影响H5N1甲型流感病毒对哺乳动物毒力变异的HA序列关键位点研究

目的筛选影响H5N1亚型甲型流感病毒对哺乳动物毒力变异的HA序列主要氨基酸位点。方法根据相关文献提供的实验结果,将54株H5N1病毒株按其对哺乳动物的毒力强弱分为高毒力组和低毒力组,在NCB□Genbank数据库中下载HA基因序列,用随机森林模型完成主要变异氨基酸位点的筛选。结果在HA序列中共筛选出8个关键位点,均位于HA1节段,分别为：279、102、228、156、154、172、140、8。位点154和156与其余几个关键位点间、位点140与172间均存在较强的协同交互作用,用上述关键位点重建的随机森林模型对病毒株毒力分类的准确率为83．33％。结论所筛选出的8个变异位点可能在决定H5N1病毒毒力上起关键作用,值得对其分子生物学作用机理做深入研究。     

影响H5N1甲型流感病毒对哺乳动物毒力变异的HA序列关键位点研究

目的筛选影响H5N1亚型甲型流感病毒对哺乳动物毒力变异的HA序列主要氨基酸位点。方法根据相关文献提供的实验结果,将54株H5N1病毒株按其对哺乳动物的毒力强弱分为高毒力组和低毒力组,在NCBI Genbank数据库中下载HA基因序列,用随机森林模型完成主要变异氨基酸位点的筛选。结果在HA序列中共筛选出8个关键位点,均位于HA1节段,分别为：279、102、228、156、154、172、140、8。位点154和156与其余几个关键位点间、位点140与172间均存在较强的协同交互作用,用上述关键位点重建的随机森林模型对病毒株毒力分类的准确率为83．33％。结论所筛选出的8个变异位点可能在决定H5N1病毒毒力上起关键作用,值得对其分子生物学作用机理做深入研究。     

福州市甲型H1N1流感病毒血凝素基因遗传特性研究

目的探究福州市甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因的遗传变异特点及种系进化分布,为研究甲型H1N1流感病毒进化、致病性和流行规律提供科学依据。方法采用MDCK细胞培养法和real-time PCR法进行流感病毒分离、鉴定。采用逆转录-聚合酶链反应扩增流感病毒血凝素基因,扩增产物经纯化后,进行血凝素基因HA区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后用DNASTAR MegAlign序列分析软件进行基因种系进化特性分析。结果福州市甲型H1N1流感病毒与参考株A/California/04/2009相比具有高度同源性,HA蛋白有4个位点氨基酸发生了替换,与猪流感代表株A/swine/Iowa/15/1930(H1N1)存在6个HA抗原决定簇位点变异。福州市甲型H1N1流感病毒株都有8个糖基化位点,其中6个位于HA1区,分离株HA蛋白不具有多碱基裂解位点,具有低致病性流感病毒特点。与美国流感病毒A/California/04/2009(H1N1)株共聚类为一个独立的小分支,进化关系最近,甲型H1N1流感病毒的HA源于古典型猪H1N1流感病毒,与A/swine/Iowa/1/1976(H1...     

2009甲型H1N1流感病毒新进展

甲型猪源性流感病毒属正粘病毒科,其可引起猪、禽和人的上呼吸道感染。2009年3月在美国和墨西哥的流感样患者的呼吸道标本中检测出新的不能分型的甲型流感病毒,并经确认为甲型H1N1流感病毒（简称2009甲型H1N1流感病毒）。这种病毒在美国和墨西哥引起暴发流行,并蔓延到世界各地,引起一些感染者死亡。文中综述了2009甲型H1N1流感病毒在基因分型、抗原特征、传播特点、致病特点、治疗等方面与已知各流感病毒不同的特征。     

浅谈甲型H1N1流感

在人类繁衍发展的历史进程中,人与病原微生物的斗争总是周而复始,循环往复,但几乎每次都会以人类战胜病原微生物而告一段落,而后又会有新的病原微生物卷土重来,给人类造成一次又一次的灾难。2009年3月,一种新的流感病毒再次袭击人类,后经研究发现造成此次疫情的病毒株包含有猪流感、     

甲型H1N1流感病毒的分子特征

当前新型甲型H1N1流感病毒的暴发,引起全球的关注。本文对甲型H1N1流感病毒的分类地位、结构特征、基因复制、蛋白功能进行介绍,说明新型甲型H1N1流感病毒是甲型流感病毒通过抗原漂移和抗原转换所产生的,对奥塞米韦(达菲)敏感,但对金刚烷胺有抗药性。     

一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒

目的 建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术.方法 针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系.通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性.结果 琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强.50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%.结论 建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术.

Abstract：

Objective To developed a multiplex RT-PCR assay for simultaneous screening of type A, B and novel A (H1N1)influenza viruses. Methods Two pairs of universal primers in were designed for amplifying the M gene and NS gene of type A and B influenza viruses, respectively. A pair of specific primers of HA gene was designed to detect novel A (H1N1) influenza virus. A one-step method was used to establish the multiplex RT-PCR system. A blinded experiment was carried out to validate the accuracy of this assay in comparison with the results of real-time fluorescence RT-PCR. The clinical practicability and efficacy of this assay was also evaluated. Results The RT-PCR products were analyzed using agarose gel electrophoresis,which yielded distinct bands of the target fragments without non-specific reactions, suggesting the high efficiency and specificity of the multiplex RT-PCR. Blinded study of 50 samples demonstrated a concordance rate of 100%. Conclusion This multiplex RT-PCR assay allows one-step simultaneous detection of type A, B and novel A (H1N1) influenza viruses rapidly and accurately, and provides a valuable low-cost screening technique for influenza epidemic monitoring and early diagnosis.     

金振口服液抗甲型 H1N1 流感病毒作用实验研究

目的 观察金振口服液对甲型 H1N1 流感病毒抑制作用。方法 采用体外抗病毒实验,观察金振口服液对流感病毒的抑制作用;采用体内实验,以流感病毒感染小鼠,观察小鼠生存时间、死亡率及肺组织病变程度。结果金振口服液体外对甲型 H1N1 流感病毒有一定抑制作用,体内则能明显延长感染小鼠的生存时间,显著降低肺湿质量 (P＜0.05、0.01),减轻肺组织病变程度。结论金振口服液体内外均有一定的抗甲型 H1N1 流感病毒作用。     

新型甲型H1N1流感病毒深圳分离株HA基因的克隆与进化

目的 分析2009年新型甲型H1N1流感病毒深圳分离株A/Shenzhen/71/09血凝素(Hemagglufinin,HA)基因序列,探讨其基因变异与分子进化.方法 采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09 HA基因片段并进行测序,利用Cluster和Mega3.1软件对不同亚型毒株HA基因核苷酸序列进行分析,绘制发育进化树. 结果 A/Shenzhen/71/09毒株HA基因包含HA1和HA2两个片段,长度分别约为1 032bp和669bp,HA蛋白裂解位点为VPSIQSR↓ GLF,不含连续碱性氨基酸.进化分析表明该病毒株与其它亚型病毒株遗传距离较远,而与深圳地区同期分离的其它H1N1毒株高度同源,同源性在99.0％以上.结论 新型甲型H1N1流感病毒HA基因不具备高致病流感病毒序列特征,深圳地区同期分离的毒株变异率低,但仍需密切关注新型甲型流感的传播情况.     

甲型H1N1流感确诊病例临床特点和治疗研究

目的分析甲型H1N1流感确诊病例的临床特征,探讨治疗方法,为防治提供依据。方法对229例甲型H1N1流感确诊病例的一般情况,临床表现,实验室检查,胸部X线,治疗方法进行统计、分析。结果甲型H1N1流感确诊病例平均年龄18.12岁,男：女为3.09：1,临床症状、体征中前三位分别是咳嗽157例、咽痛135例、咳痰50例和发热228例、咽部充血225例。白细胞总数降低40例、中性粒细胞和淋巴细胞降低占多数。血清酶升高：ALT22例、AST29例、LDH26例、CK45例、CKMB8例,血脂降低：CHO83例、TG108例。胸部X线异常6例,单侧肺炎1例,双侧肺炎5例。中药使用率100%,达菲使用率35.80%,抗生素使用率16.59%,其它抗病毒药物使用率13.10%。平均住院5.21d。结论甲型H1N1流感确诊病例以咳嗽、咽痛、咳痰、发热、咽部充血和肺部病变居多,CT检出肺部病变多,绝大部分血白细胞降低,心肌和肝脏最易受侵害,药物治疗效果好,病程较短。     

20例儿童甲型H1N1流感危重症的病例分析

目的分析甲型H1N1流感危重症的临床特点,总结治疗经验。方法回顾性分析20例甲型H1N1流感危重症的临床表现、实验室检查、影像表现。结果甲型H1N1流感危重症不仅见于婴幼儿和有原发基础病的儿童,也可见于体健的年长儿;常合并细菌、真菌、支原体、或其他病毒的感染;均伴有多脏器功能不全;好转后短期内随诊未留有后遗症。结论对甲型H1N1流感患儿早期作出正确的判断、及时积极的治疗有利于阻断和延缓病情进展、降低病死率、改善预后。     

甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化分析

【目的】 了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律｡【方法】 分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用RT-PCR技术扩增了病毒NA基因全序列,并对其分子进化和重要功能位点的遗传变异进行了分析｡ 【结果】 2009年新型H1N1流感病毒与2006年季节性HIN1流感病毒比较,NA基因的同源性较低(77.9% ~ 78.8 %),与世界各地不同年代代表株及WHO推荐的1979 ~ 2010年季节性流感疫苗株比较,NA基因的同源性也较低(78.1% ~ 79.3%),但与WHO推荐的2009年新型H1N1流感疫苗株比较同源性则高达99%以上;系统进化分析结果表明,2009年新型H1N1流感病毒NA基因与欧亚猪流感病毒株A/swine/Belgium/1/1983的亲缘关系最近;并发现自2005年以来季节性H1N1流感病毒NA基因的某些抗原位点和神经氨酸酶活性位点已发生了变异｡【结论】 2009年新型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒;接种季节性流感疫苗不能对本次流行的新型流感产生有效的免疫保护作用;季节性H1N1流感病毒在流行过程中NA基因已发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测病毒的变异情况｡     

Cross-neutralizing Anti-hemagglutinin Antibodies Isolated from Patients Infected with Avian Influenza A(H5N1) Virus

Objective To recover broad-neutralizing monoclonal antibodies(Bn Abs) from avian influenza A(H5N1)virus infection cases and investigate their genetic and functional features.Methods We screened the Abs repertoires of expanded B cells circulating in the peripheral blood of H5N1 patients.The genetic basis,biological functions,and epitopes of the obtained Bn Abs were assessed and modeled.Results Two Bn Abs,2-12 D5,and 3-37 G7.1,were respectively obtained from two human H5N1 cases on days 12 and 21 after disease onset.Both Abs demonstrated cross-neutralizing and Ab-dependent cellular cytotoxicity(ADCC) activity.Albeit derived from distinct Ab lineages,i.e.,V_H1-69-D2-15-J_H4(2-12D5) and V_H1-2-D3-9-J_H5(3-32 G7.1),the Bn Abs were directed toward CR6261-like epitopes in the HA stem,and HA_2 I45 in the hydrophobic pocket was the critical residue for their binding.Signature motifs for binding with the HA stem,namely,IFY in V_H1-69-encoded Abs and LXYFXW in D3-9-encoded Abs,were also observed in 2-12D5 and 3-32 G7.1,respectively.Conclusions Cross-reactive B cells of different germline origins could be activated and re-circulated by avian influenza virus.The HA stem epitopes targeted by the Bn Abs,and the two Ab-encoding genes usage implied the V_H1-69 and D3-9 are the ideal candidates triggered by influenza virus for vaccine development.     

人流感病毒H1N1与禽流感病毒H5N1感染人神经胶质细胞的实验研究

目的：研究人流感病毒（H1N1）及禽流感病毒（H5N1）感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点。方法：分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞;用RT-PCR技术探求白细胞介素（IL）-1β、-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α变化。结果：与阴性对照比,H1N1和H5N1感染人神经胶质细胞IL-1β、-6和TNF-α的表达量均增高,且H5N1的表达量多于H1N1。结论：H1N1与H5N1可体外感染人神经胶质细胞,并诱导其分泌大量促炎症因子,提示此与流感病毒感染中枢神经系统所致的功能紊乱及免疫病理损伤有关。     

禽流感H5N1型病毒对沙鼠致病性的初步研究

目的 观察禽流感H5N1型病毒对沙鼠的致病性。方法 在生物安全三级实验室，将禽流感H5N1型病毒通过滴鼻接种乙醚麻醉后沙鼠，观察14d，记录沙鼠的体温、体重、临床体征、病理学变化、病毒分离情况及抗体变化。结果 沙鼠感染后发病主要表现在第2～6天，攻毒组沙鼠出现反应迟钝、皱毛、弓背、食欲下降、呼吸急促、打堆等体征，攻毒组沙鼠的体温降低和体重减轻，死亡率为44％，在攻毒后8d检出抗体，主要病理学变化表现为肺出现严重淤血、水肿、出血，镜下可见肺间质充血，血管周围炎性细胞浸润，肝和胸腺淤血，肾出血，肾小管变形。结论 禽流感H5N1型病毒对沙鼠有较强致病性。     

Influenza A pandemic (H1N1) 2009 virus infection

The clinical spectrum of the 2009 pandemic influenza A (H1N1) infection ranged from self-limited mild illness to progressive pneumonia, or even a fatal outcome. We summarize the clinical manifestations, risk factors for severe and fatal cases, pathologic findings and treatment of this disease in this paper based on current reports from different regions of the world.

     

河南省18岁以下人群甲型H1N1流感抗体水平调查分析

目的 了解河南省18岁以下人群甲型H1N1流感抗体水平,为甲流防控提供相关依据。方法 采用微量血凝抑制试验对国家卫生部“甲型H1N1流感血清学横断面调查”的2020人(≤18岁)进行甲型H1N1流感抗体水平检测。结果 河南省18岁以下人群血清抗体阳性率为29.60%,13~18岁、7~12岁、0~6岁阳性率分别为45.70%、25.67%、23.71%,各年龄组阳性率比较差异有统计学意义(χ2=80.07,P<0.01)。城乡有差异(郑州市35.47%、其他市36.00%、农村23.67%)。接种疫苗人群抗体水平(63.89%)显著高于未接种人群(25.91%),χ2=117.18,P<0.01;有无流感样症状者的抗体阳性率差异无统计学意义(χ2=0.75, P>0.01)。结论 18岁以下人群具有一定的甲型H1N1流感抗体,但抗体水平较低,人群普遍易感,建议提高甲型H1N1流感疫苗接种率,进一步加强甲型H1N1流感防控措施。     

杭州新型甲型H1N1流感住院病例调查

[目的]研究杭州地区新型甲型H1N1流感的临床表现和流行病学特点。[方法]用统计指标和图表来描述杭州地区104例新型甲型H1N1流感住院病例的临床表现和血液化验数据,比较各年龄组和不同时间段组的新型甲型H1N1流感的临床表现。[结果]在104例病例中20岁及20岁以下的人群占57.7%。20岁及20岁以下与20岁以上的新型甲型H1N1流感病人的病程长短和白细胞计数的差异没有统计学意义(P>0.05),不同时期发病的新型甲型H1N1流感病人的病程长短和白细胞计数的差异没有统计学意义(P>0.05)。[结论]杭州地区的新型甲型H1N1流感青少年、学生较多,65岁以上老年人较少;重症和死亡病人较少,咳嗽是新型甲型H1N1流感的主要症状,各年龄层次新型甲型H1N1流感的临床表现差异不大。     

H5N1人禽流感病毒HA基因的克隆和表达

目的对人禽流感病毒A/China/GD01/06（H5N1）HA基因进行克隆和表达,为进一步研究GD01/06HA的致病与免疫机制提供有效制剂。方法将H5N1全长HA基因克隆入原核表达载体pET-32a（＋）,采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,并对表达的重组蛋白进行鉴定。结果经检验重组质粒p32-HA构建成功,表达蛋白分子量介于66.2~94.0kd。经鉴定所表达的特异性条带为HA蛋白片段。结论HA基因在大肠杆菌中表达并获得特异性重组蛋白,为其生物学、免疫学功能的研究提供了基础。