和复方作一综述,希望能促进中药在免疫调节方面的研究。