一株高温酸性淀粉酶产生菌的筛选、鉴定及其酶学性质研究

从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的55℃底泥中筛选到1株高温淀粉酶的高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16SrRNA基因序列分析,将其初步鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的一株菌,命名为Bacillus thuringiensis Amy-55。对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃。所产淀粉酶最适酶活温度为75℃,最适反应pH值为5.0。在25℃以下,能保持良好的稳定性,Zn~(2+)和Mn~(2+)对该酶有一定的抑制作用,Ca~(2+)、K~+、Mg~(2+)、Fe~(2+)、Cu~(2+)均对该酶活力起到促进作用,其中Fe~(2+)的促进效果最为明显。     

低温α-淀粉酶产生菌GS230发酵条件与酶学性质研究

对分离自连云港海域的低温α-淀粉酶产生菌Pseudoalteromonas sp．GS230进行了产酶条件的优化和酶学性质的研究。结果表明,该酶在0．4％可溶性淀粉、0．25％牛肉膏、1．5％蛋白胨以及5％接种量、培养32h产酶量达到最高。对低温仪．淀粉酶性质进行研究发现,该酶的最适作用温度和pH值分别是30℃和pH8．0、0℃时相对酶活达28％。对酶稳定性的研究发现,该酶对热敏感,30℃半衰期为1．5h,Ca^2＋可以提高酶的稳定性;在反应体系中添加5mmol／L Ca^2＋,30℃保温1．5h,残余酶活达93％。Na^＋K^＋、Ca^2＋等对酶有激活作用,而Pb^2＋、Cu^2＋、Fe^3＋等强烈抑制酶活性。     

酸性α-淀粉酶生产菌株的筛选及酶学性质研究

从土壤中筛选到一株产酸性α-淀粉酶的野生菌株N7,此菌株具有较高的产酶活性。通过菌落形态、菌体特征观察和16SrDNA序列比对,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。其酶学性质研究表明,菌株代谢产酶的反应最适温度为53℃,最适作用pH值为4．6,在pH3．0～10．0之间,具有较好的酸稳定性。     

Bacillus subtilis UN13产α-淀粉酶酶学性质研究

对Bacillus subtilis UN13所产生的α-淀粉酶酶学性质进行初步研究.结果表明:该酶是一种中温酸性α-淀粉酶;其最适温度为50 ℃,在40～60 ℃范围内稳定性较好;最适pH为5.5,在pH值为5.0～7.5范围内较稳定;Ca2+和Mn2+对该酶有激活作用, Cu2+,Zn2+,K+和EDTA 则抑制该酶的活性;动力学研究表明该酶的Km值为1.7039 mg/mL,Vmax值为3.1615 mg/min·mL.     

一株产酸性α-淀粉酶菌株的筛选及酶学性质研究

从酿造大曲中筛选到高产α-淀粉酶菌株A-5-3,对其进行生物学鉴定,鉴定结果为黑曲霉;对其发酵液进行酶学性质初步研究,结果表明:该酶的最适pH值为3.6,最适温度为70℃,热稳定性良好。在pH3.0~5.0之间,具有很好的酸稳定性且为非Ca2+依赖型水解酶,在工业生产上有良好的应用前景。     

耐酸性高温α-淀粉酶突变基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究

利用表达载体pET-30a,实现了去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd及未突变的高温α-淀粉酶基因amy在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。经多步纯化,重组酶AMY及AMYD的比活分别达到312.7U/mg蛋白和354.6U/mg蛋白,纯化倍数分别为75.90和83.83,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测,AMY及AMYD酶分子质量均为63.5ku。重组酶AMY的最适温度80℃,最适反应pH为6.5,在温度低于90℃,反应pH5.5~7时,酶活较稳定。重组酶AMYD的最适温度80℃,最适反应pH为4.5,在温度低于90℃,反应pH4.0~6.5时,酶活较稳定。     

真菌α-淀粉酶产生菌的筛选及酶学特性的研究

通过对实验室中保藏4种真菌菌株进行液体发酵与固体发酵研究，筛选出最佳的α-淀粉酶产生菌米曲霉FSO179，固体发酵产酶水平为910．3u／g，液体产酶水平为656.6u／mL。该酶酶学特性研究表明：该酶作用的最适温度为55℃，50℃保温30min仍保留80％；最适作用pH为4．0，pH稳定范围为3.5-6.0之间。Fe^2＋、Ba^2＋、Cu^2＋、Mn^2＋、Fe^3＋金属离子对酶具较强抑制作用。而Ca^2＋对酶具有一定激活作用。     

一株产α-淀粉酶菌株的分离筛选、鉴定及酶学性质研究

为了更加经济、更高产量的分离出高纯酶,该实验从富含淀粉的土壤中筛选出1株高产淀粉酶的菌株LZ-10,通过菌落形态观察、生理生化特性实验、16S rDNA序列和gyrB基因序列分析对其进行鉴定。采用硫酸铵盐析,DEAE-52阴离子交换纤维素纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测蛋白分子质量。结果表明,菌株LZ-10鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。纯化后的淀粉酶比活力为59.91 U/mg,纯化倍数为4.53,回收率为60.5%,分子质量为55.4 kDa。对其酶学性质进行研究,得出菌株LZ-10所产淀粉酶最大酶活力为41.6 U/mL,最适作用温度为50 ℃,在50～70 ℃温度环境下其稳定性较高;最适pH值为7.0,在pH=5.0～7.0的环境条件下稳定性较高;Ca2+、Mg2+、Na+、K+对淀粉酶有激活作用;乙二胺四乙酸（EDTA）、Fe2+、Zn2+对淀粉酶有抑制作用。     

Geobacillus sp.A27的分离筛选及其淀粉酶酶学性质研究

用淀粉平板透明圈法,从分离自腾冲热泉的高温菌中筛选到一株产胞外淀粉酶的菌株,经16sRNA序列比对,在Genbank中与Geobacillus sp.sbs4s有99%同源性,定名为Geobacillus sp.A27。该菌最适生长温度为60～65℃,在LB培养基上不生长,但能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长,并能将来自植物种子、根茎的淀粉质底物水解为以麦芽二糖为主的麦芽寡糖。Geobacillus sp.A27菌株产生的胞外α-淀粉酶最适pH5.6,最适温度70℃。金属离子Fe3+、Cu2+、EDTA对酶活有显著抑制作用,推测AmyA27可能属于金属酶。粗酶液经饱和硫酸胺沉淀、无水乙醇沉淀、8%分离胶的SDS-PAGE电泳和蛋白质复性,确定该淀粉酶分子量为67kD。     

Geobacillus sp.A27的分离筛选及其淀粉酶酶学性质研究

用淀粉平板透明圈法,从分离自腾冲热泉的高温菌中筛选到一株产胞外淀粉酶的菌株,经16sRNA序列比对,在Genbank中与Geobacillus sp.sbs4s有99%同源性,定名为Geobacillus sp.A27。该菌最适生长温度为60～65℃,在LB培养基上不生长,但能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长,并能将来自植物种子、根茎的淀粉质底物水解为以麦芽二糖为主的麦芽寡糖。Geobacillus sp.A27菌株产生的胞外α-淀粉酶最适pH5.6,最适温度70℃。金属离子Fe3+、Cu2+、EDTA对酶活有显著抑制作用,推测AmyA27可能属于金属酶。粗酶液经饱和硫酸胺沉淀、无水乙醇沉淀、8%分离胶的SDS-PAGE电泳和蛋白质复性,确定该淀粉酶分子量为67kD。      

菌株F21来源α-淀粉酶的酶学性质研究

该研究对菌株F21所产的α-淀粉酶进行纯化和酶学性质研究。 通过硫酸铵盐析、疏水层析等方法纯化后,α-淀粉酶酶活达到 4 616.3 U/mL。 酶学性质研究表明,该酶最适pH值为4.8,最适温度为55 ℃,且酶在pH 4.0～9.0及低于45 ℃的条件下稳定性较高;Ca2+ 对酶活有较强激活作用,Fe2+及Fe3+对酶活有较强的抑制作用。     

真菌α-淀粉酶酶学性质研究

真菌α-淀粉酶是淀粉生产麦芽了对比研究.结果表明:两种酶最佳试验稀释倍数为1000;最适pH值均为5.5;在50℃以下时热稳定性较好,高于60℃时酶活损失较多;Ca2 浓度在7mmol/L时对两种酶都有激活作用.     

耐高温α-淀粉酶的酶学性质研究

耐高温α-淀粉酶是淀粉生产麦芽糖的关键酶。本文对两种耐高温α-淀粉酶的酶学性质进行了对比研究。结果表明：两种酶的耐高温能力差别较大，酶活差别明显；最适pH值均为7．0，耐酸性较差：当Ca^2＋浓度在7～9mmol／L时，酶活提高明显。     

Sulfolobus tokodaii strain 7高温酸性α-淀粉酶基因在大肠杆菌中克隆表达及其酶学性质

以超嗜热古菌Sulfolobus tokodaii strain 7基因组DNA为模板,通过PCR扩增高温酸性α-淀粉酶基因ST0817,将此基因克隆至表达载体pET15b,并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21-CodenPlus(DE3)-RIL,获得重组大肠杆菌工程菌。通过热处理、镍柱亲和层析和分子筛层析,得到纯化重组酶,SDS-PAGE分析表明,该酶分子量为53.0 kDa。酶学性质研究表明,该酶最适温度和pH分别为75℃和5.5;具有较强的热稳定性和pH稳定性,在85℃处理8 h保持50%左右活力,在pH 5.2处理120 min仍保持50%活力。此酶对不同底物水解活性不同,直连淀粉>可溶性淀粉>支链淀粉>β-极限糊精>糖原>环糊精>普鲁兰糖;该酶对有机溶剂、变性剂和金属离子具有一定抗性。     

高温甲壳素降解酶产生菌筛选及其酶学性质研究

采用平板透明圈法,结合摇瓶筛选得到一株高温甲壳素降解酶高产菌芽孢杆菌HU1,其甲壳素降解酶活力达到606U/mL。对其部分酶学性质进行了分析,结果表明:该酶的最适酶解温度为60℃,最适pH为6.5,对GlcNAc-GlcNAc键具有较强的专一性,对CMC、纤维素、可溶性淀粉等无降解活性。一价的金属离子Na+、K+对该酶作用不明显;Mg2+、Zn2+、Ca2+对其有明显的促进作用;而Cu2+、Fe3+则具有显著的抑制作用。此外,酶活力还受DTT及SDS抑制,不受EDTA影响。      

酸性生淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质研究

酸性生淀粉酶在淀粉制糖中具有重要的开发价值。本实验从醋厂醋渣、淀粉厂排污口泥土分离到酸性条件下α-淀粉酶活力较高的三株菌,其中B-5所产α-淀粉酶最适pH为5.0,为酸性α-淀粉酶。对三株菌粗酶液降解生淀粉的能力进行比较,可知B-5、B-1降解生淀粉能力较强,而B-6虽然有较高的α-淀粉酶活力,但其生淀粉降解能力却较低,粗酶液降解后的生淀粉电镜图片也说明了此结果。      

耐高温α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及发酵条件与酶性质研究

从西藏八宿温泉附近土壤中 ,分离到一株能在 5 .5℃生长并分泌高温α- 淀粉酶的菌株 ,其生长pH 5 . 0～11. 0 ,最适生长pH 7. 0～ 8. 0。该菌株经初步鉴定为地衣芽孢杆菌 ,命名为BacilluslicheniformisZ - 8。在 4 5℃ ,10 %装液量 ,16. 0r/min条件下振荡培养 4 8h后 ,发酵液酶活可达 2 1. 2× 10 .4UV/mL。发酵培养基的组成成分为黄豆粉 0 . 5 %、麸皮 1%、可溶性淀粉 0 . 2 5 %、pH 8. 8。对该酶的性质研究表明 ,其最适作用pH为 6 . 0 ,最适反应温度为 95℃ ,95℃下保温 6 0min处理后酶活仅损失 5 . 4 % ,对Ca2 + 没有依赖性。     

耐酸性α-淀粉酶产生菌株的筛选及其液态发酵条件研究

从富含淀粉质的土壤中筛选到1株耐酸性α-淀粉酶的产生菌株ZY8,经初步鉴定为黑曲霉。并对其液态发酵条件进行了研究,产酶适宜培养基为可溶性淀粉50g/L,柠檬酸氢二铵20g/L,KH2PO43g/L,CaCl20.1g/LF,eSO4.7H2O0.01g/L,MgSO4.7H2O1g/L。以2%的接种量在30℃、120r/min、初始pH4.0的条件下培养72h,酶活力达到19.86U/mL。酶学特性研究表明,该耐酸性-α淀粉酶最适反应温度为70℃,最适反应pH值为2.0～5.0,在90℃高温处理20min酶活力仍然保持在80%以上。     

α-淀粉酶产生菌的分离、筛选及鉴定

通过富集培养、平板筛选、摇瓶复筛从40 ℃的温泉底泥中分离筛选出一株产α-淀粉酶菌株,通过菌株的生理生化试验、16S rRNA基因序列遗传分析对该菌株进行鉴定。结果表明,菌株FA4被鉴定为苏云芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）,该菌株具有较强的热稳定性,在55 ℃下仍能生长。     

β-甘露聚糖酶产生菌的筛选和酶学性质研究

从土壤中分离筛选出5株产胞外β-甘露聚糖酶的菌株,其中DK3菌株的摇瓶培养液的酶活力达3.85U/mL。该酶水解葡甘露聚糖的最适温度为37℃,最适pH为6.0,pH稳定范围为5.0～9.0,在低于40℃的温度下基本稳定。Fe2+、Cu2+、EDTA和NH4+对该酶有抑制作用,Na+则有激活作用。