四川骨髓库汉族人群KIR基因多态性研究

目的了解四川骨髓库汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因多态性、基因型及其单体型的组成特点。方法随机选取四川骨髓库中川籍汉族捐献者标本135份,采用序列特异性引物扩增(PCR-SSP)对其进行基因检测,并依据Hsu等建立的方法进行基因型和单体型分析。结果在四川骨髓库汉族人群中,3DL3、3DL2、2DL4基因存在于所有个体,常见基因有2DL3、2DP1、2DL1、3DL1、2DS4*001/002,频率较低的有2DS2、2DL2、2DL5、3DS1、2DS3、2DS5、2DS1、2DS4*003基因。四川骨髓库汉族人群中共发现31种基因型,其中以AF(1,2)AJ(2,2)2型最为多见,频率分别为18.52%和20.74%,同时发现12种单体型,以单体型2最为多见,占43.4%。另外,四川骨髓库汉族人群有14种基因型难以通过Hsu的方法判定基因型,其中7种见于中国其他汉族人群的报道,另7种在其他人群中亦有报道。四川骨髓库汉族人群有6种基因型无法根据Hsu的方法判定其单体型组成。结论四川汉族人群KIR基因分布表现出中国汉族人群的特点,同时也具有独特的基因型和单体型分布特征。     

云南汉族人群KIR基因多态性研究

目的分析云南汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因的多态性及基因型和单倍型特点。方法从献血者中随机选择150名无亲缘关系的云南汉族健康志愿者,采用序列特异性引物PCR法(PCR-SSP)对其进行KIR基因低分辨率检测,并根据Hsu等[5]的标准进行基因型和单倍型分析。结果在云南汉族人群中共检出目前已知的17个KIR基因,其中3DL3、2DL4、3DP1和3DL2框架基因存在于所有个体。2DL1、2DL3、2DP1、3DP1*003、3DL1、2DS4*001/002基因较为常见,而2DL2、2DL5A、2DL5B、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4*003、2DS5、3DS1和3DP1*001/002基因频率较低。在云南汉族人群中共检出31种基因型,最常见基因型为AJ(2,2)和AF(1,2)型,频率分别为26.67%和17.33%。同时检出15种单倍型,以单倍型2最为常见,频率为47.3%。此外,还发现2种新基因型目前在其他人群中尚未见报道,3种基因型无法根据Hsu等[5]的标准模式分析出单倍型。结论云南汉族人群K IR基因分布表现出中国汉族人群K IR多态性的一些共同特点,同时具有其独特的KIR基因频率、单倍型频率和基因型频率分布。     

拉萨地区藏族人群KIR基因多态性研究

目的了解拉萨地区藏族人群16个KIR基因的多态性。方法从拉萨无偿献血者中选取224名拉萨地区藏族健康自愿者,采用多重PCR-SSP方法进行KIR基因检测。根据http://www.allelefrequencies.net/中的ID号命名基因型和单体型组成。结果在拉萨地区藏族人群中,框架基因KIR3DL2、3DL3、2DL4和3DP1存在于所有个体;较为常见KIR基因有3DL1、2DL1、2DL3、2DP1和2DS4,其基因频率分别为0.836 3、0.905 7、0.884 2、0.905 7和0.810 3;频率较低的基因有KIR2DS1、2DS2、2DS3、2DS5、3DS1、2DL2和2DL5,其基因频率分别为0.201 0,0.134 0,0.064 6,0.170 8,0.195 5,0.131 4,0.215 1;共发现20种KIR基因型,其中以ID号为1和2的基因型最为常见,频率为52.68%和15.63%。结论拉萨地区藏族人群KIR基因分布与中国南方汉族人群之间较一致。     

KIR的检测技术及其与自身免疫病的研究进展

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell Ig-like receptor,KIR)是位于天然杀伤细胞(natural killer cell,NK)及部分T细胞表面的一种Ig样受体,具有高度多态性。KIR与其配体MHC-I及相关分子结合、相互作用,可调节自身活化阈值,决定NK细胞的活化或者抑制。KIR的检测方法正向高通量、快速、准确方向发展。部分自身免疫病现已证明与KIR及其受体的多态性有关。     

KIR配体不匹配对异基因造血干细胞移植的影响

近年来,NK细胞及其受体在造血干细咆移植(HSCT)中的作用越来越受到关注。在HLA半相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的相关研究中发现,供受者的杀伤细胞免疫球蛋白样受体的配体不匹配可激活NK细胞,因而诱导移植物抗肿瘤效应,还可减少移植物抗宿主病(GVHD)和降低移植排斥率。本文拟就杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体对all-HSCT中移植排斥、GVHD及移植物抗肿瘤效应的影响的研究进展进行综述。     

KIR及其HLA配体基因多态性与人类肿瘤的相关性

摘要： 天然杀伤 (NK) 细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulinlike receptor, KIR) 及人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)配体的多态性与感染性疾病、自身免疫病、生殖系统疾病和肿瘤等多种疾病的发生相关。本文重点介绍KIR及其配体HLA基因与白血病、黑色素瘤、鼻咽癌、宫颈癌、肝癌等肿瘤的相关性研究进展,以及该领域新发现的意义、研究中存在的问题和今后研究方向的展望。     

去甲基化处理对NK-92MI细胞系抑制性受体KIR表达的影响

为分析NK细胞系NK-92MI细胞中抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killercellimmnoglobulin-likere—ceptor,KIR）的基因启动子区的甲基化模式及去甲基化处理对基因表达的影响,探讨基因kir可能的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测NK-92MI细胞kir2DL1和kir2DL2／2DL3基因启动予区的甲基化水平,应用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞以诱导CpG岛去甲基化,RT—PCR方法检测其基因表达。结果显示：kir2DL1和kir2DL2／2DL3基因启动子区CpG二核苷酸甲基化频率依次在25％-88％、5％-80％之间;应用甲基化抑制剂5-氮胞苷可以诱导NK-92MI细胞重新表达kir2DL1基因,并使kir2DL1、kir2DL2和kir2DL3基因表达量增加。结论：启动子甲基化参与调控NK-92MI细胞基因kir表达。     

自建NK细胞表面受体KIR2DS1基因mRNA表达的方法及验证

摘要:目的：建立检测NK细胞表面免疫球蛋白样受体基因 KIR2DS1 mRNA表达水平的荧光定量PCR方法并评价其性能。 方法：以行异基因造血干细胞移植的供患者共57对为研究对象，针对 KIR2DS1 基因设计特异性引物及探针，构建TaqMan-MGB荧光定量PCR反应体系，并评价该实验方法的性能，包括：总符合率、重复性、灵敏度及仪器适用范围、技术人员再现性。 结果：以KIR-SSO基因定性分型法为金标准，通过检测其中35例样品，荧光定量PCR方法对 KIR2DS1 基因阳性及阴性检测率均为100%。在重复性试验中，选取Ct值分别为高、中、低值3个样品的批内、批间CV分别为0.09%～0.46%、0.71%～1.13%。该方法的灵敏度达10² copies/μL，且对拷贝数为10² copies/μL的3个样品进行5次重复试验的CV分别为5.37%、2.71%、5.51%。仪器比对结果显示，参比仪器ABI-7500与实验仪器LC-480之间的拟合直线回归方程为Y=0.973 6X+0.118 3（R²=0.961 9，R²＞0.95）。2名技术人员对10个 KIR2DS1 基因阳性样品的再现性比对试验结果显示其偏倚（%）均＜±5%。 结论：建立了TaqMan-MGB荧光定量PCR检测 KIR2DS1 mRNA表达水平的检测方法，其性能良好。     

KIR多态性与异基因造血干细胞移植的研究进展

<正>杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)是主要表达于自然杀伤细胞(nature killercell,NK)表面的一类糖蛋白受体,能够与细胞表面的HLA-Ⅰ类分子特异性结合,调控NK细胞的功能。异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后的并发症,如移植物抗宿主病(GvHD)、免疫排斥和移植后复发等,均是影响allo-HSCT治疗效果的主要因素。研究发现,在allo-HSCT中,供者抗受者     

非血缘关系HLA全相合造血干细胞移植中供者-受者NK细胞KIR的研究

目的研究自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）的生物学功能及供者抑制性KIR和受者HLA遗传背景在无关供者全相合造血干细胞移植（HSCT）中的作用。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP—PCR）和序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应（SSOP—PCR）的方法，对中国造血干细胞捐献者资料库中提供的51对HLA全相合供、受者进行KIR及HLA分型，患者中急性淋巴细胞白血病ALL18例，慢性粒细胞白血病（CML）15例，急性髓系白血病（AML）10例及其他患者8例。结果51对供者一受者均存在2DL1、2DL2／L3、2DIA、3DL2和3DL3，基因频率均为1，96．7％的个体表达KIR3DL1。供-受者中21．57％KIR完全相同；78．43％KIR不完全相同，而KIR不相同又分为受者KIR基因型包含供者KIR为25．49％，供者KIR基因型包含受者KIR为27．45％。74.62％的供者KIR2DL1无受者C2配体，5．91％的供者KIR2DL2／L3无受者C1配体，19．74％的供者KIR3DLl无受者Bw4配体，54．91％的供者KIR3DL2无受者A3、A11配体。结论KIR独特型和HLA-Ⅰ类抗原是独立遗传的。供者KIR2DL1和KIR3DL2是主要引起NK细胞异源活性的受体，供、受者的KIR／HLA不匹配可能在全相合的无关供者异基因HSCT中起着十分重要的作用。KIR受体-配体模型可以更好地提示HSCT的预后。     

几类恶性血液病病人杀伤免疫球蛋白样受体基因型的表达在高危及标危组的差异分析

本研究探讨几类高危和标危恶性血液病患者杀伤免疫球蛋白样受体（KIR）基因表达的异同。54例恶性血液病患者分为高危组（27例）和低危组（27例），其中急性髓系白血病14例、急性淋巴细胞白血病16例、慢性髓系白血病20例、骨髓增生异常综合征3例、急性混合白血病1例。用序列特异性引物PCR分型技术检测了6个激活性KIR基因（KIR2DS1-S5、3DS1）和6个抑制性KIR基因（KIR2DL1-2DL4、3DL1-3DL2）的表达，其中24例患者用流式细胞仪测定了NK细胞、T细胞表面CD158a（KIR2DL1、2DS1）、CD158b（KIR2DL2、2DL3、2DS2、2DS3）、CD158e（KIR3DL1、3DS1）的表达。结果显示，标危组病人激活性KIR基因的阳性率均高于高危组患者，2DS1（P=0.014）、2DS2（P=0.046）、3DS1（P=0．005）的差异有统计学意义；抑制性KIR基因的表达在两组患者之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。在髓系恶性血液病病人中标危组病人KIR激活性基因表达率仍然高于高危组患者，其中2DS1（66.7％vs29.4％．P=0.022）、2DS2（57.6％vs17.6％，P=0.013）和2DS3（33.3％vs5.9％。p=0．039）。高危组患者同时表达两种以上激活性KIR基因的比例显著低于标危组（P=0.035）。高危和标危组患者NK细胞和T细胞表面CD158a、CD158b、CD158e的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：几类恶性血液病患者激活性KIR基因表达在高危和标危之间存在差异。     

两种不同的KIR基因分型方法的对比研究

目的 探讨常用的序列特异性引物-PCR(PCR-SSP)及流式序列特异性寡核苷酸探针(Flow-rSSO)杂交方法在杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)框架基因分型结果中的符合率和准确性.方法 随机选择2011年6月77例深圳造血干细胞捐献者的外周血样,分别用PCR-SSP及Flow-rSSO商品化试剂盒进行KIR框架基因定型,分别通过凝胶电泳图及HLA Fusion 2.0 Research软件分析法,分析结果的一致性.对初检结果不一致的样本,采用同一厂家、不同批号的商品化试剂盒进行复检,并采用美国国立卫生研究院癌症研究所KIR PCR-SSP方法进行检测.结果 77例样本中,75例完全一致,另2例(2.6％) KIR2DL2的结果不一致,PCR-SSP方法对KIR 2DL2的初检、复检检测结果均为阴性,但用Flow-rSSO Lot#004批号试剂盒检测结果为阳性.更换新的Flow-rSSO Lot# 005批号试剂盒复检,结果与PCR-SSP方法的检测结果相一致.结论 为保证KIR基因分型的准确性,开展KIR基因分型的室内、室间质控工作至关重要.     

供者活化型KIR2DS5在单倍体相合造血干细胞移植预后中的意义

本研究探讨供者杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）和受者人类白细胞抗原（HLA）基因型在单倍体相合造血干细胞移植（HSCT）预后中的意义。26例患者接受单倍体相合HSCT,均未进行体外T细胞去除（TCD）。采用序列特异性引物聚合酶链式反应（PCR-SSP）分型技术对供、受者HLA和供者KIR基因型进行检测。根据供者KIR和受者HLA-Bw4组、-C1组、-C2组等位基因分析结果进行供受者KIR/HLA分组。对KIR/HLA不合与相合组、Bw4不合与相合组、C2不合与相合组、Bw4和C2均不合组与至少其一相合组在造血重建、移植物抗宿主病（GVHD）、无病生存（DFS）、移植后感染及移植相关死亡（TRM）等方面的差异进行比较;并就供者活化型KIR对单倍体相合HSCT预后的影响进行评价。结果表明：各组在造血重建、急性或慢性GVHD发生率、DFS、移植后感染及TRM等方面均无显著性差异（p均〉0.05）,但C2不合组发生严重GVHD4例。供者活化型KIR2DS5阳性组2年DFS明显优于阴性组,分别为（85.7±13.2）%、（31.2±12.8）%,p〈0.05〕。结论：供者KIR及受者HLA基因型对单倍体相合HSCT预后有影响,供者携带活化型KIR2DS5可能有助于提高患者的DFS。     

Adenovirus-Mediated Inducible Gene Expression in Vivo by a Hybrid Ecdysone Receptor

Precise control of transgene expression would markedly facilitate certain applications of gene therapy. To regulate expression of a transferred gene in response to an exogenous compound in vivo, we modified the ecdysone-responsive system. We combined the advantages of the Drosophila (DmEcR) and the Bombyx ecdysone receptor (BmEcR) by creating a chimeric Drosophila/Bombyx ecdysone receptor (DB–EcR) that preserved the ability to bind to the modified ecdysone promoter without exogenous retinoid X receptor (RXR). In cultured cells, DB–EcR effectively mediates ligand-dependent transactivation of a reporter gene at lower concentrations of the chemical ecdysone agonist GS-E than VgRXR (DmEcR + RXR). Transgene delivery in vivo was achieved by intramyocardial injection of recombinant adenovirus vectors in adult rats. Upon stimulation with GS-E, DB–EcR potently (>40-fold induction) activated gene expression in vivo while VgRXR was not induced. This hybrid ecdysone receptor represents an important new tool for in vivo transgene regulation with potentially diverse applications in somatic and germline transfer.     

Analysis of Gene Expression Pattern of Lumbar Intervertebral Disc Degeneration in Human

Intervertebraldiscdegenerationisthemainreasonofthe outbreakofvertebralcolumndegeneration.Theexpertsdomes ticandoverseahavestudiedthisdiseasefromtheanglesofanat omy,biochemistry,molecularbiologyandsoon.Butthedetails oftheintervertebraldiscdegenerationmechanismhavenotbeen explained.Inthisstudy,weadopt4096cDNAmicroarraysof humangenes,settingthedegeneratedintervertebraldiscfrom theclinicalsurgeryastheobjectstostudythecDNAmicroarray ofhumandegeneratedintervertebraldisc,andtosettlethefoun dationfo…     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因及其配体相合或错配对单倍相合骨髓移植效果的影响

本研究分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killer cell Ig-like receptor,KIR）及其配体分子相合与否对单倍体相合骨髓移植效果的影响。分析了74例KIR基因及其配体分子HLA-Cw的分布频率和特点,同时比较KIR分子配体缺失与否对单倍相合骨髓移植患者总体生存、无病生存、GVHD发生以及复发等的影响。结果表明：19个KIR基因表型中2DL1、2DL4和3DL2-3在所有个体100%分布,其他高频率分布的还有3DP1（98.6%）、2DP1（98.6%）、3DL1（97.3%）、2DL3（97.3%）;抑制型基因分布频次是活化型的1.37倍;所有单倍体都含有2DL1、KIR3DL2、3DL3和2DL4,其中每个单倍体中均含有2DL2和/或2DL3。HLA-C14个等位基因中Cw7分布频率最高为37.8%;KIR2DL2/2DL3识别配体Group2（HLA-Cw1,3,7,8,13,14）组占43.2%。32例单倍相合骨髓移植中KIR基因错配发生比例为43.8%,其中9/14例为2DL不相合、5/14为2DL2或3DL1不相合;46对单倍相合骨髓移植中HLA-Cw全相合者29例,不相合者14例,HLA-Cw发生完全错配比例为30.4%,全相合比例为63.4%。14例KIR基因不相合和13例KIR基因相合移植病例中,KIR基因相合组生存率高于KIR基因不相合者（p=0.032）;17例KIR分子配体HLA-Cw不相合移植患者的DFS明显高于24例相合者（p=0.024）。按供受者KIR配体是缺失的GVHD矢量组生存率高于非GVHD矢量组（p=0.015）。急性重症GVHD发生与活化型KIR2DS1/2DS2有关,2DS1/2DS2不相合组高发急性重症GVHD同时复发减低,而2DS1/2DS2相合组低GVHD但是复发增多。14例KIR配体不相合髓系白血病患者骨髓移植后1例复发死亡,而12例KIR配体相合组患者有4例复发死亡。结论：单倍体相合骨髓移植的主要特点就是HLA不全相合,KIR基因表型不一致性及其配体缺失也是其主要免疫学特征,供者型KIR配体的缺失与移植效果有密切关系,在单倍相合移植中分析KIR基因及其配体对于供者选择和判断预后有重要意义。     

LRP15基因的表达谱分析及其在白血病细胞中的表达

为检测LRP15基因在肿瘤细胞以及处于不同发育阶段造血细胞的表达状况 ,探讨其在肿瘤发生、发展以及在白血病分型预后中可能具有的作用 ,利用NCBI提供的SAGE文库及NCI提供的正常组织及肿瘤细胞基因表达数据库 ,分析比较了LRP15基因在多种肿瘤组织、细胞系和正常组织中的表达谱 ;采用RT PCR方法检测了该基因在正常血细胞及原代白血病细胞中的表达状况。结果显示 ,LRP15在人类多种正常组织及肿瘤细胞中有表达 ;在幼稚细胞中表达阳性率高于成熟细胞 (P <0 .0 1) ,在急性髓细胞白血病中M1、M2 和M3 表达的阳性率高于其它亚型 (P <0 .0 1) ;难治组LRP15表达的阳性率有高于初治组的趋势。结论 ,LRP15基因与急性白血病及其它多种肿瘤的发生、发展密切相关 ,对急性白血病的临床分型具有重要的意义 ,可能对判断急性白血病的预后具有一定价值。     

小鼠CXCR4基因慢病毒载体构建与真核表达

本研究旨在克隆小鼠CXC型趋化因子受体4（CXCR4）基因,构建携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的CXCR4重组慢病毒载体并在真核细胞中表达。采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）以C57BL／6小鼠骨髓细胞为模板克隆全长型CXCR4基因,连接至克隆载体pCR-Blunt,经限制性内切酶酶切后亚克隆至慢病毒转移载体,构建携带EGFP及CXCR4双顺反子结构的自身失活型重组慢病毒表达质粒;同时构建LV-IRES-EGFP作为对照质粒;通过脂质体转染法与包装质粒及包膜蛋白质粒共转染包装细胞293FT,超速离心浓缩病毒颗粒后转染293FT细胞,采用荧光显微镜和流式细胞术（FCM）检测EGFP的表达,Western blot鉴定CXCR4蛋白表达。结果表明,成功克隆小鼠CXCR4基因,构建重组慢病毒转移质粒LV-IRES-EGFP-CXCR4及对照质粒LV-IRES-EGFP,三质粒系统共转染293FT细胞后获得病毒滴度可达到10^8TU／ml。以重组慢病毒颗粒感染293Fr细胞后第3天,在荧光显微镜下观察到较强绿色荧光表达,FCM检测显示感染效率可达95％,FCM及Western blot结果显示感染后293Fr细胞表达CXCR4蛋白。结论：成功构建自身失活型慢病毒载体LV-IRES-EGFP-CXCR4,并在真核细胞中获得表达。     

江苏启东地区人群KIR基因型及单倍型与HBsAg清除相关

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)的多态性、KIR基因型及单倍型与乙型肝炎病毒(HBV)感染不同转归之间的相关性。方法以肝癌高发的启东地区HBV感染男性人群为研究对象,随访10年后对其再次进行血清学检测,按照HBsAg是否转阴分为HBsAg转阴组(161例)和HBsAg持续阳性组(493例)。采用序列特异性引物PCR方法进行KIR分型,用χ2检验对KIR等位基因阳性率、KIR基因型、KIR单倍型进行统计学分析。结果 HBsAg转阴组KIR2DS4(d)、单倍型1和基因型AG的频率高于HBsAg持续阳性组(P=0.014、P=0.029、P=0.048);KIR2DL5的频率低于HBsAg持续阳性组(P=0.044)。结论江苏启东地区KIR2DS4(d)、单倍型1和基因型AG可能是HBsAg转阴的保护因素,KIR2DL5可能是HBsAg持续阳性的风险因素。