优选南极磷虾蛋白肽抗氧化活性组分

目的制备南极磷虾抗氧化肽,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽成分。方法采用脱脂、酶解、超滤等手段制备南极磷虾抗氧化肽;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、抗氧化能力指数3个抗氧化指标和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活力2个酶活力指标为评价指标,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分;基于G-25凝胶层析技术对抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分进行分离纯化,进一步基于电子顺磁共振(electron paramagnetic resonance,EPR)方法测定洗脱后各峰的DPPH自由基清除率,得到抗氧化活性最好的南极磷虾抗氧化肽组分。结果通过抗氧化指标测定,截留分子量3～10 KDa的肽的DPPH自由基清除率最高,为(30.10±1.10)%,截留分子量3 KDa的南极磷虾肽的ABTS清除能力和抗氧化指数较好,则IC50值为(0.74±0.08) mg/mL、氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)值为6.39±0.21;通过酶活力指标测定,截留分子量3 KDa的肽的SOD活力和CAT活力最好,分别为(45.7±0.13)U/mg和(17.1±0.19)U/mg蛋白质。对截留分子量3KDa和3～10KDa的南极磷虾肽进行G-25分离纯化后,测定各组分的DPPH自由基清除率,可知截留分子量3～10KDa的F2-2峰清除率最好,为(51.55±1.54)%。结论基于EPR方法优选出分子量为3～10 KDa的南极磷虾肽的F2-2组分的DPPH自由基清除率最高。     

南极磷虾肽的脱氟工艺和体外抗氧化作用

以南极磷虾为原料,选取超声水洗时间、Ca(OH)2添加量、反应温度、反应时间进行单因素试验,利用正交试验法确定了南极磷虾酶解液脱氟的最佳工艺,即超声水洗时间20 min、Ca(OH)2添加量0.6%、反应温度40℃、反应时间60 min,此时酶解液氟含量为24.78 mg/kg;此外,分析了南极磷虾肽的分子量分布、氨基酸组成及抗氧化活性。结果表明:南极磷虾肽的分子质量小于1 000 U的组分高达93.233%,氨基酸组成丰富,尤其富含谷氨酸、天冬氨酸及其酰胺;南极磷虾肽的抗氧化能力与其浓度呈现一定的依赖性,其清除DPPH·、·OH和O2-·的IC50值分别是2.12, 5.72和16.43 mg/mL,同时具有一定的还原力,说明南极磷虾肽具有良好的抗氧化能力,为南极磷虾肽应用于相应的保健食品、药品等领域奠定了理论和应用基础。     

南极磷虾蛋白肽的抗氧化活性及稳定性研究

目的：分析探讨南极磷虾蛋白肽的抗氧化活性及稳定性。方法：通过测定自由基清除能力以及脂质过氧化抑制能力,系统评价南极磷虾蛋白肽的抗氧化活性,并考察温度、酸碱度、模拟胃肠道消化等条件对其稳定性的影响。结果：南极磷虾蛋白肽对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基均具有较强的清除作用,IC₅₀分别为5.68、0.32、9.54、1.68 mg/mL;同时,南极磷虾蛋白肽对亚油酸、蛋黄卵磷脂等脂质过氧化具有良好的抑制作用。南极磷虾蛋白肽在温度>60℃条件下,抗氧化活性显著下降(P<0.05);在中性及弱酸性条件下较稳定,在碱性条件下抗氧化活性急剧下降(P<0.05);经体外模拟胃肠道消化后仍能保持较高的抗氧化活性。结论：南极磷虾蛋白肽具有较好的抗氧化活性,其相关产品的加工贮藏应避免高温、强酸、强碱条件的影响。研究结果可为南极磷虾蛋白肽的品质保持和相关高值产品开发提供科学指导。     

滁菊多糖抗疲劳耐缺氧作用效果观察

目的:观察滁菊多糖的抗疲劳耐缺氧作用。方法:取雄性小鼠60只,随机分为正常对照组、红景天胶囊组和滁菊多糖高、中、低剂量组,每组12只。灌胃给药,每日1次,连续5d,观察滁菊多糖对小鼠负重游泳时间,血乳酸(BLA)、血尿素氮(BUN)和肝糖原(HG)含量,断头小鼠的呼吸次数、呼吸维持时间及小鼠缺氧存活时间的影响。结果:滁菊多糖能显著延长负重小鼠的游泳时间,降低疲劳小鼠BLA、BUN含量,升高HG含量,提高断头小鼠的呼吸次数,延长呼吸维持时间和小鼠常压耐缺氧存活时间。结论:滁菊多糖具有抗疲劳和提高耐缺氧能力作用。     

龙虾壳红色素抗疲劳耐缺氧作用的试验研究

通过灌服龙虾壳红色素研究其对小鼠抗疲劳、耐缺氧能力的影响。正常对照组小鼠灌胃蒸馏水,低剂量组、中剂量组和高剂量组分别以龙虾壳红色素1,2和4 g/(kg·d)剂量连续灌胃30 d。分别测定小鼠负重游泳时间和血乳酸(LA)、血尿素氮(BUN)、肝糖原和肌糖原含量;常压耐缺氧时间及耗氧量。结果:中、高剂量组小鼠负重游泳时间及血清中LA含量及肝糖原含量明显高于正常对照组(p0.05),高剂量组小鼠BUN含量明显低于正常对照组(p0.05)。高剂量组常压耐缺氧存活时间、耗氧量明显高于空白组(p0.05)。龙虾壳红色素能明显提高小鼠抗疲劳、耐缺氧的能力,具有非常明显的保健作用。     

枸杞酒抗疲劳和耐缺氧功能的研究

为研究枸杞酒的耐缺氧、抗疲劳功能,应用保健食品功能学评价程序和检验方法,对饮用枸杞酒的小鼠进行耐缺氧、抗疲劳作用测定,结果表明:枸杞酒可显著延长小鼠游泳时间和在缺氧条件下的存活时间,降低小鼠剧烈运动后血乳酸水平,减少肝糖原的消耗,说明枸杞酒具有提高机体机能、增强机体耐缺氧、抗疲劳的作用.     

柚皮水提液耐缺氧抗疲劳的研究

观察了柚皮水提液的耐缺氧与抗疲劳作用。以小鼠为研究对象,随机分为正常对照组、柚皮水提液小剂量、中剂量和大剂量组,连续灌胃10d。采用断头缺氧、常压耐缺氧及负重游泳等实验方法,观察小鼠断头后张口呼吸时间、常压缺氧存活时间及游泳存活时间。结果发现,1g/mL和2g/mL柚皮水提液能明显延长小鼠断头后张口呼吸时间和常压缺氧存活时间(p<0.01),显著延长力竭游泳时间(分别为p<0.05和p<0.01),明显提高肝糖原和肌糖原含量(p<0.01)。柚皮水提液具有提高小鼠耐缺氧和抗疲劳能力的作用。     

芦笋提取物抗疲劳及耐缺氧活性研究

目的:研究芦笋提取物抗疲劳及耐缺氧活性。方法:以75%乙醇为溶媒,超声提取芦笋,获得芦笋乙醇提取物,对提取物中总皂苷、总多糖、氨基酸进行含量分析;整体口服给药实验观察芦笋乙醇提取物对小鼠抗疲劳及耐缺氧功能的影响,给药剂量分别为25、100、400mg/kgmb。结果:给药14d后,小鼠负重游泳时间均显著延长（低、高剂量组p<0.01,中剂量组p<0.05）;给药30d后,无负重游泳30min小鼠血乳酸含量显著下降（低、中剂量组p<0.01,高剂量组p<0.05）,血尿素氮（BUN）含量没有显著性变化（p>0.05）,肝脏谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量显著升高（低、中剂量组p<0.05,高剂量组p<0.01）,过氧化物歧化酶（SOD）含量显著升高（低剂量组p<0.01,中、高剂量组p<0.05）,高剂量组丙二醛（MDA）含量显著下降（p<0.05）;给药30d后,高剂量组小鼠常压密闭存活时间显著延长（p<0.05）,注射盐酸异丙肾上腺素后,各剂量组小鼠耗氧量及存活时间均无显著变化。结论:芦笋乙醇提取物有明显的抗疲劳功能及一定的耐缺氧功能。      

响应面法优化南极磷虾蛋白肽脱色工艺

为优化南极磷虾蛋白肽脱色工艺,提高南极磷虾蛋白肽产品品质,采用活性炭吸附法脱除南极磷虾蛋白肽溶液中的色素,以脱色率和蛋白保留率为评价指标,分别考察活性炭用量、pH、脱色温度、脱色时间对脱色效果的影响,在单因素实验基础上,选择脱色温度50℃,采用响应面法优化南极磷虾蛋白肽脱色工艺。结果表明,采用粉末活性炭吸附脱除南极磷虾蛋白肽色素的最佳条件为：活性炭用量4.0%、pH1.5、脱色时间1.0 h;在此条件下,脱色率达到82.19%±0.20%,蛋白保留率为90.93%±2.28%。采用优化工艺对南极磷虾蛋白肽进行脱色处理,样品氨基酸组成中必需氨基酸与非必需氨基酸的占比以及样品的分子量分布不会发生明显变化。研究将为优质南极磷虾蛋白肽产品开发提供支撑。     

芡实种皮多酚抗疲劳耐缺氧作用研究

目的:研究芡实种皮多酚的抗疲劳耐缺氧作用。方法:将昆明小鼠随机分为空白组、阳性对照组（维生素E,50 mg/kg·d-1）、多酚高（400 mg/kg·d-1）、中（200 mg/kg·d-1）、低剂量组（100 mg/kg·d-1）,分别灌胃给药,每日1次,连续5 d,观察芡实种皮多酚对小鼠体重、负重游泳时间、常压耐缺氧时间、肝糖原、肌糖原、乳酸脱氢酶、血尿素氮和组织一氧化氮的含量,以及免疫器官指数变化的影响。结果:高、中、低剂量种皮多酚均能延长负重小鼠游泳时间和常压密闭耐缺氧时间,显著提高了小鼠的抗应激能力（p<0.05）。其活动量、食量、精神状态、日均体重增加量、脏器系数得到提升。同时,芡实种皮多酚提高了疲劳小鼠肝糖原、肌糖原储备,降低了血清尿素氮水平,提高了血清和肝脏中乳酸脱氢酶含量,增加了血清中一氧化氮含量。结论:芡实种皮多酚具有抗疲劳和提高耐缺氧能力的作用。      

Isolation and Identification of Antihypertensive Peptides from Antarctic Krill Tail Meat Hydrolysate

ABSTRACT:  Antarctic krill ( Euphausia superba ) obtained from the huge biomass in Antarctic waters is an important food product in Japan. Antarctic krill peptide powder (AKPP) prepared from the tail meat by enzymatic hydrolysis significantly decreased the systolic blood pressure in spontaneously hypertensive rats by a single oral administration (1, 10, or 100 mg). Presumably, the effect of AKPP was through inhibition of the conversion of angiotensin, which mediates blood pressure elevation, from its inactive propeptide to the mature angiotensin. Two potent angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory peptides were isolated from AKPP by high-performance liquid chromatography (HPLC) and identified as Val-Trp (IC₅₀= 2.75 μg/mL; 12.9 μM) and Leu-Lys-Tyr (IC₅₀= 4.26 μg/mL; 10.1 μM). Val-Trp and Leu-Lys-Tyr comprised 0.025%± 0.0023% (w/w) and 0.018%± 0.0023% (w/w) of AKPP, respectively, as measured by electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS). The contributions of Val-Trp and Leu-Lys-Tyr to the ACE inhibitor activity of AKPP were 17.7%± 1.60% and 8.04%± 1.03%, respectively, suggesting that these 2 peptides constitute a substantial portion of the overall ACE inhibitor potential of AKPP.     

南极磷虾自溶酶性质的初步研究

探讨南极磷虾自溶酶的最适pH值、最适温度以及抑制剂和金属离子对其活性的影响。结果表明:南极磷虾自溶酶主要含有3种酶,最适pH值分别为3.0、6.0、8.0;各最适pH值条件下最适温度分别为40、50、50～60℃之间。苯甲基磺酰氟(PMSF)和大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)对南极磷虾自溶酶活性有较强的抑制作用,抑制范围分别在pH3.0～9.0之间和pH6.0～10.5之间。Cu2+和Ba2+对自溶酶活性的抑制作用较强,Ca2+对自溶酶活性几乎没有抑制作用,而Mg2+对自溶酶活性有一定的激活作用。     

南极磷虾自溶前后氨基酸和胰蛋白酶降解产物的变化

南极磷虾富含内源自溶酶,死后易快速自溶,限制了其加工利用。为研究南极磷虾自溶特性,测定了不同条件下南极磷虾自溶酶的最适温度和pH值,然后在最适自溶条件下研究了南极磷虾自溶3 h前后的氨基酸态氮含量和组成变化,并对南极磷虾自溶前后的胰蛋白酶降解产物进行了分析。结果表明：南极磷虾自溶酶最适温度为55 ℃,最适pH值为7.5,在此条件下南极磷虾自溶后氨基酸态氮质量浓度升高;甘氨酸和脯氨酸为南极磷虾的主要游离氨基酸,其次为谷氨酸和丙氨酸,南极磷虾自溶后鲜味氨基酸如谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸质量分数降低,而苦味氨基酸如亮氨酸、异亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸质量分数升高;南极磷虾自溶后胰蛋白酶降解产物分子质量分布向小分子质量范围偏移。本实验为进一步研究南极磷虾自溶特性提供了理论依据。     

南极磷虾粗虾油提取工艺优化

研究南极磷虾粗虾油的有机溶剂提取工艺。探讨不同提取剂、提取剂混合比、提取时间、提取温度和料液比对南极磷虾粗虾油得率的影响。在单因素试验基础上,通过响应面分析确定最佳的提取工艺条件为:以正己烷+乙酸乙酯为提取剂,提取剂混合比71.3:28.7、料液比1:6.6,在57.8℃提取50min;此时粗虾油得率为14.76%。     

南极磷虾中产抗菌活性物质菌株的筛选及系统发育分析

分别以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 27661(Sa 27661)和大肠杆菌Escherichia coli ATCC 35218(Ec 35218)为指示菌,以南极磷虾中分离出的59株菌为测试菌,利用牛津杯法进行抗菌活性菌株的初筛及复筛,同时用比浊测定法和牛津杯法对活性菌株的部分特性包括生长曲线、抗菌曲线、最佳温度、最佳p H、最佳盐度进行了测定,以Mega 5邻接法对其16S r RNA基因序列及系统发育地位进行探究。结果发现,初筛获得13株菌对Sa 27661具有抗菌活性,6株菌对Ec 35218具有抗菌活性。复筛得到对Sa 27661和Ec 35218均具有明显抗菌活性的菌株3株,阳性率为5.08%,其编号分别为1A3、A4、1A5。且3株菌分别培养16、20、28 h进入生长对数期,培养36、48、60 h达到稳定期。分别培养56、64、72 h时抗菌活性达到最高,之后基本达到稳定。最佳温度分别为15、20、20℃,最佳p H分别为7、6、6,最佳盐度分别为1%、3%、2%。系统发育分析结果表明,菌株A4、1A5,均属于嗜冷杆菌属Psychrobacter,菌株1A5与已注册的菌株(Psychrobacter sp.OK1)基因序列相似性可达100%。而菌株1A3与不可培养嗜冷杆菌属(Uncultured Psychrobacter)同源性为97%。三株菌均具有较好的耐酸性、耐碱性和耐盐性的能力,同时具有较好的抗菌活性。      

响应面法优化南极磷虾亚铁螯合肽制备工艺及其理化性质

以南极磷虾为原料,酶解制备亚铁螯合肽。以亚铁螯合率为主要指标,水解度为辅助指标,在单因素实验基础上,利用响应面优化制备南极磷虾亚铁螯合肽(Antarctic krill iron-chelating peptides,AKIP),并对其理化性质进行分析。结果表明:Alcalase 2.4 L是南极磷虾酶解的最适用酶,最佳酶解条件为:酶解温度57.6 ℃,加酶量5.5%,pH8.8,酶解时间5 h,在此条件下酶解液的亚铁螯合率为77.77%±0.72%,水解度为23.22%±0.16%,实测结果与预测值符合良好。氨基酸组成分析表明,南极磷虾亚铁螯合肽具有良好的亚铁螯合活性位点。AKIP的相对分子质量主要分布在180~1000 Da之间,约占89.28%。体外抗氧化实验表明,AKIP对DPPH自由基和羟自由基均有良好的清除能力(IC₅₀分别为1.92、2.09 mg/mL),且呈现较好的量效关系,在食源性螯合肽和天然抗氧化剂领域具有一定的开发利用价值。     

南极磷虾冷藏过程中的品质变化

以pH 值、出肉率、可溶性蛋白质含量为指标,结合感官评价,探讨了南极磷虾0℃和3℃贮藏过程中的品质变化,运用SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析南极磷虾的蛋白质相对分子质量变化。实验结果显示,南极磷虾24h 贮藏后,pH 值都逐渐升高,分别达到8.21 ± 0.01 和8.28 ± 0.02;出肉率从(61.92 ± 2.50)% 分别减少到(22.65 ± 6.81)% 和(13.64 ± 2.72)%;可溶性蛋白质含量都逐渐降低,分别降为(19.0 ± 0.50)mg/10g 湿质量和(25.5 ± 2.00)mg/10g 湿质量。SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳出现5 条蛋白质条带,1h 时0℃和3℃的蛋白质分子质量分别为49.5、32、29、26、13.2kD,且29kD 的蛋白质条带被分解的最快。感官评分最高值和最低值分别为9.5 ± 0.05、9.4 ± 0.12 和1.3 ± 0.10、1.0 ± 0.08。表明在0℃和3℃条件下贮藏的南极磷虾自溶迅速,品质下降很快,因此冷藏条件下的南极磷虾开始进行加工的时间应该在10h 之内。     

D-核糖对大鼠负载游泳后胰岛素、去甲肾上腺素、肾上腺素的影响及其抗疲劳、抗缺氧能力研究

通过灌服D-核糖,测定大鼠在负重游泳后血浆胰岛素、去甲肾上腺素和肾上腺素水平,研究D-核糖对运动后大鼠心脏及骨骼肌功能的恢复作用。灌服D-核糖,测定大鼠的抗疲劳游泳力竭时间与抗缺氧存活时间,探讨核糖的抗疲劳和抗缺氧能力。结果表明:运动后即刻核糖实验组胰岛素水平高于正常对照组和游泳对照组,恢复72h后,核糖组胰岛素水平均高于正常对照组;核糖实验组在运动后即刻去甲肾上腺素、肾上腺素水平高于游泳对照组,恢复72h后,核糖实验组肾上腺素水平低于游泳对照组和正常对照组;核糖组与对照组大鼠的抗疲劳游泳力竭时间、抗缺氧存活时间分别延长了50.21%和8.8%。结论:核糖可以调节激素水平,促进运动过程中的糖异生作用,对维持运动过程中血糖水平的稳定起重要作用,保护了心脑等重要器官的正常生理功能。补充核糖可以显著延长大鼠的抗疲劳游泳时间和缺氧状态下的存活时间。     

南极磷虾酶解工艺优化及模型建立

以短肽得率(trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI)和水解度(degree of hydrolysis, DH)为指标,从7种常用酶中选出Alcalase酶作为酶解南极磷虾的最适酶。对Alcalase酶水解南极磷虾的酶用量、底物浓度、pH值、温度和时间5个因素进行单因素试验和正交旋转组合试验,建立TCA-NSI和DH与各因素的回归模型;在此基础上,结合实际生产确定Alcalase酶水解南极磷虾的最适工艺为温度50.7℃、pH8.01、加酶量3010U/g、时间239min,此时TCA-NSI值为73.02%,DH值为42.33%,短肽平均肽链长(peptide chain long,PCL)为2.36,平均相对分子质量为277.9。