右美托咪定对小鼠肺血-再灌注损伤的保护作用

目的: 探讨右美托咪定对小鼠肺缺血/再灌注损伤的保护作用。方法: 实验用雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠50只,随机分为5组：假手术组（sham operation, sham组）,缺血 再灌注组（I/R组）,I/R+生理盐水组（NS组）,I/R+右美托咪定组（DEX组）,I/R+阿替美唑（Atipamezole,ATI）+DEX组（ATI+DEX组）。复制在体小鼠左肺I/R损伤模型,I/R组小鼠开胸夹闭左肺门缺血30 min,再灌注180 min;sham组仅开胸游离肺门而不夹闭,肺门游离后机械通气210 min;DEX组在左肺缺血前30 min腹腔注射DEX 25 μg/kg,NS组则腹腔注射同体积生理盐水;ATI+DEX组在缺血前30 min腹腔注射ATI 250 μg/kg后,随即腹腔注射DEX 25 μg/kg。实验结束时取左肺组织测肺组织湿/干重比（W/D）、总肺含水量（TLW）,评估肺组织损伤指数（IQA）,光镜和电镜下观察肺组织的形态学变化。结果: 与sham组比,其余4组肺组织W/D、TLW、IQA值明显上升（P<0.05）,光镜、电镜示肺组织呈明显损伤性变化;I/R组与NS组间上述指标差异无统计学意义（P>0.05）;DEX干预后,肺组织W/D、TLW、IQA值较I/R组明显降低（P<0.01）,肺组织损伤明显改善;应用阿替美唑以后,肺组织损伤加重,W/D、TLW、IQA值明显升高,与DEX组相比差异具有统计学意义（P<0.01）。结论: 右美托咪定可能通过抑制交感活性,改善缺血区域的血流,对缺血再灌注肺发挥保护作用。     

右美托咪定对肢体缺血再灌注后患者肺换气的影响

目的: 观察右美托咪定对上肢止血带诱发肢体缺血再灌注后肺换气的影响。方法: 前臂或者手部需要止血带进行手术的患者40例,采用随机数字表法,将患者分成两组（n=20）：对照组（C组）,右美托咪定组（D组）。D组患者在完成肌间沟臂丛神经阻滞后静脉泵注右美托咪啶负荷剂量 1 μg/kg,持续 10 min,随后以 0.5 μg•kg^-1•h^-1速率直到手术结束;C组患者相同方法静脉泵注等量生理盐水。待麻醉起效后上止血带,分别在上止血带即刻（T₀）、上止血带后1 h (T ₁)、松止血带后 0.5 h(T₂)、2 h (T₃)、6 h (T₄)和 24 h (T₅)取动脉血进行血气分析和测定血浆超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）浓度,记录动脉血二氧化碳分压(PaCO₂)、动脉血氧分压(PaO₂),按照公式计算肺泡动脉血氧分压差(PA-aDO₂)、呼吸指数(RI)和动脉血/肺泡氧分压比值(a/A比值)。结果: 与T₀比较,两组患者T₄时PaO₂、a/A比值下降,PA-aDO₂、RI比值上升,D组上升幅度比C组大。与T₀比较,C组T_3-5时血浆MDA浓度升高、SOD浓度降低,D组仅在T₄时血浆MDA浓度升高、SOD浓度降低,MDA浓度增加幅度明显低于C组,SOD浓度降低幅度明显低于C组。结论: 右美托咪定改善肢体缺血再灌注后患者的肺换气功能,其可能的机制是右美托咪定可以增加体内氧自由基清除剂（SOD）从而减少体内脂质过氧化反应(MDA),减少肢体缺血再灌注过程中脂质过氧化损伤。     

CYP2A6*4基因多态性对右美托咪定药动学的影响

目的: 在CYP2A6*4突变频率高的中国人中测定CYP2A6*4等位基因对右美托咪定药代动力学的影响,为临床提供参考。方法: 31名手术患者通过静脉泵接受0.5 μg/kg右美托咪定后,抽取多个时间点的血样,测定血药浓度以及CYP2A6*4的多态性,并进行统计分析。结果: 9名患者为*1/*4或*4/*4,22名患者为*1/*1。主要药代动力学参数如下,曲线下面积（AUC）为（1 396.19±332.47）h·ng·L^-1,峰值血药浓度（C _max）为（495.50±104.90）ng/L,分布容积（V）为（0.68±0.20）L/kg,清除率（CL）为（0.38±0.11）L·h ^-1·kg^-1,分布半衰期（t _1/2α）为（0.05±0.01）h,消除半衰期（t _1/2β）为（2.53±0.04）h。在CYP2A6*1/*1,*1/*4和*4/*4患者中未发现显著的药代动力学差异。结论: 中国患者使用右美托咪定后,t _1/2β与公布的一致,但t _1/2α,V和CL较低。在制定右美托咪定的精准治疗方案时,可不予考虑CYP2A6*4突变。     

右美托咪定对小鼠全身炎性细胞因子水平的作用及其机制研究

目的:本研究拟从胆碱能抗炎通路方面阐述右美托咪定的抗炎作用机制。方法: 实验动物选用BALB/c小鼠,以腹腔注射脂多糖（LPS）的方式建立内毒素血症小鼠模型,使用右美托咪定进行干预。观察动物行为学表现及进行生存率分析,实验分为三组（n=20）,分别是右美托咪定组（Dex组）、生理盐水组（Saline组）、空白对组照（C组）。观察药物干预120 h后三组行为学表现及小鼠生存状况。检测血清炎症因子和观察病理形态学试验分为四组（n=16）,分别为右美托咪定组（Dex组）、生理盐水组（Saline组）、α银环蛇毒素+右美托咪定组（αBGT+Dex组）、空白对照组（C组）。用酶联免疫吸附法检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度,最后进行病理形态学检查。颈部迷走神经切除试验分为两组（n=16）：假手术组(SHAM+Dex组)和颈部迷走神经切除组(VNX+Dex组)。注射LPS 3 h后,检测血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度。结果: 生存率分析实验中,Dex组与Saline组比较内毒素血症小鼠的生存率显著提高（P<0.01）;检测血清炎症因子试验中,Dex组血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平较Saline组显著降低（P<0.01）,而αBGT+Dex组血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平则较Dex组显著升高（P<0.01）。并且在心脏组织、肝组织、肾组织、肺组织中病理形态有显著差异。颈部迷走神经切除试验中VNX + Dex组TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水较SHAM + Dex组显著升高（P<0.01）。结论:本实验结果表明右美托咪定预处理显著提高内毒素血症小鼠的生存率,可能与其抑制内毒素血症小鼠血清中炎性细胞因子的表达有关。     

右美托咪定对脓毒症大鼠肾功能及血清炎症因子的影响

目的：探讨右美托咪定（Dex）对脓毒症大鼠肾功能及血清炎症因子的影响。方法：选取60只雄性SD大鼠为实验对象,采用随机数字法将其分为空白组、模型组以及Dex组（n=20）,空白组不采取任何措施,模型组及Dex组采用静脉注射脂多糖制备脓毒症大鼠模型。随后Dex组泵注右美托咪定注射液7 μg·kg-1·h-1,15 min后剂量降低至5 μg·kg-1·h-1,持续泵注30 min,模型组泵注等体积生理盐水。术后12 h、24 h、48 h,每组各取6只大鼠,取腹腔静脉血,应用比色法测定三组血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）水平,免疫酶联吸附实验（ELISA）测定三组血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平。取血后处死大鼠,取右侧肾脏,采用HE染色观察肾组织病理改变情况。结果：术后12 h、24 h、48 h,模型组、Dex组血清Scr、BUN水平均高于空白组（P<0.05）,Dex组低于模型组（P<0.05）;术后12 h、24 h、48 h,空白组Scr、BUN水平差异无统计学意义（P>0.05）,模型组及Dex组Scr、BUN水平依次增加（P<0.05）。术后12 h、24 h、48 h,模型组、Dex组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平均高于空白组（P<0.05）,Dex组低于模型组（P<0.05）;术后12 h、24 h、48 h,空白组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平差异无统计学意义（P>0.05）,模型组及Dex组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平依次增加（P<0.05）。术后12 h、24 h、48 h,HE染色病理切片显示,空白组未见肾脏组织异常改变,模型组与Dex组可见病理改变,且随着时间增加逐渐加重,Dex组各时间点病理改变均较模型组减轻。结论：右美托咪定保护脓毒症大鼠肾功能的作用可能与下调血清炎症因子表达水平有关。     

右美托咪定复合瑞芬太尼对全麻气管拔管反应的影响

目的: 探讨右美托咪定（Dex）复合小剂量瑞芬太尼能否减少全麻气管拔管反应。方法: 选择常规全麻并七氟烷吸入维持的甲状腺手术患者60例,随机分为右美托咪定组（D组,Dex负荷量0.4 μg/kg后0.01 μg•kg^-1•min^-1持续泵注）、小剂量瑞芬太尼组（R组, 持续静脉靶控输注瑞芬太尼1.5 ng/mL效应室浓度）、Dex联合小剂量瑞芬太尼组（DR组,Dex负荷量0.4 μg/kg后0.01 μg•kg^-1•min^-1持续泵注复合静脉靶控输注瑞芬太尼1.5 ng/mL效应室浓度）,每组20例。记录拔管前(T₁)、拔管后1 (T₂)、5 (T₃)、10 min (T₄) 患者心率、血压及SpO₂,观察苏醒期患者睁眼时间、自主呼吸恢复时间、拔管时间、定向力恢复时间、拔管时呛咳情况;在PACU 5、10及20 min时行镇静评分。结果: 三组各记录时点生命体征平稳。三组患者睁眼时间、自主呼吸恢复时间、拔管时间及定向力恢复时间比较差异无统计学意义（P>0.05）。DR组严重呛咳反应发生率较D组、R组显著减少（15% vs 55% vs 40%,P<0.05）。三组患者在PACU 5、10、20 min镇静评分比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论: Dex联合小剂量瑞芬太尼可有效减轻拔管期呛咳反应,且不影响患者清醒及拔管时间。     

右美托咪定复合丙泊酚在无痛肠镜检查中的应用

目的: 观察右美托咪定复合丙泊酚用于无痛肠镜检查的临床效果及安全性。方法: 选择用肠镜检查患者66例,随机分成两组:P组(n=33)、D组(n=33),入室开放上肢静脉,吸氧,监测血压、心率、血氧饱和度,D组先 0.1 μg·kg^-1·min^-1静脉推注右美托咪定(0.1 μg/kg),P组静脉推注安慰剂(0.9%生理盐水)3 mL 后,再 2 μg·kg^-1·min^-1静脉推注丙泊酚(1.5 mg/kg),完成后待睫毛反射消失,开始插镜,检查中如有体动反应,追加丙泊酚30~50 mg,并观察丙泊酚用量,及体动、循环、呼吸抑制等副作用。结果: 丙泊酚总用药量,可唤醒时间P组明显高于D组 ( P<0.05);D组体动发生例数明显低于P组(P<0.05);用丙泊酚实施无痛麻醉过程中均可导致循环抑制,心率加快,右美托咪定对循环影响小,能导致心率降低,可拮抗丙泊酚的心率加快作用(P<0.05)。结论: 小剂量右美托咪定在无痛肠镜中的使用,方法简单,具有良好的安全性; 能协同丙泊酚的麻醉镇静作用,提供更佳的术中镇静效果。     

SLC7A11在右美托咪定预处理减轻小鼠肠缺血再灌注损伤引起铁死亡中的保护作用

目的：评价SLC7A11在右美托咪定预处理减轻小鼠肠缺血再灌注损伤引起铁死亡中的作用。方法：24只雄性健康SPF级C57BL/6J小鼠,8周龄,体质量22～25 g,随机数表法分成4组：假手术组（S组）、肠缺血再灌注组（II/R组）、右美托咪定组（DEX组）、右美托咪定+SLC7A11抑制剂组（DIKE组）,每组6只。夹闭肠系膜上动脉（superior mesenteric artery, SMA）45 min,再灌注30 min建立小鼠肠缺血再灌注损伤模型。DEX组和DIKE组夹闭SMA前30 min腹腔注射25 μg/kg DEX,S组和II/R组腹腔注射等量生理盐水;DIKE组缺血前90 min腹腔注射SLC7A11抑制剂Imidazole ketone erastin 50 mg/kg。再灌注30 min时处死小鼠,距回盲瓣约5 cm处取小肠组织,HE染色光镜下观察肠黏膜病理改变并行Chiu评分,比色法测定小肠组织Fe2+、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,微板法测定谷胱甘肽（glutathione, GSH）含量,免疫印迹法检测小鼠小肠组织SLC7A11、谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4, GPX4）的表达。结果： 与S组比较,其余3组小肠组织Chiu评分、Fe2+和MDA含量升高,GSH含量降低,SOD活性下降,SLC7A11、GPX4表达下调（P<0.05）;给予右美托咪定后明显降低小肠组织Chiu评分、Fe2+和MDA含量,增加SOD活性和GSH含量,SLC7A11、GPX4表达上调（P<0.05）;腹腔注射SLC7A11抑制剂后得到的结果相反。结论：SLC7A11的激活在右美托咪定减轻小鼠肠缺血再灌注损伤引起的铁死亡中发挥保护作用。     

预注右美托咪定对依托咪酯诱导全麻气管插管安全性研究

目的: 观察预注右美托咪定对依托咪酯诱导插管的患者安全性情况。方法: 择期头颈部手术患者80例,随机分成四组:依托咪酯复合右美托咪定组(A组)、丙泊酚复合右美托咪定组(B组)、依托咪酯组(C组)、丙泊酚组(D组),每组20例。记录四组患者在入室后麻醉前基础值(T₀)、给予右美托咪定开始 1 min(T₁)、输注右美托咪定 10 min(T₂)、麻醉诱导后 3 min 为(T₃)、插管即刻(T₄)、插管后 1 min(T₅)、插管后 3 min(T₆)、插管后 10 min(T₇)的SBP、DBP、脑电双频指数(BIS)、心率(HR),记录T₀、T₂两个时点血氧饱和度(SpO₂)值、Ramsay评分。结果: T₂时点与T₀时点比较,A、B组HR下降,并低于C、D组(P<0.01),但对血压并未产生影响(P>0.05);T₃时点跟T₀时点比较,A、B、C三组SBP下降(P<0.01),A、C组DBP下降(P<0.01),B 组DBP下降(P<0.05), T₄时点A组SBP高于B组(P<0.01),A组DBP高于B组(P<0.05);T₅、T₆、T₇时点A、B两组血压、HR比较无统计学差异(P>0.05)。A、B两组SpO₂值T₂时点低于T₀时点(P<0.01),T₂时点Ramsay评分,A、B两组高于C组(P<0.05)。A、B组BIS值T₂时点低于T₀(P<0.01),T₃~T₇时点三组均低于T₀(P<0.01),T₅时点C、D组BIS值高于A、B组(P<0.05)。结论: 预注右美托咪定可以降低依托咪酯诱导全麻气管插管的心血管反应,保留较丙泊酚复合右美托咪定更好的循环调节功能,其抑制插管心血管反应效能和丙泊酚相似。     

术前应用右美托咪定复合氟比洛芬酯对小儿扁桃体摘除术后躁动的影响

目的: 观察超前应用右美托咪定复合氟比洛芬酯在小儿扁桃体摘除术苏醒期的安全性和有效性。方法: 60例ASAⅠ级4～12岁行扁桃体摘除术的患儿,随机分为3组(n=20):对照组(Ⅰ组)、氟比洛芬酯组 (Ⅱ组)、氟比洛芬酯联合右美托咪定组(Ⅲ组),麻醉诱导前分别静注生理盐水 2 mL、1 mg/kg 氟比洛芬酯、1 mg/kg 氟比洛芬酯及 0.5 μg/kg 右美托咪定。所有患儿均采用咪达唑仑-芬太尼-罗库溴铵-异丙酚静脉麻醉诱导、七氟烷吸入维持麻醉。记录3组患儿拔管后各时点血压、心率、麻醉后躁动评分(PAED)和疼痛评分(CHIPPS)、术后恶心呕吐的发生率。结果: Ⅲ组患儿术中和复苏期间芬太尼追加量较Ⅰ组显著减少(P<0.05);3组复苏室低氧血症的发生率分别为25%、20%和5%,Ⅲ组发生率明显降低(P<0.01);与Ⅰ和Ⅱ组比较,Ⅲ组恶心呕吐发生率(30%)减少(P<0.01)。与Ⅰ组比较,Ⅲ组心率在拔管后5、10 min 均下降(P<0.05)。Ⅲ组PAED评分在拔管即刻、拔管后5、10 min 较Ⅰ组低(P<0.01),III组CHIPPS评分在拔管即刻、拔管后 5 min 较Ⅰ组低(P<0.05)。3组患儿麻醉后睁眼时间和拔管时间无统计学差异(P>0.05)。结论: 小儿扁桃体摘除术术前应用氟比洛芬酯联合右美托咪定可以减轻术后疼痛,减少术后躁动、恶心呕吐的发生率,且不影响患儿的苏醒时间。     

阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:观察δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮(5) 脑啡肽(DADLE) 对培养心肌细胞缺氧/复氧(H/R) 损伤的保护作用。方法:采用培养的SD 大鼠乳鼠的心肌细胞, 建立H/R 损伤模型, 检测指标包括:(1) 心肌细胞形态;(2) 心肌细胞存活率;(3) 超氧化物歧化酶(SOD) 活性;(4) 丙二醛(MDA) 含量;(5) 乳酸脱氢酶(LDH) 活性。结果:模型组缺氧后心肌细胞存活率降低, 复氧30 min后进一步下降, 各个时间点细胞内SOD 活性下降, MDA 含量升高, LDH 活性升高, 与正常组比较差异有统计学意义(P <0.01), 复氧60 min 后各指标逐渐趋于正常状态;DADLE 1 μmol/L 组细胞存活率升高, LDH 活性降低, MDA 含量逐渐趋于正常, SOD 活性逐渐回升, 表明经DADLE 干预后, 心肌细胞抗损伤能力加强, 发生损伤的程度减轻;δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10 μmol/L 抑制DADLE的保护作用。结论:DADLE 通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H/R 损伤具有保护作用。     

JNK在缺血后处理减轻再灌注损伤肺细胞凋亡中的作用

目的: 探讨C-Jun氨基末端激酶(JNK)在缺血后处理(IPO)减轻缺血/再灌注损伤大鼠肺细胞凋亡中的作用。方法: 雄性SD大鼠随机分成5组(n＝8),即对照组(C组)、肺缺血/再灌注组(I/R组)、肺缺血/再灌注+缺血后处理组(IPO组)、缺血后处理+溶剂对照组(PPCES溶液)(P组)、缺血后处理+SP600125组(SP组)。分别于再灌注 2 h 颈动脉取血、留取左肺组织,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO),检测肺组织湿/干重比(W/D)和总肺含水量(TLW);光电镜观察肺组织形态学结构改变,并进行肺组织损伤定量评估(IQA);原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI)。结果: 与C组相比,I/R组血清SOD活性显著降低,MDA含量、MPO活力显著升高(P均<0.01),肺组织W/D、TLW、IQA和AI均显著升高(P<0.05 或P<0.01),光镜电镜下肺组织结构发生明显损伤;IPO组、P组、SP组与I/R组相比,MDA含量、MPO活力显著降低,SOD活性升高(P<0.05 或P<0.01),肺组织W/D、TLW、IQA和AI均显著降低(P<0.05 或P<0.01),光镜电镜下肺组织结构损伤情况有所改善;P组与IPO组比较各项指标均无明显差异(P均>0.05);SP组与IPO组相比,MDA含量、MPO活力显著降低,SOD活性升高(P<0.05 或P<0.01),肺组织W/D、TLW、IQA和AI均显著降低(P<0.05或P<0.01),光镜电镜下肺组织结构未见明显损伤。结论: I/R导致大鼠肺组织过度氧化应激,激活JNK,肺内中性粒细胞聚集,导致肺组织结构严重破坏,细胞大量凋亡;IPO可以减轻氧化应激,抑制JNK通路的激活,从而改善其结构破坏和细胞凋亡。     

羟丁酸钠在大鼠海马脑片缺氧复氧损伤中的保护作用机制

目的 研究羟丁酸钠(SO) 在大鼠海马脑片缺氧 复氧(H R) 损伤中的保护作用, 揭示SO 在缺血性脑损伤中的保护作用机制。方法 采用大鼠海马脑片H R 损伤模型。设正常对照组, H R组, SO 1 、10 、100 μmol/L 组, NCS-382 100 μmol/L +SO 100 μmol/L (NCS-382 + SO) 组、NCS-356100 μmol/L (NCS-356) 组。测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶(LDH) 释放率, γ-氨基丁酸(GABA) 、谷氨酸(Glu) 含量;脑片进行TTC 染色计算组织损伤百分率;HE 染色观察组织病理形态学变化, 流式细胞仪测定细胞内钙;酶组织化学法检测一氧化氮合酶(NOS) 的表达。结果 SO 明显降低H R 海马脑片LDH 释放率(P<0.01), 提高TTC 染色的A490值, 降低组织损伤百分率(P<0.01), 升高GABA Glu 比值(P<0.01), 减轻H R 所致的组织病理损伤。H R 组脑片细胞内钙荧光强度和NOS阳性神经元明显高于正常对照组(P<0.01) ;SO 100 μmol/L 组、NCS-356 组细胞内钙荧光强度较H R 组显著减弱(P<0.01),NOS 阳性神经元的数目明显减少(P<0.01)。用γ-羟基丁酸(GHB) 受体选择性阻断剂NCS-382 后再使用SO, 细胞内钙荧光强度、NOS 阳性神经元的数目均接近H R组。结论 SO 对大鼠海马脑片H R 损伤有明显的保护作用, 其机制可能与升高GABA Glu 比值, 激动GHB 受体抑制细胞内钙的增高及NOS 的表达有关。     

巨噬细胞移动抑制因子通过调控自噬抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）对H9c2心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）过程中自噬的影响,并探讨其分子作用机制。方法:利用MIF特异性siRNA瞬时转染H9c2心肌细胞,建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,给予自噬经典抑制剂3-甲基嘌呤（3-MA）,蛋白免疫印迹（Western blot）检测MIF、LC3、Cleaved caspase-3以及mTOR蛋白的表达。 结果:干扰MIF后可抑制H/R诱导的心肌细胞自噬;自噬抑制剂3-MA抑制H/R诱导的心肌细胞自噬,减少细胞凋亡的发生;沉默MIF后可增加H/R过程中p-mTOR的表达。 结论:MIF可通过抑制自噬减少H9c2心肌细胞H/R损伤,其作用机制可能与激活mTOR有关。     

Ero1α在缺氧复氧致H9C2细胞内质网应激时的表达变化及意义

目的: 观察内质网氧化还原酶（Endoplasmic oxidoreductin-1-like protein alpha,Ero1α）表达与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)、细胞凋亡的关系。方法: 将培养的H9C2心肌细胞随机分组：对照组(Control组)、缺氧/复氧1、3、6、12 h组(H/R1组,H/R3组,H/R6组,H/R12组)、4-苯基丁酸钠预处理+缺氧复氧6 h组(4PBA+H/R6组)。对照组心肌细胞正常培养至实验结束,H/R组行缺氧3 h后复氧1、3、6、12 h,4PBA+H/R6组分别于缺氧前2 h给4PBA再行缺氧/复氧6 h过程。Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。Western blot测定Ero1α,内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白(CHOP)、半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白酶12 (caspase-12)的表达。结果: 与对照组比较,Ero1α蛋白表达水平随着复氧时间的延长Ero1α表达量逐渐升高(P<0.01),在复氧3 h明显升高,6 h达到高点。Grp78在缺氧复氧后即明显升高（P<0.01）,在复氧3 h达到高峰。细胞凋亡率也显著升高,其中复氧6 h最为显著。以缺氧3 h复氧6 h作为观测点,H/R6组Ero1α、GRP78、CHOP、Caspase12蛋白表达较对照组明显增加(P<0.01);给予4PBA干预后,Ero1α、GRP78、CHOP、caspase-12蛋白表达较H/R6组明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论: 缺氧复氧能够诱导心肌细胞凋亡及内质网应激,缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞内质网应激时Ero1α的表达可出现相应的变化并与细胞凋亡相关。     

TNF-α对人肺癌A549 细胞凋亡的影响

目的: 探讨TNF-α对人肺癌A549 细胞凋亡的影响;方法:培养人肺癌A549 细胞,与TNF-α(10 、100U·ml^-1)共孵育,通过Western blot 分析P53 蛋白表达的变化,同时利用Annexin V/PI 双染色流式细胞仪,检测人肺癌A549 细胞凋亡率的变化。结果: 与空白组相比,TNF-α组的P53 蛋白表达明显升高,且细胞凋亡率也明显升高,分别为1.22±0.62 和1.65±0.38(P<0.01)。结论: TNF-α可以诱导人肺癌A549 细胞凋亡,从而可能起到抗肿瘤的疗效。     

苦瓜蛋白对A549 肺癌细胞的抑制作用及其对MAPK 信号通路的影响

目的 观察苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A₅₄₉细胞的生长抑制及促凋亡作用;探讨苦瓜蛋白对A₅₄₉ 细胞p42/44-MAPK 及其磷酸化p42/44-MAPK蛋白表达水平的影响及其作用分子机制。方法 以不同浓度梯度的苦瓜蛋白处理A₅₄₉ 细胞, 分别作用不同时间,CCK-8 检测其对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡。提取苦瓜蛋白不同作用时间点的全细胞蛋白, western blot 检测p42/44-MAPK 及p-p42/44-MAPK 信号分子的变化。结果 苦瓜蛋白对A₅₄₉ 细胞生长具有明显抑制作用, 可显著地诱导A₅₄₉ 细胞凋亡。与阴性对照比较, 苦瓜蛋白可以不同程度下调p42/44-MAPK 及p-p42/44-MAPK 信号分子的表达(P <0.05)。结论 苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A₅₄₉ 细胞具有明显地抑制作用及抗肿瘤作用, 其作用可能通过诱导A₅₄₉ 细胞凋亡来实现;苦瓜蛋白可以不同程度地下调p42/44-MAPK 和磷酸化p42/44-MAPK 的表达;MAPK 信号通路可能部分参与了苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制, 驱使肿瘤细胞发生凋亡。     

异丙酚预处理对缺氧/复氧后培养海马神经元金属硫蛋白-3蛋白表达的影响

目的:本研究观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响及金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)在其中的作用。方法: 培养7~10 d 海马神经元,以不同浓度的异丙酚(50,150,250 μmol/L)预处理后 24 h 后,制备缺氧 4 h 后复氧 24 h 模型(H/R),Western blot法检测MT-3蛋白表达水平;以MT-3特异性siRNA沉默MT-3表达后,采用MTT法观察异丙酚对H/R海马神经元存活率的影响。结果: 在H/R条件下,异丙酚可浓度依赖性促进MT-3的蛋白表达。以MT-3 siRNA抑制MT-3蛋白表达后,异丙酚提高神经元存活率的作用消失。结论:异丙酚具有神经元保护效应,这一作用可能与其上调MT-3的蛋白表达有关。     

氨甲蝶呤对映体对肺癌A549细胞的生长抑制作用研究

摘要 目的 研究氨甲喋呤对映体对肺癌A549细胞的生长抑制作用。方法 倒置相差显微镜观察加入MTX对映体后细胞形态变化,应用MTT法检测MTX对映体对A549细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率的变化。 结果 倒置相差显微镜观察加入MTX对映体后细胞形态发生明显变化,MTT法检测表明两种MTX对映体抑制A549细胞的生长呈剂量与时间依赖性,L-（+）-MTX对A549细胞的抑制作用明显强于D-（-）-MTX。流式细胞检测发现两种MTX对映体药物对A549细胞的细胞周期和凋亡具有明显干扰作用。 结论 MTX对映体对A549细胞的作用明显具有手性差异,L-（+）-MTX对A549细胞的抑制作用明显强于D-（-）-MTX。关键词：氨甲蝶呤,对映体,A549细胞,增殖,凋亡     

碳酸酐酶1沉默对肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨沉默碳酸酐酶1（CA1）对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:采用脂质体转染法将CA1特异性siRNA（si-CA1组）及阴性对照（si-NC组）转染肺癌A549细胞,同时以转染空脂质体的A549细胞为空白对照组（Blank组）。采用实时荧光定量PCR（qPCR）和蛋白印迹法（Western blot）检测CA1 mRNA和蛋白表达水平,细胞计数试剂盒法（CCK-8）、流式细胞术、Transwell实验分别检测A549细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力。结果:qPCR和Western blot检测结果显示,转入CA1 siRNA的A549细胞中CA1 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P<0.05）;CCK-8实验结果显示,沉默CA1后si-CA1组A549细胞在24、48和72 h时光密度（OD）值明显低于si-NC组（P<0.05）;流式细胞术结果发现,si-CA1组A549细胞凋亡率明显高于si-NC组（P<0.05）;Transwell实验结果显示,si-CA1组侵袭和迁移细胞数均明显少于si-NC组（P<0.05）。与Blank组相比,si-NC组以上各指标差异均不显著（P>0.05）。结论:沉默CA1能够抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡。