RNAi对人胃癌BGC-823细胞中HPA基因表达的影响

目的探讨RNAi（RNA interference,RNAi）对人胃癌BGC-823细胞中肝素酶（heparanase,HPA）mRNA表达的影响。方法针对HPA不同基因位点设计合成寡核苷酸然后转录为小干扰RNA（siRNA）,分别用浓度为10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L的siRNA经LipofectamineTM2 000脂质体介导转染BGC-823细胞72h,同时设无关序列组及不转染组。采用完整细胞原位杂交技术观察各组BGC-823细胞中HPA mRNA的表达。结果 siRNA可有效抑制人胃癌BGC-823细胞中HPA mRNA的表达,以20μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义（P〉0.05）,不同浓度siRNA对HPA mRNA表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组（P〈0.05）。结论 RNAi技术可有效抑制人胃癌BGC-823细胞中HPA mRNA表达,为进一步运用RNAi技术治疗胃癌等恶性肿瘤奠定了一定的理论基础。     

大蒜素对胃癌BGC823细胞株PPARγ基因的影响

目的观察大蒜素对胃癌BGC823细胞生长以及对PPARγmRNA表达的影响,探讨大蒜素抑制BGC823细胞增殖的可能作用机制。方法不同浓度的大蒜素处理胃癌BGC823细胞,MTT法观察细胞增殖抑制作用;RT-PCR法检测胃癌BGC823细胞中PPARγmRNA表达的变化。结果大蒜素抑制BGC823细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;大蒜素作用72h后明显抑制胃癌BGC823细胞PPARγmRNA表达,呈浓度依赖性。结论大蒜素可能通过下调PPARγmRNA表达抑制胃癌BGC823细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。     

人参皂苷Rg1对人胃癌BGC-823的抑制作用研究

目的:研究人参皂苷Rg1对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823活性、增殖、凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3及形态学影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,加入不同浓度人参皂苷Rg1加以干预,生长曲线法、MTT法、蛋白质含量分别观察人参皂苷Rg1对BGC-823细胞活性、增殖的影响,荧光定量PCR法测定凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3 mRNA含量变化,形态学方法观察人参皂苷Rg1促BGC-823细胞凋亡作用。结果:人参皂苷Rg1 40、60、80 mg/L不同剂量均不同程度抑制细胞的增殖,且有明显的量-效、时-效关系;人参皂苷Rg1对BGC-823细胞具有明显的细胞毒作用,其IC50为29.56 mg/L;人参皂苷Rg1可明显减少肿瘤细胞内蛋白含量,提高细胞内Bax-2、caspase-3 mRNA含量,提高经人参皂苷Rg1作用后,凋亡细胞皱缩,胞浆稀少或缺乏,淡红色;染色质凝聚,成深紫色;细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。结论:人参皂苷Rg1可明显抑制细胞增殖,降低细胞活性,表现出较好的抗肿瘤活性,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞蛋白质合成、促进BGC-823细胞凋亡有关。     

姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的探讨姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法检测姜黄素对胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测姜黄素对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响;Hoechst 33258荧光核染色法观察姜黄素对胃癌BGC-823细胞的形态学改变的影响。结果姜黄素80μmol·L-1和160μmol·L-1剂量在24、48和72 h均可显著抑制胃癌BGC-823细胞对MTT的摄取能力(P0.05或P0.01),并呈现一定的时间依耐性;姜黄素20μmol·L-1和40μmol·L-1剂量在短时间内对胃癌BGC-823细胞摄取MTT的能力无显著作用,但随作用时间的增长,也表现出显著的抑制作用(P0.05);流式细胞术和Hoechst 33258荧光核染色法结果表明姜黄素40、80和160μmol·L-1剂量均可显著提高胃癌BGC-823细胞的凋亡率(P0.05或P0.01)。结论姜黄素可能通过介导胃癌BGC-823细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

基因多态对他莫昔芬疗效影响研究进展

他莫昔芬是治疗乳腺癌抗雌激素金标准药物,但临床上雌激素受体α阳性的乳腺癌患者中有30%~50%对其耐药。他莫昔芬耐药机制部分与基因变异有关。代谢酶细胞色素氧化酶P450 CYP2D6, 细胞色素P450 CYP2C19, 细胞色素P450 CYP3A5以及磺基转移酶1A1基因多态在一些特定人群中与他莫昔芬疗效显著相关,转运体ABCC2以及雌激素受体基因型对他莫昔芬疗效也具有显著影响。他莫昔芬相关的遗传药理学研究正在不断深入揭示该药耐药的遗传学基础,尽管有些发现尚需进一步阐述,但一些成果已经开始发挥临床药物治疗的指导作用。     

二氢青蒿素对体外培养胃癌细胞株BGC-823周期蛋白D1 P16蛋白表达的影响

目的探讨二氢青蒿素(DHA)对人胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用及周期蛋白D1、P16蛋白表达的影响。方法以25～100μmol/L DHA干预人胃癌细胞株BGC-823细胞后通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖率,吖啶橙-溴化乙定(AO-EB)染色观察细胞凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡周期、蛋白质印迹法检测细胞中周期蛋白D1、P16蛋白表达情况。结果 DHA对人胃癌细胞具有时间、浓度依赖性抑制作用;且浓度依赖性阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。DHA浓度依赖性下调cyclin D1蛋白,上调p16蛋白的表达(P<0.05)。结论 DHA通过下调cyclin D1蛋白,上调p16蛋白的表达,调节细胞周期调控通路,阻滞细胞于G0/G1期,有效抑制人胃癌细胞的增殖。     

他莫昔芬对肝癌HepG2细胞脂质代谢的影响

目的:研究他莫昔芬对肝癌HepG2细胞脂质代谢的影响。方法:体外培养HepG2细胞,MTT法检测0.5、1、5、15、30μmol/L他莫昔芬对HepG2细胞增殖的影响;油红O染色检测0.5、1、5μmol/L他莫昔芬和200μmol/L棕榈酸(阳性对照)对HepG2细胞内脂质沉积的影响;荧光定量聚合酶链式反应法检测5μmol/L他莫昔芬对HepG2细胞内脂肪酸(FA)合成酶(FAS)、固醇调节元件结合蛋白1c(Srebp-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的表达和FA氧化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)、解偶联蛋白2(UCP-2)表达的影响;蛋白印迹法检测5μmol/L他莫昔芬对HepG2细胞内ACC蛋白表达及其磷酸化(P-ACC)水平的影响。以上检测结果均与空白对照组进行比较。结果:与空白对照组比较,0.5、1、5μmol/L他莫昔芬对HepG2细胞增殖无明显影响(P>0.05),15、30μmol/L他莫昔芬能明显抑制HepG2细胞的增殖(P<0.05);5μmol/L他莫昔芬能明显增加细胞内脂质沉积,且与阳性对照相似,0.5、1μmol/L他莫昔芬对细胞内脂质沉积无明显影响(P>0.05);细胞内FASmRNA表达明显增强、P-ACC水平明显降低(P<0.05),其余基因和蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:他莫昔芬能诱导HepG2细胞脂质沉积增加,可能与细胞内P-ACC水平降低、FASmRNA表达上调有关。     

基因芯片技术分析BGC823细胞Zbtb7A高表达前后差异基因的表达

目的 分析胃腺癌BGC823细胞Zbtb7A高表达前后差异基因的表达.方法 应用22K人基因组寡核苷酸芯片,筛选BGC823细胞高表达Zbtb7A前后差异表达的基因,采用RT-PCR验证部分差异基因的表达.结果 发现Zbtb7A高表达前后BGC823细胞有显著性表达差异的基因共312个,其中上调基因205个,下调基因107个.经RT-PCR验证部分差异基因的表达与芯片结果一致.结论 Zbtb7A高表达前后胃腺癌BGC823细胞部分功能基因存在着显著的表达差异,多数差异表达的基因参与细胞黏附、细胞骨架形成以及细胞代谢等过程.     

他莫昔芬的临床应用

乳腺癌、子宫内膜癌是女性最常见的恶性肿瘤 ,发病率逐年增高且发病年龄有变小的趋势。他莫昔芬 (ＴＡＭ)作为人工合成的非甾体类雌激素拮抗药 ,已广泛用于乳腺癌、子宫内膜癌的内分泌治疗。1　他莫昔芬与乳腺癌10ａ间随访服ＴＡＭ 1,2 ,5ａ的 3 0 0 0名女性乳腺癌患者 ,肿瘤复发率减少依次为 2 1% ,2 9% ,47% ,死亡率下降依次为12 % ,17% ,2 6% ,在服药最初 5ａ肿瘤延迟复发确有大的改善 ,最初 10ａ生存率平稳增加。淋巴结阳性、阴性者死亡率下降相似 ,但绝对死亡率减少前者居多 ,服ＴＡＭ约 5ａ的 10ａ期生存率改善是肯定的 ,淋巴结阳性为…     

他莫昔芬对人肝胚细胞瘤HepG2细胞中mTOR和survivin表达的影响研究

目的 研究他莫昔芬对人肝胚细胞瘤HepG2细胞中mTOR和survivin表达的影响。方法 运用RT-PCR、双荧光素酶报告基因检测系统和Western blot生物学方法对接受他莫昔芬刺激的HepG2细胞内survivin和p70S6k的转录水平和蛋白表达水平进行分析。结果 他莫昔芬明显抑制了survivin的蛋白表达,并且减少了p70S6k激酶的合成。20μM的他莫昔芬即可有效抑制survivin mRNA的转录。运用mTOR特异性抑制因子雷帕霉素处理HepG2细胞,发现HepG2细胞内survivin的蛋白表达水平明显下降,但是雷帕霉素并未影响survivin基因的转录,表明他莫昔芬和雷帕霉素通过协同作用抑制HepG2细胞内survivin的表达。结论他莫昔芬通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路有效地抑制了HepG2细胞内survivin因子的表达。     

Caveolin-1蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

目的检测Caveolin-1在乳腺癌表达的情况,揭示其与乳腺癌发生的关系。方法用免疫组织化学(二步法)检测Caveolin-1在正常乳腺组织和乳腺癌组织的阳性表达率,用统计学方法分析其意义。结果Caveolin-1在正常乳腺组织的阳性表达率10%,在乳腺癌组织的阳性表达率分别为85%和95%;Caveolin-1在二者的表达有显著性差异(P<0.005)。结论Caveolin-1在乳腺癌组织的表达与乳腺癌的发生可能存在关联,具体机制有待进一步实验研究。     

靶向Ang-1的siRNA片段逆转人胃腺癌细胞株BGC-823侵袭表型的研究

【摘要】目的 利用RNA干扰技术沉默人胃腺癌细胞株BGC-823中血管生成因子1（Ang-1）的表达,观察其对肿瘤侵袭性的抑制效果。方法 设计靶向Ang-1的siRNA片段并转染人胃腺癌细胞株BGC-823;RT-PCR方法检测Ang-1的mRNA水平;Western Blot和细胞免疫荧光方法检测整合素β1、CD44V6和Ang-1的蛋白表达量和细胞定位;细胞黏附试验检测转染前后细胞黏附能力;Matrigel胶及Transwell双室培养体系检测癌细胞侵袭能力。结果 RTPCR结果显示所设计的siRNA片段可有效沉默Ang-1的mRNA表达;整合素β1、CD44V6和Ang-1蛋白主要定位于肿瘤细胞胞浆和胞膜,其表达水平较转染siRNA片段前均有不同程度降低;细胞黏附能力和侵袭能力均明显降低（P<0.01）。结论 靶向Ang-1的siRNA技术可有效降低人胃腺癌细胞株BGC-823的侵袭能力,为胃癌基因治疗提供了新的思路。     

桦褐孔菌提取物诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

目的:探讨桦褐孔菌提取物对肿瘤细胞周期的影响及其抗癌的作用机制。方法:将不同浓度(20、40、80mg·L-1)桦褐孔菌提取物作用于人胃癌BGC-823细胞48h,用碘化丙啶染色法检测凋亡细胞和细胞周期分布。采用免疫细胞化学染色法检测药物处理前、后Ki-67抗原的表达。结果:3种浓度桦褐孔菌提取物处理48h后细胞凋亡率分别为11.57%、20.97%、31.22%,阻滞细胞周期于S期,并使Ki-67阳性表达率下降,且具有浓度依赖性。结论:桦褐孔菌提取物可抑制人胃癌BGC-823细胞的生长,细胞主要阻滞于S期,并能诱导部分细胞凋亡。     

Caveolin-1及其与肿瘤多药耐药的研究进展

Caveolin-1(Cav-1)是细胞膜上caveolae的重要组成蛋白,在大多数正常细胞中高表达,通过其绞手架区可与多种信号分子相连接,参与分子运输、细胞黏附和信号转导在内的许多细胞活动.近来研究发现Cav-1与肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移、凋亡以及多药耐药(multidrug resistance,MDR)关系密切,且其表达水平存在明显差异,取决于肿瘤的类型、分期和分级.本文就Cav-1蛋白的结构和功能,及其与MDR的关系做一综述,为改善肿瘤治疗中MDR问题提供新思路.     

PRNCR1基因沉默对于胃癌细胞BGC-823增殖活性的影响

目的：比较胃癌及其癌旁组织中PRNCR1含量;设计并合成针对PRNCR1基因的siRNA,转染人胃癌细胞BGC-823,观察PRNCR1含量改变对BGC-823细胞增殖活性的影响。方法 Real Time-PCR检测10对胃癌及其癌旁组织中PRNCR1含量;化学法合成针对PRNCR1的siRNAs,脂质体法转染至BGC-823细胞,转染分为细胞对照组、转染对照组、错义序列组和siRNA转染组。转染后48 h收集细胞,Real Time-PCR检测转染后细胞内PRNCR1含量变化;CCK-8检测肿瘤细胞对数生长期基因干预对于增殖活性的影响。结果 PRNCR1在胃癌组织中含量明显高于癌旁组织(P<0．05)。与细胞对照组比较,siRNA转染组细胞中PRNCR1含量明显降低,细胞增殖活性明显受到抑制(P<0．01);而转染对照组、错义序列组与细胞对照组比较,PRNCR1含量、细胞增殖活性均无明显差异(P>0．05)。结论 PRNCR1沉默可显著抑制BGC-823细胞增殖活性。     

Caveolin-1与Ki-67在宫颈癌中的表达及与HPV16/18的相关性

目的:研究Caveolin-1和Ki-67在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样变(CIN)以及宫颈癌中的表达情况及其与人乳头状病毒(HPV)16/18感染的相关性,探讨上述指标作为宫颈癌诊治的一种新的有效指标的可行性。方法:采用免疫组化方法检测15例正常宫颈组织、35例CIN组织、50例宫颈癌组织中Caveolin-1、Ki-67及HPV16/18的表达情况。结果:Caveolin-1和Ki-67在宫颈癌组织中的阳性表达率与CIN、正常宫颈组织差异有统计学意义。在宫颈癌组织Caveolin-1的阳性表达率表现为高临床分期低于低临床分期,中、高分化程度高于低分化程度;而Ki-67的阳性表达率与之情况相反;此外,无淋巴结转移患者Caveolin-1的阳性表达率高于有转移患者。HPV16/18在宫颈癌组织中的阳性表达率高于正常宫颈和CIN组,但不同临床分期、病理分级、年龄和淋巴结有无转移差异无统计学意义。Caveolin-1与Ki-67在宫颈癌组织的异常表达与HPV16/18感染有关。结论:联合检测Caveolin-1、Ki-67和HPV16/18可作为筛查宫颈癌和判断预后的有利指标。     

胃癌组织中窖蛋白-1与细胞周期素D1的表达及临床意义

目的 探讨窖蛋白-1(Caveolin-1)和细胞周期素D1(cyclin D1)在胃腺癌组织中的表达及其临床病理意义,为胃癌判断预后及多途径治疗提供有效的试验依据.方法 采用免疫组织化学方法,检测120例胃腺癌和30例正常胃组织中Caveolin-1和cyclin D1的表达,分析两者与临床病理特征的关系及相关性.结果 胃癌组织中Caveolin-1表达降低、cyclin D1表达增多,与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期相关,且两者的表达呈负相关(r=-0.297,P=0.001).结论 Caveolin-1和cyclin D1表达的负向协同可能与胃癌的发生、发展密切相关,两者可作为评价胃癌预后的指标,对胃癌的治疗有重要意义.     

Caveolin-1和Survivin在结直肠腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨Caveolin-1和Survivin在结直肠腺癌组织中的表达及其意义,为结直肠癌判断预后及多途径治疗提供有效的试验依据。方法采用免疫组织化学方法,检测116例结直肠腺癌和正常结肠组织Caveolin-1与Survivin的表达,分析与临床病理参数的关系。结果 Caveolin-1在结直肠腺癌中表达降低,与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期相关。Survivin在结直肠腺癌组织表达增多,其阳性表达与肿瘤的不同的分化程度、浸润深度、Dukes分期及有无淋巴结转移相关。结论 Caveolin-1和Survivin的表达可能与结直肠腺癌的发生、发展密切相关,二者可作为评价结直肠腺癌预后的指标,对结直肠腺癌的治疗有重要意义。     

Role of Caveolin-1 in Indomethacin-induced Death of Human Hepatoadenocarcinoma SK-Hep1 Cells

Caveolin-1 (CAV1) is an integral membrane protein that may function as a scaffold for plasma membrane proteins and acts as a tumor suppressor protein. One causative factor of chemotherapy-resistant cancers is P-plycoprotein (P-gp), the product of the multidrug resistance-1 gene (MDR1), which is localized in the caveolar structure. Currently, the interactive roles of CAV1 and MDR1 expression in the death of cancer cells remain controversial. In this study, we investigated the effects of indomethacin on the cell viability and the expression levels of MDR1 mRNA and protein in a CAV1-siRNA-mediated gene knockdown hepatoma cell line (SK-Hep1). Cell viability was significantly decreased in CAV1-siRNA-transfected cells compared with that of control-siRNA-transfected cells. Furthermore, the viability of cells pretreated with CAV1 siRNA was markedly decreased by treatment with indomethacin (400µM for 24 h). However, the protein and mRNA levels of MDR1 were unchanged in CAV1-siRNA-transfected cells. These results suggest that CAV1 plays an important role as a major survival enzyme in cancer cells, and indomethacin can sensitively induce cell death under conditions of reduced CAV1 expression, independent of MDR1 expression.