癸酸能够活化CD8+ T细胞并提高其抗肿瘤免疫反应能力

目的：探究中链脂肪酸癸酸对CD8+ T细胞活化的影响,及其对CD8+ T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的作用和机制。方法：建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16F10 皮下荷瘤模型,随机分为癸酸组（10 mg/kg 癸酸灌胃）和对照组（等量溶剂灌胃）,观察癸酸对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响,采用流式细胞术检测肿瘤微环境中浸润CD8+ T细胞的活化水平。建立B16F10-OVA和OT-I T细胞共培养体系,采用流式细胞术检测癸酸对CD8+ T细胞的肿瘤细胞杀伤能力的影响。采用α-CD8抗体清除B16F10 荷瘤小鼠体内CD8+ T细胞,观察对小鼠肿瘤体积的影响。小鼠原代CD8+ T细胞经癸酸处理后,采用WB、ELISA及qPCR、流式细胞术检测T细胞受体（TCR）活化、效应细胞因子产生以及增殖和代谢水平。在B16F10荷瘤小鼠模型中,观察α-PD-1抗体联合癸酸给药对小鼠肿瘤生长以及生存率的影响。结果：在小鼠黑色素瘤荷瘤模型中,与对照组相比,癸酸组小鼠移植瘤体积显著降低且生存率显著提高（均P<0.05）,肿瘤浸润CD8+ T细胞IFN-γ和TNF-α的表达水平显著升高（P<0.01）。经癸酸处理的OT-I T细胞对B16F10-OVA细胞的杀伤水平显著升高（P<0.01）。在荷瘤小鼠模型中用α-CD8 抗体清除CD8+ T 细胞后,癸酸对移植瘤的抑制作用显著降低（P<0.000 1）。小鼠原代CD8+ T细胞经癸酸处理后,TCR活化水平显著升高、细胞因子IL-2和IFN-γ的产生增多、线粒体代谢水平显著上调（均P<0.05）。在黑色素瘤荷瘤小鼠模型中,癸酸与α-PD-1抗体联用,能够显著抑制小鼠移植瘤生长并提高其生存率（均P<0.05）。结论：癸酸能够促进CD8+ T细胞活化、增强其抗肿瘤免疫反应能力。     

结直肠癌肿瘤引流淋巴结T细胞的特征及其功能

目的：探讨结直肠癌（colorectal cancer,CRC）肿瘤引流淋巴结（tumor-draining lymph node,TDLN）中T细胞的免疫学 特性及其抗肿瘤作用。方法：收集2018年12月至2021年1月贵州医科大学附属医院收治的33例CRC患者的临床资料和淋巴 结标本。采用染料法示踪,配对采集CRC患者TDLN和非肿瘤引流淋巴结（non-TDLN,NTDLN）。用流式细胞术检测已制备成 单细胞悬液的TDLN和NTDLN中免疫细胞亚群和功能表型差异,酶联免疫斑点法比较 TDLN 和 NTDLN 中肿瘤反应性 T 细 胞比例,多色免疫荧光组织化学技术分析两种淋巴结中免疫细胞空间分布情况。体外扩增 TDLN-T 细胞,检测其 T 细 胞亚群和表型变化以及肿瘤免疫反应能力。结果：与NTDLN相比,TDLN中含有更高比例肿瘤反应性T细胞（ P<0.05）,调节 性T（Treg）细胞比例较高（P<0.01）,但单核样髓源性抑制细胞比例较低（P<0.05）,T细胞活化标志物ICOS、CD28和抑制标志物 PD-1、TIGIT比例均显著升高（P<0.05或P<0.01）。Treg细胞和滤泡性T细胞主要分布在淋巴结皮质区和生发中心。TDLN-T细 胞扩增后,以CD8+ T细胞为主（P<0.01）,ICOS、CD28 表达升高（P<0.05或P<0.01）,肿瘤反应性 T 细胞比例升高（P<0.01）。结论：CRC的TDLN中T细胞处于免疫激活状态,同时高表达免疫抑制标志物;体外培养可以增加TDLN-T细胞活化水平,并提 高抗肿瘤T细胞比例。     

红景天苷通过TLR4调控DC提高T细胞对肺癌3LL细胞的杀伤力

目的：探讨红景天苷（salidroside,SAL）对树突状细胞（dendritic cell,DC）表型及细胞毒性T细胞（cytotoxic T lympho‐cyte,CTL）抗肿瘤能力的影响。方法：选用Lewis肺癌细胞株3LL、野生型C57BL/6和TLR4-/-C57BL/6小鼠,获取小鼠骨髓来源的DC前体细胞,经过培养分化成未成熟DC,收获第6天的DC,经磁珠分选后获得纯度较高的CD11c+DC。将细胞分成PBS组、SAL组和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组,培养48 h后用流式细胞术检测SAL体外对DC表面分子、吞噬功能、TLR4通路和对T细胞杀伤能力的影响。结果：与 PBS 组比较,SAL组DC的表面分子CD80、CD86、MHC Ⅱ表达水平显著升高（均 P<0.05）、吞噬功能显著下降（P<0.05）、TLR4 表达水平显著升高（P<0.01）;与野生型组比较,TLR4-/-组DC经SAL或LPS处理后,其表面分子CD80、CD86、MHC Ⅱ的表达水平显著降低（均P<0.05）;与PBS组比较,SAL组刺激活化的CTL对肺癌3LL细胞的杀伤效应显著升高（P<0.05）。结论：SAL可以通过调控TLR4诱导DC成熟,从而提高T细胞的杀伤能力     

捕获肿瘤抗原的树突状细胞治疗小鼠膀胱肿瘤

目的：研究捕获肿瘤抗原的树突状细胞（dendritic cells,DC)治疗膀胱肿瘤的可行性。方法：分离小鼠脏树突状细胞,外体经粒－巨细胞集落刺激因子（GM－CSF）活化和放射线来活的肿瘤细胞刺激后（D组）,治疗膀胱肿瘤移植模型,并设立空白对照组（A）,单纯GM－CSF活化的树突状细胞组（B）及灭活肿瘤细胞组（C）。结果：D组特异性T淋巴细胞活性、IL－4及IFN－γ水平明显高于其它组（P＜0．01）;所有小鼠长期无瘤存活（＞100天）而其它组小鼠存活期小于30天（P＜0．001）。结论：捕获肿瘤抗原的树突状细胞治疗膀胱肿瘤具有一定的临床应用前景。     

PD-1单抗联合顺铂或吉西他滨化疗对KRAS突变非小细胞肺癌A549 细胞移植瘤小鼠模型的治疗作用

目的：探讨程序性死亡受体-1(PD-1)单抗联合顺铂或吉西他滨在KRAS基因突变非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞移植瘤小鼠模型治疗中的作用。方法：构建免疫系统-肿瘤双人源化A549细胞小鼠移植瘤模型,将60只小鼠按随机数字表法分成6组（10只/组）,分别为对照组（200μL/kg PBS）、PD-1单抗组（20 mg/kg PD-1单抗）、顺铂组（3 mg/kg顺铂）、PD-1单抗+顺铂组（20 mg/kg PD-1单抗+3 mg/kg顺铂）、吉西他滨组（30 mg/kg吉西他滨）和PD-1单抗+吉西他滨组（20 mg/kg PD-1单抗+30 mg/kg吉西他滨）。TUNEL和DAPI双染色法检测移植瘤组织中细胞凋亡水平,测量移植瘤体积和质量并计算肿瘤生长抑制率,免疫组化法检测移植瘤微血管密度（MVD）。结果：成功构建免疫系统-肿瘤双人源化NSCLC A549细胞小鼠移植瘤模型,PD-1单抗+顺铂组移植瘤的细胞凋亡率、肿瘤生长抑制率均最高,移植瘤体积、质量和MVD均最小,与其他5组小鼠比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：顺铂与PD-1单抗具有协同活性,而吉西他...     

水疱性口炎病毒对小鼠乳腺癌4T1 细胞荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、移植瘤生长与肺转移的影响

目的：探究野生型水疱性口炎病毒印第安纳株（VSV-IN）对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法：VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100 感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qPCR 检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA 的表达。于雌性 BALB/c 小鼠脂肪垫接种1×106个/mL 的4T1 细胞0.1 mL,构建4T1 细胞荷瘤小鼠模型,待小鼠肿瘤体积达200 mm3 ,分别向移植瘤内注射PBS、紫杉醇（TAX）（15 mg/kg）、VSV-IN（1×106 pfu/只）,每周1次。给药4次后,处死小鼠、剥离完整移植瘤组织,测量肿瘤体积及质量,肺组织病理切片经H-E 染色后观察肿瘤肺部转移结节,流式细胞术检测脾组织中T 细胞亚群比例,ELISA 法检测小鼠血清IL-6 及TNF-α水平,利用GEPIA 在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9 与E-cadherin的表达,利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV-IN 的G 蛋白、M 蛋白与ERK2、E-cadherin 的亲和力。结果：经MOI=10、100的VSV-IN 处理48 h 后,4T1 细胞死亡率显著高于对照组（均P<0.01）;与对照组相比,VSV-IN 组（MOI=10）细胞迁移率明显降低（P<0.01）,MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低（P<0.05）;与对照组小鼠相比,VSV-IN 组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小（P<0.05）,VSV-IN 组小鼠肺转移结节数量显著减少[（12.86±1.86） vs （24±3.67）个,P<0.01],脾内CD4+ T、 CD8+ T 细胞比例显著升高（均 P<0.05）,血清 TNF- α、IL-6含量显著升高（均P<0.01）;GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、 MMP-9表达水平均高于癌旁组织（P<0.05）;VSV-IN 组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组（P<0.05）;VSV-IN 的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论：野生型VSV-IN 可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移,这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。     

荷乳腺癌小鼠髓源抑制性细胞对B细胞功能的影响

目的：探讨荷乳腺癌小鼠髓源抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cell,MDSC）对B细胞功能的影响。方法：构建BABL/c 小鼠4T1 乳腺癌模型,磁珠分选出荷瘤小鼠脾脏的MDSC与正常小鼠脾脏的B细胞,将MDSC与B细胞共孵育后流式细胞术检测MDSC对B细胞表面分子PD-1、PD-L1、CTLA-4、CCR6、CD62L 和MHCⅡ表达的影响,ELISA 法检测B细胞分泌的IgA、IgM和IgG的变化;BrdU试剂盒检测B细胞增殖情况;Annexin Ⅴ/PI 凋亡试剂盒检测B细胞凋亡。磁珠分选出共孵育体系中的B细胞,将其与T细胞共孵育,BrdU 试剂盒检测T细胞增殖情况,Annexin Ⅴ/PI 凋亡试剂盒检测T细胞凋亡。结果：与B细胞对照组相比,B+MDSC组中B细胞表面PD-L1 表达升高（P<0.01）,PD-1、CTLA-4、CCR6、CD62L 和MHCⅡ的表达均降低(均P<0.01);B细胞分泌的IgA、IgM 和IgG 明显升高（均P<0.01）,B细胞增殖增高（P<0.01）、凋亡降低（P<0.01）。与T细胞对照组相比,B+MDSC (1∶5）+T组的T细胞增殖明显降低（P<0.01）,T细胞凋亡无明显变化。结论：荷乳腺癌小鼠MDSC促进B细胞增殖和抑制B细胞凋亡,并且MDSC诱导的B细胞可以抑制T细胞的增殖。     

中央记忆型T细胞与肿瘤免疫治疗的相关性研究进展

记忆T细胞（memory T cell,Tm）作为人体免疫系统中的一个组成部分，在免疫应答中发挥着至关重要的作用。中央记忆型T细胞（central memory T cell,Tcm）是幼稚T细胞经过抗原激活后，产生的具有长期记忆性的、并能够归巢到淋巴结接受抗原再刺激的T细胞。肿瘤免疫治疗的抗肿瘤作用及不良反应的发生与T细胞功能密切相关，Tcm不仅是介导免疫应答的防线，其作为疗效预测生物标记物的研究也取得了相当大的进展。目前肠道菌群对肿瘤免疫治疗的影响备受关注，肠道菌群及其代谢产物通过影响肿瘤微环境调控疗效，其在免疫细胞层面的机制值得探究。本文对Tcm在组织中的分化、表面标记，在肿瘤免疫治疗中的作用及其与肠道菌群的联系等方面的研究进展进行综述。     

妇科肿瘤免疫治疗的新靶点

虽然作用于程序性细胞死亡蛋白1/程序性死亡配体 1（PD-1/PD-L）和细胞毒性 T淋巴细胞抗原4（CT- LA4）的抗体已成功应用于晚期实体瘤的治疗，但其疗效仍不够高。需寻找新的免疫靶点以便为难治性肿瘤患者寻求替代治疗。根据受体与配体结合后发挥的作用，可将免疫靶点分为共刺激分子和共抑制分子，共抑制分子包括∶T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3（TM-3）、含免疫球蛋白及 ITM 结构域的T 细胞免疫受体（TGIT）、淋巴细胞活化基因3（LAG-3）、T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域（VISTA）以及 B7家族的 B7-H3 和 B7-H4;共刺激分子包括 CD27、OX40、4-1BB、CD40，糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（GITR）和诱导共刺激因子（ICOS）等。本文就新兴的免疫靶点在妇科恶性肿瘤的临床前和临床研究进展作一简要阐述。     

T细胞的扩增及其信号转导分子ZAP-70的检测

目的检测γδT细胞信号转导分子ζ链相关蛋白-70（ζ-chainassociated protein70,ZAP．70）。方法分离获取健康人PBMC,用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb．Ag）刺激PBMC,通过流式细胞仪检测总T细胞和丫6T细胞CD69分子的动态表达;Mtb-Ag活化俩T细胞增殖培养,10d后收集细胞,用免疫磁珠阳性分选法分离获取高纯度的γδT细胞;westernblot方法检测γδT细胞内的ZAP．70分子。结果总T细胞和γδT细胞均在活化刺激24h时表达CD69分子达高峰,但总T细胞仅为16％,γδT细胞可达75．2％;新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为4．9％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为69．2％,免疫磁珠阳性分选后达99-3％;检测到Y6T细胞内的ZAP-70分子。结论Mtb-Ag可特异性激活俩T细胞,用Mtb-Ag刺激γδT细胞活化增殖培养,可获得大量的γδT细胞;成功地检测到细胞内ZAP-70分子,这为Y6T细胞内其它分子的检测分析奠定方法学基础,也为进一步检测γδT细胞活化信号转导过程中ZAP-70分子的激活及作用奠定基础。     

Minichromosome maintenance protein 6, a proliferation marker superior to Ki-67 and independent predictor of survival in patients with mantle cell lymphoma

Minichromosome maintenance protein 6 (MCM6) is one of six proteins of the MCM family which are involved in the initiation of DNA replication and thus represent a marker of proliferating cells. Since the level of cell proliferation is the most valuable predictor of survival in mantle cell lymphoma (MCL), we investigated lymph node biopsy specimens from 70 patients immunohistochemically with a monoclonal antibody against MCM6. The percentage of MCM6 expressing lymphoma cells ranged from 12.0 to 95.6%, with a mean of 61.0%, and was significantly higher than the percentage of Ki-67-positive cells (P<0.0001). Surprisingly, the ratio of MCM6-positive cells to Ki-67-positive cells was higher than in normal stimulated peripheral blood mononuclear cells, indicating a cell early G1-phase arrest in MCL. A high MCM6 expression level of more than 75% positive cells was associated with a significantly shorter overall survival time (16 months) compared to MCL with a low MCM6 expression level of less than 25% (no median reached, P<0.0001). Multivariate analysis revealed MCM6 to be an independent predictor of survival that is superior to the international prognostic factor and the Ki-67 index. Therefore, aside from gene expression profiling, immunohistochemical detection of MCM6 seems to be the most promising marker for predicting the outcome in MCL.     

CHARACTERIZATION OF A HUMAN HERPES VIRUS－6（HHV－6） AND EPSTEIN－BARR VIRUS（EBV） ASSOCIATED LEUKEMIC CELL LINE，J6－1

ＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＯＦＡＨＵＭＡＮＨＥＲＰＥＳＶＩＲＵＳ－６（ＨＨＶ－６）ＡＮＤＥＰＳＴＥＩＮ－ＢＡＲＲＶＩＲＵＳ（ＥＢＶ）ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤＬＥＵＫＥＭＩＣＣＥＬＬＬＩＮＥ，Ｊ６－１ＷｕＫｅｆｕ吴克复；ＪａｎｏｓＬｕｋａ；Ｓｈａｎｔ...     

Estimating the prognosis of esophageal squamous cell carcinoma based on The Cancer Genome Atlas (TCGA) of m6A methylation-associated genes

BackgroundN6-methyladenosine (m6A) mRNA modification is the most prevalent in certain tumors. However, its expression profile and prognostic value in human esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) remains unknown.MethodsHerein, we performed an extensive investigation of the m6A-associated gene expression profile and determined its significance in the prognosis of ESCC. We received the RNA expression profiles of 81 ESCC tissues and one normal esophageal tissue from The Cancer Genome Atlas (TCGA) database. Kaplan-Meier (KM) survival analysis was used to assess the predictability of m6A methylation-associated gene expression in ESCC prognosis. In addition, univariate and multivariate Cox regression, as well as least absolute shrinkage and selection operator (LASSO) regression models were employed for the establishment of prognostic signatures. Lastly, KM survival analysis, proportional hazard models, and receiver operating characteristic (ROC) curves were used to verify the prognostic value. Moreover, we also investigated the associations among the m6A prognostic signature, immune cell infiltration, and programmed cell death-ligand 1 (PD-L1) expression.ResultsWe demonstrated that YTHDF3 [hazard ratio (HR): 0.910; 95% confidence interval (CI): 0.832–0.995; P=0.038], RBM15 (HR: 0.721; 95% CI: 0.549–0.948; P=0.019), KIAA1429 (HR: 0.801; 95% CI: 0.664–0.967; P=0.021), and ALKBH5 (HR: 0.948; 95% CI: 0.895–1.003; P=0.0.064) overexpression predicted better overall survival (OS) of ESCC patients. Furthermore, based on prognostic factors, the high-risk (H-R) cohort was found to have worse survival than the low-risk (L-R) cohort (P<0.001).ConclusionsWe revealed three m6A methylation-associated genes that were closely correlated with enhanced survival in ESCC patients. In addition, we generated an independent prognostic signature based on the expression of YTHDF3, RBM15, KIAA1429, and ALKBH5 genes. The results revealed significantly higher proportions of CD8⁺ T cells and higher expression of PD-L1 in the H-R group.     

食管鳞癌组织PTK6表达临床意义研究

目的探讨酪氨酸激酶-6(protein tyrosine kinase 6,PTK6)在食管鳞癌组织中的表达,及其与食管鳞癌发生发展及临床病理因素的相关性。方法采用免疫组织化学方法,检测2003-01-01-2005-12-01中山大学肿瘤防治中心胸外科切除的67例食管鳞癌及正常食管黏膜上皮组织中PTK6表达水平;在蛋白质和RNA水平检测7对手术切除的食管鳞癌及其癌旁组织标本中PTK6的RNA与蛋白表达情况。结果 PTK6在癌组织中的表达明显弱于癌旁正常黏膜组织,50.7%(34/67)的食管鳞癌组织中检测到PTK6蛋白高表达,73.1%(49/67)正常食管黏膜上皮组织中检测到PTK6蛋白高表达,两者差异有统计学意义,χ2=7.123,P=0.008。食管癌组织中PTK6表达水平与肿瘤浸润深度(χ2=0.647,P=0.03)和病理分级(χ2=0.577,P<0.001)密切相关,PTK6低表达组5年总生存率为31.9%,显著低于PTK6高表达组的77.3%,差异有统计学意义,P=0.021。RT-PCR及蛋白质印迹结果证实,无论是在基因水平还是蛋白水平,PTK6在食管鳞癌组织中均呈低表达。结论 PTK6在食管鳞癌的发生发展中起着重要作用,可能作为食管癌判断预后的独立预测因素。     

CMTM6 和PD-L1 蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及其与患者临床病理特征的相关性

[摘要] 目的：探讨趋化素样因子超家族6（CMTM6）、程序性死亡受体-配体1（PD-L1）在脑胶质瘤组织中的表达及其与患者临床病理特征的相关性。方法：选用2012 年1 月至2015 年12 月于郑州大学第五附属医院神经外科手术切除的86 例脑胶质瘤标本及30 例头颅外伤去骨瓣减压患者的脑组织标本（对照组）,用免疫组化法、WB法检测脑胶质瘤组织中CMTM6 和PD-L1 蛋白的分布与表达,用两独立样本t 检验分析CMTM6 与PD-L1 的表达差异,用单因素χ2检验分析CMTM6 和PD-L1 表达与患者临床病理特征之间的关系。结果：胶质瘤组织中CMTM6 的表达水平明显高于对照组织（P<0.01）, 高病理级别（WHO Ⅲ-Ⅳ）胶质瘤组织中CMTM6 和PD-L1 的表达水平均明显高于低病理级别（WHO Ⅰ-Ⅱ）胶质瘤组织（均P<0.01）。CMTM6 表达与患者脑胶质瘤病理级别、头晕病史、癫痫发作、PD-L1 表达有关（均P<0.05）,PD-L1 表达与脑胶质瘤病理级别、癫痫发作、CMTM6 表达有关（均P<0.05）。结论：CMTM6 和PD-L1在脑胶质瘤组织中均高表达且两者间有一定相关性,有望用于研究脑胶质瘤信号通路。     

宫颈癌组织中MCM4、CDC6的表达及其与HPV16/18感染的相关性

摘 要 目的: 研究微小染色体维持蛋白4(minichromosome maintenance proteins 4,MCM4)、细胞分裂周期蛋白(cell division cycle 6,CDC6)在宫颈癌组织中的表达及其与人乳头状瘤病毒16/18型(human papilloma virus 16/18 type,HPV16/18)感染的相关性及其临床意义。方法：收集2006-2007年间山西大同市第五人民医院病理科经病理证实的50例宫颈癌、20例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）Ⅰ、20例CINⅡ-Ⅲ、20例正常宫颈组织石蜡标本，以免疫组织化学法检测这些组织标本中MCM4、CDC6的表达，同时采用PCR技术检测HPV16/18的感染情况。结果：（1）在宫颈癌组织中MCM4、CDC6表达的阳性率显著高于CIN和正常宫颈组织（均P<0.05），且MCM4、CDC6阳性表达率与宫颈癌病理分级和淋巴转移相关（均P<0.05），而与年龄分组、临床分期无关（均P>0.05）。（2）HPV16/18 感染在正常宫颈组织、CIN和宫颈癌组织中的阳性率依次升高（P<0.05），但与宫颈癌患者年龄、临床分期、病理分级、淋巴转移无关（均P>0.05）。（3）宫颈癌组织中MCM4和CDC6的表达呈正相关（r= 0.390;P<0.05）；MCM4和CDC6表达均与HPV16/18感染相关（r=0.634, P<0.05; r=0.386, P<0.05）。结论：宫颈癌及CIN组织中MCM4、CDC6表达的改变与HPV16/18感染密切相关，共同影响CIN的发展及宫颈癌的发生与发展。     

A mutual activation loop between breast cancer cells and myeloid-derived suppressor cells facilitates spontaneous metastasis through IL-6 trans-signaling in a murine model

Introduction

Tumor cell interactions with the microenvironment, especially those of bone-marrow-derived myeloid cells, are important in various aspects of tumor metastasis. Myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) have been suggested to constitute tumor-favoring microenvironments. In this study, we elucidated a novel mechanism by which the MDSCs can mediate spontaneous distant metastasis of breast cancer cells.

Methods

Murine breast cancer cells, 4T1 and EMT6, were orthotopically grafted into the mammary fat pads of syngeneic BALB/c mice. CD11b⁺Gr-1⁺ MDSCs in the spleen, liver, lung and primary tumor mass were analyzed. To evaluate the role of MDSCs in the distant metastasis, MDSCs were depleted or reconstituted in tumor-bearing mice. To evaluate whether MDSCs in the metastasizing tumor microenvironment affect breast cancer cell behavior, MDSCs and cancer cells were co-cultivated. To investigate the role of MDSCs in in vivo metastasis, we blocked the interactions between MDSCs and cancer cells.

Results

Using a murine breast cancer cell model, we showed that murine breast cancer cells with high IL-6 expression recruited more MDSCs and that the metastasizing capacity of cancer cells paralleled MDSC recruitment in tumor-bearing mice. Metastasizing, but not non-metastasizing, tumor-derived factors induced MDSCs to increase IL-6 production and full activation of recruited MDSCs occurred in the primary tumor site and metastatic organ in the vicinity of metastasizing cancer cells, but not in lymphoid organs. In addition, tumor-expanded MDSCs expressed Adam-family proteases, which facilitated shedding of IL-6 receptor, thereby contributing to breast cancer cell invasiveness and distant metastasis through IL-6 trans-signaling. The critical role of IL-6 trans-signaling was confirmed in both the afferent and efferent pathways of metastasis.

Conclusion

In this study, we showed that metastasizing cancer cells induced higher MDSCs infiltration and prompted them to secret exaggerated IL-6 as well as soluble IL-6Rα, which, in turn, triggered a persistent increase of pSTAT3 in tumor cells. This potential tumor-MDSC axis involving IL-6 trans-signaling directly affected breast cancer cell aggressiveness, leading to spontaneous metastasis.     

CDK6及E2F-1参与细胞周期调控pRb通路的研究进展

目前肿瘤的本质被认为是一种细胞周期病,细胞周期的调控是一种受多条件限制、由多因素参与的复杂并且精细的过程,其经典途径包括pRb途径及p53途径,其中任何一个环节出现异常,均可能导致肿瘤的发生。细胞周蛋白依赖性激酶6(CDK6)、核转录调节因子E2F-1均参与细胞周期调控的RB通路,在G1期向S期转换过程中起到非常关键的作用。现有研究已证实,在人体的很多肿瘤中CDK6、E2F-1表达均呈现异常,其与肿瘤的发生发展有密切联系。因此,进一步了解二者在细胞周期调控中的作用及其在不同类别肿瘤中的表达异常对了解肿瘤的发生发展有重大意义。     

KRT6A调控胰腺导管腺癌细胞生物学行为的作用及作为诊断与预后判断靶标的研究

目的：通过生物信息学分析以及细胞生物学实验研究角蛋白6A（KRT6A）对胰腺导管腺癌（PDAC）诊断、预后判断、免疫微环境以及PDAC 细胞PANC1 增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法：通过GEPIA 平台整合TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库与GTEx（Genotype-Tissue）数据库中的数据,分析KTRT6A在PDAC组织中的表达情况,并通过CIBERSORT工具分析KRT6A表达与PDAC组织中免疫细胞浸润的关系,然后通过GSEA方法研究与KRT6A基因表达相关的肿瘤信号通路。选取长海医院病理科保存的60 例PDAC 组织与癌旁组织标本进行免疫组化分析,验证KRT6A在肿瘤组织中表达情况;通过干扰RNA敲减PANC1细胞中KRT6A的表达,采用CCK-8实验以及流式细胞术检测敲减KRT6A对细胞的增殖、凋亡的影响。结果：利用TCGA与GTEx数据库数据分析发现,KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,且与患者较差的生存期存在关联（P=0.015）。利用CIBERSORT 软件以及GSEA 分析发现,KRT6A 高表达的PDAC组织中M2型巨噬细胞浸润性升高（P=0.034）,且与Wnt 通路（NES:1.7359272,P<0.05）、磷酸戊糖途径（PPP）（NES:1.5613053,P<0.05）等信号通路上调有关联（P<0.05 或P<0.01）;免疫组化结果进一步验证了KRT6A在PDAC组织中呈高表达（P<0.001）。增殖和凋亡实验发现,干扰KRT6A能够显著抑制PANC1细胞的增殖（P<0.05）以及凋亡（P<0.001）。结论：KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,敲减其表达能够抑制PANC1细胞的增殖和凋亡,具有作为PDAC诊断与预后判断新靶标的潜力。