X-线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮内Ghrelin表达的研究

目的 在X线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮中Ghrelin表达变化的意义.方法 采用辐射剂量1.0 GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16 h、2 w和4 w取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测Ghrelin的表达及变化.结果 正常小鼠睾丸Ghrelin表达主要集中在睾丸间质的间质细胞,生精上皮呈阴性反应,照射后Ghrelin间质细胞为阴性,而生精上皮内出现阳性反应,阳性反应定位于精原细胞、精母细胞和早期变形精子细胞,支持细胞未见阳性反应.但随照射时间延长,Ghrelin表达逐渐减少.结论 在X线辐射损伤小鼠睾丸生精上皮中Ghrelin表达的变化,表明Ghrelin及其受体GHS-R系统在小鼠睾丸辐射急性损伤及损伤后修复过程中具有一定的调节作用.     

小鼠睾丸组织培养时间及温度对精子生成影响的观察

为建立小鼠睾丸组织短期培养方法，对成年小鼠睾丸组织进行培养。结果显示：在３４℃条件下培养２４小时，小鼠睾丸组织各级生精细胞和间质细胞发育正常。培养４８小时，曲精小管基底部细胞发生增殖。培养７２小时，曲精小管基底层增殖的细胞向管腔面迁移。在３７℃条件下，生精上皮细胞发生脱落和崩解。结果提示，本研究建立的小鼠睾丸组织短期培养方法能有效减少曲精小管微环境的改变，为进一步建立睾丸组织长期的培养方法奠定基础     

X线辐射对成年小鼠睾丸ghrelin表达的影响

目的:探讨ghrelin在X射线全身照射后小鼠睾丸中表达及其意义。方法:采用辐射剂量1.0GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16h、4w取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测ghrelin的表达及变化。结果:正常小鼠睾丸ghrelin的阳性表达主要集中在间质细胞,生精细胞呈阴性反应,照射后ghrelin间质细胞为阴性,而生精细胞中出现阳性反应,阳性反应定位于精原细胞、精母细胞和早期变形精子细胞,但照射后4w组中的精子细胞中未见阳性反应。结论:ghrelin在X线辐射后小鼠睾丸中表达的变化,表明ghrelin参与了小鼠睾丸辐射急性损伤及损伤后修复过程。     

三种波段电磁辐射致大鼠睾丸损伤的比较

目的 对比性探讨电磁脉冲(EMP)、S带高功率微波(S-HPM)和X带高功率微波(X-HPM)三种波段电磁辐射致睾丸组织受损的近期和远期效应及其相关敏感指标.方法 雄性Wistar大鼠192只,随机分为EMP组、S-HPM组、X-HPM组和对照组,于照后不同时间点采集睾丸组织称重,光镜观察睾丸损伤,并用图像分析技术对曲细精管病变进行定量分析.结果 三种波段电磁波辐照后睾丸结构和生精细胞形态损伤基本相似:早期睾丸重及睾丸重/体重比值呈下降趋势;曲细精管生精上皮变薄,生精细胞排列紊乱,精原细胞变性坏死并由管壁脱落,精母细胞和精子数量减少并团聚于管腔中央,支持细胞和间质细胞不同程度变性;曲细精管受损百分率显示EMP组最重,S-HPM最轻,生精细胞受损数量与程度显著增加(P<0.05).结论 三种波段电磁辐射对睾丸生精细胞的损伤,具有速发性、时相性、分布不均一性特点;损伤程度呈EMP>X-HPM>S-HPM;睾丸曲细精管受损百分率可定量反映其损伤程度,可望成为评估电磁辐射致睾丸损伤的敏感指标之一.     

小鼠睾丸组织培养时间及其温度对精子生成影响的观察

为建立小鼠睾丸组织短期培养方法，对成年小鼠睾丸组织进行培养。结果显示：在３４℃条件下培养２４小时，小鼠睾丸组织各级生精细胞和间质细胞发育正常。培养４８小时，曲精小管基底部细胞发生增殖。培养７２小时，曲精小管基底层增殖的细胞向管腔面迁移。在３７℃条件下，生精上皮细胞发生脱落和崩解。结果提示，本研究建立的小鼠睾丸组织短期培养方法能有效减少曲精小管微环境的改变，为进一步建立睾丸组织长期的培养方法奠定基础     

枸杞多糖对模拟隐睾温度培养的离体小鼠睾丸组织形态学影响的研究

目的：观察研究枸杞多糖（ＬｙｃｉｕｍＢａｒｂａｒｕｍＰｏｌｙｓａｃｈａｒｉｄｅｓ,ＬＢＰ）对３７℃体外培养的小鼠睾丸组织形态结构有无保护作用。方法：未加ＬＢＰ的培养组为对照组,添加５００μｇ／ｍｌＬＢＰ的培养组为实验组。昆明种小白鼠睾丸组织在３２℃和３７℃ＣＯ２培养箱中分别培养２４、４８和７２ｈ后制成石蜡切片,ＨＥ染色,光镜下观察分析。结果：３２℃培养的小鼠睾丸组织对照组与实验组在各时间内曲精小管结构变化无显著差异。而３７℃培养的小鼠睾丸组织曲精小管结构４８ｈ之内两组间亦无明显差异。但７２ｈ时,对照组显示曲精小管上皮结构紊乱严重,大量细胞脱落退化;而实验组曲精小管上皮结构变化与３２℃培养７２ｈ的组织结构相似,生精上皮仍为复层,管腔脱落细胞明显少于对照组。结论：ＬＢＰ可减弱由于培养温度过高所致的曲精小管结构损伤。     

生后不同发育阶段大鼠睾丸生精小管和间质细胞形态学的变化

目的通过对生后不同年龄SD大鼠睾丸生精小管、间质细胞的组织形态学观察,探讨生后不同发育阶段睾丸生精细胞和间质细胞的发育及变化规律。方法取10天、20天、30天、4月、12月、24月龄雄性大鼠睾丸,常规石蜡包埋、切片、HE染色,镜下观察不同发育阶段生精小管和间质细胞的变化,并进行定量组织学分析。结果⑴生后10天睾丸生精小管细而稀疏,小管中仅见精原细胞和支持细胞,可见单个和成群存在的间质细胞,20天小管中出现初级精母细胞,间质细胞消失,30天龄出现精子细胞,间质细胞再度出现;⑵4月龄生精小管密集、小管外直径和细胞层数均明显增加（P（0.05）并达最大值,上皮内生精活跃,间质内见有大量嗜酸性的间质细胞;⑶12月龄生精细胞层数减少并出现空泡变性,上皮变薄,间质细胞数量减少,体积变小,成纤维细胞增多,界膜增厚;⑷24月龄生精小管明显稀疏,上皮层数降低（P（0.05）,生精细胞和间质细胞均明显减少,内空泡增多,支持细胞也出现空泡变。结论生后10~30天生精小管内尚无精子形成,处于幼年期,除20天龄外,间质内均可见较多的间质细胞;4月龄的青年期生精小管内生精能力和激素分泌能力达高峰,处于生殖旺盛的性成熟阶段;12月龄的中年期睾丸出现衰老性变化,至24月龄老年期生精能力和激素奇泌能力均明显降低.     

益气养阴生精方对微波辐射雄性大鼠生殖的影响

目的 评价中药益气养阴生精方对微波辐射后雄性大鼠生殖系统相关参数的影响及睾丸组织病理形态学的变化情况.方法 二级健康成年雄性Wistar大鼠54只,随机分为对照组14只,辐射组20只和中药组20只,辐射组和中药组用高功率脉冲微波辐射雄性大鼠,1周后中药组给予益气养阴生精方灌胃给药,对照组不予辐射,常规饲养.14 d后大鼠股动脉取血,分离血清,采用化学发光法检测血清性激素,并剖开附睾和附睾管,采用WL-9000精子分析仪分析精子总数和活跃精子密度,取睾丸组织光镜观察组织学变化情况.结果 辐射组大鼠血清睾酮(T)浓度低于对照组,孕酮(P)浓度高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);中药组的T浓度高于辐射组,P浓度低于辐射组,差异有统计学意义(P＜0.05).大鼠精子总数和活跃精子密度辐射组较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05);中药组的精子总数比辐射组和对照组显著提高,差异有统计学意义(P＜0.05).光镜观察大鼠睾丸组织辐射组可见生精上皮层轻度疏松,生精细胞变性、坏死和脱落,腔内精子减少,生精小管腔内间质蛋白水肿液积聚等;而经过中药灌胃治疗后大鼠睾丸生精小管腔中的精子明显密集,精子数量增高.结论 高功率辐射可引起睾丸早期损伤,睾酮辐射后的变化提示睾丸间质细胞对高功率辐射较敏感;益气养阴生精方能够改善辐射后大鼠血清性激素水平,治疗后睾酮和孕激素有显著改变,可提高辐射后精子质量,改变辐射后睾丸的病理变化,从而提高其生殖能力.     

40例无精子不育症睾丸活检组织观察

观察40例22～40岁,婚后2～10年不育,精液检查二次以上均未见精子的不育症患者睾丸组织。主要病理改变为生精上皮的损伤及曲细精管界膜的变化。前者表现为上皮变薄,生精细胞脱落并堵塞管腔,生精细胞定向障碍,后者表现为界膜变厚,纤维增生或透明变性。部分病例亦表现为间质的纤     

红外线对大鼠生精上皮超微结构的影响

目的观察红外线对大鼠睾丸生精上皮超微结构的影响。方法采用不同波段的红外线对大鼠的睾丸局部照射,并与对照组进行比较,采用透射电镜观察睾丸生精上皮超微结构变化。结果与对照组比较,实验组大鼠电镜下生精细胞排列紊乱,精原细胞内细胞器变性多见;支持细胞线粒体空泡化,嵴消失,内质网肿胀。结论红外线可导致大鼠睾丸生精上皮超微结构损伤。     

睾酮致成人精子发生抑制不伴有明显的生精细胞排列疏松

目的确定庚酸睾酮致人精子发生抑制是否伴有生精细胞排列疏松。方法10名正常已生育男性,5人接受庚酸睾酮肌注(200 mg/周)19-24周(睾酮组),5人未作处理(对照组)。取睾丸活检组织块,作甲基丙烯酸树脂包埋切片,观察睾丸的组织学变化。结果与对照组相比,睾酮组的生精小管萎缩,精子发生障碍,长形精子细胞滞留。在两个组的多数生精小管轮廓中,均见有生精细胞团突入生精小管腔,但在两个组均未见生精细胞之间出现明显的裂隙。结论外源性睾酮致成人精子发生抑制,不伴有明显的生精细胞排列疏松。     

氯化锰对小鼠睾丸组织形态学的影响

目的研究锰对小鼠睾丸组织形态学的影响,探讨其时间-效应关系和剂量-效应关系。方法将雄性小鼠随机分为3个染锰组和1个对照组,分别给予腹腔注射7.5、15.0、30.0mg/kg氯化锰和生理盐水,于染锰第3、7、14、28、56天处死小鼠5只/组。观察小鼠睾丸组织学的变化和染锰56d各计量组曲细精管横截面积及生精上皮细胞数量。结果与对照组比较睾丸组织的损伤随染锰剂量的增加和时间的延长而逐渐加重;染锰56d与对照组比较,曲细精管横截面积和生精上皮细胞数差异均有统计学意义(P<0.01)。结论各剂量的MnCl2对雄性小鼠睾丸组织形态结构均有损害作用,以染锰56d,30mg/kg对小鼠的损害最为严重,染锰56d,7.5mg/kg对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞明显减少,证实7.5mg/kg的锰对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞有明显的损害。     

氨基胍对隐睾所致生精细胞凋亡中p53表达的影响

目的:通过研究氨基胍对隐睾生精细胞中p53表达的影响,探讨生精细胞凋亡的分子机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、隐睾组、隐睾+氨基胍(Aminoguanidine,AG,iNOS抑制剂)组、隐睾+生理盐水组。后三组建立单侧隐睾模型,后两组术后分别于腹腔内注射AG和生理盐水,每天一次,定时定量。7天后处死所有大鼠,取双侧睾丸称湿重。手术侧睾丸H.E染色观察常规组织学及免疫组化检测p53的表达。结果:隐睾+AG组睾丸生精上皮较隐睾组及隐睾+生理盐水组排列有序,细胞层数厚,该组中p53表达弱于隐睾组。结论:AG可降低隐睾中p53的表达,抑制隐睾生精细胞的凋亡,提示NO可能通过增强隐睾生精细胞中p53的表达而促进生精细胞凋亡。     

成人睾丸组织在裸鼠体内的存活情况研究

目的以成人睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体,研究成人睾丸组织中生精细胞异种移植后的存活及变化情况。方法将成人正常睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后110d取出移植物,进行组织形态学观察。结果在一例移植前显示非正常生精上皮结构标本的移植物中,大多数生精小管中只含有Sertoli细胞,而另一例移植前显示出正常生精上皮结构的标本,在移植到裸鼠背部110d后,仍然观察到圆形和长形精子细胞存在。结论将成人睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内,110d后仍观察到有生精细胞的存活。     

母鼠长期低剂量锰染毒对子代大鼠睾丸氧化应激状态及生精细胞凋亡的影响

目的 探讨氯化锰长期低剂量染毒对子代大鼠睾丸中氧化应激状态及生精细胞凋亡的影响。方法 健康雌性SD 大鼠32 只随机分为对照组,低、中、高剂量组,每组8 只。锰染毒组分别腹腔注射2、4 和8 mg/kg MnCl2·4H2O,对照组腹腔注射等容生理盐水,1 次/d,5 d/ 周,共8 周。与正常雄性SD 大鼠交配受孕后,雌 鼠在妊娠期和哺乳期继续染毒。每组随机取8 只12 周龄子代雄性大鼠断头处死后取材,HE 染色观察睾丸生精小 管结构;qRT-PCR、免疫组织化学、Western blot 分别检测叉头蛋白转录因子O 3a（FoxO3a）、与Bcl-2 相互作 用的细胞死亡调节子（Bim）、半胱天冬酶9（Caspase-9）mRNA 和蛋白的表达;TUNEL 技术检测生精细胞凋 亡。结果 ① HE 染色可见各锰染毒组睾丸生精小管呈现不同程度的形态学改变。随着锰染毒剂量的增加,生精 细胞层数逐渐减少,各级生精细胞排列紊乱、数量减少或缺如,管腔内成熟的精子数目减少;②中、高剂量组 精子密度、精子活动率降低,而精子畸形率上升（P <0.05）;③各锰染毒组大鼠睾丸组织内超氧化物歧化酶 （SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）活性随锰染毒剂量的增加而降低（P <0.05）; 而睾丸组织内丙二醛（MDA）含量和活性氧（ROS）水平随锰染毒剂量的增加逐渐升高（P <0.05）;④在 mRNA 和蛋白水平,FoxO3a 的表达随锰染毒剂量的增加逐渐上升（P <0.05）;低剂量组Bim mRNA 表达量 未见变化,但在中、高剂量组则降低,而细胞死亡调节因子表达量则随锰染毒剂量的增加逐渐增加（P <0.05）; ⑤ Caspase-9 mRNA 和蛋白表达量在各锰染毒组均升高,且随锰染毒剂量的增加逐渐增加（P <0.05）;⑥各 锰染毒组大鼠均可见生精细胞凋亡,其凋亡指数高于对照组,且随锰染毒剂量的增加而上升（P <0.05）。结论 长期低剂量锰染毒可抑制子代大鼠睾丸内抗氧化酶活性或（和）增加MDA 含量,提高睾丸组织ROS 水平,促 进FoxO3a 和Bim 表达,启动Caspase-9 信号通路,最终导致子代大鼠生精细胞的凋亡。     

雄激素受体敲除小鼠睾丸生精功能变化及p63的表达

目的 研究雄激素受体（AR）敲除小鼠睾丸生精功能及p63在曲细精管中表达的改变.方法 采用雄性Flox-AR小鼠与雌性ACTB-Cre小鼠交配,并敲除胚胎中AR,筛选AR敲除（AR敲除组）和AR未敲除（对照组）雄性小鼠各10只,对比睾丸曲细精管生精功能及p63的表达.结果 两组小鼠曲细精管内径、管周膜厚度、管壁生殖细胞层数、生殖细胞成熟度评分及总Makler评分之间差异均有统计学意义（P＜0.05）,p63的阳性表达主要位于精原细胞及精母细胞,精子细胞及成熟精子中表达呈阴性,且AR敲除组表达阳性率及HSCRE评分均显著低于对照组（P＜0.01）.结论 AR表达与小鼠睾丸曲细精管p63表达关系密切,AR敲除小鼠睾丸曲细精管生精功能受损、p63表达下调,p63调控生殖细胞的早期分化.     

新生期脂多糖暴露对大鼠睾丸发育及波形蛋白表达的影响

目的探讨新生期脂多糖暴露对睾丸发育及波形蛋白表达和分布的影响。方法选取新生雄性SD大鼠150只,随机分为对照组和实验组,实验组于生后第4～12d期间,隔日皮下注射脂多糖（75μg/kg）,共5次,对照组在相同时间皮下注射等容生理盐水。常规饲养至生后14d、21d、28d、包皮分离日、60d、77d分批取材,采用组织学和免疫组化技术,观察脂多糖对大鼠睾丸发育、波形蛋白的表达与分布的影响。结果①与同龄对照组相比,实验组大鼠生精小管横径变小,生精上皮变薄,细胞排列紊乱,生精细胞与支持细胞分离,脱落至管腔,性成熟以后,管腔内精子生成减少;②对照组波形蛋白阳性染色从基膜围绕支持细胞核形成棕黄色的环,并呈辐射状延伸至管腔;实验组支持细胞变矮、变圆,波形蛋白仅见于核周或核的基部胞质,伸向管腔的辐射状条带变短或消失。结论新生期脂多糖暴露,可改变支持细胞波形蛋白的有序分布,造成生精细胞脱落,干扰生精细胞的发育成熟,这种影响可延续至成年期,导致成年期精子生成减少。     

邻苯二甲酸二丁酯致小鼠睾丸生殖细胞凋亡及超微结构观察

目的:探索暴露邻苯二甲酸二丁酯(DBP)小鼠生殖细胞凋亡及超微结构形态变化特征.方法:60只8～9周的BALB/C小鼠,体重20～25 g,雄性20只,雌性40只,按雌雄2:1的比例同笼交配,将受孕母鼠随机分为实验组、模型对照组、正常对照组,在妊娠12～21 d分别经口给予500 mg·kg<'-1>·d<'-1>DB...