日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析I.未成熟卵28KDa分子的快速分离纯化与鉴定

为了进一步研究日本血吸虫天然抗病分子（SIEA28KDa）的结构与功能,采用SDS-PAGE制备电泳和电洗脱法从日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（SIEA）中快速分离纯化了SIEA28KDa抗原分子,纯化后抗原分子经梯度凝胶电泳分离,重复测定其分子量,同时,采用Western blot和ELISA检测SIEA28KDa分子的免疫活性及其生化纯度。证实获得的提取物SIEA28KDa抗原分子的纯度高、活性好;用该抗原分子免疫家兔获得的单特异性抗血清可同时识别日本血吸虫未成熟虫卵、雌虫和雄虫的28KDa抗原组分,说明该分子与日本血吸虫成虫（AWA）28KDa组分具有部分交叉抗原性。     

日本血吸虫天然抗病分子疫苗的结构与功能分析 Ⅱ.SIEA 28kDa分子的高效液相色谱分离及薄层等电聚焦分析

采用高效液相离子交换法对电泳纯SIEA28kDa抗原组分进一步分离纯化。对获得的色谱纯SIEA28kDa抗原分子进行薄层等电聚焦分析,测定其等电点。结果证明电泳纯SIEA28kDa抗原分子经高效液相离子交换法纯化后,280nm,220nm波长色谱图均为一个两侧对称,光滑的高峰曲线,色谱洗脱液对其免疫活性光密度图也为一个两侧对称,光滑的高峰曲线,色谱纯化证明SIEA28kDa抗原组分可能为单一分子,其等电点范围在pi5-pI7之间。     

日本血吸虫Sj23与IL-12多价DNA疫苗的构建

构建能共同表达日本血吸虫23kDa膜抗原(Sj23)与细胞因子IL-12的多价DNA疫苗．RT-PCR的方法从日本血吸虫成虫获得Sj23的基因片段,克隆到载体pVIVO2-mIL12／mcs上,进行酶切和测序鉴定．采用免疫荧光的方法检测多价DNA疫苗pVIVO2-Sj23-IL12在小鼠骨骼肌细胞的表达．成功地构建了能共同表达日本血吸虫23kDa膜抗原(Sj23)与细胞因子IL-12的多价DNA疫苗．此多价DNA疫苗在免疫小鼠肌细胞的细胞膜和细胞浆均获得了Sj23的表达．     

日本血吸虫CDNA文库的构建及功能性抗原基因的克隆、筛选和鉴定

采用一步法提取MRNA及定向克隆技术,构建了日本血吸虫(中国大陆株)CDNA文库;应用多种不同特色的血清以免疫学方法筛选文库;系统的报道了日本血吸虫22.6KD基因克隆和在大肠杆菌中的高效表达、分离纯化、免疫原性及特性分析,填补了国内空白.     

曼氏血吸虫28kDa谷胱甘肽S-转移酶的有效抗原肽P141结构与活性研究

以曼氏血吸虫28kDa谷胱甘肽S-转移酶的有效抗原肽P141为先导肽,通过分别改变在结构上、Chou-Fasman构象参数上和亲水性上相似的氨基酸残基设计并合成了4个类似物,通过ELISA法测定了它们对血吸虫表膜抗原多克隆抗体的抗原性,通过类似物与P141的活性比较讨论了构效关系。     

血吸虫膜相关抗原基因的克隆

目的:筛选日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.japonicum)新的疫苗候选抗原基因.方法:以S.japonicum成虫DNA为模板,PCR扩增相关基因,然后将其克隆XpBS-T载体,通过菌落PCR对产物进行检测,对阳性克隆子测序,与GeneBank中的已知相关序列进行比对分析.结果:菌落PCR获得一条与PCR产物一致的DNA片段,序列测定结果表明PCR产物与S.japonicum 22.6 kDa抗原分子核苷酸序列具有高度同源性.其目的基因大小636 bp,具有一个189 bp的ORF,能编码63个氨基酸.ORF不是全长的阅读框,只获得部分编码区.表达产物可含有一个包含9个氨基酸残基的潜在螺旋跨膜片段(25～33位)和一个酪氨酸激酶磷酸化位点(38～39位).讨论:成功克隆出一个与S.japonicum 22.6kDa抗原编码基因有高度同源性的基因.预测该基因为膜相关蛋白基因,可编码血吸虫体表膜相关蛋白.在生理机能上,该膜相关蛋白可能是信号传递分子.     

抗小鼠雄性特异性抗原（H—Y抗原）单克隆抗体的研究

将经Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄鼠脾细胞免疫的同系雌鼠脾细胞与Ｂａｌｂ／ｃ小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０细胞进行融合,以雌、雄鼠脾细胞作细胞性ＥＬＩＳＡ、间接免疫荧光和精细胞间接免疫荧光技术进行筛选,共建立了５株稳定分泌抗Ｈ－Ｙ抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。该杂交瘤细胞可在Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ与Ｂａｌｂ／ｃ杂交子一代雌性小鼠腹腔生长并形成腹水性抗体。鉴定结果证明这些抗体具有较好的特异性。     

Identification of a New Member of the Ep-CAM (17-1A) Tumor-Associated Antigen Family

IntroductionThe tumor- associated antigen,epithelial celladhesion molecule (Ep- CAM ) ,defined by themurine m Ab1 7- 1 A,is expressed on the surface ofvarious types of normal and malignant humanepithelial tissues,which makes it an attractivetarget for immunotherapy[15] . Adjuvantimmunotherapy treatment with the m Ab 1 7- 1 Asuccessfully reduced the 5 - year mortality andrecurrence rate among colorectal cancer patientswith minimal residual disease[6 ] .　Studies on Ep- CAM,alias 1 7- 1 A a…     

工程菌表达马铃薯钙调素(PCM 6)的抗体制备及鉴定

PCM6是马铃薯钙调素亚型中与其他植物钙调素在氨基酸序列上最为保守的一种，利用大肠杆菌表达系统，表达并纯化了这种蛋白，以纯化的重组马铃薯CaM(PCM6）蛋白为抗原，免疫新西兰兔，获得了高效价（1：16000）抗体，免疫印迹检测表明，制备的抗体与植物钙调素有特异性的免疫交叉反应。     

将GNA基因导入莴苣（L.sativa）及其表达的研究

将含ＣａＭＶ３５Ｓ启动子的雪花莲凝集素基因置换Ｔｉ质粒载体ｐＢＩ１２１中的ＧＵＳ基因得到了ｐＢＩＧＮＡ质粒,将其导入农杆菌ＬＢＡ４４０４,得到ＬＢＡ４４０４菌株。     

糠醛缩邻苯二胺与锰(Ⅱ)配合物的合成、表征及热分解动力学

合成了一种新的希夫碱配合物 [MnL(Ac) (H2 O) ]Ac·H2 O(L表示糠醛缩邻苯二胺 )。通过元素分析、IR、UV和摩尔电导分析等手段 ,对合成的配合物进行了表征 ,并用非等温热重法研究了锰配合物的热分解反应动力学。推断出第一步和第三步热分解动力学方程分别为 :dα dt=A·e-E RT·3 2 (1-α) 4 3[1 (1-α) 1 3- 1]- 1 ;dα dt=A·e-E RT·(1-α) 2 。     

中华鳖病原维氏气单胞菌的分子鉴定及分子分类学研究

气单胞菌是一类人和水产经济动物的严重致病菌,用分子进化手段鉴定一株分离自红脖子病甲鱼病灶部位的菌HBJY01,同时探讨气单胞菌的进化地位.克隆HBJY01的16S rRNA和gyrB基因,鉴定该菌的属种.用16S rRNA和gyrB基因通过构建系统进化树和计算序列两两间遗传距离的方法,探讨气单胞菌的进化地位.HBJY01的16S rRNA和gyrB基因与维氏气单胞菌的相应基因同源性最高,经分子鉴定为维氏气单胞菌.气单胞菌应独立于弧菌科,单独形成一个科,即气单胞菌科(Aeromonadaceae).     

抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定

分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB／c小鼠，选择血清抗体滴度高的免疫小鼠，取其脾细胞和Sp2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合．经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞，共获得分泌抗组织蛋白酶B的单克隆抗体杂交瘤细胞3株，分别命名为9D5，100E2和100H6．以ELISA法和Western blotting法对3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了特异性鉴定，其中9D5和100E2能够同时识别两种不同来源的组织蛋白酶B，而100H6只能识别基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B．