Nanog基因及其传导通路在保持胚胎干细胞多能性中的作用

胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)的研究最早开始于1980年,当时鼠ES第一次被分离出来[1-2],ES来源于囊胚内细胞团(inner cell mass,ICM),可以自我复制并分化出其他胚层,这一特性对于细胞替代治疗、药物开发和自我修复治疗等研究具有重要的价值.近些年来人类ES的成功培养和分化受到了很大关注,它可以用于组织再生治疗和研究人类进化过程[3].     

胚胎干细胞与Nanog基因

目的:胚胎干细胞可塑性强,但只能从胚胎中提取,来源受限使研究阻力加大。Nanog基因的发现为胚胎干细胞的来源提供了一条崭新的途径,文章综述胚胎干细胞与Nanog基因的关系及研究进展。资料来源:应用计算机检索PUBMED2002-01/2006-11期间的相关文章,检索词为"embryonic stem cells,Nanog gene",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库2002-01/2006-11期间的相关文章,检索词为"胚胎干细胞,Nanog基因",并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与胚胎干细胞和Nanog基因研究相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到162篇相关文献,35篇文献符合纳入标准,排除的127篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的35篇文献中,分别涉及胚胎干细胞的转录调节、Nanog基因与胚胎干细胞、Nanog基因与p53、Nanog基因与人类等方面的内容。选择其中的30篇作为支持文献。资料综合:胚胎干细胞来源于着床前胚胎的一类未分化的全能性(多能性)干细胞,在一定条件下可以分化为所有功能细胞。一个独特的转录因子网络可能赋予其自我更新,同时抑制分化。通过细胞融合技术,胚胎干细胞能够使一个已分化的细胞重新编排信息而进入具有多潜能的胚胎阶段。调节这一改变的基因应该就在胚胎干细胞中,而Nanog基因可能就是这一候选基因,它具有使未分化的胚胎干细胞产生增殖的能力。Nanog mRNA出现在人和老鼠的多功能干细胞中,但在成人干细胞中却没有。结论:Nanog基因是胚胎干细胞中的多潜能维持因子。通过细胞融合技术,胚胎干细胞能够使一个已分化的细胞重新编排信息而进入具有多潜能的胚胎阶段。     

干细胞标志物Nanog基因检测在肺癌诊断中的临床意义

目的 观察干细胞标志物Nanog基因在肺癌组织与癌旁组织中的表达情况,明确其在肺癌诊断中的作用.方法 选择2011年1月至2013年7月在我院诊治且临床被诊断为肺癌的患者作为研究对象,分为肺腺癌（A组）和肺鳞癌（B组）.取患者癌组织与癌旁组织,以实时定量RT-PCR反应检测两组患者干细胞标志物Nanog基因的表达水平,并比较不同分化程度下各组织中Nanog基因的表达量.结果 肺腺癌与肺鳞癌患者各年龄段的发病率大致相等,两组患者在性别、疾病分期及有无淋巴结转移方面无显著差异（P＞0.05）;与I期、II期相比,Ⅲ期、Ⅳ期癌组织中Nanog基因的表达明显升高,且癌组织中Nanog基因的整体表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.05）.与中分化及高分化型的癌组织相比,未分化、低分化癌组织中Nanog基因的表达明显升高,差异显著（P＜0.05）.结论 肺腺癌与肺鳞癌患者癌组织中Nanog基因的表达明显增强,以Ⅲ期、Ⅳ期肺癌中表达最高,细胞的分化程度越低,其癌组织中Nanog基因的表达越强.     

胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞（ESC）是来源于哺乳动物早期胚胎的内细胞团中的一种二倍体细胞,具有发育的全能性。ESC的体内和体外分化在分子水平有许多相似之处。在现有培养条件下。小鼠ESC体外分化的细胞类型或结构主要有4种：内皮细胞与血管,肌细胞和心肌、造血细胞和神经细胞,最近的研究提示;造血干细胞（HSC）来源于胚胎内的特定区域,HSC的产生可能受尚未发现的胚胎生长因子调节。ESC为从胚胎着手明确早期造血过程提供了方便有效的实验途径。人ESC的研究及应用尚面临一系列伦理问题,对ESC的研究具有广阔的应用前景。     

成体干细胞及其分化机理

成体干细胞是存在于胎儿和成人组织器官中具有自我更新，高度增殖和多向分化潜能的细胞，在适当的诱导条件下。可变成不同类型的细胞。成体干细胞的分化是指成体干细胞具有可在体内、体外分化成不同类型细胞的能力，将其分化物植入体内后在各种情况下都能稳定地存活。目前认为分化的可能机制是：多种成体干细胞可能在不同的器官中存在，包括出生后体内仍存在的多能性干细胞。美国Minnesota大学干细胞研究所一系列的研究证明成体骨髓中确实存在具有多分化潜能的成体干细胞，命名为MAPC，能在体外由单细胞分化为具有中胚层系、外胚层系或内胚层系特征的细胞；将其注入胚泡，能分化成各种组织细胞。多能的成体干细胞在今后能用于多个不同器官的变性或遗传性疾病的治疗。     

人Nanog基因重组腺病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达

摘要:目的：构建重组人Nanog基因腺病毒载体(Ad-Nanog),转染人脐带间充质干细胞（hucMSCs）,用于后续研究。 方法：设计含有KpnⅠ及XhoⅠ酶切位点的引物,PCR扩增Nanog基因,将扩增产物亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒上,经双酶切和基因测序鉴定,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组,筛选获得Ad-Nanog重组腺病毒质粒。经PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,包装和扩增病毒,并感染hucMSCs。 结果：重组腺病毒质粒经PCR和双酶切鉴定正确,测序结果和设计片段的序列一致。荧光显微镜下观察在感染的hucMSCs中绿色荧光蛋白高效表达。 结论：成功构建了Nanog腺病毒表达载体,能高效转染hucMSCs,可用于后续转基因的研究。     

人胚胎干细胞的研究进展

人胚胎干细胞(hES细胞)是由早期人类胚胎内细胞团或原始生殖细胞(PGCs)经体外分化抑制培养而建立的克隆细胞系,具有多种增殖和分化潜能。其生物学特征包括:正常的核型、高端粒酶活性及表达阶段特异性胚胎抗原等。细胞因子及细胞培养条件对胚胎干细胞分化有着重要的影响作用。     

诱导性多潜能干细胞在血液学的研究进展

诱导性多潜能干细胞(iPScs)是近年来发展十分迅速的干细胞技术,与传统的获得干细胞的方法不同,它通过向体细胞导入几种基冈或者小分子物质直接将其重编程为干细胞,不涉及复杂的技术和伦理问题.已有多种人类体细胞可以重编程为iPSCs,这类细胞具有发育成为三个胚层细胞的潜能,并且可以继续分化为各类细胞.由于拥有这些性质,iPSCs在医学领域中有广阔的应用前景.本文主要讨论iPSCs研究的新进展,及其在输血医学血液病发病机制和治疗等领域中的应用.     

人胚胎干细胞的研究进展

人胚胎干细胞(hES细胞)是由早期人类胚胎内细胞团或原始生殖细胞(PGCs)经体外分化抑制培养而建立的克隆细胞系，具有多种增殖和分化潜能。其生物学特征包括：正常的核型、高端粒酶活性及表达阶段特异性胚胎抗原等。细胞因子及细胞培养条件对胚胎干细胞分化有着重要的影响作用。     

胚胎干细胞的体外诱导分化模型

目的：胚胎干细胞是具有全能性及无限制自我更新与分化能力的一类特殊细胞群体，通过对胚胎干细胞诱导分化研究的回顾和总结，期望能给胚胎干细胞的临床应用提供理论参考。资料来源：应用计算机检索Highwire press以及Medline数据库2000／2004期间的相关章。检索词为“Embryonic stem cell，differentiation．induce”，同时计算机检索万方数据库2000／2004期间的相关章，检索词为“胚胎干细胞”，限定章类型为中。资料选择：对资料进行初审，选取与诱导分化有关的章，纳入标准为研究原。资料提炼：选取与诱导分化有关的章共369篇(其中外364篇)。通过阅读相关献的要，从中选取15篇较全面介绍胚胎干细胞的诱导分化以及应用的章。其中，全面介绍胚胎干细胞各种细胞模型，神经细胞模型，心肌细胞模型，上皮细胞模型，造血细胞模型。资料综合：7篇献较为全面的介绍胚胎干细胞可以诱导分化为神经细胞、心肌细胞、上皮细胞以及造血细胞等细胞模型，从以上献以及单独介绍各种细胞模型的章中分别对各种细胞模型的研究概况进行归纳整理。结论：胚胎干细胞经过定向诱导分化后可获得神经细胞．心肌细胞．上皮细胞以及造血细胞等细胞模型，这些模型可以用于细胞发育分化的分子机制．并对药物筛选和临床细胞治疗提供良好应用前景．     

肾母细胞瘤过度表达基因促进入神经干细胞增殖和向神经元分化的实验观察

背景：肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)编码的NOV蛋白是一种胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor，IGF)结合蛋白，它对人神经干细胞的增殖和分化有什么影响作用呢?目的：探讨NOV蛋白对人神经干细胞(HNSCs)增殖和分化的影响。设计：以细胞为研究对象，单因素方差分析实验研究。单位：一所军医大学组织学与胚胎学教研室和神经生物学教研室。材料：实验在解放军第三军医大学组织学与胚胎学教研室完成。对象为10～14周人胚大脑皮质培养的HNSCs：干预：NOV基因重组质粒转染COS-7细胞，收集COS-7细胞和NOV基因修饰COS-7细胞的条件培养液(COS-CM和NOV—CM)，作用于培养的HNSCs。主要观察指标：^3H-TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖，免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。结果：COS-CM和NOV-CM均能明显促进HNSCs对^3H—TdR的摄入，其中NOV-CM组的1／min比COS-CM组要高(P&;lt;0．05)，说明NOV-CM中含有促进HNSCs增殖的成分，另外NOV-CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系；免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示，在NOV—CM组内有较多的NF-200阳性细胞，在对照组和COS-CM组可见到大量GFAP阳性细胞。结论：NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和向神经元分化的作用。     

胚胎干细胞向心肌细胞的分化

目的：了解国内外在胚胎干细胞向心肌细胞分化的机理及其应用潜能等方面的研究现状。资料来源：应用计算机检索Medline，检索时间为1997／2005，检索词限定为“embryonic stem cell，cardiomyocyte／cardiac myocyte．differentiation”，并限定语言种类为英文。资料选择：对所检索到的文献进行初审，纳入标准：符合胚胎干细胞向心肌细胞分化的文章。排除标准：重复性研究。资料提炼：共查找文献200余篇，筛选出26篇。资料综合：收集到多篇关于胚胎干细胞分化为心肌细胞的文章，从最初获得胚胎干细胞源性心肌细胞的实验方法的建立到在单细胞水平对胚胎干细胞源性心肌细胞进行电生理研究。进一步，很多研究者从转录因子的角度研究了控制心脏发育的转录因子在胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中的表达，研究表明心脏转录因子GATA4、肌细胞增强因子2C和NKx2．5控制着心脏基因的表达，它们在心脏发生过程中发挥重要的转录调控作用。研究同时发现，钙调神经磷酸酶信号通路、MAPK信号通路以及其他信号通路参与了心肌细胞分化的调节。此外，从胚胎干细胞纯化分化的心肌细胞用于治疗心肌梗死亦是一个关键问题。结论：当胚胎干细胞以胚小体的形式在没有白血病抑制因子的条件下培养时，一些干细胞可以分化成心肌细胞。干细胞来源的心肌细胞表达一些收缩蛋白，如MHC和肌球蛋白轻链-2V。转录因子GATA4、肌细胞增强因子2C和NKx2．5在心肌细胞分化中发挥重要作用，并且可以触发特异基因如α-肌动蛋白、MHC和肌球蛋白轻链-2V的表达，然而，胚胎细胞向心肌细胞分化的分子机制还有待进一步研究，鉴别出促进心脏分化的因子是研究心脏分化的基础所在。     

干细胞标志物Nanog的检测在胃癌诊断中的意义

目的检测胃癌患者癌组织和癌旁组织中干细胞标志物Nanog的表达水平并探讨其与临床病理参数的相关性。方法用RT-PCR和Real-timePCR检测62例胃癌患者癌组织和癌旁组织中Nanog的表达。结果RT-PCR结果显示胃癌组织和癌旁组织中Nanog的表达阳性率分别为58.1%(36/62)、9.7%(6/62),差异有统计学意义(P<0.0001);Real-timePCR结果表明胃癌组织中Nanog相对表达水平高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Nanog阳性表达与肿瘤分化状态相关,低、未分化组高于中、高分化组(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移无关。结论Nanog表达与胃癌的发生及其分化状态相关,可作为胃癌诊断的一个新的分子标志。     

人参皂苷Rg1干预骨髓间充质干细胞转化为多潜能干细胞关键基因mRNA的表达

背景：将成体细胞重编程为诱导多潜能干细胞方案主要通过反转录病毒将Oct-4,Sox2,c-Myc,Klf4等基因转入成体细胞而实现。目的：观察人参皂苷Rg1作用于骨髓间充质干细胞后,对成体细胞向诱导多潜能干细胞转化的关键性基因Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4、NanogmRNA表达的影响。方法：培养骨髓间充质干细胞,对照组培养基为α-MEM,体积分数5%FBS,1%双抗;用药组培养基为α-MEM,体积分数15%FBS,1000U/mLRatESGRO,1%双抗,并加入6.25μmol/L和12.5μmol/L人参皂苷Rg1。检测骨髓间充质干细胞Oct4,Sox2,c-Myc,Klf4,Nanog等mRNA的表达。结果与结论：人参皂苷Rg16.25μmol/L培养30d,Nanog、c-Myc、Oct、Klf4、Sox2mRNA表达均有升高,且Nanog、c-Myc与对照组差异有显著性意义。人参皂苷Rg1能促进骨髓间充质干细胞表达c-Myc,Nanog,但Nanog阳性的诱导多潜能干细胞在基因表达谱上很难与胚胎干细胞区分出来,提示人参皂苷Rg1对骨髓间充质干细胞向诱导多潜能干细胞转化可能具有促进作用。     

人参皂苷Rg1干预骨髓间充质干细胞转化为多潜能干细胞关键基因mRNA的表达

背景:将成体细胞重编程为诱导多潜能干细胞方案主要通过反转录病毒将Oct-4,Sox2,c-Myc,Klf4等基因转入成体细胞而实现.目的:观察人参皂苷Rg1作用于骨髓间充质干细胞后,对成体细胞向诱导多潜能干细胞转化的关键性基因Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog mRNA表达的影响.方法:培养骨髓间充质干细胞,对照组培养基为α-MEM,体积分数5%FBS,1%双抗;用药组培养基为α-MEM,体积分数15%FBS,1 000 U/mL Rat ESGRO(R),1%双抗,并加入6.25 μmol/L和12.5 μmol/L人参皂苷Rg1.检测骨髓间充质干细胞Oct4,Sox2,c-Myc,Klf4,Nanog等mRNA的表达.结果与结论:人参皂苷Rg1 6.25 μmol/L培养30 d,Nanog、c-Myc、Oct、Klf4、Sox2 mRNA表达均有升高,且Nanog、c-Myc与对照组差异有显著性意义.人参皂苷Rg1能促进骨髓间充质干细胞表达c-Myc,Nanog,但Nanog阳性的诱导多潜能干细胞在基因表达谱上很难与胚胎干细胞区分出来,提示人参皂苷Rg1对骨髓间充质干细胞向诱导多潜能干细胞转化可能具有促进作用.     

胚胎干细胞的体外诱导分化模型

目的胚胎干细胞是具有全能性及无限制自我更新与分化能力的一类特殊细胞群体,通过对胚胎于细胞诱导分化研究的回顾和总结,期望能给胚胎干细胞的临床应用提供理论参考.资料来源应用计算机检索Highwire press以及Medline数据库2000/2004期间的相关文章,检索词为"Embryonic stem cell,differentiation,induce",同时计算机检索万方数据库2000/2004期间的相关文章,检索词为"胚胎干细胞",限定文章类型为中文.资料选择对资料进行初审,选取与诱导分化有关的文章,纳入标准为研究原著.资料提炼选取与诱导分化有关的文章共369篇(其中外文364篇).通过阅读相关文献的摘要,从中选取15篇较全面介绍胚胎干细胞的诱导分化以及应用的文章.其中,全面介绍胚胎干细胞各种细胞模型,神经细胞模型,心肌细胞模型,上皮细胞模型,造血细胞模型.资料综合7篇文献较为全面的介绍胚胎干细胞可以诱导分化为神经细胞、心肌细胞、上皮细胞以及造血细胞等细胞模型,从以上文献以及单独介绍各种细胞模型的文章中分别对各种细胞模型的研究概况进行归纳整理.结论胚胎干细胞经过定向诱导分化后可获得神经细胞、心肌细胞、上皮细胞以及造血细胞等细胞模型,这些模型可以用于细胞发育分化的分子机制,并对药物筛选和临床细胞治疗提供良好应用前景.     

体外培养人胚胎干细胞饲养层的研究进展

人胚胎干细胞在体外培养过程中始终保持未分化和持续增殖能力的首要条件是要有饲养层的支持。目前常用的饲养层有小鼠成纤维细胞、小鼠原代成纤维细胞、同源动物胚胎成纤维细胞、人包皮成纤维细胞等。饲养层细胞能分泌多种细胞因子、细胞问黏附分子及蛋白质,能有效抑制胚胎干细胞的分化并促进其增殖。现就胚胎干细胞培养过程中所需饲养层细胞的来源与筛选、分泌物及作用机制研究进展作一综述。     

Oct4和Nanog在胰腺癌干细胞中表达的研究

目的:研究Oct4和Nanog基因在人胰腺癌细胞系及干细胞中的表达情况.方法:用流式细胞仪,以CD44+CD24+和CD44+CD24+ESA+为表面标记,在胰腺癌Panc-1细胞中分选肿瘤干细胞,RT-PCR、定量PCR及免疫荧光法检测肿瘤干细胞中Oct4、Nanog基因的表达情况.结果:分选出的胰腺癌CD44+CD24+细胞约占细胞总量的1%～3%,CD44+CD24+ESA+约占细胞总量的0.1%～0.8%,Oct4及Nanog基因在两种分选出的细胞中表达均高于未分选细胞,在CD44+CD24+ESA+细胞中的表达高于CD44+CD24+细胞.结论:干细胞相关基因Oct4、Nanog高表达于胰腺癌干细胞中,其表达量与干细胞纯度成正相关.     

诱导性多潜能干细胞的研究进展及应用前景

背景：由于诱导性多潜能干细胞可以从患者的诸多细胞进行诱导,避开了干细胞研究的免疫排斥和伦理道德问题,且具有类似于胚胎干细胞的特征。 目的：综述诱导性多潜能干细胞研究进展及应用前景,并提出目前诱导性多潜能干细胞在诱导方法及效率、安全性、应用等方面许多亟待解决的问题。 方法：以“induced pluripotent stem cel s,efficiency,disease model,clinical application”为英文检索词,应用计算机检索Kjmed数据库中2003年1月至2013年6月发表的相关文章。纳入与诱导性多潜能干细胞研究相关的文献,排除重复性研究。 结果与结论：共检索到112篇,排除无关重复的文献,保留32篇进行综述。通过导入特定的转录因子可将成体细胞重编程为诱导性多能干细胞,转染效率低是诱导性多潜能干细胞技术的一个主要障碍。诱导性多潜能干细胞在建立疾病模型、研究疾病发病机制以及新药物的筛选和新治疗方法的探索方面有着巨大的应用前景,且诱导性多潜能干细胞也有较高的临床应用价值,但是,在诱导性多潜能干细胞应用于临床这条道路的探索过程中,还有许多亟待解决和深入探究的问题。     

利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞编程为多潜能干细胞

目的:探讨利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞(UMC)编程为多潜能干细胞(iPS)的可能性。方法:原代分离培养UMC细胞,包装生产逆转录病毒感染UMC细胞,将感染后细胞接种到饲养层细胞培养,镜下观察细胞形态学变化。对编程后细胞进行碱性磷酸酶(AP)染色、检测细胞基因表达量和体内分化畸胎瘤实验。结果:获得原代UMC细胞,细胞被编程后形态类似于胚胎干细胞,细胞AP染色阳性,内源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rex1表达量增高,外源编程基因Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc表达沉默,细胞体内分化为畸胎瘤。结论:利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因能将UMC细胞编程为iPS细胞。