牛血液前处理方式对ELISA法检测克仑特罗结果的影响

采用单因素实验和正交实验探讨牛血液样品前处理方式对酶联免疫法（ELISA）检测克仑特罗残留结果的影响。结果表明:通过控制牛血液离心前放置时间、离心后放置时间、抗凝剂添加比例,可以有效提高血清样品的质量,最大程度的减少ELISA法检测牛血样中克仑特罗残留假阳性的结果。牛血液样品前处理的各因素对克仑特罗残留检测结果的影响顺序为:离心前放置时间>抗凝剂添加比例>离心后放置时间。牛血液样品最佳前处理条件为离心前放置30min、抗凝剂添加比例为1:9、离心后放置时间0min。按照牛血液样品最佳前处理条件,用ELISA法检测30份样品,筛选出2份阳性样品,经液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）确证为阳性,两种方法检测结果一致。在1.0～8.1μg/L线性范围内,ELISA法检测克仑特罗残留结果假阳性率为0%。      

ELISA法与LC-MS/MS法测定动物组织中克仑特罗残留

目的:比较酶联免疫法(ELISA)和液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定动物组织中克仑特罗残留量的准确度、精密度及检测限。方法:样品经过处理后,分别采用ELISA法和LC-MS/MS法进行测定;用ELISA法对组织样品进行初筛,测出阳性样品利用LC-MS/MS法进行确证。结果:应用ELISA法测定样品猪肉样品中克仑特罗的回收率为67.0%～99.6%,批内变异系数3.4%～8.7%,批间变异系数6.1%～9.6%,灵敏度为0.025μg/L,最低检测限0.025μg/kg;LC-MS/MS检测方法回收率88.62%～111.43%,批内变异系数4.4%～7.4%,最低检测限0.5μg/kg;用ELISA法对50份猪肉和50份猪肝样品进行检测,筛选出3个阳性样品,经LC-MS/MS确证为阳性,两种方法检测结果一致。结论:ELISA法灵敏度和准确度较高,样品处理方法简单,成本低,适合组织中克仑特罗残留大规模筛查;LC-MS/MS准确度高,适合于阳性样品精确定量。     

盐酸克仑特罗ELISA试剂盒的研制

在间接竞争酶联免疫吸附法的基础上,研制了一种可以检测尿样或食品中盐酸克仑特罗的试剂盒。ELISA检测方法的各个影响因素均通过实验进行了优化。该试剂盒具有良好的灵敏度,半抑制率(IC50)为0.6ng/ml,该抗体与肾上腺素等结构类似物的交叉反应率均小于0.3%,回收率为90%～104%,批内变异系数小于6%,批间变异系数小于10%,试剂盒在12个月保存期内稳定。可用于盐酸克仑特罗的快速定量检测。     

酶联免疫法与液相色谱-串联质谱法检测猪肉中沙丁胺醇

运用酶联免疫法（ELISA）与液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）对猪肉中沙丁胺醇残留进行测定,并比较了二者在灵敏度、准确性和重现性等方面的差异。结果显示,ELISA法和LC-MS/MS法在猪肉样品中的检测限可达到0.5 μg/kg和0.25 μg/kg,分别向猪肉样品中添加3个质量浓度水平（1.0 μg/kg、2.0 μg/kg、4.0 μg/kg）的沙丁胺醇时,回收率分别为83.7%～90.9%和86.6%～93.5%,变异系数（CV）分别为5.4%～10.3%和6.0%～8.3%。用酶联免疫法实际样品进行检测,筛选出2个阳性样品,经液相色谱-串联质谱法确证亦为阳性,测定结果一致。研究表明,酶联免疫法重复性较好、准确度较高,适用于进行猪肉样品中沙丁胺醇的快速筛选,液相色谱-串联质谱法适用于阳性样品的确证和精确定量。     

三聚氰胺ELISA试剂盒在食品检测中的检测效果研究

目的为验证本公司生产的三聚氰胺ELISA检测试剂盒的检测效果。方法用酶联免疫法对牛奶、奶粉、鸡肉和鸡蛋等4种样品中三聚氰胺的残留量进行检测,并与高效液相色谱法进行对照。结果结果表明:该试剂盒对4种样品的最低检测限分别为19.22、46.86、51.64、21.38μg/kg,试剂盒板内板间变异系数均小于10%;对4种样品做加标回收试验,其回收率均在95%~120%之间,变异系数均小于10%;该方法与高效液相色谱法检测实际样品的阴、阳性判断结果一致。结论该方法稳定、可靠,可满足食品中三聚氰胺残留快速检测的需要。     

直接竞争ELISA法检测蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸

目的研究竞争性酶联免疫法分析测定蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)残留量。方法样品用乙腈进行前处理后采用ELISA试剂盒检测蔬菜中2,4-D的残留,分析方法的灵敏度、回收率和稳定性;并比较其与超高效液相色谱-质谱法(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)在灵敏度、稳定性等方法学参数上的差异。结果经过有机溶剂提取等前处理过程,ELISA与UPLC-MS的检测灵敏度分别可以达到1.739μg/kg和3μg/kg,回收率分别为80.19%~117.37%和80.04%~112.5%;试剂盒稳定性的测定证明其可以在4℃至少保存8个月。结论与UPLC-MS法相比,直接竞争ELISA法简单、高效,检测快速,灵敏度高,适合大批量筛选样品。因此,ELISA法更加适合快速检测蔬菜中2,4-D的残留。     

克仑特罗食物中毒的酶联免疫法筛选与气-质联机确证研究

本文采用酶联免疫法筛选和气-质确证对克仑特罗食物中毒病因学诊断技术进行研究。组织样品经匀浆初提,液液萃取;生物材料经离心适当稀释,上酶标板显色进行筛选测定。克仑特罗浓度的自然对数与吸光度比值呈线性关系,线性方程Y=-22.078ln(X)+199.24,相关系数为0.9922。检出限为0.1μg/kg。在对猪肝、鸡肉和尿液样品基质的不同加标水平的回收率在50.5%～92.0%之间,相对标准偏差在12.3%～18.1%之间。中毒者食用中毒食品(酱猪肝)及血液和尿液的测定结果与气质联机法确证结果基本吻合,而且生物体液(特别是尿液在中毒7d内仍可以作为克仑特罗食物中毒的辅助病因学诊断材料。     

ELISA法检测乳制品中的三聚氰胺质量浓度

建立酶联免疫吸附法(ELIsA)检测乳制品中三聚氰胺的残留量.结果表明,乳制品中的三聚氰胺质量浓度在20～500 μg/L范围内呈线性关系,相关系数R2=0.9989;最低检出限为20 μg/L;加标回收率:液态70%～02%,固态奶94%～108%;相对标准偏差(RSD)小于13%;与结构类似物无交叉反应.该方法简便、快速、准确,能够满足快速筛检要求.     

基于单克隆抗体的玉米赤霉烯酮检测方法研究

建立一种检测谷物样品中玉米赤霉烯酮的酶联免疫分析方法。将玉米赤霉烯酮修饰羧基制得半抗原,再与钥孔嘁血蓝蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合与筛选,得到3株具有高亲和力和特异性的杂交瘤细胞,分别为2E8、2C7、6E11,重链类型均为IgG_1,轻链类型均为Kappa。细胞株2E8分泌的抗体特异性较好,制备腹水得到单克隆抗体用于后续实验。建立检测玉米赤霉烯酮的间接竞争酶联免疫吸附(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法,方法的灵敏度(IC_(50))为(0.13±0.02)ng/mL,检测限(IC_(15))为(0.02±0.01)ng/m L,在玉米和燕麦中的检出限分别为2.4μg/kg,4.0μg/kg。加标回收率为82.80%~109.20%,变异系数为3.27%~15.38%。经高效液相色谱串联质谱仪验证(R~2=0.996 3)二者具有良好的相关性。     

乳及乳制品中蛋白组分测定方法研究进展

乳蛋白是乳及乳制品中重要的组成成分,其含量和组成是影响营养、免疫等功能特性的重要因素.乳中蛋白组分复杂,不同组分含量差异大,随着乳蛋白功能特性研究的深入,快速准确测定乳蛋白组分的含量具有重要的意义和研究价值.本文对目前使用最多的酶联免疫法、毛细管电泳法、高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法4类测定乳蛋白组分方法的原理...     

新霉素的直接竞争酶联免疫分析法

首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE 进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测方法。通过一系列参数的优化,包括包被溶液、封闭溶液、竞争时间、抗体稀释液、pH值、反应温度、显色时间等,最终得到其IC20(抑制率为20%时的标准溶液质量浓度)＜1ng/mL、半数抑制量(IC50)为7.6ng/mL,线性方程为y =－0.2798x＋0.7456,R2=0.991。直接ELISA总耗时只需大约1h。     

Determination of PCBs in Fish Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA)

ABSTRACT: Polychlorinated biphenyls (PCBs) were determined in fish tissue using an enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA). Standard curves for Aroclor 1248, 1254, and 1260 in catfish tissue were developed with ranges from 0.05 to 0.5 ppm and 0.5 to 5.0 ppm. Wild fish were initially analyzed using gas chromatography/electron‐capture detection (GC/ECD) and those having residues within the standard curve ranges were analyzed with ELISA. Results obtained using ELISA and GC/ECD were not significantly different (p < 0.05) from 0.05 to 0.5 ppm. From 0.5 to 5.0 ppm, the standard curve for Aroclor 1254 was the best predictor of total PCB in wild fish samples.     

抗环丙沙星抗血清制备及其ELISA检测

采用碳二亚胺法和混和酸酐法,将环丙沙星与BSA 和OVA 分别合成免疫抗原(ciprofloxacin-BSA)和包被抗原(ciprofloxacin-OVA)。利用合成的免疫抗原免疫家兔,获得了抗环丙沙星的特异性抗血清。在此基础上建立环丙沙星酶联免疫检测方法(ELISA),其线性范围为0.05～10μg/ml (r=0.998)。在样品检测中与HPLC 方法具有良好的相关性。     

双抗夹心酶联免疫(ELISA)方法测定卵类黏蛋白

卵类黏蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,因此建立相应的检测方法对保障消费者健康非常重要。为此本试验分别制备了卵类黏蛋白特异性兔多克隆抗体和鼠多克隆抗体,对不同检测条件进行优化,最终建立了一种用于定量分析卵类黏蛋白的双抗夹心ELISA方法,并对检测方法的精密度进行考察。结果表明,通过对封闭液、捕获抗体包被量和检测p H的优化,该方法的最低检出限达到(0.274±1.27)ng/m L,且具有良好的特异性以及检测精密度。因此,所建立的方法可用于食品中卵类黏蛋白的定量检测。     

卵转铁蛋白双抗夹心ELISA方法的建立

卵转铁蛋白是鸡蛋中的主要过敏原,针对鸡蛋中主要过敏原卵转铁蛋白建立了双抗夹心ELISA方法,该方法检出限为(15.37±1.20)ng/m L。除白蛋白外,该方法对粘蛋白、溶菌酶、α-乳白蛋白、牛奶总蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、花生总蛋白、大豆、杏仁和绿豆等致敏蛋白几乎没有交叉反应。板内重复性和板间重复性较好,因此所建立的方法可用于对卵转铁蛋白的检测。     

酶联免疫法(ELISA)测定婴幼儿配方奶粉中的黄曲霉毒素M_1方法改进

本文对ELISA检测婴幼儿配方奶粉中的黄曲霉毒素M1含量方法进行改进,处理方法为(1+1)甲醇水提取再经三氯甲烷净化,提取效果比直接提取更佳。此方法的灵敏度为0.1μg/kg,加标回收率为90.0%～105.6%,相对标准偏差为6.57%,方法重复性良好,能有效消除假阳性。     

酶联免疫法测定干红辣椒中的黄曲霉毒素B1

本实验采用酶联免疫法对干辣椒中的黄曲霉毒素B1 进行检测,并对黄曲霉毒素的防控措施进行讨论。结果显示,检测灵敏度为0.1μg/kg,相对标准偏差小于3%,平均回收率达97%,说明本法稳定性好,测定准确,重现性好,能有效的应用于干辣椒中黄曲霉毒素B1 的检测。     

青霉素G人工抗原的合成及其酶联免疫检测方法研究

在碱性条件下,降解青霉素G并与6-氨基己酸反应,首次成功合成了纯度较高的半抗原.采用活化酯法与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联,成功制备了具有青霉素G结构特征的人工抗原.通过免疫获得了高效价、高特异性的多克隆抗体,抗血清效价达1:240 000.绘制了青霉素G酶联免疫直接竞争法的标准曲线,检测限可达0.04μg/L,灵敏度0.37μg/L.     

酶联免疫法检测赭曲霉毒素A在浓香型白酒生产中的变化

本研究采用酶联免疫法对泸州老窖大曲、入窖酒醅、丢糟、黄水、基酒、成品酒中的赭曲霉毒素A的含量进行检测,结果表明:此法检测灵敏度为0.3μg/kg,相对标准偏差在1.497%-3.369%之间,平均回收率达96.4%,浓香型白酒生产各个环节的样品中赭曲霉毒素A的含量远低于国内外食品行业的限量标准,并由此初步验证得知赭曲霉毒素A在浓香型白酒生产中是安全的。