全反式维甲酸诱导荷瘤裸鼠EC9706食管癌细胞凋亡的机制

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导荷瘤裸鼠EC9706食管癌细胞凋亡的作用机制.方法 将食管癌EC9706细胞接种于裸鼠,成瘤后将裸鼠分为ATRA作用组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用组、联合用药组和空白对照组,每组10只,腹腔内连续给药10 d后处死裸鼠.采用原位末端标记(TUNEL)法,检测各组裸鼠移植瘤组织中的细胞凋亡情况.采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测caspase-3和survivin蛋白及mRNA的表达水平.结果 ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组的细胞凋亡率分别为44.3%、39.7%和91.0%,均明显高于空白对照组(0.7%,均P＜0.01).空白对照组caspase-3蛋白表达水平为46.12±0.33,caspase-3 mRNA的相对表达量为0.14±0.03,均显著低于ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组(P＜0.05).空白对照组survivin蛋白表达水平为96.07±0.13,survivin mRNA的相对表达量为0.84±0.04,均显著高于ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组(均P＜0.05).ATRA作用组与5-Fu作用组的细胞凋亡率、caspase-3和survivin蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义(均P＞0.05),但单药组与联合用药组的差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 ATRA可诱导荷瘤裸鼠EC9706细胞产生凋亡,其作用机制与下调survivin蛋白和mRNA的表达以及上调caspase-3蛋白和mRNA的表达有关.     

全反式维甲酸对食管癌EC9706细胞系化疗敏感性的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对食管癌EC9706细胞系化疗敏感性的影响及其作用机制.方法 将常规传代培养的食管癌EC9706细胞分为4组,即ATRA作用组(加入终浓度为1μmol/L的ATRA)、5-氟尿嘧啶(5+Fu)作用组(加入终浓度为50mg/L的5-Fu)、联合用药组(加入终浓度为1μmol/L的ATRA和终浓度为5omg/L的5-Fu)和空白对照组(仅含EC9706细胞).采用原位酶末端标记(TUNEL)法检测各组细胞的凋亡情况,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期的变化.结果 TUNEL法检测结果显示,联合用药组的凋亡率达89.7%,明显高于ATRA作用组(38.3%)和5-Fu作用组(40.3%,均P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,联合用药组的凋亡率达76.9%±2.7%,明显高于ATRA作用组(38.2%±2. 6%)和5-Fu作用组(45.2%±2.3%,均p＜0.05).联合用药组G1期细胞比例明显增加,达83.4%±3.0%,明显高于ATRA作用组(48.2%±2.5%)和5-Fu作用组(53.2%±2.6%,均P＜0.05);联合用药组S和G2/M期细胞比例明显下降,与其他各组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).ATRA作用组与5-Fu作用组的凋亡率和各期细胞比例的差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 ATRA有增加食管癌EC97O6细胞对5-Fu敏感性的作用,其作用机制与其调节细胞周期的变化和增加细胞的凋亡有关.     

全反式维甲酸诱导食管癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导食管癌EC9706细胞凋亡的作用及其机制。方法用不同浓度的ATRA处理EC9706细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对EC9706细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞周期的变化和凋亡率;采用免疫组化S-P法,检测凋亡相关基因caspase-3和bcl-2的蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果ATRA对EC9706细胞有增殖抑制和诱导凋亡的作用;流式细胞仪检测显示,在G1期之前可出现Sub-G1峰,凋亡率最高为(32.6±0.4)%,并有浓度和时间依赖性;TUNEL法显示凋亡小体形成;EC9706细胞在凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达增强,bcl-2的蛋白表达减弱。结论ATRA作用于食管癌EC9706细胞后将引起细胞凋亡的增加,这主要与ATRA能促进caspase-3的活化,并下调bcl-2的蛋白表达有关。     

全反式维甲酸对食管癌细胞系EC109作用的研究

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞系EC109的生长抑制作用及其机理.方法 不同浓度ATRA作用于细胞EC109,采用MTT法检测细胞生长;通过流式细胞仪检测和DNA梯状电泳证实凋亡存在;用RT-PCR方法检测凋亡诱导过程中p53、bcl-2和bax基因表达变化.结果 ATRA呈剂量及时间依赖性抑制细胞生长;琼脂糖电泳呈现凋亡DNA梯状条带;流式细胞仪分析存在明显的凋亡峰;ATRA处理组bax和p53基因表达上调,但bcl-2基因表达下调.结论 ATRA具有抑制食管癌细胞株EC109生长作用,其机理可能是诱导细胞凋亡,其分子机制可能与bcl-2/bax和p53的表达相关.     

全反式维甲酸诱导前列腺癌DU—145细胞凋亡的研究

目的：应用全反式维甲酸作用于前列腺癌细胞系DU—145细胞，观察维甲酸对前列腺癌细胞生长的影响。方法：应用全反式维甲酸(10^-5mol/L)分别作用于前列腺癌DU—145细胞36h及72h，分别应用光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态及超微结构的改变，并用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果：全反式维甲酸作用前列腺癌DU—145细胞36h后，细胞生长开始减缓，肿瘤细胞超微结构出现细胞核固缩、染色质凝集于核膜周边等细胞凋亡早期改变。作用72h后，流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”，部分肿瘤细胞出现凋亡。结论：全反式维甲酸可以诱导前列腺癌细胞产生凋亡，凋亡的产生与药物的作用时间密切相关。     

全反式维甲酸对人膀胱癌细胞株T24生长 抑制和凋亡诱导作用的实验研究

 目的　探讨全反式维甲酸(ATRA)对人膀胱癌细胞T24的生长抑制和凋亡诱导作用。方法　应用细胞和分子生物学技术检测不同浓度ATRA对T24细胞生长和凋亡的影响。结果　3×10-5M～3×10-7M ATRA可显著抑制T24细胞增殖。用3×10-5M和3×10-6M ATRA作用细胞6天出现典型凋亡特征;3×10-5M、3×10-6M组及对照组的细胞凋亡率分别为20.16%、15.31%和1.49%;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性的DNA梯形带。结论　ATRA对人膀胱癌细胞T24有剂量生长抑制作用,且可成功地诱导人膀胱癌细胞T24发生凋亡。     

全反式维甲酸诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡的研究

目的 :应用全反式维甲酸作用于前列腺癌细胞系DU 145细胞 ,观察维甲酸对前列腺癌细胞生长的影响。方法 :应用全反式维甲酸 (10 -5mol L)分别作用于前列腺癌DU 145细胞 36h及 72h ,分别应用光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态及超微结构的改变 ,并用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果 :全反式维甲酸作用前列腺癌DU 145细胞 36h后 ,细胞生长开始减缓 ,肿瘤细胞超微结构出现细胞核固缩、染色质凝集于核膜周边等细胞凋亡早期改变。作用 72h后 ,流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型的亚二倍体“凋亡小峰” ,部分肿瘤细胞出现凋亡。结论 :全反式维甲酸可以诱导前列腺癌细胞产生凋亡 ,凋亡的产生与药物的作用时间密切相关     

IP6对结肠癌裸鼠皮下移植瘤细胞生长抑制及其机制的探讨

目的:研究肌醇六磷酸(IP6)对HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:建立HT-29细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水组)、低剂量IP6组和高剂量IP6组,用药20 d后处死小鼠.比较各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,透射电镜观察移植瘤细胞形体变化,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,并运用RT-PCR、蛋白质印迹法检测移植瘤Bcl-2及Bax基因和蛋白的表达.结果:IP6组出现典型凋亡现象,PCR及蛋白检测也显示IP6可显著上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05);在移植瘤质量和体积方面,用药组与对照组差异无统计意义,P＞0.05,但用药组移植瘤呈现下降趋势.结论:IP6可能通过促进细胞凋亡而起到抑制和延缓肿瘤生长的作用,其机制可能与上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关.     

三氧化二砷对食管癌细胞系EC9706作用的研究

目的探讨不同浓长三氧化二砷（As2O3）对食管癌细胞系EC9706的生长抑制作用及其机理。方法不同浓度三氧化二砷作用于细胞EC9706,采用MTT法检测细胞生长,倒置显微镜观察细胞形态,并通过DNA梯状电泳和流式细胞仪检测凋亡。结果三氧化二砷剂量依赖性抑制细胞生长;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;琼脂糖电泳呈现凋亡DNA梯状条带;流式细胞仪分析。细胞株EC9706存在明显的G0／C1期阻滞。结论As2O3具有抑制食管癌细胞株EC9706生长作用,其机理是诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。     

全反式维甲酸抗肿瘤作用的研究进展

 维甲酸类药物包括维生素A的天然及人工合成的衍生物。维生素A（视黄醇）进入人体后转变成视黄醛，再经氧化变成维甲酸。维甲酸是维持生长发育不可缺少的物质，尤其在促进上皮组织分化生长及维持其正常功能方面起重要作用。     

血管内皮生长因子反义RNA对裸鼠食管癌细胞增殖和凋亡的影响意义

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）反义RNA对裸鼠食管癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法：将转染VEGF反义eDNA和空载体peDNA3．1的食管癌细胞株TE-1分别接种在裸鼠体内；应用免疫组化法、RT-PCR法检测移植瘤组织中VEGF蛋白和mRNA表达情况；流式细胞仪和透射电镜检测肿瘤细胞增殖及凋亡情况。结果：反义组肿瘤组织中VEGF蛋白和mRNA的表达降低，肿瘤细胞的细胞器发生扩张和肿胀、核染色质边集、凝集成块等凋亡形态学改变；Go／G，期细胞明显增多，S期细胞明显减少，细胞增殖指数降低；对照组和空载体组细胞凋亡较少。结论：VEGF反义RNA能抑制裸鼠食管癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，为食管癌基因治疗基础研究提供依据。     

全反式维甲酸和二甲亚砜诱导人食管癌细胞wtp53基因的表达

目的探讨野生型p53(wtp53)基因表达与食管癌细胞分化相关性。方法采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、软琼脂集落形成、原位杂交方法分别检测细胞分化和wtp53的基因表达变化。结果ATRA和DMSO作用5d后可以抑制Eca109细胞增殖,诱导细胞分化及降低集落形成率。wtp53基因表达随着Eca109细胞分化而增高。结论ATRA和DMSO可上调Eca109细胞wtp53的表达使其趋向正常细胞分化。     

人类卵巢癌原位移植自发转移裸小鼠模型的构建

 目的　用人类卵巢癌组织块原位移植构建与人类卵巢癌最相似的裸鼠原位移植自发转移模型。方法　将人类卵巢癌高转移细胞系8910PM在裸鼠皮下注射成瘤,然后将瘤组织运用显微外科的方法植入裸鼠卵巢包膜内,原位移植成功后继续在鼠间卵巢包膜内传代,并运用透射电镜进一步验证肿瘤形成和转移效果。结果　裸鼠皮下与卵巢部位成瘤率均为100 %（分别为2／2和16／16）,原位移植瘤转移率为50 %。卵巢包膜间传代,第2代、第4代分别出现卵巢癌的肝转移,其他部位尚未见转移灶。最早成瘤时间1周,最早转移出现时间2周。在连续传代过程中移植瘤仍保持原癌组织病理形态特点及人类肿瘤染色体的特点。结论　成功构建了人类卵巢癌原位移植自发转移裸鼠模型,为卵巢癌的转移机制及治疗研究提供了一个理想的动物模型。     

沉默H-ras基因对人涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的构建H-ras靶向短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒,研究其对人涎腺腺样囊性癌裸鼠成瘤的抑制作用及其对移植瘤细胞增殖活性及细胞凋亡率的影响.方法构建含H-ras靶向特定序列的真核表达质粒pHRAS,稳定表达pHRAS质粒的细胞为实验组,未处理的SACC-M细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型,计算成瘤率;移植瘤原代培养检测质粒表达及瘤细胞增殖活性;免疫组织化学法检测瘤内H-ras蛋白表达;采用组织学观察、流式细胞术及TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况.结果pHRAS质粒转染组成瘤率及肿瘤体积显著低于对照组,原代培养可见大量瘤细胞表达绿色荧光.实验组瘤内H-ras蛋白表达量明显减少,实验组肿瘤细胞凋亡率为(41.55±4.25 )%,明显高于对照组的(4.73±1.35) %(P＜0.05).结论shRNA沉默H-ras基因能抑制SACC-M细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,在体内有效下调H-ras蛋白的表达,且对肿瘤细胞具有促凋亡作用.     

全反式维甲酸联合射线对食管癌细胞TE13增殖及凋亡的影响

目的:研究全反式维甲酸( all-trans-retinoicacid,ATRA)联合放射线照射对食管癌TE13细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制.方法:采用MTT法检测ATRA对人食管癌细胞TE13增殖的影响;以其对TE 13细胞生长抑制率(inhibitory rate,IR)达25％、50％和75％时的ATRA的浓度分别联合γ-射线进行分组处理细胞;FCM法分析ATRA单药及联合放射治疗对TE13细胞周期及凋亡的影响;采用克隆形成实验分析对克隆形成率和细胞存活率的影响;采用FCM法检测cyclinD1蛋白的表达.结果:ATRA对TE13细胞有增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;ATRA浓度为0.78、6.25和12.5 μmol/L作用48 h后,其对TE13细胞的IR分别达到22.0％、55.1％和71.1％.ATRA联合γ-射线(4 Gy)与ATRA单药组比较,可明显降低TE13细胞的存活率和克隆形成率;ATRA联合γ-射线(4 Gy)处理TE13细胞24和48 h后,细胞增殖能力明显下降,更多的细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率明显增加,与ATRA单药组比较,联合放射治疗可明显增强对TE13细胞周期和凋亡的影响;ATRA浓度为0.78 μmol/L时和γ -射线联合作用对细胞周期cyclinD1蛋白表达量影响不大,但ATRA浓度为6.25和12.5 μmol/L时则能明显下调cyclinD1的表达.结论:ATRA对TE 13细胞具有明显的增殖抑制作用,其可能通过下调cyclinD1蛋白的表达,将TE13细胞阻断于G0/G1期并诱导细胞凋亡.在ATRA浓度较高时联合放疗,能显著下调cyclinD1蛋白表达,加强细胞G0/G1期阻滞及促进凋亡,抑制细胞克隆的形成能力;在ATRA浓度较低时联合放疗对原代细胞cyclinD1蛋白表达量的影响较小,但对促进细胞凋亡、抑制细胞克隆仍有一定的效果,其损伤效应可能需要一定时间.     

雷帕霉素对食管鳞癌细胞系EC9706的mTOR/p70S6K信号通路的影响

目的：观察雷帕霉素（rapamycin，rapa）对食管鳞癌细胞系EC9706的mTOR／p70S6K信号通路的影响。方法：采用免疫细胞化学证实mTOR／p70S6K信号通路的存在，然后通过DNALadder、RT—PCR、Westernblot及流式细胞术分别从DNA、RNA、蛋白及细胞水平研究rapa对细胞凋亡和信号通路的影响。结果：免疫细胞化学结果显示，在细胞核及细胞质中mTOR均呈阳性；rapa处理后有明显DNALadder产生，且mTOR的mRNA水平及蛋白水平下调。但是，mTOR下游的直接靶点p70S6K的mRNA水平及蛋白水平则升高，二者的变化程度均与rapa剂量的相关；流式细胞术检测结果表明，rapa可使细胞停滞于G1期。结论：食管鳞癌细胞系EC9706中存在mTOR／p70S6K信号通路并且处于激活状态，rapa能明显促进细胞凋亡并抑制该通路激活，从而间接抑制翻译的进行。     

溶血磷脂酸对卵巢癌细胞在移植瘤动物模型中生长转移和相关因子表达的影响

目的:观察溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对卵巢癌细胞在裸鼠腹腔移植瘤模型中生长转移和相关因子表达的影响,分析其促转移机制。方法:将6×10~6个未经处理的卵巢癌细胞株SKOV3(对照组)和用LPA刺激后的SKOV3细胞(LPA处理组)分别注入裸鼠腹腔,建立人卵巢癌腹腔移植瘤裸鼠动物模型,待裸鼠自然死亡后,测定移植瘤大小和质量,观察腹腔转移灶转移情况。用免疫组化法和流式细胞技术分析两组移植瘤组织中VEGF、MMP2和COX-2的蛋白表达。结果:经LPA处理和未经处理的SKOV3细胞在裸鼠体内的成瘤率均是100%,但LPA组移植瘤的生长速度、质量和腹腔转移灶数目均高于对照组,有统计学意义(P＜0．05)。LPA处理组的移植瘤组织中VEGF、MMP2和COX-2蛋白表达水平均高于对照组,有统计学意义(P＜0．01)。结论:溶血磷脂酸具有促进卵巢癌细胞在腹腔内增殖和浸润转移的作用,该作用可能与促进癌组织表达肿瘤生长和转移的相关因子有关。