奥巴克拉联合5-氟尿嘧啶对低氧性胰腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的: 研究在低氧条件下,奥巴克拉(obatoclax)联合5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)对胰腺癌细胞株BxPC-3细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）的影响。方法: 细胞分组为低氧组、5=FU组、obatoclax+5-FU组,利用MTT法检测各组BxPC-3细胞增殖活性;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western blot检测各组BxPC-3细胞中EMT相关基因与蛋白的表达情况。结果: 在低氧条件下,obatoclax联合5-FU可抑制BxPC-3细胞的增殖活性,且具有时间依赖性;obatoclax联合5-FU可进一步促进EMT的管家基因,转录因子Snail与Slug的表达升高;obatoclax联合5-FU促进上皮标记E-Cadherin的表达升高,及间质标记N-Cadherin、Fibronectin、Collagen I、Vimentin的表达下降。结论: 在低氧状态下obatoclax联合5-FU可抑制胰腺癌BxPC-3细胞的增殖活性,可通过抑制转录因子Snail与Slug的表达,上调上皮标记E-Cadherin的表达,下调间质标记N-Cadherin、Fibronectin、Collagen I及Vimentin的表达,从而抑制肿瘤细胞上皮向间质的转化,进而降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。     

5-氟尿嘧啶配伍姜黄素抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的: 研究5-氟尿嘧啶(5-FU)与姜黄素联合用药对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用及相关机制。方法: 采用MTT法检测5-FU和姜黄素单独及联合用药后细胞活力,并计算5-FU与姜黄素联合用药后q值;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;PI单染流式细胞仪分析细胞周期的变化;Annexin V/PI 双染流式细胞仪分析凋亡率;Western blotting法检测Caspase-9、Caspase-3蛋白变化。结果: MTT结果表明,单独给予5-FU和姜黄素在一定的浓度范围内能够抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖;联合用药具有协同作用;JC-1染色结果显示单独给药组的SGC-7901细胞线粒体膜电位有所降低,而联合用药组与单独给药组相比则膜电位明显降低;PI单染检测发现50 μmol/L姜黄素和 20 μmol/L 5-FU作用于SGC-7901细胞 24 h 后,细胞周期阻滞于G₂/M期;AV/PI双染经流式细胞仪检测后发现,5-FU与姜黄素单独和联合作用均能诱导SGC-7901细胞凋亡,且联合用药组与单独用药组相比细胞凋亡率增加;Western blotting法实验结果表明,单独给药组中Caspase-9和Caspase-3蛋白表达上调,而联合用药组蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论: 5-FU与姜黄素联合作用于人胃癌SGC-7901细胞具有协同效应,其作用机制可能与诱导细胞活性氧产生,细胞线粒体损伤和阻滞细胞周期而诱导细胞凋亡有关。     

氮酮与薄荷醇联用对5-氟尿嘧啶的促透作用

目的：以5-氟尿嘧啶（5-FU）为模型药物,对氮酮和薄荷醇的促透特性进行比较,并探讨两种促透剂合用时的促透效果。方法：在离体透皮实验装置上进行透皮试验,由浓度计算累积透过量,运用倍量法对氮酮与薄荷醇联用的效果进行评价。结果： 浓度为0.25%、0.50%、1.00%、2.00%的氮酮对5-FU均有促透作用,与空白对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;浓度为0.25%、0.50%、1.00%、2.00%的薄荷醇对5-FU也有明显的促透作用,与空白对照相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;用倍量法对两种药物联用的作用进行评价分析时,二者联用未显示有协同作用。结论：氮酮和薄荷醇对（5-FU）均有促透作用,但二者以相同浓度合用时,未有明显的协同作用。     

雷替曲塞或5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂一线治疗晚期胃癌的对比性研究

目的: 观察雷替曲塞联合奥沙利铂(A组)与5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂(B组)一线治疗晚期胃癌的近期疗效和毒副反应。方法: 晚期胃癌43例,具体用法:A组(21例):雷替曲塞 3 mg/m² 静滴,第1 天;奥沙利铂 130 mg/m² 静滴,第1 天。B组(22例):亚叶酸钙 200 mg/m² 静滴,第1~5天;氟尿嘧啶 375 mg/m² 静滴,第1~5 天;奥沙利铂 130 mg/m² 静滴,第1 天。两方案均3 周为1 周期。每3 个周期评价疗效,直至疾病进展或毒副反应不能耐受,最多化疗6 周期。结果: 两组的有效率(RR)分别为 47.6%和 31.8%(P=0.289),A组中位无进展生存期(PFS)9.8个月,明显优于B组的 6.6 个月,两组对比差异有统计学意义(χ²=3.928,P=0.047)。两组方案的恶心呕吐及手足综合征反应差异具有统计学意义(P＜0.05),余毒副反应发生率近似。结论: 与5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂(B组)方案相比,雷替曲塞联合奥沙利铂(A组)方案一线治疗晚期胃癌可延长患者的无进展生存期(PFS),且耐受性较好。     

芬戈莫德对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖和凋亡的作用

目的: 观察芬戈莫德（FTY720）对人胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其可能的机制。方法: 将FTY720作用于MIAPaCa-2细胞,采用不同方法观察细胞形态学和分子生物学方面的改变。结果: MTT结果显示经过FTY720处理后,MIAPaCa-2细胞的增殖受到抑制,且这种作用呈现剂量依赖性,IC₅₀约为5 μmol/L。流式细胞术提示FTY720可以促进MIAPaCa-2细胞凋亡。划痕实验结果显示FTY720可抑制MIAPaCa-2细胞迁移。3D细胞增殖实验结果显示FTY720可以抑制MIAPaCa-2细胞增殖和集落形成。Western Blotting显示FTY720可以降低p-Akt、Bcl-2和pro-caspase-3的表达,上调caspase-9表达。结论: FTY720可以抑制胰腺癌MIAPaCa-2细胞的增殖,并且引起细胞凋亡,可能与其降低Bcl-2的表达,进而激发caspase家族介导的凋亡程序有关。     

5-氟尿嘧啶、表阿霉素、丝裂霉素单用及合用时对胰腺癌细胞Aspc-1 和Bxpc-3 的抑制作用

目的 观察5-氟尿嘧啶(5-FU)、表阿霉素(EADM)和丝裂霉素(MMC) 体外对胰腺癌细胞(Aspc-1及Bxpc-3) 的作用和药物联合应用时的相互作用。 方法 采用MTT 测定法观察5-FU、E-ADM 和MMC 单用及合用时对细胞的抑制作用, 并应用中效原理判定药物合用的效果。 结果 单用或者合用时随着药物浓度的增加其对细胞的抑制作用也增加, 5-FU 和MMC 合用于Aspc-1 细胞株, 当效应为0.84 时CI 为1, 大剂量时(效应大于0.84) 是协同作用(CI <1), 小剂量时(效应小于0.84) 是拮抗作用(CI >1)。MMC和E-ADM 合用时表现为轻度的拮抗作用。5-FU 和MMC、MMC 和E-ADM 合用于Bxpc-3, 当效应分别为0.49、0.62 时CI 为1, 大于此效应表现为轻度拮抗(C >1), 小于此效应则相反。5-FU 和E-ADM 合用对两株细胞量效曲线图的形态相似表现为轻度的拮抗作用, 随着效应的增加拮抗作用略有下降。 结论 药物的相互作用与药物浓度有关, 药物及细胞株的不同其量效曲线存在较大差异。通过动脉灌注或保留导管持续灌注以提高化疗药物局部浓度能够改善胰腺癌的化疗效果。     

通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药

目的：探讨核糖核苷酸还原酶M2（RRM2）在肝癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药中的作用,并开发潜在的策略来提高肝癌细胞对5-FU的敏感性。方法：利用Western blot检测5-FU耐药肝癌细胞（BEL/5-FU）与非耐药肝癌细胞（BEL7402）中RRM2蛋白的表达差异;通过用RNA干扰技术下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达或RRM2抑制剂3-AP（Triapine）抑制RRM2活性;CCK-8和集落形成实验用于检测细胞的增殖能力;使用高内涵细胞成像系统仪检测与分析细胞凋亡。结果：BEL/5-FU细胞中RRM2的表达量是BEL7402细胞的2.5倍。RNA干扰技术能够下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达,并使5-FU对BEL/5-FU细胞的半数抑制浓度（IC50）下降约50%,同时细胞集落形成能力也显著减弱。3-AP与5-FU联合处理BEL/5-FU细胞,使5-FU对BEL/5-FU细胞的IC50下降约40%,细胞集落形成能力减弱,并促进5-FU导致的细胞凋亡。结论：RRM2与肝癌细胞对5-FU的耐药相关,本研究通过抑制RRM2的活性来逆转肝癌细胞对5-FU的耐药,为提高肝癌的5-FU化疗疗效提供新靶点和新思路。     

黄药子醇提物对人胃癌细胞凋亡及FABP-5表达的影响

目的: 探讨黄药子醇提物对人胃癌MGC-803细胞的侵袭、凋亡及FABP-5表达的影响。方法: 制备黄药子醇提物,以人胃癌细胞MGC-803细胞为研究对象,根据细胞培养液所含黄药子醇提物的不同浓度,将实验分为空白对照组（等量无菌水）、黄药子醇提物低浓度组（60 mg/L）和高浓度组（120 mg/L）。分别以CCK-8法检测体外细胞增殖能力;流式细胞技术观测细胞周期及凋亡的情况变化;TUNEL染色观察各组细胞的凋亡情况;细胞侵袭小室法观测体外细胞的侵袭力变化,以RT-PCR法和Western blot法从mRNA水平和蛋白水平对FABP-5基因的表达进行检测,每组实验重复3次。结果: 黄药子醇提物高浓度组和低浓度组MGC-803细胞的生长速度明显减缓,G₁期细胞比例降低,S期和G₂/M期比例增高;与空白对照组相比,高浓度组和低浓度组细胞的凋亡率明显升高（P<0.01）,增殖、侵袭能力显著下降（P<0.05),高浓度组和低浓度组细胞相比促进凋亡和抑制FABP-5表达的作用更明显（P<0.05)。RT-PCR和Western blot显示,黄药子醇提物高浓度组和低浓度组较空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白表达都明显下降。结论: 黄药子醇提物可加快人胃癌MGC-803细胞的凋亡,抑制其增殖力和侵袭能力,并对FABP-5 mRNA和蛋白的表达起到抑制作用,提示此机制可能使其参与了抗肿瘤的作用。     

灵菌红素对人胰腺癌细胞增殖抑制的实验研究

目的 观察从生物工程技术得到的灵菌红素对人胰腺癌8898 细胞增殖抑制的药效学作用, 并探讨其作用的部分机理。 方法 用MTT 法测定8898细胞的存活率和抑制率, 用流式细胞仪分析细胞的周期变化和凋亡细胞的百分比, 用HPLC 检测人胰腺癌8898 细胞内灵菌红素的浓度, 用琼脂糖凝胶电泳对DNA 段片化进行分析。 结果 灵菌红素5 mg·L^-1的培养液中8898 细胞出现凋亡早期的形态学特征, 半数抑制浓度(IC₅₀) 为30 mg·L^-1。而3T3 细胞却未显示出该作用。研究表明灵菌红素抑制细胞的增殖, 与抑制S 期细胞的DNA 复制及调控细胞的增殖周期相关。同时, 细胞凋亡的产生与实验药物呈正相关。HPLC 结果显示, 灵菌红素的药理学作用与细胞内药物浓度相关。 结论 灵菌红素能有效的进入细胞内, 抑制细胞的增殖, 其机理与诱导细胞凋亡和调控细胞的增殖周期相关。     

低氧诱导因子-1α对脓毒症肠黏膜屏障的保护作用

目的：探讨低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对脓毒症肠黏膜屏障的影响及机制。方法：SD大鼠随机分4组：假手术组、脓毒症组、脓毒症+HIF-1α刺激剂组（脓毒症+DMOG组）、脓毒症+HIF-1α抑制剂组（脓毒症+Bay87-2243组）,每组6只。采用盲肠结扎穿孔（cecal ligation and perforation, CLP）建立脓毒症模型。ELISA检测大鼠血浆炎性标记物IL-1β、IL-6、TNF-α,氧化应激标记物丙二醛（MDA）以及抗氧化因子超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的水平。Western blot检测大鼠肠黏膜HIF-1α表达。HE染色检测肠黏膜病理学损伤。结果：与假手术组相比,脓毒症大鼠炎症因子、氧化应激因子以及HIF-1α显著上调（P<0.05）;给予腹腔注射DMOG明显降低脓毒症大鼠血浆IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平（P<0.05）;增加血浆SOD、CAT水平（P<0.05）;HIF-1α表达上调（P<0.05）,肠黏膜病理损伤减轻,Chiu's评分显著降低（P<0.05）。口服灌胃Bay87-2243则得到相反的结果。 结论：HIF-1α对脓毒症肠黏膜损伤具有保护作用,其机制可能与缓解脓毒症炎性反应和抑制氧化应激水平有关。     

泛素特异性肽酶22诱导胰腺癌细胞对吉西他滨耐药的观察

目的: 探讨泛素特异性肽酶22（ ubiquitin specific peptidase 22,USP22）在胰腺癌吉西他滨耐药中的作用。方法: 采用Western blot检测吉西他滨诱导不同胰腺癌细胞株对USP22表达情况的影响。利用胰腺癌SW1990亲本细胞株,构建吉西他滨耐药细胞株SW1990/Gem及USP22 siRNA稳定表达细胞株(表示为SW1990-shUSP22、SW1990/Gem-shUSP22);采用CCK-8实验检测抑制USP22表达对胰腺癌细胞吉西他滨敏感性的影响。结果: 1 μmol/L或10 μmol/吉西他滨诱导人胰腺癌PANC-1和SW1990细胞后,USP22表达均增高（P<0.05或P<0.01）。耐药细胞株SW1990/Gem中USP22蛋白表达显著高于SW1990亲本细胞株（P<0.01）。USP22 siRNA稳定表达细胞株SW1990-shUSP22,SW1990/Gem-shUSP22中USP22蛋白表达水平与相应对照组SW1990-NC,SW1990/Gem-NC相比,分别显著下调约65%（P<0.01）和60%（P<0.01）。SW1990-NC组和SW1990-shUSP22组对吉西他滨的IC50分别为（1 850.96±87.37） nmol/L和（534.83±49.68） nmol/L,差异具有统计学意义(P<0.01)。SW1990/Gem-shUSP22组对吉西他滨的IC50为（2 157.08±120.32） nmol/L,与SW1990/Gem-NC组（29 850.96±345.78） nmol/L相比,差异具有统计学意义(P<0.01);与SW1990-NC组（1 387.58±96.56） nmol/L相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 吉西他滨可诱导胰腺癌细胞USP22表达增高。抑制USP22表达可增加胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,并可有效逆转胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。本研究揭示胰腺癌细胞对吉西他滨耐药的新机制,为改善胰腺癌个体化化疗方案提供新思路。     

奥沙利铂联合氟尿嘧啶亚叶酸钙一线治疗转移性大肠癌2周方案与3周方案的对比研究

目的:比较奥沙利铂(L-OHP)联合5-氟尿嘧啶/亚叶酸钙(5-FU/CF)的2周方案与3周方案一线治疗转移性结直肠癌的临床疗效及不良反应。方法:66例转移性结直肠癌患者随机接受治疗。A 组, 予L-OHP 85 mg/m², 第1天, 静脉滴注2h, 同时或之后予CF 200 mg/m², 静脉滴注2h,续5-FU 400 mg/m², 静脉推注, 600 mg/m² 持续静脉滴注22h, 次日重复CF 与5-FU 。每2周重复1次, 每2次计为1周期。B 组, 予L-OHP130 mg/m², 第1天, 静脉滴注2h, CF 200 mg/m²,静脉滴注2h, 续5-FU 375～425 mg/m² 静脉滴注4～6h, 连用5d, 每3周重复1次, 每次计为1周期。结果:A 、B 两组疗效相近, RR 分别为42.9%和38.7%(P>0.05)。两组病例不良反应发生率相似, 主要表现为消化道反应、神经系统毒性和脱发。结论:L-OHP 联合5-FU/CF 的2周方案与3周方案均可作为晚期转移性大肠癌一线治疗的选择之一。     

CD40调节胰腺癌细胞生物学行为的研究

目的: 研究CD40L对胰腺癌细胞生物学特性、干性的影响。方法: CCK-8活细胞计数法分析CD40可溶性配体（sCD40L）不同浓度（0、1、2、4 μg/mL）在不同时间对人胰腺癌细胞系panc02生长增殖的影响,AnnexinV/PI双染法检测凋亡;细胞划痕实验检测迁移的改变。Q-PCR检测4 μg/mL sCD40L处理panc02 48 h后c-Myc、OCT-4、Sox-2水平的改变。建立Balb/c裸鼠胰腺癌荷瘤模型,随机分为2组,对照组（生理盐水）和sCD40L（10 mg/kg）组,分别腹腔注射sCD40L 10 mg/kg以及等体积生理盐水,每天注射3次,游标卡尺测量0、7、14、21、28 d时肿瘤体积。结果: 与对照组比较,浓度为1、2、4 μg/mL的sCD40L处理panc02 96 h时可显著抑制panc02的增殖（P＜0.01）,并促进panc02的凋亡（P＜0.01）,并呈剂量依赖性地抑制panc02的迁移能力（P＜0.01）;sCD40L 4 μg/mL组可明显抑制panc02细胞的c-Myc、OCT-4、Sox-2的表达（P＜0.01）。在裸鼠荷瘤实验中,与对照组比较,sCD40L处理28 d明显抑制肿瘤体积（P＜0.01,252±13 vs. 189±9）。结论: CD40通路的活化能够抑制胰腺癌细胞增殖迁移、促进凋亡,同时抑制胰腺癌细胞系体内的增殖能力,而这一效应可能与CD40L抑制胰腺癌细胞系干性相关。     

肉桂油活性成分(E)-肉桂醛对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨肉桂油主要活性成分(E)-肉桂醛对人结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:采用CCK-8法测定(E)-肉桂醛对LOVO细胞增殖活性的影响。平板克隆形成实验检测(E)-肉桂醛对LOVO细胞克隆形成能力的影响。AnnexinV-PE/7-AAD双染色法测定(E)-肉桂醛对细胞凋亡的影响。Western blot分析细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平。结果:(E)-肉桂醛能显著抑制结肠癌细胞LOVO的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05),且细胞增殖抑制作用随时间的延长和剂量的增加而增强。与对照组相比(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后,细胞凋亡率升高(P<0.05)。Western blot检测结果显示(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),Bax、Caspase-3表达水平明显增高(P<0.05)。结论:(E)-肉桂醛能抑制结肠癌细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能是通过增加Bax、Caspase-3的活性及抑制Bcl-2的表达来实现的,(E)-肉桂醛是一种具有发展潜力的抗结肠癌药物。     

柚皮素通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭、诱导凋亡作用的研究

目的:探究柚皮素（NAR）通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的机制。方法:体外培养卵巢癌细胞,并分为空白组、低剂量柚皮素组、中剂量柚皮素组和高剂量柚皮素组;使用柚皮素预处理后,检测NAR对卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响情况;检测细胞侵袭迁移及凋亡相关蛋白和PI3K/AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达情况。结果:使用柚皮素处理后,各组卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭受到显著抑制,凋亡受到显著促进,且对柚皮素呈剂量依赖性。相比空白组,使用柚皮素各组PCNA、Bcl-2、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白水平显著降低（P<0.01）,Bax、Caspase-3、E-cadherin、PI3K蛋白表达水平及AKT、p65磷酸化水平显著升高（P<0.01）,且随着柚皮素使用剂量的增加呈剂量依赖性,总AKT蛋白表达无显著变化（P>0.05）。结论:NAR可能通过抑制EMT及PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭能力,并促进卵巢癌细胞的凋亡,在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

TNF-α对人肺癌A549 细胞凋亡的影响

目的: 探讨TNF-α对人肺癌A549 细胞凋亡的影响;方法:培养人肺癌A549 细胞,与TNF-α(10 、100U·ml^-1)共孵育,通过Western blot 分析P53 蛋白表达的变化,同时利用Annexin V/PI 双染色流式细胞仪,检测人肺癌A549 细胞凋亡率的变化。结果: 与空白组相比,TNF-α组的P53 蛋白表达明显升高,且细胞凋亡率也明显升高,分别为1.22±0.62 和1.65±0.38(P<0.01)。结论: TNF-α可以诱导人肺癌A549 细胞凋亡,从而可能起到抗肿瘤的疗效。