SARS冠状病毒疫苗猴体免疫应答研究

已经证实引起严重急性呼吸道综合征(SARS)的病原体是一种新型冠状病毒(CoV)。美国匹兹堡大学医学院Gao等报道用表达SARS-CoV结构蛋白的重组腺病毒疫苗接种恒河猴的研究结果。以腺病毒为载体,分别构建了包含SARS-CoV Urbani株棘突蛋白S1片段、膜蛋白和核壳蛋白三种结构蛋白的重组表达载体Ad5-SARS-CoV。采用肌肉注射方法,将此三种Ad5-SARS-CoV联合接种6只恒河猴,每种载体含1×1011病毒颗粒。两只对照猴注射相同剂量不含外源蛋白的腺病毒载体。所有猴子于第28天加强免疫一次。用蛋白印迹技术检测免疫动物血清中最可能诱导中和抗…     

治疗用乙型肝炎腺病毒注射液TC007食蟹猴免疫原性、免疫毒性和生物分布研究

目的 重复给予食蟹猴治疗用乙型肝炎腺病毒注射液（TC007）,观察其免疫原性、免疫毒性、生物分布。方法 普通级食蟹猴随机分为溶媒对照组,TC007低、中、高剂量（1.0×10⁹、1.0×10¹⁰、1.0×10¹¹ VP/只）组,Ad5-Null（1.0×10¹¹ VP/只,空载对照）组,每组10只,背部肩胛区sc给药,每周给药1次,共7次,停药恢复28 d。应用流式细胞仪进行外周血中淋巴细胞分群检测,检测经TC007刺激后分泌干扰素-γ（IFN-γ）的特异T细胞水平;免疫组化检测肝脏IFN-γ、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-2（IL-2）表达;试剂盒法测定血清中抗Ad5抗体的中和活性,补体成分C3、C4及免疫复合物（CIC）水平;给药期及恢复期结束,进行多个组织取材,HE染色后进行病理学阅片,TaqMan探针qPCR法进行Ad5分布检测。结果 与溶媒对照组比较,各组动物血浆中CD3⁺CD8⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺、CD3^-CD56⁺NK细胞、CD3⁺CD56⁺NKT细胞、巨噬细胞CD45⁺CD14⁺百分率均未见明显异常;Ad5-Null组特异T细胞均未见明显改变,TC007各剂量组针对HBV 3种抗原（Core、Env、Pol）分泌IFN-γ的特异性T细胞水平显著增加（P<0.05、0.01）,停药恢复末期（d68）,效应值仍略高;TC007各剂量组和Ad5-Null组食蟹猴肝脏组织中IFN-γ、TNF-α、IL-2均高于溶媒对照组,且呈剂量相关性,但TC007各剂量组与Ad5-Null组比较未见明显差异;TC007各剂量、Ad5-Null组动物均产生抗Ad5抗体,39/40例具有中和活性;TC007各剂量组补体C3、C4未见明显异常,高剂量组CIC轻微升高（P<0.05）。Ad5主要分布于给药局部,在腋下淋巴结有少量分布,其他组织未见分布。TC007及Ad5-Null组均可见给药局部轻微至轻度皮下组织炎性细胞浸润,停药恢复28 d,病变可见明显恢复,其他组织未见病理学改变。结论 TC007在食蟹猴体内具有一定免疫原性,抗Ad5抗体具有中和活性,高剂量组可见轻微免疫复合物形成,未见免疫器官损伤,生物分布主要集中于给药部位,可产生特异性T细胞。     

重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的药代动力学和组织分布

目的研究重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)的药代动力学和组织分布。方法恒河猴单次静脉滴注rhTRAIL1,5和25mg.kg-1及iv5mg·kg-1后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定rhTRAIL在恒河猴体内的血药浓度,并采用放射性核素示踪技术结合三氯乙酸(TCA)沉淀和分子排阻高效液相色谱法测定[125I]rhTRAIL在荷瘤裸鼠组织内的含量。结果恒河猴单次静脉滴注rhTRAIL1,5和25mg·kg-1后,各剂量组的药代参数除cmax和AUC以外,均无显著差异,表现出线性动力学性质。恒河猴每天给药1次,连续7d,药物在体内没有蓄积。恒河猴静脉滴注和iv给药对药物的体内清除过程无明显影响。[125I]标记rhTRAIL后的放化纯度大于98%。荷瘤裸鼠iv给予[125I]rhTRAIL后,在各组织广泛分布,总放射性在肿瘤组织中于给药后2h达到高峰,在其他大部分组织中于给药后10min达高峰。给药后10min及2,8和24h,肿瘤/血清的酸沉放射性比值分别为0.07±0.01,0.62±0.17,0.78±0.57和1.66±0.50;给药后24h,肿瘤组织的放射性浓度高于其他组织和血清。结论在研究剂量范围内,rhTRAIL在恒河猴体内表现为线性动力学。[125I]rhTRAIL给药后在荷瘤裸鼠中广泛分布,在肿瘤组织中分布浓度较高,并主要经肾脏排泄。     

食蟹猴疟原虫——斯氏按蚊系统猴疟模型的一些生物学特性和对常用抗疟药物的生物效应

本文证明在一定条件下,斯氏按蚊对食蟹猴疟原虫的感染率为77±0.15％;恒河猴易感性强,对照组的感染率非常稳定,用10~5个以上子孢子静脉接种恒河猴可100％获得感染。在食蟹猴疟原虫—斯氏按蚊系统猴疟模型上,常用抗疟药如乙胺嘧啶、伯喹显示有病因性预防作用。伯喹剂量达到2.5mg(基质)/kg×5天,合并氯喹20mg(基质)/kg×3天显示有权治作用,氯喹20mg(基质)kg×3天则仅能显示抑制性治疗作用。     

食蟹猴疟原虫——斯氏按蚊系统猴疟模型的一些生物学特性和对常用抗疟药物的生物效应

本文证明在一定条件下,斯氏按蚊对食蟹猴疟原虫的感染率为77±0.15%;恒河猴易感性强,对照组的感染率非常稳定,用10⁵个以上子孢子静脉接种恒河猴可100%获得感染。在食蟹猴疟原虫—斯氏按蚊系统猴疟模型上,常用抗疟药如乙胺嘧啶、伯喹显示有病因性预防作用。伯喹剂量达到2.5mg(基质)/kg×5天,合并氯喹20mg(基质)/kg×3天显示有权治作用,氯喹20mg(基质)kg×3天则仅能显示抑制性治疗作用。     

吡噻硫酮治疗动物日本血吸虫病的初步研究

报告了吡噻硫酮对几种实验动物日本血吸虫病的疗效。口服给药,小鼠1g/(kg·d)×5,治愈率为100%,半数治愈剂量(CD_(50))为475mg/(kg·d)×5,家兔150mg/(kg·d)×4,减虫率为80.1%,治愈1/3。该药对犬血吸虫病无效。小鼠的急性 LD_(50)>10g/kg。     

重组人干扰素-β1b对恒河猴免疫原性的影响

目的:研究重组人干扰素-β1b(rhIFN-β1b)对恒河猴的免疫原性及其对疗效的潜在影响.方法:实验分溶剂对照组及rhIFN-β1b低、中、高剂量组,分别皮下注射1.25%人血清白蛋白0.36mL·kg-1及rhIFN-β1b 4.0×106,1.2×107及3.6×107IU·kg-1,连续90d.血清结合抗体测定采用ELISA法,中和抗体测定采用细胞病变抑制法.结果:给药3周后,3个给药组动物均出现rhIFN-β1b结合抗体,4周后抗体滴度达最大值,不同剂量组间在结合抗体滴度方面未见明显的剂量-反应关系.同时,给药3周后血清中出现中和抗体,以后抗体滴度逐步升高.停药30d后,中和抗体滴度逐渐降低.结论:恒河猴重复给予rhIFN-β1b后,体内产生结合抗体和中和抗体,但给药组动物未观察到明显的病理学和生化指标异常,提示该生物制品重复使用是安全的.     

米诺环素注射剂的药动学

目的:研究健康志愿者静脉滴注米诺环素后的药动学特征,为临床合理用药提供参考依据。方法:8名健康志愿者分别静脉滴注米诺环素单剂量(200mg)、多剂量(100mg,bid×5d),于规定时间点取血,以高效液相色谱法测定血药浓度,计算单剂量和多剂量给药后的药动学参数。结果:单剂量给药后的主要药动学参数分别为cmax=(5.4±s0.9)mg·L-1;tmax=2h;t1/2=(26±3)h;MRT=(36±5)h;AUC0~72=(94±24)mg·h·L-1;AUC0~∞=(109±29)mg·h·L-1。多剂量给药达稳态后的药动学参数分别为cmssax=(8.4±1.5)mg·L-1;cmssin=(1.0±0.4)mg·L-1;csavs=(2.1±0.6)mg·L-1;AUCss=(149±42)mg·h·L-1;DF=3.7±0.6。结论:受试制剂米诺环素注射剂在人体内的药动学特征与文献报道基本一致。     

恒河猴重复给药腺病毒载体疫苗毒性研究

目的 探讨以5型腺病毒为载体的人用疫苗Ad5 SARS-CoV-2(LW2006)经3次皮下重复给予恒河猴所产生的毒性反应,为其安全性评价实验和临床用药提供基础数据。方法 30例恒河猴,雌雄各半,按体重均衡随机分为对照组(生理盐水)、LW2006低剂量(0.5×10¹¹ VP)组和LW2006高剂量(2.0×10¹¹VP)组。通过皮下注射连续给药3周,每周给药1次,恢复期观察4周。于给药结束、恢复观察结束后,分别剖检18只和12只恒河猴。检测观察指标包括临床观察、体重、血液、生化、尿常规、淋巴细胞亚群、细胞因子、抗核抗体、脏器重量、脏器系数和病理学检查。结果 腺病毒疫苗可引起绝大部分动物给药部位皮肤皮下血管周围局灶性/多灶性炎细胞浸润。恢复期观察结束后,以上变化与给药结束后相比,皮下反应动物比例和程度均明显降低,其余检查脏器包括免疫器官胸腺、脾和淋巴结等均未见明显异常变化。结论 在本实验条件下,以5型腺病毒为载体的人用疫苗Ad5 SARS-CoV-2可引起恒河猴给药部位皮下局部轻度刺激性反应,恢复期可逆,无其他毒理学反应。     

中和抗体对促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A暴露水平的影响

目的研究恒河猴注射促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A(GP38)后体内中和抗体的产生及其对药物暴露水平的影响。方法恒河猴24只随机分成4组(即对照组、低、中、高剂量组),每组6只,♀♂各半,分别给予生理盐水、50、100、300μg.kg-1GP38;采用ELISA法测定GP38及抗体滴度,中和抗体的测定采用IC50法间接测定。结果恒河猴给药2 wk后产生抗体,具有中和GP38活性的作用;GP38首次静脉注射50、100、300μg.kg-1时,毒代动力学参数Cmax分别为(866±88)、(1466±113)、(5436±733)μg.L-1,AUC0-t分别为(322±33)、(587±93)、(2201±307)μg.h.L-1,MRT分别为(0.27±0.02)、(0.31±0.02)、(0.40±0.08)h;相同剂量反复给药,第7次(d 14)给药后的毒代动力学参数Cmax分别为(352±136)、(589±372)、(1013±642)μg.L-1,AUC0-t分别为(139±55、322±222)、(962±743)μg.h.L-1,MRT分别为(0.26±0.03)、(0.39±0.08)、(0.68±0.45)h;试验动物毒性反应在给药1～3 wk较严重,之后毒性反应逐渐减弱。结论恒河猴反复静脉注射GP38,能够产生中和抗体,降低药物的体内暴露水平。     

负载EB病毒潜伏膜蛋白基因的树突状细胞疫苗的体内抗肿瘤免疫作用

目的 观察负载EB病毒潜伏膜蛋白(EBV-LMP2)基因的树突状细胞(DC)疫苗体内激活的细胞毒T细胞(CTLs),在严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内对人鼻咽癌(NPC)细胞株CNE-2的免疫保护作用.方法 人外周血来源的单核细胞(PBMC)经细胞因子扩增培养为成熟DC,rAd-EBV-LMP2重组腺病毒转染DC制备疫苗,对疫苗进行致瘤性检测;采用人外周血T细胞悬液腹腔注射建立人外周血淋巴细胞-严重联合免疫缺陷小鼠(hu-PBL-SCID)模型,随机分为4组:对照组、T细胞组、未转染DC组、LMP2-DC组.末次免疫7d后,接种CNE-2细胞,观察小鼠成瘤率、成瘤潜伏期、肿瘤体积及重量;定期检测小鼠血清中人IgG水平;测定小鼠脾淋巴细胞的特异性细胞毒淋巴细胞(CTL)活性.结果 rAd-EBV-LMP2-DC疫苗接种于小鼠体内未见肿瘤形成,脾、肺、肝和肾等器官未出现肿瘤病变;小鼠血清均检测出人IgG,hu-PBL-SCID嵌合模型重建成功;LMP2-DC组肿瘤的潜伏期明显延长,肿瘤生长速度、体积及重量显著减小(P＜0.01),且LMP2-DC组小鼠脾淋巴细胞显示出对肿瘤细胞强大的杀伤活性(P＜0.01).结论 EBV-LMP2-DC疫苗能在hu-PBL-SCID小鼠体内诱导产生强大的CTL反应,保护小鼠免受肿瘤细胞的攻击,对肿瘤细胞具有有效的免疫保护作用.     

商陆多糖Ⅰ对荷S180小鼠的抑癌,增强免疫和造血保护作用

商陆多糖Ⅰ(PEP Ⅰ)10,20mg·kg~1 ip能显著抑制S180生长,最大抑瘤率可达51.7％,Cy 10mg·kg~1 ip.抑瘤率为55.1％,两者合用抑瘤率为68.6％,PEP-Ⅰ治疗能显著促进脾脏增生,但不影响体重,PEP-Ⅰ治疗后,小鼠的T淋巴细胞转化及白介素2(IL-2)产生能力显著高于对照组,计数外周白细胞,骨髓有核细胞并用[~3H]TdR参入法观察rmGM-CSF刺激骨髓细胞增殖.结果表明PEP-Ⅰ与Cy合用治疗至d 11的外周白细胞数,骨髓有核细胞数和骨髓细胞的增殖能力显著高于单用Cy组,以上实验结果说明EPP-Ⅰ可能通过增强T淋巴细胞功能来抑制移植性肿瘤生长,并具有保护造血功能的作用。     

冻融人外周血树突状细胞基因疫苗体外抗肿瘤活性研究

目的观察EB病毒潜伏膜蛋白重组腺病毒(rAd-EBV-LMP2)转染的冻融人外周血树突状细胞(DC)诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗肿瘤活性。方法人外周血来源的单核细胞经细胞因子扩增培养为成熟DC,液氮冻存;rAd-LMP2重组腺病毒转染冻融DC制备疫苗。动态观察细胞形态学特征,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DC疫苗刺激同种T淋巴细胞增殖活性,以及诱导的CTL对肿瘤细胞的杀伤活性。结果rAd-LMP2转染的冻融DC疫苗具有形态迥异、多突起的典型形态学特征,其刺激同种T淋巴细胞的增殖能力明显高于对照组(P<0.01),能诱导高效的CTL活性(P<0.01),与新鲜DC疫苗差异无统计学意义(P>0.05)。结论rAd-LMP2转染冻融DC疫苗在体外能激发较强的EBV-LMP2特异性的功能性CTL,为EBV相关的鼻咽癌(NPC)的免疫治疗提供策略。     

西洋参茎叶皂甙在阿霉素诱导大鼠心肌损伤中的抗氧化作用

西洋参茎叶皂甙50和100mg·kg~(-1)能明显降低阿霉素诱导的大鼠全血和心肌组织中丙二醛含量,保护超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性。表明西洋参茎叶皂甙有抗氧化作用。     

雷公藤甲素的免疫抑制机理

雷公藤甲素(Triptolide,TL)为雷公藤主要有效对大剂量环磷酰胺所致DTH反应增高模型亦具显成分之一。在体外,0.5～10μg·L~(-1)的TL可抑制单向著抑制作用“0.25 mg·kg~(-1)的TL还可明显降低小鼠混合淋巴细胞培养(MLC).TL5和10μg·L~(-1)所诱导胸腺Th/Ts细胞比值.这些资料显示TL对小鼠细胞出的混合淋巴细胞经~(60)Co照射后可抑制第二次免疫功能具有显著抑制作用,其机理可能与抑制ThMLC.表明TL可以诱导抑制性T细胞(Ts)。体内给细胞和IL—2分泌活性及诱导Ts细胞有关。药.0.12～0.5 mg·kg~(-1)的TL可以显著抑制DNFB所致小鼠迟发性超敏反应(DTH).0.25和0.5 mg·kg~(-1)时,小鼠脾细胞的IL—2分泌活性亦明显受抑,     

Effect of cyclo-oxygenase blockade on the renal actions of vasopressin and SK&F 105494 in the rhesus monkey.

1. Vasopressin administration to pentobarbitone-anaesthetized, hydrated female rhesus monkeys resulted in dose-dependent increases in urine osmolality and decreases in urine flow. Treatment with indomethacin at a dose (5 mg kg-1, i.v.) that reduced urinary prostaglandin E2 (PGE2) excretion by at least 70% did not alter these responses. 2. The vasopressin antagonist, SK&F 105494 (Pas1,6D-Tyr(Et)2Val4Arg7D-Arg8desGly9 arginine vasopressin; 10 micrograms kg-1), caused significant rightward shifts (P less than 0.05) of both the vasopressin-urine osmolality and the vasopressin-urine flow dose-response curves. Treatment with indomethacin did not alter these responses. 3. SK&F 105494 alone or after indomethacin treatment had minimal effects on urine osmolality and urine flow. 4. The data indicate that indomethacin does not alter the antidiuretic activity of vasopressin in the rhesus monkey and that SK&F 105494 is a potent antagonist of exogenous vasopressin with minimal agonist activity.     

A single sublingual dose of an adenovirus-based vaccine protects against lethal Ebola challenge in mice and guinea pigs

Sublingual (SL) delivery, a noninvasive immunization method that bypasses the intestinal tract for direct entry into the circulation, was evaluated with an adenovirus (Ad5)-based vaccine for Ebola. Mice and guinea pigs were immunized via the intramuscular (IM), nasal (IN), oral (PO) and SL routes. SL immunization elicited strong transgene expression in and attracted CD11c(+) antigen presenting cells to the mucosa. A SL dose of 1 × 10? infectious particles induced Ebola Zaire glycoprotein (ZGP)-specific IFN-γ? T cells in spleen, bronchoalveolar lavage, mesenteric lymph nodes and submandibular lymph nodes (SMLN) of naive mice in a manner similar to the same dose given IN. Ex vivo CFSE and in vivo cytotoxic T lymphocyte (CTL) assays confirmed that SL immunization elicits a notable population of effector memory CD8+ T cells and strong CTL responses in spleen and SMLN. SL immunization induced significant ZGP-specific Th1 and Th2 type responses unaffected by pre-existing immunity (PEI) that protected mice and guinea pigs from lethal challenge. SL delivery protected more mice with PEI to Ad5 than IM injection. SL immunization also reduced systemic anti-Ad5 T and B cell responses in naive mice and those with PEI, suggesting that secondary immunizations could be highly effective for both populations.     

海洛因和吗啡对猴的致依赖性比较

本文用吗啡依赖猴作对比,对恒河猴海洛因依赖形成的时间、累计剂量、催促实验戒断反应的量 -效、时 -效变化及自然戒断反应出现的时 -效关系等进行了研究。结果表明 :海洛因sc恒河猴,起始剂量为2.5mg·kg-1 ,tid ,每2d递增1.25mg·kg-1,日剂量达11.25mg·kg-1 后,改为每日递增1.25mg·kg-1,日剂量达到20mg·kg-1 时,维持该剂量到用药时间为3mon。给药d5,当海洛因累计剂量为17.5mg·kg-1 时,催促实验中,猴出现明显的戒断症状,以后随给药剂量的增加,戒断反应呈显著的量 -效、时 -效变化,反应强度在给药头10d内增加最快,以后呈缓慢上升的趋势。注射满3mon,突然停药,可出现明显的戒断症状,其时 -效关系与吗啡组基本一致。与吗啡组相比,在依赖形成初期,海洛因具有形成依赖时间短,用药量少,戒断反应程度严重,戒断症状稍有不同,有兴奋表现等特点。海洛因组Emax=100分,ED50 =20.9mg·kg-1;吗啡组Emax=104.2分,ED50 =80.7mg·kg-1,二者的等效剂量比为1∶3.9。自然戒断实验中,二组均达最大反应强度,且戒断反应程度基本相近。     

Delivery of antigens by viral vectors for vaccination

Viral vectors have been developed as vaccine platforms for a number of pathogens and tumors. In particular, adenovirus (Ad)-based vectors expressing genes coding for pathogen or tumor antigens have proven efficacious to induce protective immunity. Major challenges in the use of Ad vectors are the high prevalence of anti-Ad immunity and the recent observation during an Ad-based HIV vaccine trial that led to increased HIV-1 acquisition in the presence of circulating anti-Ad5 neutralizing antibodies. In this review we summarize strategies to address these challenges and focus on modifications of the Ad capsid to enhance the adjuvant effect of anti-Ad immunogenicity and to circumvent pre-existing immunity. In addition, we summarize the current status and potential of other viral vector vaccines based on adeno-associated viruses, lentiviruses and poxviruses.