超高效液相色谱串联质谱法测定大鼠血浆中埃索美拉唑质量浓度及药动学研究

目的：建立超高效液相色谱串联质谱（UPLC-ESI-MS/MS）法测定大鼠血浆中埃索美拉唑的含量,并应用于药动学研究。方法：血浆样品经蛋白沉淀法处理后,采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.8 μm）,以A（0.1%甲酸）-B（乙腈）（80：20）为流动相,柱温为35℃,采用电喷雾电离源（ESI）源,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测。通道分别为m/z 346→198（埃索美拉唑）和m/z 254→156（内标,磺胺甲卟唑）,用非室模型计算药动学参数。结果：埃索美拉唑的线性范围为0.2~20 ng·mL^-1（r=0.999 7）,检出限为0.12 ng·mL^-1,日内日间精密度均小于10%。低、中、高3个浓度提取回收率均大于90%,达峰时间（t_max）为（1.5±0.5）h,达峰浓度（C_max）为（620.65±2.89）ng·mL^-1,药物浓度-时间曲线下面积（AUC_0-t）为（2 530.68±60.17）ng·h·mL^-1,半衰期（t_1/2）为（3.87±0.03）h。结论：该方法操作简便、快速、准确度高、重复性好,可用于大鼠血浆中埃索美拉唑的测定和药动学研究。     

二甲双胍肠溶片人体药动学和生物利用度研究

目的：研究二甲双胍肠溶片生物利用度。方法：HPLC法测定血浆中二甲双胍浓度。30名健康受试者随机交叉单剂量口服二甲双胍肠溶片参比药物和试验药物1 000 mg,测定不同时间血浆中二甲双胍浓度,DAS软件处理药时数据。结果：与参比药物相比,试验药物相对生物利用度F₀^t：（97.3±14.9）%,F₀^∞：（94.9±13.9）%;试验药物与参比药物的主要药动学参数t_max分别为：（2.20±0.49）h;（2.42±0.58）h,C_max分别为：（1 733±379）ng·mL^-1;（1 620±396）ng·mL^-1,t_1/2ke分别为：（2.48±0.40）h;（2.50±0.20）h,AUC₀^t分别为：（11 402±2 402）ng·h·mL^-1;（10 701±2 011）ng·h·mL^-1,AUC₀^∞分别为：（12 258±2 401）ng·h·mL^-1;（11 299±2 321）ng·h·mL^-1;对两制剂间AUC₀^t、AUC₀^∞、C_max、t_max药动学参数进行双向单侧t检验,P值分别为：0.050 86、0.059 02、0.063 85、0.058 34,均大于0.05,无统计学意义。结论：二药物生物等效。     

HPLC-DAD波长切换法同时测定化扁汤中10种有效成分的含量

目的：采用高效液相色谱-二极管阵列检测（HPLC-DAD）波长切换法建立同时测定化扁汤中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、连翘苷和牛蒡苷10种有效成分的定量分析方法。方法：采用SHIMADZU Insertsustain C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以流动相乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,DAD检测器,检测波长为327 nm（0~37 min,检测新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C）、278 nm（37~41.3 min,检测黄芩苷）、228 nm（41.3~50 min,检测连翘苷和牛蒡苷）,流速1.0 mL·min^-1,柱温为35℃。结果：各成分均能有效检出且分离度良好;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、连翘苷、牛蒡苷10种成分的进样浓度分别在4.512~1.444×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、14.162~4.532×10² μg·mL^-1（r=1.000 0）、2.538~0.812×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、3.275~1.048×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、2.638~0.844×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、5.912~1.892×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、8.162~2.612×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、30.288~9.692×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、3.288~1.052×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）、5.812~1.860×10² μg·mL^-1（r=0.999 9）与峰面积呈良好的线性关系;加样回收率（n=6）分别为99.1%（RSD=1.1%）、99.6%（RSD=0.9%）、100.2%（RSD=1.5%）、99.8%（RSD=1.6%）、99.5%（RSD=1.4%）、100.3%（RSD=1.0%）、100.0%（RSD=2.0%）、99.7%（RSD=1.5%）、99.6%（RSD=1.5%）、99.7%（RSD=1.9%）。结论：利用HPLC-DAD波长切换法可同时测定化扁汤中10种有效成分的含量,该法简便可靠,重现性好,为化扁汤的质量控制与评价提供科学依据。     

基于超高效液相色谱-串联质谱快速检测索非布韦及其代谢物在大鼠体内的生物等效性分析

目的：建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）快速并同时测定大鼠血浆中抗丙肝药索非布韦及其代谢物GS-331007的含量,探讨索非布韦代谢产物作为标记物测定药时曲线的可能性,研究不同厂家抗丙肝药索非布韦在大鼠体内的生物等效性。方法：通过液质联用检测原研药A和仿制药B以36 mg·kg^-1灌胃大鼠各时间点索非布韦和GS-331007的血药浓度。用DAS 2.1.1和SPSS 17.0软件计算药动学参数并比较原研药A和仿制药B的一致性。结果：原研药A和仿制药B中索非布韦药动学参数C_max分别为（1 376.08±174.95）ng·mL^-1和（1 297.58±164.93）ng·mL^-1,t_max分别为（0.75±0.08）h和（0.72±0.16）h,t_1/2分别为（1.57±0.20）h和（1.73±0.45）h,AUC_（0→t）分别为（2 691.67±280.85）ng·mL^-1·h和（2 851.20±199.54）ng·mL^-1·h,AUC_{（0→∞）}分别为（2 748.51±258.91）ng·mL^-1·h和（3 007.75±364.02）ng·mL^-1·h,原研药A和仿制药B代谢物GS-331007 C_max分别为（1 302.52±163.73）ng·mL^-1和（1 430.88±107.52）ng·mL^-1,t_max分别为（3.97±0.74）h和（3.95±1.38）h,t_1/2分别为（5.56±2.55）h和（5.44±1.38）h,AUC_（0→t）分别为（9 723.24±1170.38）ng·mL^-1·h和（9 032.31±1 037.76）ng·mL^-1·h,AUC_{（0→∞）}分别为（9 893.26±1 251.89）和（9 316.90±1 293.44）ng·mL^-1·h。结论：本实验建立的UPLC-MS/MS方法可在3.5 min内准确测定大鼠血浆中索非布韦及其代谢物GS-331007含量。根据索非布韦和其代谢物GS-331007药时曲线得出原研药A和仿制药B的药动学参数一致性较好（P>0.05）。本工作发现用代谢物GS-331007作为索非布韦生物等效性研究的可能性。     

微乳液相色谱法测定大鼠血浆中罗布麻甲素的浓度及其药动学研究

目的：建立测定大鼠血浆中罗布麻甲素的微乳液相色谱方法,并将其用于大鼠体内药动学的研究。方法：用微乳液相色谱法分别测定给药后不同时间点大鼠的血药浓度,并对其药动学参数进行研究。色谱条件为：色谱柱为Zorbax SB-C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）柱;流速0.8 mL·min^-1;检测波长360 nm;柱温30℃。采用经过优化后的微乳体系为流动相,其组成为：2.0% Genapol X-080-2.8%正丁醇-1.8%乙酸乙酯-0.4%三乙胺-93.0%水溶液（pH调至5.0）。结果：大鼠静脉注射罗布麻甲素后,其药动学模型符合二室模型。分布和消除相半衰期分别为7.3 min和28.7 min。药时曲线下面积AUC（μg·min^-1·mL^-1）为804.37。表观分布容积V_d（μg·mL^-1）为0.325。平均驻留时间MRT（min）为25.8。大鼠血浆中罗布麻甲素在0.1~10 μg·mL^-1内线性均良好（r=0.998 6）,最低定量浓度（S/N=10）为0.1 μg·mL^-1,日内和日间RSD均小于4.9%,平均加样回收率在96.3%~98.8%之间,RSD均小于5.1%。结论：本法快速、简便、准确、重现性好,可用于罗布麻甲素血药浓度测定及药动学研究。     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血清中文拉法辛和O-去甲基文拉法辛浓度的不确定度评价

目的：评价高效液相串联质谱（Liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）法测定人血清中文拉法辛和O-去甲基文拉法辛浓度的不确定度。方法：对可能会引入不确定度的步骤进行分析,包括测量重复性、样品称量、溶液配制、样品处理、仪器允差、基质效应、提取回收、标准曲线拟合等,评估扩展不确定度。结果：文拉法辛低（12 ng·mL^-1）、中（120 ng·mL^-1）、高（300 ng·mL^-1）浓度质控样品的拓展不确定度分别为：U_L=0.847 ng·mL^-1,U_M=7.518 ng·mL^-1,U_H=20.776 ng·mL^-1;O-去甲基文拉法辛低（60 ng·mL^-1）、中（600 ng·mL^-1）、高（1 500 ng·mL^-1）浓度质控样品的拓展不确定度分别为：U_L=11.666 ng·mL^-1,U_M=91.479 ng·mL^-1,U_H=254.523 ng·mL^-1（P=95%,k=2）。结论：LC-MS/MS法测定人血清中文拉法辛和O-去甲基文拉法辛浓度的不确定度主要来源于标准曲线拟合、基质效应和提取回收过程。选择合适的同位素氘代内标浓度能够有效降低标准曲线拟合过程引入的不确定度。     

HPLC-ELSD法快速测定生脉注射液中糖类成分含量

目的：利用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）建立生脉注射液中糖类成分快速定量分析方法。方法：采用Alltech Prevail^TM Carbohydrate ES （4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈和水为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30℃,进样量20 μL,ELSD漂移管温度65℃。结果：生脉注射液中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖成分达到基线分离,浓度在179.0~2 864 μg·mL^-1（r=0.996 8）,49~784 μg·mL^-1（r=0.998 1）,39~642 μg·mL^-1（r=0.996 8）,30~480 μg·mL^-1（r=0.999 3）范围内均呈现良好的线性关系。平均回收率（n=3）在98.34%~100.7%之间,RSD ≤ 3.8%。结论：该方法快速、准确,可用于生脉注射液中糖类成分的定量检测。     

波长切换高效液相色谱法同时测定青翘抗毒颗粒中7个成分的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定青翘抗毒颗粒中绿原酸、马钱苷、连翘苷、葛根素、（R,S）-告依春、射干苷、咖啡酸的含量。方法：采用岛津InertSustain C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以甲醇-0.3%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;进样量为5 μL;检测波长为240 nm（0~25 min,检测（R,S）-告依春）、327 nm（25~39 min,检测绿原酸和咖啡酸）、240 nm（39~45 min,检测葛根素和马钱苷）、265 nm（45~53 nm,检测射干苷）、228 nm（53~65 min,检测连翘苷）;柱温为30℃。结果：绿原酸、马钱苷、连翘苷、葛根素、射干苷、咖啡酸、（R,S）-告依春7个成分的进样质量浓度分别在4.56~228 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、4.04~202 μg·mL^-1（R²=0.999 8）、8.10~405 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、8.06~161 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、2.10~105 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、3.46~173 μg·mL^-1（R²=0.999 9）、4.58~229 μg·mL^-1（R²=0.999 9）与峰面积呈良好的线性关系;各组分分离度良好;加样回收率（n=6）分别为99.35%（RSD为2.6%）、100.76%（RSD为1.5%）、100.34%（RSD为0.9%）、100.63%（RSD为1.5%）、100.31%（RSD为1.7%）、100.70%（RSD为1.6%）、99.03%（RSD为1.7%）。结论：本研究建立的含量测定方法符合方法学验证要求,可用于青翘抗毒颗粒7个指标性成分的同时测定。     

高效液相色谱法测定人血清中替考拉宁浓度的不确定度评定

目的：评定高效液相色谱（HPLC）法测定人血清中替考拉宁浓度的不确定度。方法：HPLC法测定人血清中替考拉宁浓度，分析评定测定精密性、天平称量、工作液制备、血清样品制备、液相色谱仪、提取回收率、标准曲线拟合、对照品纯度、样品均匀性以及温度等因素对结果的影响，计算各因素的相对标准不确定度，最终计算合成标准不确定度和扩展不确定度。结果：当置信概率为95%时，人血清中低（6 μg·mL^-1）、中（20 μg·mL^-1）、高（50 μg·mL^-1）浓度替考拉宁的扩展不确定度分别为U（L）=0.63 μg·mL^-1，U（M）=1.87 μg·mL^-1，U（H）=5.08 μg·mL^-1，其测量结果可分别表示为（6.18±0.63）、（20.74±1.87）、（50.09±5.08）μg·mL^-1。结论：HPLC法测定人血清中替考拉宁浓度的不确定度主要由标准曲线拟合、样品提取过程（特别是低、高浓度）引入。     

UPLC-MS/MS法同时检测大鼠血浆中参芪扶正注射液主要成分的含量及其药动学

目的：建立超高效液相-三重四极杆质谱联用（UPLC-MS/MS）法同时测定大鼠血浆中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷和党参炔苷的浓度,研究参芪扶正注射液在大鼠体内的药动学。方法：血浆样品加入适量内标,50%甲醇-乙腈沉淀蛋白,离心后取上清进样。采用ACE Excel 1.7 C₁₈柱（50 mm×2.1 mm,2.1 μm）,柱温：40℃,流速：0.6 mL·min^-1,流动相由0.1%甲酸水和0.1%甲酸-乙腈组成,采用梯度洗脱,分析时间2.5 min。质谱采用ESI源,正离子检测。大鼠尾静脉注射参芪扶正注射液浓缩液,眼眶采血测定血浆中药物浓度,药动学参数以DAS 3.0软件处理。结果：黄芪甲苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷、党参炔苷的浓度分别在5~2 000 ng·mL^-1、2~800 ng·mL^-1、10~4 000 ng·mL^-1内均呈良好线性关系（R ≥ 0.991 5）;日内、日间精密度良好,RSD均小于13.3%（n=6）;提取回收率均在79.0%~97.1%之间,RSD均小于11.4%（n=6）。药动学结果表明,黄芪甲苷、党参炔苷和毛蕊异黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷在大鼠体内的AUC_0-t分别为（38.84±17.20）、（23.11±6.84）、（5.32±0.36）μg·min·L^-1,t_1/2分别为（56.44±28.25）、（47.48±9.54）、（10.01±4.42）min,CL分别为（0.15±0.06）、（1.18±0.47）、（0.47±0.11）mL·min^-1·kg^-1。结论：本法简便、快速、灵敏度高、专属性好,可用于参芪扶正口服液大鼠血浆中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷和党参炔苷的含量测定及药动学研究。     

高效分子排阻色谱法分析头孢尼西钠中的聚合物

目的：建立高效分子排阻色谱（HPSEC）法测定头孢尼西钠中的聚合物,并与葡聚糖凝胶G-10为填料的凝胶色谱法进行比较。方法：HPSEC法采用表面键合亲水薄膜硅胶为填料的色谱柱（Zenix SEC-150,7.8 mm×300 mm）;流动相为0.01 mol·L^-1磷酸盐缓冲液-乙腈（95∶5）;流速： 1.0 mL·min^-1;检测波长250 nm。结果：HPSEC法：头孢尼西及其聚合物分别在1~100 μg·mL^-1和0.25~1.75 mg·mL^-1范围内的线性关系良好,头孢尼西的定量限为1.0 ng·mL^-1,精密度（RSD）为0.57%,聚合物测定重复性（RSD）为1.01%。凝胶色谱法： 头孢尼西的定量限为500 ng· mL^-1,精密度（RSD）为1.81%,聚合物测定重复性（RSD）为3.08%。HPSEC和凝胶色谱法测得的样品中头孢尼西聚合物的量分别为1.31%和0.23%。结论：HPSEC 法适于测定头孢尼西钠聚合物,较凝胶色谱法专属性强,灵敏度高,重复性好,操作简便。     

LC-MS/MS法同时分析血液中几种免疫抑制剂浓度

目的：建立LC-MS/MS法同时测定人血浆及全血中霉酚酸（MPA）、环孢素（CsA）、他克莫司（TAC）及西罗莫司（SRL）等几种常用免疫抑制剂的浓度。方法：分别采用蛋白沉淀法与液液萃取法处理血浆与全血：100 μL血浆加入含内标乙腈，涡旋振荡， 离心后取上清液进入LC-MS/MS分析。100 μL全血加入硫酸锌破裂血细胞，加入乙醚萃取，分离有机相，以氮气吹干后流动相复溶分析。色谱柱为 Agilent Eclipse XDB-C₁₈柱（3.5 μm，2.1 mm×100 mm），流动相为 2 mmol·L^-1 甲酸铵水溶液和甲醇，采用梯度洗脱的方式，流速0.3 mL·min^-1，多反应监测定量，ESI 正离子方式进行检测，用于定量分析的检测离子对分别为m/z→274.4/159.2（MPA），m/z→1 219.4/1 202.4（CsA），m/z →821.7/768.5（TAC），m/z →931.6/864.5（SRL），内标m/z→809.6/756.5（子囊霉素），m/z→356.3/312.0（吲哚美辛）。回顾性收集常规监测肾移植患者的全血标本，比较LC-MS/MS 法与 EMIT法的检测结果。结果：CsA、TAC、SRL、MPA的线性范围分别为：4~1 000 ng·mL^-1 （r=0.999 7）、0.2~50 ng·mL^-1 （r=0.999 5）、0.2~50 ng·mL^-1 （r=0.999 8）、0.204~51 μg·mL^-1 （r=0.997 6），血浆和全血日内和日间相对标准差（RSD）均小于15%，提取回收率以及基质效应血浆中为72.38%~98.52%、65.61%~99.19%，全血中为85.34%~99.76%、75.94%~97.67%。不同法检测全血中与血浆中CsA及TAC浓度相关性良好，而血浆中CsA与TAC显著低于全血中水平，MPA血浆浓度大约为全血浓度的2倍。结论：本研究建立的方法具有方便快速的特点，可以同时测定几种免疫抑制剂浓度，对同时监测多种免疫抑制剂具有一定价值。     

高效液相色谱法同时测定蒙药阿那日-4散中3种成分的含量

目的：建立蒙药阿那日-4散（石榴、肉桂皮、白豆蔻、荜茇）中有效成分没食子酸、桂皮醛和胡椒碱的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法以Promosil C₁₈（4.6 mm×250 nm,5μm）为色谱柱;以乙腈-1%冰乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;柱温为30℃;检测波长为290 nm。结果：没食子酸在0.08~0.4μg·mL^-1（r=0.9998）、桂皮醛在0.56~2.81μg·mL^-1（r=0.9996）、胡椒碱在0.52~2.59μg·mL^-1（r=0.9997）范围内与峰面积呈良好的线性关系;其平均回收率（n=6）分别为99.5%（RSD=2.3%）、99.3%（RSD=2.8%）和98.5%（RSD=2.2%）;6批样品中上述3种成分平均含量范围分别为0.198~0.241,2.44~2.61,1.41~1.54μg·g^-1。结论：所建立方法操作简便、稳定可靠、专属性强、准确度及重复性较好,为蒙药阿那日-4散质量检测提供依据。     

氯吡格雷活性代谢物在人体内的血药浓度测定

目的：采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）建立人血浆中氯吡格雷活性代谢产物浓度测定的方法。方法：血浆经冷冻干燥处理,以Accucore C₁₈为色谱柱;乙腈（含0.01%甲酸）-水（含0.01%甲酸）为流动相,流速0.4 mL·min^-1,柱温30 ℃,进样量2 μL;通过正离子模式多反应监测扫描分析,离子通道分别为氯吡格雷活性代谢产物衍生物（CAMD）m/z 504.2→155.1,内标氯雷他定m/z 382.8→336.9。结果：血浆中氯吡格雷活性代谢产物衍生物在0.5~500 ng·mL^-1范围内线性关系良好;最低检测限为0.5 ng·mL^-1;提取回收率为83.81%~97.65%;日内和日间精密度的RSD均小于9.86%。结论：本方法准确可靠,简便快速且灵敏度高,适用于人血浆中氯吡格雷活性代谢物的测定,可进一步用于研究氯吡格雷活性代谢产物的药代动力学特征。     

SFOD-LPME-HPLC测定金线莲中对羟基苯乙酮和香草乙酮

目的：建立漂浮有机液滴凝固液相微萃取-高效液相色谱（SFOD-LPME-HPLC）法测定金线莲中对羟基苯乙酮和香草乙酮含量的方法。方法：利用SFOD-LPME技术对中药材金线莲中低峰度组分对羟基苯乙酮和香草乙酮进行富集,最后运用HPLC进行分析。优化后的萃取实验条件：60 μL的十二醇为萃取溶剂,1 000 μL的四氢呋喃为分散溶剂,15 mL样液加入氯化钠4.50 g,pH为4.0,40℃水浴,以1 500 r·min^-1转速搅拌萃取40 min。色谱条件：色谱柱：Agilent TC-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：甲醇-0.1%乙酸（25：75）;流速：1.0 mL·min^-1;柱温：31.5℃;检测波长：275 nm。结果：对羟基苯乙酮和香草乙酮的线性范围均为2~24 ng·mL^-1,检测限分别为0.06 ng·mL^-1和0.17 ng·mL^-1,富集倍数分别为166和140,测得福建南靖组培金线莲中对羟基苯乙酮和香草乙酮的含量分别为1.69 μg·g^-1和0.72 μg·g^-1,回收率在95.29%~104.30%之间。结论：该法具有集富集、净化于一体的特点,可成为简单、可靠、快速的中药质量控制前处理和测定方法。