萝卜硫素介导Akt/p70S6K信号传导诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡

目的:研究萝卜硫素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响及其对Akt/p70S6K信号传导的作用。方法:采用CCK-8实验分析萝卜硫素对CNE-2细胞生长增殖的影响,流式细胞仪检测萝卜硫素对CNE-2细胞凋亡率及细胞周期分布的影响,Western blot技术检测CNE-2细胞中调控细胞周期的相关蛋白及Akt/p70S6K信号通路关键蛋白的表达水平。结果:采用萝卜硫素干预CNE-2细胞后,细胞增殖抑制率及凋亡率相对于对照组呈浓度依赖的方式显著增高,差异有统计学意义（P<0.05）;流式细胞仪分析提示,萝卜硫素干预能够将细胞停留在S期及G2/M期,并且萝卜硫素还能抑制细胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B、Cyclin D、Cyclin E以及CDK/p34的表达水平,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;此外,萝卜硫素还能抑制Akt/p70S6K信号通路关键蛋白p-Akt及p70S6K蛋白表达水平（P<0.05）,但萝卜硫素与Akt激动剂IGF-I共同处理细胞后,上述蛋白表达量与对照组相比没有统计学差异（P>0.05）。结论:萝卜硫素可能通过干扰CNE-2细胞中Akt/p70S6K信号传导而发挥有效的抗增殖及促凋亡的作用。     

柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2 mRNA及蛋白表达水平的影响

目的: 研究中药柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2(COX-2)mRNA及蛋白表达水平的影响。方法: 常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷 10 μmol/L 组、柚皮苷 20 μmol/L 组、柚皮苷 40 μmol/L 组、阳性对照组(塞来昔布 80 μmol/L)。MTT法测定柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响,运用Real-time PCR和Western Blot法测定培养48 h后各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果: MTT检测法显示,柚皮苷各浓度处理组,时间依赖性和剂量依赖性地抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长。经药物处理48 h后,Real-time PCR结果显示,与空白对照组(1.094±0.053)比较,10、20 μmol/L 柚皮苷即对SKOV3细胞COX-2 mRNA表达抑制作用(0.828±0.006,0.753±0.011,P<0.05),而 40 μmol/L 柚皮苷则明显下调 COX-2 mRNA的表达(0.412±0.216,P<0.01),与塞来昔布组(0.321±0.017)的抑制程度相近。Western Blot法检测结果显示,与空白对照组(1.7325±0.0826)相比,10 μmol/L 柚皮苷组相对表达量(1.7925±0.0880)虽略有上调,但无统计学差异,20、40 μmol/L 柚皮苷组均可明显下调SKOV3细胞COX-2蛋白的表达(1.2225±0.0822,1.2725±0.0763,P<0.05),塞来昔布组也明显抑制COX-2蛋白的表达。结论: 柚皮苷可抑制人卵巢癌SKOV3细胞体外增殖并抑制COX-2 mRNA和蛋白的表达。     

柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞P38MAPK及ERK1/2蛋白表达的影响

目的: 探讨中药柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞P38MAPK及ERK1/2蛋白表达水平的影响。方法: 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷10、20、40 μmol/L 组、塞来昔布 80 μmol/L 组。Western Blot测定培养 48 h 后各组细胞中P38MAPK及ERK1/2蛋白表达水平。结果: Western Blot结果显示,与空白对照组相比,低浓度柚皮苷组(10、20 μmol/L)对SKOV3细胞P38MAPK及ERK1/2蛋白的表达无明显影响,而 40 μmol/L 柚皮苷及塞来昔布组可明显下调P38MAPK及ERK1/2蛋白表达,具有统计学差异(P<0.05)。结论: 柚皮苷能抑制人卵巢癌SKOV3细胞P38MAPK及ERK1/2蛋白的作用,从而可能阻断卵巢癌的发生、发展。     

柚皮素通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭、诱导凋亡作用的研究

目的:探究柚皮素（NAR）通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的机制。方法:体外培养卵巢癌细胞,并分为空白组、低剂量柚皮素组、中剂量柚皮素组和高剂量柚皮素组;使用柚皮素预处理后,检测NAR对卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响情况;检测细胞侵袭迁移及凋亡相关蛋白和PI3K/AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达情况。结果:使用柚皮素处理后,各组卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭受到显著抑制,凋亡受到显著促进,且对柚皮素呈剂量依赖性。相比空白组,使用柚皮素各组PCNA、Bcl-2、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白水平显著降低（P<0.01）,Bax、Caspase-3、E-cadherin、PI3K蛋白表达水平及AKT、p65磷酸化水平显著升高（P<0.01）,且随着柚皮素使用剂量的增加呈剂量依赖性,总AKT蛋白表达无显著变化（P>0.05）。结论:NAR可能通过抑制EMT及PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭能力,并促进卵巢癌细胞的凋亡,在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

柚皮素对K562/A02细胞MDR1 mRNA/P gp的影响及机制研究

目的: 研究柚皮素对MDR1 mRNA与P-糖蛋白（P-gp）表达的影响及其分子生物学机制。方法: 将不同浓度的柚皮素（50、100、250、500 μmol/L）单独或联合阿霉素 （5 μmol/L）作用于K562/A02细胞48 h,RT-PCR法检测MDR1 mRNA的表达水平,Western-blot法检测P-gp的表达水平,并以NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）为对照,比较柚皮素与PDTC间的差异。结果: 系列浓度柚皮素作用于K562/A02细胞48 h后能显著抑制MDR1 mRNA（IC50=460.3 μmol/L）及P-gp的表达 （IC₅₀=286.3 μmol/L）,抑制作用随浓度的增加而增强;无毒剂量的柚皮素抑制强度与PDTC相近（P＞0.05）;经阿霉素诱导后二者抑制效应仍然相仿（P＞0.05）。结论: 柚皮素明显抑制K562/A02细胞MDR1 mRNA及P-gp的表达,可能与PDTC的作用机制相同,即限制IκB-α磷酸化,阻抑NF-κB的活化,从而抑制MDR1的转录,导致MDR1 mRNA及P-gp的表达量下调,最终使得药物外排转运效应下降。     

灯盏花素对非小细胞肺癌A549细胞的促凋亡作用

目的: 分析灯盏花素对非小细胞肺癌细胞的促凋亡作用以及对移植瘤生长的影响及初步机制探讨。方法: 检测25、50、100 μmol/L灯盏花素处理后A549细胞凋亡、Caspase-3活性及促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的改变,用A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,每日腹腔注射10 mg/kg和20 mg/kg灯盏花素,每周观察肿瘤的大小、裸鼠体质量,第21天时处死小鼠,获取瘤体,Western blot检测Bax和Bcl-2的表达,分析Bax/Bcl-2比值变化;免疫组化法检测组织内Caspase-3表达变化,TUNEL染色检测肿瘤组织内细胞凋亡情况。结果: 灯盏花素增加A549细胞凋亡率;酶标仪检测结果显示灯盏花素处理后,Caspase-3活性较对照组显著增加;Western blot结果显示灯盏花素能够显著抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,增加促凋亡蛋白Bax表达,致Bax/Bcl-2比值显著增加。体内实验中,第14和21天时,肿瘤大小较对照组明显减小;而裸鼠的体质量无明显降低。Western blot检测结果显示灯盏花素能够上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,而Caspase-3的表达明显增加。TUNEL染色结果显示灯盏花素处理后,细胞凋亡比例较对照组明显增加。 结论: 灯盏花素能够在体内外诱导A549细胞凋亡,其机制可能是灯盏花素通过上调Bax的表达和抑制Bcl-2的表达,增加Bax/Bcl-2的比值,激活Caspase-3,达到促凋亡作用。     

艾迪注射液对培美曲塞联合奈达铂治疗晚期非小细胞肺癌的增效作用

目的: 探讨艾迪注射液对培美曲塞联合奈达铂治疗晚期非小细胞肺癌是否有增效作用。方法: 将86例晚期非小细胞肺癌患者分为研究组和对照组,每组43例。对照组采用培美曲塞联合奈达铂治疗。研究组在对照组基础上,给予艾迪注射液治疗。对比两组的临床疗效,并检测两组患者治疗前后血清免疫指标变化,包括CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgM、IgA、IgG,观察治疗过程中两组患者不良反应的发生情况。结果: 研究组的控制率及有效率高于对照组,但差异无统计学意义（P>0.05）;对照组治疗后的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgA、IgG较治疗前均明显降低（P<0.05）;研究组治疗后的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、IgA、IgG明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;研究组胃肠道反应、白细胞减少、肝肾功能异常的发生程度明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:艾迪注射液对培美曲塞联合奈达铂治疗晚期非小细胞肺癌具有增效减毒的作用。     

甲磺酸阿帕替尼三线治疗晚期非小细胞肺癌患者的疗效及安全性分析

目的:本研究旨在观察并探讨甲磺酸阿帕替尼三线治疗晚期非小细胞肺癌患者的疗效及安全性。方法: 本研究为回顾性分析,从2015年3月到2018年6月纳入接受甲磺酸阿帕替尼治疗的96例晚期非小细胞肺癌患者作为研究对象,对疗效及安全性进行回顾性分析。96例晚期非小细胞肺癌患者接受甲磺酸阿帕替尼进行治疗2个周期后观察并分析临床疗效及基质金属蛋白酶（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）和癌胚抗原（CEA）等指标的变化情况,评价客观缓解率（ORR）,疾病控制率（DCR）,随后评价无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）,并记录安全性数据。结果:96例患者均可评价疗效,其中完全缓解（CR）0例,部分缓解（PR）16例,疾病稳定（SD）54例,疾病进展26例。ORR为16.67%,DCR为72.92%。MMP-9、VEGF和CEA指标与治疗后相比,差异存在统计学意义（P<0.05）。中位无进展生存期（mPFS）为4.65个月。中位总生存期（mOS）为8.90个月。安全性方面,发生率较高的3级以上不良反应为高血压13例（13.54%）,手足综合征9例（9.75%）,蛋白尿7例（7.29%）,咯血7例（7.29%）,疲劳6例（6.25%）,高甘油三酯血症4例（4.17%）。结论:甲磺酸阿帕替尼治疗晚期非小细胞肺癌具有一定的临床疗效,安全性事件总体可控。     

第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂在非小细胞肺癌临床治疗中的应用及研究进展

表皮生长因子受体（EGFR）是非小细胞肺癌（NSCLC）靶向治疗最重要的靶点之一。目前,靶向EGFR突变的酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）已发展至第三代,广泛用于治疗伴有EGFR敏感突变和伴有EGFR T790M耐药突变的NSCLC患者。然而,第三代EGFR TKIs用药过程中不可避免地会出现继发耐药,限制了该类药物的长期使用和临床治疗预后。本文首先围绕已上市或处于临床研究的第三代EGFR TKIs,重点综述了它们的作用特点和临床疗效。其次,从EGFR依赖性耐药和EGFR非依赖性耐药两个方面,归纳了第三代EGFR TKIs发生继发耐药的潜在机制。最后,针对EGFR依赖性耐药、EGFR非依赖性耐药和机制不明确的耐药,分别总结了可能有效的后续用药策略,以期为以EGFR为靶点的药物开发和临床应用提供借鉴和参考。     

白蛋白结合型紫杉醇二线及以上治疗晚期非小细胞肺癌的单臂、单中心探索性临床研究

目的:探讨白蛋白结合型紫杉醇二线及以上治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及安全性。方法:选取2012年10月到2015年12月入组前接受过至少一线治疗方案失败的晚期非小细胞肺癌患者63例,给予白蛋白结合型紫杉醇130 mg/m2,第1天和第8天静脉滴注治疗,21 d为一个周期。每2个周期进行疗效评价,用CTCAE4.03版本的标准评价每个周期出现的不良反应。患者疾病进展后通过电话随访获取患者的预后数据。结果:纳入研究的63例患者均可评价疗效,其中接受治疗后疗效达到完全缓解（CR）0例,部分缓解（PR）15例,疾病稳定（SD）21例,疾病进展（PD）27例。该研究的客观缓解率（ORR）为23.81%,疾病控制率（DCR）为57.14%。经过随访预后,63例患者的中位无进展生存期（mPFS）为3.9个月（95%CI：3.1-5.2）,中位总生存期（mOS）为9.3个月（95%CI：7.8-10.4）。安全性方面,主要的2级以上不良反应为中性粒细胞减少,血小板减少,脱发和外周神经毒性,总体不良反应可耐受。结论:白蛋白结合型紫杉醇二线及以上治疗晚期非小细胞肺癌患者具有不错的疗效,不良事件可控,有望成为晚期非小细胞肺癌二线治疗标准。     

中医化痰法治疗非小细胞肺癌疗效的Meta分析

目的: 系统评价中医化痰法治疗非小细胞肺癌的临床疗效。方法: 采用计算机检索CNKI,WANFANG Data,VIP,PubMed数据库2000年以来公开发表的有关中医化痰法治疗非小细胞肺癌的随机对照试验,实验组中医化痰法加化疗治疗324例,对照组化疗治疗323例,按照纳入和排除标准筛选,对文献进行质量评价,采用STATA 11.0统计软件进行对纳入的实验结果的统计学分析。结果: 共纳入647例非小细胞肺癌病人,其中实验组324例,对照组323例。中医化痰法治疗后,有效率提高,结果显示相对危险度（RR）=1.48,95%可信区间（95%CI）=1.24～1.77,P<0.001;生活质量改善,结果显示RR=1.92,95%CI=1.51～2.45,P<0.001;可提升免疫力,结果显示均值差MD=0.36,95%CI=0.23～0.50,P<0.001。结论: 中医化痰法治疗非小细胞肺癌相比于常规用药疗效更好。     

呼吸道微生态对晚期非小细胞肺癌患者接受PD-1抑制剂单药治疗疗效影响的探索性研究

目的：探讨呼吸道微生态对晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者接受PD-1单药治疗的疗效及预后的影响。方法：本研究设计为回顾性分析,从2018年10月到2021年10月纳入后线接受PD-1抑制剂单药治疗且符合入排标准的晚期NSCLC患者58例。PD-1抑制剂包括卡瑞利珠单抗,信迪利单抗和帕博利珠单抗。通过科室的患者病历记录及医院的电子病历系统整理分析患者的基本人口学资料,接受治疗的疗效数据,生存预后情况及接受治疗过程中的不良反应情况。另一方面,收集患者接受PD-1抑制剂治疗前的深部诱导痰标本,通过16S rRNA基因测序方法检测收集的58例样本的呼吸道菌群情况,分析呼吸道菌群α多样性的指标,并和患者的疗效及预后进行关联分析。结果：58例NSCLC患者符合研究的筛选标准并且均可以评价疗效与不良反应。疗效数据提示PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC患者的客观缓解率（ORR）为19.0%［95%置信区间（CI）：9.9%-31.4%］,疾病控制率（DCR）为55.2%（95%CI：41.5%-68.3%）。通过后续的访视获取的预后数据表明58例NSCLC患者的中位PFS为3.2个月（95%CI: 2.29-4.11）,中位OS为10.5个月（95%CI: 5.58-15.43）。呼吸道菌群分析结果根据Shannon多样性指标的高低将58例患者分为高α多样性组（H组）和低α多样性组（L组）,分别为30例和28例。关联性结果提示H组和L组的ORR分别为23.3%和17.9%（P=0.380）。预后结果表明H组和L组的中位PFS分别为3.8个月和2.8个月,差异具有统计学意义（P=0.034）。结论：PD-1单药在晚期NSCLC患者后线治疗中具有初步的疗效和预后。呼吸道菌群分析中高的α多样性菌群的患者具有较好的预后,研究结论尚需要大样本前瞻性研究进一步验证。     

苦瓜蛋白对A549 肺癌细胞的抑制作用及其对MAPK 信号通路的影响

目的 观察苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A₅₄₉细胞的生长抑制及促凋亡作用;探讨苦瓜蛋白对A₅₄₉ 细胞p42/44-MAPK 及其磷酸化p42/44-MAPK蛋白表达水平的影响及其作用分子机制。方法 以不同浓度梯度的苦瓜蛋白处理A₅₄₉ 细胞, 分别作用不同时间,CCK-8 检测其对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡。提取苦瓜蛋白不同作用时间点的全细胞蛋白, western blot 检测p42/44-MAPK 及p-p42/44-MAPK 信号分子的变化。结果 苦瓜蛋白对A₅₄₉ 细胞生长具有明显抑制作用, 可显著地诱导A₅₄₉ 细胞凋亡。与阴性对照比较, 苦瓜蛋白可以不同程度下调p42/44-MAPK 及p-p42/44-MAPK 信号分子的表达(P <0.05)。结论 苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A₅₄₉ 细胞具有明显地抑制作用及抗肿瘤作用, 其作用可能通过诱导A₅₄₉ 细胞凋亡来实现;苦瓜蛋白可以不同程度地下调p42/44-MAPK 和磷酸化p42/44-MAPK 的表达;MAPK 信号通路可能部分参与了苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制, 驱使肿瘤细胞发生凋亡。     

超声-微泡介导的microRNA-449a通过调节Notch1对肺癌细胞的生长抑制作用

目的:基因加载的微泡（MBs）与超声结合可以提高递送效率,是一种较好的基因传递方法。本实验旨在研究超声-微泡介导的microRNA（miR）-449a通过靶向Notch1对肺癌细胞的影响。方法:检测miR-449a在肺癌组织,癌旁组织,肺癌细胞系和肺上皮细胞中的表达,并分析其与肺癌患者临床特征的关系。进行功能研究以探测miR-449a和超声-微泡介导的miR-449a在肺癌中的作用。应用RT-qPCR、Western blot分析来验证miR-449a,Notch1,增殖和凋亡相关蛋白的水平。结果:在肺癌中观察到miR-449a表达下降。miR-449a的过表达抑制了肺癌细胞增殖,促进了G2/M期阻滞和细胞凋亡。超声-微泡介导的miR-449a增强了miR-449a对细胞生长和抗凋亡的抑制作用。miR-449a通过靶向Notch1抑制肺癌细胞活性。结论:miR-449a过表达抑制肺癌细胞生长,超声-微泡介导的miR-449a增强了miR-449a对肺癌的抑制作用。该研究可能为肺癌治疗提供新的方向。