细胞因子IL-27和CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组蛋白疫苗增强性肺部免疫病理的调节作用

目的研究细胞因子佐剂IL-27单独或与Cp G2216佐剂联合使用对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗G1F/M2免疫病理的调节作用。方法将编码IL-27的质粒(以下简称IL-27)单独或与Cp G2216佐剂联合使用与G1F/M2共免疫Balb/c小鼠3次,第3次免疫后第10天用RSV攻击免疫后的Balb/c小鼠,攻毒后5 d处死,留取肺组织,用实时定量PCR检测RSV-N基因的表达量,Th1和Th2型细胞因子IFN-γ和IL-5,中性粒细胞和嗜酸性粒细胞趋化因子Gro-α和eotaxin,Th1和Th2特异性转录因子T-bet和GATA3及黏液因子gob-5的m RNA的表达量;另一部分肺组织做病理切片,用HE染色观察肺组织情况。结果 PBS组明显被RSV感染,而各疫苗组显著被保护。IL-27+G1F/M2组和IL-27+Cp G2216+G1F/M2组的IFN-γ表达量无差异(P0.05),且均显著高于无佐剂的G1F/M2组(P0.05);IL-27+Cp G2216+G1F/M2组的T-bet表达量显著高于其它组(P0.05);IL-27+Cp G2216+G1F/M2和IL-27+G1F/M2组的GATA3、IL-5表达量均显著低于G1F/M2组(P0.05),且IL-27+G1F/M2组的IL-5表达量在疫苗组中最低(P0.05);IL-27+G1F/M2组的Gro-α、eotaxin、gob-5表达量显著低于其它疫苗组(P0.05)。病理切片结果显示:与正常小鼠相比,各组经RSV攻击后肺组织均有不同程度的炎症病理损伤,而IL-27+G1F/M2组的肺部的炎症病理损伤与其它各组相比明显减轻。结论 IL-27+Cp G对疫苗增强性肺部免疫病理有一定的下调作用,而IL-27能显著抑制疫苗增强性肺部免疫病理。     

CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用

目的:研究CpG2216佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的细胞免疫应答的作用。方法:重组RSV疫苗G1F/M2与CpG2216佐剂混合,或与CpG2216及常规佐剂Al(OH)3混合,鼻腔(i.n.)或腹腔注射(i.p.)免疫BALB/c小鼠三次,最后一次免疫后2周杀小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾细胞特异性杀伤活性;用ELISPOT法检测分泌IFNγ-和IL-4的细胞;用流式细胞仪检测CD4+/CD8+效应及LDH记忆细胞。结果:与G1F/M2相比,CpG+G1F/M2鼻腔或腹腔注射免疫均诱导了显著的杀伤活性;而且G1F/M2+Al+CpG(i.p.)诱导的杀伤活性显著高于CpG+G1F/M2(i.p.)。ELISPOT结果显示:CpG+G1F/M2鼻腔免疫和腹腔注射免疫组的分泌IFNγ-和IL-4的淋巴细胞数量明显多于G1F/M2组;CpG+Al+G1F/M2(i.p.)组的细胞数显著多于CpG+G1F/M2(i.p.)组;且各组分泌IFNγ-的淋巴细胞数显著多于分泌IL-4的淋巴细胞,即均诱导了Th1型优势应答,有利于宿主抗病毒。流式细胞仪检测结果表明:CpG+G1F/M2(i.n.)仅诱导CD44+单阳性的细胞,而CpG+G1F/M2(i.p.)和CpG+Al+G1F/M2(i.p.)既诱导产生了CD44+单阳性细胞,也产生了CD44+CD62L+双阳性的记忆细胞。结论:CpG2216作为RSV重组疫苗G1F/M2的佐剂,可显著增强细胞免疫应答。     

铝佐剂吸附CpG ODN增强重组乙肝疫苗免疫效应

目的探索新佐剂CpG ODN在重组乙肝疫苗中的免疫效应及吸附状态。方法 CpG ODN佐剂与重组乙肝疫苗混合免疫小鼠,收集小鼠血清检测。通过免疫小鼠后的体液和细胞免疫应答水平来评价双佐剂乙肝疫苗对重组乙肝疫苗的增强作用。CpG ODN佐剂与乙肝疫苗在不同温度条件下混合吸附,计算在不同吸附时间下CpG ODN佐剂在乙肝疫苗中的吸附率。结果CpG ODN佐剂可以提高重组乙肝疫苗在体液及细胞中的免疫效果。CpG ODN佐剂在室温条件下1 h即可在乙肝疫苗中达到吸附平衡,于2~8℃放置5 d的条件下其吸附率约在50%左右。结论 CpG ODN能够增加乙肝疫苗的免疫应答,其免疫效果可提高5倍以上。     

CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展

随着对含有CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)的结构、功能以及作用机理的深入研究，CpG ODN已经应用于疾病的治疗和预防等许多方面。本文就CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展做一综述。     

CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展

随着对含有CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)的结构、功能以及作用机理的深入研究,CpGODN已经应用于疾病的治疗和预防等许多方面。本文就CpG ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展做一综述     

HSPs对呼吸道合胞病毒重组蛋白抗原免疫应答的调节作用

目的考察热休克蛋白HSP70对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白抗原G1F/M2免疫应答的调节作用。方法构建并表达了Javelin-G1F/M2重组蛋白,在G1F/M2的N端引入Javelin序列,通过该序列可以实现重组蛋白与HSP70蛋白高亲和力结合。以HSP70:Javelin-G1F/M2复合物等免疫Balb/c小鼠,用乳酸脱氢酶释放法测定CTL活性,ELISA法测定IgG及其亚型IgG1和IgG2a抗体滴度,空斑抑制实验测定血清中和抗体。结果经表达和纯化获得了纯度达90%以上的融合蛋白;皮下免疫HSP70:Javelin-G1F/M2复合物可诱导高滴度的IgG抗体和强的CTL应答,其抗体滴度和CTL应答强度均优于Javelin-G1F/M2加铝佐剂腹腔免疫和单独Javelin-G1F/M2皮下免疫。HSP70:Javelin-G1F/M2复合物在诱导中和抗体方面与Javelin-G1F/M2加铝佐剂腹腔免疫基本相当。HSP70:Javelin-G1F/M2复合物可以诱导更强的IgG2a应答,IgG的亚型IgG1/IgG2a的比值明显低于Javelin-G1F/M2加铝佐剂腹腔免疫组和单独Javelin-G1F/M2皮下免疫组。结论 HSP70可能通过增强CTL应答进一步纠正Th2型优势应答,使得Th1/Th2应答更加平衡。     

细胞因子佐剂对HIV DNA疫苗免疫效果的影响

根据联合国艾滋病规划署(UNAIDS)资料，在艾滋病流行的20年里，全世界已有6000万人感染了人类获得性免疫缺陷病毒(HIV)，其中1／3已因艾滋病或HIV感染相关疾病而死亡。尽管目前公认疗效较好的高效抗逆转录病毒治疗(HAART)在抗HIV感染中取得一定效果，但由于药物昂贵和HIV耐药株的产生影响了艾滋病治疗，限制了其在发展中国家使用。因此，最终将需要一种有效的疫苗来控制HIV感染的流行及传播。近年来，不少学者研究了多种类型的HIV疫苗，其中最引人关注的是HIV—1 DNA疫苗(核酸疫苗)。     

呼吸道合胞病毒DNA疫苗的构建和免疫效果的初步观察

目的构建呼吸道合胞病毒（RSV）的DNA疫苗并对其免疫效应进行观察,为RSV的免疫预防提供新思路。方法构建表达RSV-F蛋白的质粒pcD—F,接种BALB／c小鼠后以RSV long株进行攻击,于攻击当日和攻击后第5、14天采用ELISA和ELISPOT方法分别检测小鼠RSV特异性IgG抗体和分泌RSV特异性IFN-γ的淋巴细胞,荧光定量PCR方法检测小鼠肺组织RSV—RNA的含量。肺组织切片行苏木精-伊红染色,观察RSVlong株攻击后肺组织病理改变。结果pcD-F免疫小鼠后,产生RSV特异性IgG抗体（滴度1：60）,RSV攻击后第14天,pcD—F免疫小鼠的特异性IgG抗体水平升至1：250,明显高于对照组（P〈0．05）。RSV攻击后,pcD—F免疫小鼠分泌RSV特异性IFN-γ的淋巴细胞升至99个／1×10^5细胞,明显高于对照组的9个／1×10^5细胞（P〈0．05）。pcD-F免疫小鼠的肺部炎症反应明显轻于对照组,肺部RSV得到有效的清除。结论成功构建的RSVDNA疫苗具有良好的免疫原性。     

CpG ODN佐剂对乙肝疫苗抗原免疫原性的影响

目的探究CpG ODN佐剂对不同抗原含量乙肝疫苗免疫效果的影响。方法在体液免疫方面不同抗原浓度的CpG ODN与Al(OH)3佐剂乙肝疫苗免疫Balb/c小鼠,于免疫后第2、4、6、8、10周收集血清,检测小鼠体内相对效力ED50和血清中的anti-HBs抗体水平;在细胞免疫方面测定诱导产生IFN-γ水平及IgG2a应答水平。结果 CpG ODN与Al(OH)3佐剂可以有效协同HBs Ag诱导机体产生的抗体滴度达49 427 mIU/ml,抗体效价随时间延长而增加。乙肝抗原减半后双佐剂乙肝疫苗诱导机体产生的特异性抗体滴度可达41 225 mIU/ml,高于无CpG ODN佐剂的铝佐剂疫苗。在诱导细胞分泌方面,对照组诱导产生IFN-γ水平及IgG2a应答水平明显低于所有双佐剂疫苗组。结论 CpG ODN对HBsAg具有良好佐剂活性,并与铝佐剂有协同作用,二者联合应用可以降低乙肝抗原用量并提高疫苗免疫原性。     

不同佐剂对病毒灭活疫苗免疫效果的影响

目的探讨两种不同佐剂CpG和纳米乳(Nanoemulsion)对病毒灭活疫苗免疫效果的影响。方法以灭活猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)培养液为例,将骨髓来源树突状细胞(BMDC)与含有不同免疫佐剂的PDCoV灭活疫苗共孵育。抗体染色后使用流式细胞仪检测BMDC成熟、活化情况。成年健康C57BL/6J雌性小鼠20只,鼠龄6～8周;随机分成4组,分别接种磷酸盐缓冲溶液(PBS)、灭活PDCoV液、CpG/PDCoV疫苗和Nanoemulsion/PDCoV疫苗,皮下免疫3次,时间间隔为1周;第21天杀死小鼠获取脾脏和血液,检测不同PDCoV灭活疫苗接种小鼠免疫反应情况。结果 Nanoemulsion可负载灭活PDCoV的抗原成分,形成平均粒径为(157.6±0.4) nm的纳米粒,而CpG与灭活PDCoV则是无规则混合。Cp G/PDCoV组或Nanoemulsion/PDCoV组促BMDC成熟程度分别为45.57%和53.32%(CD86+MHCⅡ+BMDC),明显高于PDCoV组(38.49%),差异有统计学意义(P 0.01、P 0.05)。第21天,CpG/PDCoV组小鼠脾脏中Th1(P 0.05)和Tc2(P 0.05)细胞比例分别为5.81%和0.24%,显著高于PDCoV组(3.56%和0.14%);Nanoemulsion/PDCoV组小鼠脾脏中Tc1(P 0.05)细胞比例为6.46%,高于PDCoV组(9.28%);CpG/PDCoV组小鼠血清中总免疫球蛋白(IgG)、IgG2a和干扰素-γ(IFN-γ)水平明显高于PDCoV组,差异有统计学意义(P 0.05);Nanoemulsion/PDCoV组小鼠血清中总IgG、IgG2a、IFN-γ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-4)水平明显高于PDCoV组,差异有统计学意义(P 0.05);另外,与CpG相比,Nanoemulsion能够诱导更高水平的IgG2a、IFN-γ、TNF-α和IL-4。结论佐剂CpG或者Nanoemulsion的添加能够显著地增强病毒灭活疫苗免疫效果。相较于CpG,Nanoemulsion可以诱导更强的细胞免疫和体液免疫,更适用于病毒灭活疫苗的研发。     

CpG ODN联合乙型肝炎疫苗与乙型肝炎疫苗免疫效果对比研究

目的探讨CpG ODN乙型肝炎疫苗与市售乙型肝炎疫苗对Balb/c小鼠的免疫作用效果。方法将乙肝疫苗、乙肝疫苗+100μgCpG ODN分别肌肉注射到4～6周龄,16～18g Balb/c小鼠体内,于第1次免疫后28d以同样剂量加强免疫1次。分别于第1次免疫后28、42、63 d收集小鼠血清,用ELISA方法检测抗HBs IgG抗体。结果实验组产生的抗HBs IgG与对照组HBsIgG相比P<0.05,具有显著性差异。28、42、63 d抗HBs IgG分别是对照疫苗的114倍、4.73倍、5.41倍以上。结论 CpG ODN能够显著增强小鼠对乙肝疫苗的免疫应答,在较短时间内显著的提高乙肝抗体的产生水平,免疫效果是乙肝疫苗的5倍以上。     

呼吸道合胞病毒样颗粒疫苗制备及免疫效果研究

目的利用昆虫表达系统表达以流感病毒基质蛋白M1为骨架制备的嵌合呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白F和表面糖蛋白G蛋白的呼吸道合胞病毒样颗粒(RSV-F/G VLPs)疫苗候选株,并滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性与免疫保护性。方法通过基因重组技术制备以流感基质蛋白M1为骨架,并嵌合RSV F/G蛋白的RSV-F/G VLPs,经超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化VLP,滴鼻免疫Balb/c小鼠,检测血清抗体IgG、IgG1、IgG2a,黏膜sIgA效价以及细胞因子IL-4、INF-γ等,评价候选疫苗的免疫原性;二免后2周RSV A2株攻毒,通过检测小鼠体质量变化,肺病毒载量及肺病理切片来评价候选疫苗的免疫保护性。结果成功制备了RSV-F VLPs、RSV-G VLPs疫苗抗原,动物实验结果证实,候选疫苗株RSV-F/G VLPs可刺激机体产生特异性Th1型细胞免疫及黏膜免疫;攻毒实验结果表明候选疫苗株RSV-F/G VLPs针对RSV A2株的攻击可以产生一定的保护效果。结论成功制备了RSV-F VLPs、RSV-G VLPs候选疫苗抗原,并通过动物实验证明RSV-F/G VLPs具有良好的免疫原性和免疫保护性,为发展新型RSV疫苗提供实验依据。     

IL-23、IL-27对RSV重组蛋白疫苗免疫原性的影响

目的:以编码IL-23和IL-27的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-23(以下简称IL-23)和pcDNA3.1-IL-27(以下简称IL-27)为佐剂,与呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗G1F/M2共免疫小鼠,观察IL-23和IL-27对疫苗的免疫原性的影响。方法:以IL-23、IL-27质粒和Al(OH)3为免疫佐剂,与G1F/M2共免疫BALB/c小鼠,末次免疫后10天杀死小鼠,用ELISA检测特异性IgG、IgG1和IgG2a水平;流式细胞术检测小鼠脾细胞CD4+、CD8+细胞的变化;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性小鼠脾细胞杀伤活性。结果:G1F/M2+Al(OH)3+IL-23和G1F/M2+Al(OH)3+IL-27可诱导高效价的IgG、IgG1、IgG2a抗体,且显著高于这三种佐剂单独使用诱导的抗体效价;流式细胞检测结果显示G1F/M2+IL-23和G1F/M2+Al(OH)3+IL-23刺激的CD4+T细胞和CD8+T细胞水平显著高于其他组;单独的IL-23或IL-27对G1F/M2诱导的脾细胞杀伤活性没有增强作用,而Al(OH)3+IL-23和Al(OH)3+IL-27佐剂组的杀伤率显著高于单独的IL-23、IL-27或Al(OH)3组。结论:这些结果表明:IL-23或IL-27质粒与传统铝盐佐剂Al(OH)3联合使用能显著增强RSV重组疫苗G1F/M2的免疫原性。     

佐剂Al(OH)_3和CpG2216对福尔马林灭活呼吸道合胞病毒疫苗免疫增强的作用研究

研究佐剂Al(OH)_3与CpG2216对FI-RSV疫苗增强性免疫病理的不同作用,探寻FI-RSV疫苗增强性免疫病理的发生机制和解决方法,分别制备加入佐剂Al(OH)_3与CpG2216的FI-RSV疫苗,肌注免疫C57BL/6小鼠2次。免疫后观察小鼠发病情况,检测抗体水平、细胞因子转录表达并做肺组织切片等。实验发现两组血清IgG抗体产生无显著差异;FIRSV+CpG2216组小鼠有明显的发病迹象;病理切片显示,FI-RSV+Al(OH)_3组的黏液分泌最明显,FI-RSV+CpG2216组肺部显示更大量炎症细胞浸润,炎症反应较强;FI-RSV+CpG2216组肺组织RSV-N基因的表达量显著高于FI-RSV+Al(OH)_3组(P<0.05),FI-RSV+Al(OH)_3组的IFN-γ、IL-5、TNF-α、GATA-3、T-bet基因的表达量显著高于其他各组(P<0.05),FI-RSV+CpG2216组IL-17、ROR-γt基因的表达量显著高于其他各组(P<0.05)。认为CpG2216与Al(OH)_3单独作为佐剂在诱导抗体产生方面无明显差异;CpG2216单独作为佐剂引发了较强肺部炎症损伤和病理表现,可能因为其诱导了更强的Th17型优势应答所致;Al(OH)_3单独作为佐剂引发了较强的气管黏液分泌和Th2型优势应答。     

细胞因子佐剂对核酸疫苗免疫效果的影响及作用机制

细胞因子佐剂包括白细胞介素、干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、趋化因子等,其作为佐剂可显著增强抗原的免疫原性,调节机体的体液免疫和细胞免疫应答水平.在核酸疫苗的研究中,细胞因子佐剂已被证实具有重要的调节作用.现就细胞因子佐剂对核酸疫苗免疫效果的影响及作用机制进行综述.     

呼吸道合胞病毒G和F蛋白诱导细胞因子免疫反应的研究进展

呼吸道合胞病毒是引起儿童急性肺炎、支气管炎、哮喘等疾病的主要病原体。目前国内外仍没有安全有效的预防性疫苗。呼吸道合胞病毒感染引起相关细胞因子异常表达可能是导致呼吸道病理性损伤的主要原因,G黏附蛋白和F糖蛋白是疫苗研究的常用抗原,在诱导细胞因子分泌、调节宿主免疫应答、促使病毒逃逸免疫系统等免疫机理方面有重要作用。本文对RSV G和F蛋白诱导产生细胞因子及相关免疫应答调节机理研究进展做一简要综述。     

呼吸道合胞病毒病原学和疫苗研究现状

呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）可分为Ａ、Ｂ两亚型，其结构蛋白中，Ｆ蛋白与Ｇ蛋白与诱发保护性免疫应答有关，灭活ＲＳＶ疫苗接种无保护作用，减毒活性疫苗和亚单位疫苗可作为候选疫苗。     

不同因素对非甲基化CpG ODN佐剂活性的影响

cpG ODN即含有胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的寡脱氧核苷酸，研究发现，非甲基化的CpG ODN能够显著促进机体的特异性及非特异性免疫应答，是一种高效的THl型疫苗佐剂，它的佐剂活性与其结构有着密切的关系。我们综合考虑了可能影响CpG CDN佐剂活性的6个因素，即骨架是否进行了硫代修饰、是否具有回文结构、CpC基序侧翼序列的种     

CpG ODN佐剂促进HBsAg疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的探讨

目的 探讨cpG ODN对重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）诱导小鼠细胞免疫应答的影响。方法HBsAg和HBsAg＋CpG ODN分别肌肉注射免疫Balb／c小鼠后,从淋巴组织（脾和淋巴结）和非淋巴组织（肺）分离淋巴细胞,体外经HBsAg抗原刺激后,利用ELISA检测细胞培养液中IFN-γ的水平,再利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ^＋细胞的频率,分析IFN-7^＋细胞亚群。结果对照组和HBsAg免疫组IFN-γ产生的水平很低,当HBsAg加强免疫1～2次后,IFN-γ表达仍然没有明显升高;而CpG ODN＋HBsAg免疫1次或加强免疫后,CpG显著促进HBsAg诱导的IFN-γ产生。进一研究结果表明CpG促进HBsAg诱导淋巴器官和非淋巴器官内CD4^＋和CD8^＋T细胞IFN-γ的表达。结论CpG免疫佐剂不仅能诱导细胞免疫应答同时也诱导体液免疫应答,提示CpG ODN可以用于HBsAg预防和治疗性佐剂。