补阳还五汤4类有效部位对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积的影响

目的研究补阳还五汤(BYHWD)中生物碱、多糖、苷、苷元4类有效部位对大脑中动脉闭塞(MCAO)后局灶性脑缺血大鼠脑梗死的作用。方法用颈内动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,检测脑梗死体积,并比较其神经功能行为评分。结果脑缺血6h,模型组脑梗死体积显著增大(P<0.01),神经功能行为评分显著升高(P<0.01);生物碱、多糖、苷、苷元各组脑梗死体积较模型组缩小(P<0.05、0.01);生物碱、苷、苷元和多糖可使MCAO大鼠神经功能行为评分下降(P<0.05、0.01),其中以生物碱和苷的作用较强。结论MCAO后,大鼠脑组织出现梗死,补阳还五汤4类有效部位生物碱、多糖、苷、苷元能减少脑梗死体积,改善脑缺血后神经行为症状。生物碱和苷的抗脑缺血作用较强,这可能是补阳还五汤抗缺血性脑损伤的部分物质基础。     

阿魏酸钠对局灶性脑梗死大鼠内皮素、降钙素基因相关肽变化的影响

目的：探讨局灶性脑梗死急性期应用阿魏酸钠对内皮素（ET）和降钙素基因相关肽（CGRP）的影响。方法：随机将成熟雄性大鼠分为正常对照组、假手术组、手术非干预组、手术干预组4组,手术组按时间随机分为30min、1h、2h、6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d、14d 11个亚组;采用改良Longa法建立局灶脑梗死模型．应用放射免疫法测定各组大鼠不同时间点脑组织和血浆中ET、CGRP含量。结果：大脑中动脉梗死后30min时ET无明显变化,1h起,较假手术组显著升高（P〈0．01）;cGRP在各个时间点均较假手术组降低（P〈0．01）;二者具有相关性,脑组织与血浆中r分别为-0．415、-0．350;手术干预组ET、CGRP与非干预组比较差异有显著性（P〈0．01）,脑组织与血浆中r分别为．0．602、-0．590。结论：阿魏酸钠可有效地抑制ET升高及CGRP降低．从而起到脑保护的作用。     

局灶性脑缺血大鼠血浆蛋白组学研究

目的 研究脑缺血后的血浆蛋白质组学的变化差异,筛选出具有高度脑特异性的差异表达蛋白.方法 用大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立大鼠局灶性脑缺血模型.造模成功后,收集新鲜血浆.用阳离子交换色谱分级血浆蛋白,并用胰蛋白酶消化蛋白,得到的肽段混合物经超高效液相色谱分离后进行飞行时间质谱鉴定,确定缺血前后血浆中的差异表达蛋白,对差异蛋白进行基因表达组织特异性分析,筛选具有高度脑特异性的蛋白.结果 在正常组和缺血组的大鼠血浆中各鉴定到285种和309种蛋白质.其中,缺血组的差异蛋白种类数量为200.经基因表达的组织特异性分析,从缺血组差异蛋白中筛选出6个具有高度脑特异性的差异蛋白.结论 脑缺血后,血浆蛋白组发生明显变化.鉴定到的脑特异性蛋白,为后续生物标记物研究提供了候选蛋白.     

牛膝多肽对局灶性脑缺血大鼠坐骨神经功能指数的影响

目的:观察牛膝多肽对局灶性脑缺血后大鼠坐骨神经功能损伤的影响,为其应用于临床提供实验依据.方法:制备局灶性脑缺血-大脑中动脉阻塞模型,血管阻塞再通后连续6 d进行尾静脉注射牛膝多肽.术后7、30 d进行足迹实验,观察牛膝多肽对局灶性脑缺血后坐骨神经功能下降的影响.结果:于大脑中动脉阻塞后7、30 d,SD大鼠坐骨神经功能指数的百分率明显增加(P<0.01).尾静脉注射不同剂量的牛膝多肽后,坐骨神经功能指数百分率均有不同程度的下降,其中牛膝多肽中剂量组(ABPP(0.2 mg/kg)),无论是大脑中动脉阻塞后7 d还是30 d,其坐骨神经功能指数百分率均较生理盐水组明显下降(P<0.01).结论:牛膝多肽对大脑中动脉阻塞引起的坐骨神经功能下降具有保护作用.     

全植入式变频电刺激对局灶性脑缺血模型大鼠卒中后神经功能和大脑重塑的影响

目的 研究大鼠局灶性脑缺血后植入全植入式、变频电刺激器,观察低强度皮层电刺激(CES)对卒中后神经功能和大脑重塑的影响.方法 成年雄性SD大鼠70只,线栓法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)模型.将有皮层梗死的大鼠随机分为两组:电刺激组(CES组,n=13)和无刺激组(NS组,n=10).电刺激时间为2周,2周后进行4周的观察,全程记录大鼠的体质量变化.在植入刺激器后的第2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38和41天,对两组大鼠进行肢体放置、足失误和横木行走测试的综合行为学评价.6周后,用免疫组织化学方法评价两组大鼠梗死灶周大脑皮层和梗死对侧大脑皮层的神经元标记物(NeuN)、血管标记物(laminin)、星型胶质细胞标记物(GFAP)和树突标记物(MAP2)的表达.结果 在2周电刺激期和4周观察期内,CES组大鼠的体质量高于NS组(F=5.757,P=0.026).行为学方面,CES组大鼠的肢体放置结果在各时间点均优于NS组(P＜0.05),两组间差异有统计学意义(F=4.46,P=0.047);CES组大鼠的足失误率在各时间点(除电刺激后第8天)均低于NS组(P＜0.05),两组间差异有统计学意义(F=39.017,P=0.000);CES组大鼠的横木行走得分在各时间点(除电刺激后第5和17天)均高于NS组(P＜0.05),两组间差异有统计学意义(F=8.323,P-0.009).免疫组化方面,在梗死侧大脑皮层,CES组和NS组NeuN的表达差异无统计学意义(P ＞0.05);CES组laminin的表达高于NS组(P ＜0.05);CES组GFAP的表达显著低于NS组(P＜0.01);CES组MAP2的表达显著高于NS组(P＜O.O1).在梗死对侧大脑皮层,CES组和NS组laminin的表达差异无统计学意义(P ＞0.05);CES组GFAP的表面密度低于NS组(P ＜0.05);CES组MAP2的表达高于NS组(P＜0.05).结论 全植入式皮层电刺激器能促进神经功能康复,促进梗死侧大脑皮层的血管新生和树突萌芽,抑制梗死侧大脑皮层的炎症反应.另外,皮层电刺激还促进了梗死对侧皮层的树突萌芽并抑制炎症反应.     

局灶性脑缺血大鼠模型的研究

采用开颅电凝阻断大鼠一侧大脑中动脉并结扎同侧颈总动脉的方法,复制了局灶性脑缺血模型,应用神经检查分级评估法,组织化学染色和计算机图象处理系统,证实了该模型的可靠性。     

线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型及其影响因素

在缺血性脑病的研究中,局灶性脑缺血模型的制备必不可少。用线栓阻塞大脑中动脉被公认为是较理想的造模方法,已得到广泛的研究和应用,并涌现出大量改良方法,但实施中也存在诸多分歧和影响因素。由于实验研究的需要,文中就模型的制备流程、影响因素及其现状进行综述,力求获得比较全面而清晰的认识。     

大鼠局灶脑缺血基质金属蛋白酶-2的表达

目的 研究大鼠局灶脑缺血后基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2, MMP-2)在不同时相的表达,探讨MMP-2与缺血性损伤的关系.方法 制作大鼠自体血栓性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,在不同时点用免疫组化染色观察MMP-2表达情况,并与假手术组进行对照.结果 缺血6 h后MMP-2表达很少,24 h表达上调,5 d达最高水平.MMP-2主要表达在星形细胞、巨噬细胞.结论 缺血后出现MMP-2表达的上调,影响缺血性卒中的转归.     

线栓法大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制作

大脑中动脉闭塞(MCAO)模型被普遍认为是局灶性脑缺血的标准动物模型[1].其中线栓法MCAO模型,具有不开颅、效果肯定且可准确控制缺血及再灌注时间的优点,便于分析神经元对缺血的敏感性、耐受性,及研究再灌注损害和治疗时间窗的选择.由于对动物全身的生理功能影响较小,动物存活时间长,也适用于慢性脑损伤的研究,近几年该模型得到研究者的喜爱[1].现将我们制作模型的体会报道如下.     

大鼠局灶性脑缺血后远隔区域rCBF改变

目的 观察大鼠一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)后急性期两侧额叶、丘脑、小脑、下丘脑血流星(regional cerebral blood flow，rCBF)的动态变化。方法 采用线栓法建立大鼠一侧大脑中动脉闭塞模型，按实验需要将实验动物分成正常、单纯缺血二组；用氢清除法测定两侧额叶、丘脑、小脑、下丘脑脑在MCAO后1h、3h、6h、24h rCBF。结果 正常对照组各相应部位rCBF无显著差异(P＞0．05)；一侧MCAO后，两侧额叶皮层、丘脑、下丘脑、对侧小脑半球rCBF下降，MCAO后1h达最低水平(P＜0．05或P＜0．01)，随时间延长，rCBF逐渐增加，除对侧小脑、下丘脑外，其余部位rCBF至MCAO后24h基本恢复正常。结论 一侧MCAO后，可引起两侧额叶、上脑、下丘脑、对侧小脑rCBF改变。     

芍药苷对局灶性大鼠脑缺血再灌注脑组织中SOD、Nrf2表达的影响及神经保护作用

目的：研究芍药苷（paeoniflorin,PF）对局灶性大鼠脑缺血再灌注模型脑组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）在各时间点的表达情况及其神经保护作用。方法：将108只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,每组在3、6、12、24、48、72 h进行神经功能评分,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,RT-PCR、Western blot技术测定Nrf2 mRNA、蛋白分子的表达。结果：与假手术组相比,模型组的神经功能评分明显升高,SOD活性明显下降,Nrf2的表达有所增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,给予PF（20 mg/kg）能使模型组的神经功能评分降低,SOD活性有所升高,Nrf2的表达持续上调,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：PF能通过提高机体消除自由基能力和增加Nrf2表达来减轻局灶性脑缺血再灌注损伤后自由基引起的氧化损伤作用,从而对缺血性脑组织起到脑保护作用。     

线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型手术操作的研究进展

线栓法大鼠大脑中动脉阻塞模型被普遍认为是标准的大鼠局灶性脑缺血动物模型。该模型在制备过程中,易受到多重因素的影响,其中手术操作对模型的成功制作起着关键作用。文章从大鼠颈部主要动脉的解剖位置、手术切口位置的选择、手术左右侧别的选择,以及插线位置的选择进行了综述。     

人参皂苷Rb3对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的探讨3种人参皂苷Rb3对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用。方法将48只大鼠随机分成6组：假手术组、模型组、人参皂苷Rb320、40、80 mg/kg组和阳性对照药血栓通注射液（XST）组;采用插线法使大脑中动脉闭塞（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血模型,于造模24 h后进行行为学评分,测定脑组织含水量以及脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量,计算脑梗死面积百分比,并进行组织病理学检查。结果人参皂苷Rb340、80 mg/kg能明显缓解脑缺血大鼠的行为学症状,减轻其脑水肿程度,降低血清中MDA含量,升高SOD含量,并能减少其脑梗死面积,减轻组织病理学损伤。结论人参皂苷Rb3对大鼠局灶性脑缺血损伤有较明显的保护作用。     

运动训练对局灶性脑缺血大鼠神经功能及Sema3A表达的影响

目的探讨运动训练对局灶性脑缺血大鼠神经功能及Sema3A表达的影响。方法选取健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、对照组、训练组,每组10只。训练组采用线栓法建立左侧大脑中动脉阻塞2h再灌注动物模型,假手术组造模方法同训练组但不阻塞大脑中动脉血流。训练组大鼠于再灌注24h后游泳训练30min,共计3d;假手术组和对照组大鼠不行游泳训练。3d后对各组大鼠进行受损神经功能(MENZIES评分)、抓握力及平衡功能评定;处死大鼠,取缺血侧大脑皮质和海马,均用RT-PCR方法检测Sema3A-mRNA表达。结果训练组大鼠MENZIES评分低于对照组,而高于假手术组,差异均有显著意义(F=177.75,q=19.49、6.00,P<0.05);训练组大鼠抓握力及平衡功能评分高于对照组,而低于假手术组,差异均有统计学意义(F=57.63、117.00,q=7.25～12.46,P<0.05)。训练组Sema3A-mRNA的表达量低于对照组,高于假手术组,差异均有统计学意义(F=62.873、78.095,q=8.35～9.10,P<0.05)。结论运动训练能降低轴突抑制因子Sema3A-mRNA的表达,从而促进轴突再生、改善受损神经功能。     

一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带区细胞自噬的影响

目的 探究一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（Nω-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME）对大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型大鼠再灌注后24 h脑内一氧化氮（nitric oxide,NO）和自噬相关蛋白Beclin1、LC3B表达的影响,探讨L-NAME保护脑缺血再灌注损伤的机制。方法 18只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术（Sham）组、MCAO组,和MCAO+L-NAME组,每组6只。使用改良线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血90 min再灌注模型。术中监测大鼠肛温,使其维持在正常范围。于再灌注后24 h处死大鼠,迅速取脑,用免疫荧光染色检测小鼠脑组织冰冻切片缺血半暗带区Beclin1和LC3B的表达水平,用免疫荧光双标分别将Beclin1和LC3B与NO介导的蛋白质损伤标志物3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine,3-NT）进行共定位。结果 Sham组大鼠没有3-NT染色阳性细胞,偶见Beclin1和LC3B染色阳性细胞,MCAO组小鼠脑组织缺血半暗带区3-NT、Beclin1、LC3B均大量表达（P<0.05）。与MCAO组相比,给予L-NAME治疗后,缺血再灌注大鼠脑组织半暗带区3-NT、Beclin1、LC3B表达均明显减少（P<0.05）。缺血再灌注小鼠脑组织半暗带区,Beclin1和LC3B分别与3-NT免疫荧光染色共定位。结论 L-NAME通过抑制NOS活性,减少NO的产生,直接避免神经元的氧化应激损伤;同时,氧化应激损伤的减弱也避免了自噬的进一步激活,起到了间接的神经保护作用。     

三七三醇皂苷对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用和脑血流量的影响

目的探讨三七三醇皂苷(PTS)对局灶性脑缺血损伤的保护作用。方法将大鼠随机分成6组:假手术组,模型组,PTS25、50、100mg/kg组和阳性对照药血栓通注射液(XST)组;采用栓线法使大脑中动脉闭塞(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血模型,于造模24h后进行行为学评分,测定脑组织含水量以及脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,计算脑梗塞面积百分比以及进行组织病理学检查。结果三七三醇皂苷50、100mg/kg能明显缓解脑缺血大鼠的行为学症状,减轻其脑水肿程度,降低血清中MDA含量和升高SOD含量,并能减少其脑梗塞面积,减轻脑组织病理学损伤。结论PTS对大鼠局灶性脑缺血有较明显的保护作用,增加脑血流量可能为治疗作用机理之一。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究

目的改进大鼠大脑中动脉梗塞法，建立更接近于临床缺血性脑卒中及其再灌注的可靠模型。方法沿大鼠右颈外动脉入栓，经颈内动脉到达大脑中动脉，入栓线长15～18mm，直径0．205mm，阻断其血流，观察大鼠神经病学改变及脑组织形态学变化。结果术后大鼠表现出特殊体态及典型追尾征，6h后大脑中动脉供血区出现缺血性外观（TTC染色）及相应组织学变化（HE染色），模型成功率近83％。结论本方法既可构成缺血性病灶，又能形成再灌注模型，具有可逆性重复操作的特点，其神经病学与形态学的特殊表现，可作为鉴定模型的可靠依据。     

短暂性局灶性脑缺血再灌注后氯化锂对大鼠海马CA1区神经元凋亡及糖原合成酶激酶-3β的影响

目的：观察氯化锂对短暂局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡及GSK-3β的影响。方法：SD大鼠126只,随机分为正常（NO）组、假手术（SH）组、缺血再灌注（IR）组、氯化锂1（Li1）组、氯化锂2（Li2）组、氯化锂3（Li3）组。Hoechst染色观察海马CA1区神经元凋亡的变化,免疫荧光染色观察海马CA1区GSK-3β及p-GSK-3β（Ser9）的变化。结果：与SH组比较IR组细胞凋亡明显（P〈0.01）。与IR组比较各氯化锂组凋亡细胞明显减少（P〈0.05或P〈0.01）,氯化锂剂量越大,凋亡细胞减少越明显（P〈0.05或P〈0.01）。各组GSK-3β阳性反应颗粒数差异无显著性。与SH组相比IR组p-GSK-3β（Ser9）明显增多（P〈0.01）。与IR组比较各氯化锂组p-GSK-3β（Ser9）明显增多（P〈0.01）,氯化锂剂量越大,增多越明显（P〈0.05或P〈0.01）。结论：氯化锂能剂量依赖性的减轻大鼠短暂性局灶性脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡,增加海马CA1区p-GSK-3β（Ser9）表达。     

NBT对大鼠局灶性脑缺血的影响

目的观察NBT对大鼠局灶性脑缺血的影响。方法采用大鼠大脑中动脉梗塞(MCAO)造成局部脑缺血模型,观察NBT对脑缺血大鼠行为症状、脑梗死面积、脑组织含水量的影响。结果预先给予NBT0.21g/kg,0.42g/kg7d,可减轻MCAO大鼠行为障碍、减少脑梗死面积、降低脑组织的含水量(P<0.05)。结论NBT对大鼠脑缺血有一定的预防作用。     

不同性别大鼠局灶性脑缺血脑血流及梗死体积的变化

目的探讨正常生理条件下性别因素对大鼠局灶性脑缺血模型脑梗死体积及梗死过程中脑血流变化的影响。方法健康雌、雄(sprague dawley,SD)大鼠(280～310g)各12只,使用大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)线栓模型,大脑中动脉阻塞2 h,再灌注24 h后处死。(1)手术中全程监测大脑中动脉灌注区域脑血流变化,记录梗死前脑血流的基础值,插栓后脑血流的下降值及拔栓后脑血流的恢复值,并比较雌雄2组之间的差异。(2)处死大鼠后进行大脑切片,通过2,3,5-氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium,TTC)染色测量并比较雌雄2组大鼠脑梗死体积。结果 (1)脑血流监测基础值雌性为(154±20)PU,雄性为(212±24)PU,雌性显著低于雄性(P<0.01);线栓插入后,雌性为(48±3)PU,雄性为(78±21)PU,雌性显著低于雄性(P<0.05),下降百分比雌性为(68±4)%,雄性为(63±12)%,差异无统计学意义(P>0.05);拔栓后脑血流雌性为(159±5)PU,雄性为(196±36)PU,恢复百分比雌性为(104±11)%,雄性为(91±14)%,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)TTC染色发现雌性大鼠脑梗死体积为(28.4±3.3)%,雄性为(40.0±3.1)%,雌性明显小于雄性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论正常生理条件下,雌性大鼠脑血流基础值显著低于雄性,单侧MCAO缺血再灌过程中,雌雄2组脑血流和各自基础值相比,下降和恢复的程度差异无统计学意义。因此推测雌性大鼠脑血流基础值低水平状态可能提高其对缺血再灌注损伤的耐受性,最终导致在病死率及脑梗死统计中雌性大鼠都显著低于雄性大鼠。