MTP18在口腔鳞癌细胞迁移与侵袭中的作用

  目的  探讨线粒体蛋白18(mitochondrial protein 18,MTP18)在口腔鳞癌转移中的调控作用。  方法  (1) 采用生物信息分析44例正常口腔黏膜与520例口腔鳞癌组织中MTP18的表达。(2)siRNA干涉MTP18表达后,用qRT-PCR与Western blotting实验检测干涉效果,用划痕与Transwell实验检测对细胞迁移与侵袭能力的影响。(3)siRNA下调MTP18表达后,用qRT-PCR实验分析对细胞上皮间质转化的影响。  结果  (1) 口腔鳞癌中MTP18表达显著上调(P＜0.001),尤其在高级别与淋巴转移的肿瘤组织中。(2)siRNA显著下调了MTP18表达(P＜0.001)。干涉MTP18可显著抑制口腔鳞癌SCC9细胞的迁移(siCtrl vs.siMTP18#1 vs. siMTP18#2为1.00±0.07 vs. 0.43±0.04 vs. 0.44±0.03,F=102.241, P＜0.001)与侵袭(siCtrl vs. siMTP18#1 vs. siMTP18#2为1.00±0.07 vs. 0.43±0.04 vs. 0.44±0.03,F=97.017, P＜0.001)。(3)干涉MTP18上调了上皮细胞标志分子的表达(P＜0.001),而下调了间质细胞标志分子的表达(P＜0.001)。  结论  MTP18通过诱导上皮间质转化促进口腔鳞癌细胞的迁移与侵袭。      

整合素连接激酶在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：观察子宫内膜癌患者癌组织中整合素连接激酶（ILK）的表达水平,通过体外细胞实验探讨其对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：采用免疫组织化学SP法检测29例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织细胞中ILK阳性表达率。分别将ILK siRNA和siRNA control转染至子宫内膜癌HEC-1B细胞作为干扰组和空载组,以不作处理的细胞作为对照组;采用Western blotting法检测HEC-1B细胞中ILK、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）和磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白表达水平,细胞划痕实验检测细胞迁移距离,Transwell小室法检测侵袭细胞数。结果：29例子宫内膜癌患者癌组织中ILK阳性表达率为79.3%,癌旁组织中ILK阳性表达率为10.3%,子宫内膜癌组织中ILK阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）。与对照组和空载组比较,干扰组HEC-1B细胞中ILK、p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Akt和GSK-3β蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）;细胞划痕实验,与对照组和空载组比较,干扰组HEC-1B细胞迁移距离明显缩短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ILK在子宫内膜癌组织中呈高水平表达,干扰ILK表达能够降低子宫内膜癌细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能与其抑制Akt和GSK-3β蛋白磷酸化有关。     

毛蕊花苷通过上调Max蛋白抑制口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭

【】目的 分析毛蕊花苷通过上调MAX蛋白表达抑制口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭。方法 质谱分析空白对照组及毛蕊花苷处理组口腔鳞癌细胞HN4中蛋白的表达谱,筛选毛蕊花苷处理后丰度高且表达显著增加的蛋白,用Western blotting验证质谱分析的结果,并在口腔鳞癌细胞HN4中运用shRNA干扰关键蛋白的表达,分析毛蕊花苷的处理对鳞癌细胞HN4迁移和侵袭的作用。结果 分析质谱检测的结果筛选经毛蕊花苷处理后,在口腔鳞癌HN4细胞中表达显著升高的MAX蛋白,蛋白印记检测发现与质谱芯片结果相一致,毛蕊花苷处理组鳞癌细胞HN4中MAX的表达明显增加;shRNA干扰口腔鳞癌HN4细胞中MAX的表达,qRT-PCR和Western blotting检测发现HN4细胞中MAX的表达明显下调,运用毛蕊花苷进一步刺激HN4细胞,发现HN4细胞的迁移和侵袭能力显著被抑制。结论 毛蕊花苷可能是通过增强口腔鳞癌细胞中MAX的表达抑制口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭。     

口腔鳞癌组织中LINC01605的表达及对细胞侵袭、迁移的影响

目的：探究LINC01605在口腔鳞癌组织中的表达及对细胞侵袭、迁移的影响。方法：收集口腔鳞癌病人的口腔鳞癌组织及相对应的癌旁组织标本各40例,分析口腔鳞癌组织中LINC01605的表达与临床病理特征的关系。将处于对数期的口腔鳞癌细胞CAL-27随机分为：CK组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01605组(转染si-LINC01605)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC01605组(转染pcDNA-LINC01605);qRT-PCR检测组织和细胞中LINC01605表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;Western blotting检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、神经型钙黏素(N-cadherin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达;体内移植瘤实验检测肿瘤生长情况。结果：口腔鳞癌组织中LINC01605表达高于癌旁组织(P<0.01);LINC01605表达与TNM分期、分化程度、淋巴结...     

DCLK1敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究双皮质素样激酶1（doublecortin-like kinase 1,DCLK1）的敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在的作用机制。方法 使用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除食管鳞癌细胞（Kyse450,Kyse70）的DCLK1基因。通过细胞划痕实验和Transwell实验评估DCLK1敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。Western blotting法检测DCLK1敲除细胞系中上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关转录因子的表达变化。通过癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atla,TCGA）数据库进一步分析食管鳞癌患者（n=95）中DCLK1表达和EMT相关转录因子之间的相关性。结果 CRISPR/Cas9基因编辑技术能够有效地敲除食管鳞癌细胞系DCLK1基因并影响其表达。DCLK1缺失显著抑制食管鳞癌细胞的体外迁移和侵袭能力（P<0.05）,并上调上皮标志物E-cadherin的表达,下调间质标志物如Vimentin、ZEB1、Slug和Snail的表达（P<0.05）。另外TCGA数据库分析显示食管鳞癌患者中DCLK1与EMT相关转录因子存在相关性。结论 DCLK1敲除可通过抑制EMT进程影响食管鳞癌细胞的迁移和侵袭。     

siRNA干扰整合素β4的表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的采用RNA干扰（Small interference RNA,siRNA）技术抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞中整合素β4（integrinβ4）基因表达,观察其对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法选用MDA-MB-231乳腺癌细胞为研究对象,应用siRNA技术沉默癌细胞Integrinβ4 mRNA的表达,Real-time PCR和Western blotting方法分别检测未转染Integrinβ4 siRNA的乳腺癌细胞组（简称空白对照组）及转染Integrinβ4 siRNA的乳腺癌细胞组（简称Integrinβ4 RNA干扰组）的Integrinβ4 mRNA和蛋白表达水平;Transwell实验检测两组细胞的侵袭及迁移能力。结果与空白对照组相比,Integrinβ4 RNA干扰组Integrinβ4的mRNA及蛋白表达水平分别降低了86%（P〈0.01）和89%（P〈0.01）,细胞侵袭和迁移能力下降（P〈0.05）。结论应用siRNA干扰技术抑制Integrinβ4表达可使MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力降低,提示Integrinβ4在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。     

趋化因子受体CCR7对口腔鳞(癌细胞增殖和迁移的影响

目的 检测趋化因子受体CCR7[Chemokine(C-C)Receptor 7]的表达及其对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot 检测 20例口腔鳞癌组织 、口腔鳞癌细胞系Tca-8113 、腺样囊性癌细胞系ACC-M(Adenoid Cystic Carcinoma,ACC-M)和10例正常口腔黏膜组织中 CCR7的表达.用MTT法检测细胞的增殖能力,通过趋化实验观察在CCR7的配体次级淋巴组织趋化因子(Secondary Lymphoid-tissue Chemokine,SLC)作用下对口腔鳞癌细胞的趋化迁移作用.结果 ①在口腔鳞癌组织和Tca-8113细胞中,CCR7在mRNA及蛋白水平均有强的表达,ACC-M细胞系中CCR7弱表达,而在正常口腔黏膜组织细胞不表达.②口腔鳞癌细胞在SLC作用下增殖反应明显增强,CCR7抗体可明显抑制肿瘤细胞的增殖.③体外实验显示SLC可诱导口腔鳞癌细胞发生明显迁移,在30、50 ng/ml的实验浓度范围内,诱导口腔鳞癌细胞迁移的作用呈明显量效关系.结论 CCR7/ SLC受体配体系统可通过介导口腔鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移,从而在口腔鳞细胞向颈部淋巴结转移中发挥着重要作用,CCR7有可能成为口腔鳞癌治疗的新靶点.     

ECRG2基因通过干扰uPAR与β1整合素的相互作用抑制肿瘤细胞侵袭迁移

目的 探讨ECRG2影响人成纤维肉瘤HT1080细胞侵袭迁移的分子机制. 方法 利用ECRG2可诱导表达系统观察该基因对uPAR与β1整合素相互作用及下游Src/MAP信号通路的影响. 结果 ECRG2基因通过干扰uPAR与β1整合素的相互作用、阻断uPAR/β1/Src/MAP信号通路,从而抑制HT1080细胞的侵袭迁移;ECRG2基因缺失导致uPAR/β1整合素/Src/MAP信号通路活性增强,促进HT1080细胞的侵袭迁移. 结论 ECRG2基因通过干扰uPAR/β1整合素/Src/MAP信号通路参与肿瘤细胞侵袭迁移的调控.     

miR-21对人喉鳞癌细胞Hep2迁移侵袭能力的影响

目的：探讨微小RNA‐21（miR‐21）对人喉鳞癌细胞Hep2迁移、侵袭能力的影响。方法用脂质体Lipofectami‐neTM2000将miR‐21抑制剂和miR‐21NC转入人喉鳞癌细胞Hep2中,48h后,运用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）／磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）的激活情况,以及基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9与伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白（RECK）的表达。结果与miR‐21NC比较,miR‐21抑制剂能明显降低Hep2细胞活力[（0．688±0．043）vs．（0．375±0．012）],抑制细胞迁移能力[（6．57±0．02）μmvs．（20．49±2．18）μm]及细胞侵袭能力[（100．7±10．2）vs．（46．8±4．3）],差异均有统计学意义（P＜0．01）;同时miR‐21抑制剂能明显下调PI3K、MMP2及MMP9的表达（P＜0．01）,降低Akt的磷酸化水平（P＜0．01）,并上调PTEN及RECK的表达（P＜0．01）。结论miR‐21抑制剂能明显抑制人喉鳞癌细胞Hep2的迁移、侵袭能力,可能与PTEN／PI3K／Akt信号通路有关。     

沉默整合素连接激酶基因抑制TCA8113舌癌细胞生长和侵袭

目的 研究沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达,对人舌鳞癌细胞生长、侵袭和转移能力的影响.方法 通过用ILK mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,通过筛选鉴定后,用MTT法、划痕试验和Transwell法分别检测细胞生长、迁移和侵袭能力,用Western blot分析细胞中ILK、p-Akt、p-GSK3β及Snail等的表达.结果 沉默ILK基因表达显著抑制了细胞的生长、迁移和侵袭能力,接种的第48、72、96、120小时,TCA8113 siILK组的抑制率分别为17％、29％、25％、42％,迁移能力较TCA8113组和TCA8113 vector组分别下降67％和66％,侵袭能力则较两个对照组下降了67％和68％,p-Akt、p-GSK3β及Snail的表达较TCA8113组和TCA8113 vector组分别降低了45％和53％,57％和61％,74％和73％.结论 抑制ILK基因的表达可通过Akt/GSK3β/Snail途径,显著抑制人舌鳞癌TCA8113细胞的生长、迁移和侵袭潜能,可作为治疗人舌鳞癌的靶蛋白.     

过表达DBHS家族基因可促进食管鳞癌细胞的迁移侵袭

目的 研究人类剪切蛋白(drosophila behavior human splicing,DBHS)家族基因,包括p5nrb、PSF、PSPC1基因,对食管鳞状细胞癌(以下简称食管磷癌)细胞系TE-8细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法 构建p54nrb、PSF、PSPC1基因过表达载体,通过脂质体法转染TE-8细胞,转染48 h后qRT-PCR和Western blotting检测各组细胞p54nrb、PSF、PSPC1在mRNA和蛋白质水平的表达。细胞划痕实验及覆盖有Matrigel的Transwell小室检测食管鳞癌细胞的迁移、侵袭能力。结果 过表达p54nrb、PSF、PSPC1后,qRT-PCR和Western blotting检测证实食管鳞癌TE-8细胞中上述基因表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显上调,细胞划痕实验及Transwell小室实验证实食管鳞癌TE-8细胞过表达p54nrb、PSF、PSPC1后,其迁移、侵袭能力增强。结论 过表达DBHS家族基因可促进食管鳞癌细胞的迁移侵袭。     

薏苡仁提取物经PDGFB/PDGFRβ信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 观察薏苡仁提取物(ESC)经血小板源性生长因子B(PDGFB)/血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 2020年6—8月于甘肃省人民医院实验室进行实验.体外培养人口腔鳞癌CAL27细胞,设对照组(不予处理)、ESC低剂量组(10μmol/L)、ESC高剂量组(...     

Per1基因对口腔鳞癌细胞增殖侵袭和迁移的影响

目的:探讨Per1基因通过Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法:培养人口腔鳞癌细胞SCC-15,将si-Per1和si-NC转染至SCC-15细胞,作为si-Per1组和si-NC组.RT-qPCR检测细胞Per1基因表达水平,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小...     

TPM1调节口腔鳞癌的增殖、侵袭迁移及其机制研究

目的 探讨TPM1在口腔鳞癌组织中的表达情况及对人口腔鳞癌细胞恶性表型的影响。方法 通过RT-PCR检测口腔鳞癌组织和癌旁组织标本TPM1的表达情况。选取CLA27和HSC3细胞作为后续实验对象,构建TPM1干扰质粒。采用RT-PCR检测TPM1转染后表达效果,采用CCK-8检测细胞0、24、48和72h增殖情况,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot法检测MMP家族蛋白表达情况。结果 TPM1在口腔鳞癌组织中高表达(P<0.05)。RT-PCR结果显示敲减组mRNA表达显著低于空载组(P<0.05);过表达组mRNA表达显著高于空载组(P<0.05)。与空载组比较,敲减组细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05);过表达组细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,相对于空载组敲减组MMP9蛋白表达水平显著下降(P<0.05);过表达组MMP9蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。结论 TPM1在口腔鳞癌组织中呈现高表达,TPM1可能通过调节MMP9蛋白显著影响口腔鳞癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力。     

α2整合素抗体对人类骨肉瘤MG63细胞迁移侵袭的影响

目的:细胞间黏附分子整合素的变化与肿瘤细胞的侵袭迁移之间有重要联系,文中进一步深入探讨α2整合素抗体对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响,为预防骨肉瘤细胞的转移和辅助治疗提供理论依据. 方法:采用细胞迁移实验、细胞侵袭实验观察骨肉瘤MG63细胞在整合素α2单克隆抗体作用下瘤细胞迁移、侵袭能力的变化.迁移或侵袭的细胞通过结晶紫染色,100倍显微镜下计数. 结果:anti-α2阻断组细胞的迁移能力较对照组明显降低,侵袭能力较对照组明显减弱. 结论:α2整合素抗体在骨肉瘤细胞迁移侵袭过程中起着抑制作用.     

人舌鳞癌细胞中SOCS1表达抑制对细胞侵袭及凋亡的影响

目的 研究细胞信号转导抑制因子1(SOCS1)基因表达抑制对人舌鳞癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响。方法 人舌鳞癌细胞系CAL27中SOCS1沉默效果采用实时定量PCR和Western blotting方法验证;应用Transwell侵袭小室模型观察舌鳞癌细胞的侵袭力;划痕试验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平。结果 SOCS1干扰片段显著下调CAL27细胞SOCS1基因的蛋白和m RNA表达水平(P0.05)。沉默SOCS1表达后,干扰组和对照组细胞体外穿膜细胞数分别为(42±9)个和(91±17)个,迁移细胞数分别为(93±14)个和(184±3)个,干扰组均明显弱于对照组(P0.05);SOCS1表达抑制后CAL27细胞凋亡率(11.5±2.1)%明显大于对照组(1.3±0.4)%,且凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 人舌鳞癌细胞株CAL27的SOCS1基因表达抑制后,体外侵袭、迁移能力下降,且促进舌鳞癌细胞凋亡。     

三氧化二砷体外诱导口腔鳞癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对口腔鳞癌细胞的体外生物学作用及机制。方法 采用形态学、MTT、克隆形成试验、DNA梯度降解试验、原位末端标记及流式细胞仪等方法，对As2O3在Tca8113细胞系中的作用进行体外研究。结果 As2O3对Tca8113细胞产生明显的生长抑制作用，MTT显示生长抑制率为76.3%。DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示As2O3诱导了Tca8113细胞凋亡。流式细胞仪显示As2O3的Tca8113细胞凋亡与细胞周期阻滞有关。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用。     

PD-L1对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨程序性细胞死亡配体1 (PD-L1)在口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞中的表达及其对OSCC CAL27细胞生物学行为的影响,阐明其可能的作用机制。方法：采用Western blotting法检测口腔上皮HOK细胞和OSCC CAL27、TCA8113和SCC15细胞中PD-L1蛋白表达水平。免疫荧光染色法检测CAL27细胞中PD-L1蛋白表达和定位情况。将CAL27细胞分为对照组（转染si-NC）和si-PD-L1组（转染si-PD-L1）,Western blotting法检测2组细胞干扰效率,CCK-8法检测不同时间点2组细胞增殖活性,平板克隆实验检测2组细胞克隆形成数,细胞划痕愈合实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测2组细胞中迁移和侵袭细胞数。结果：OSCC细胞中PD-L1蛋白表达水平均高于HOK细胞（P<0.05或P<0.01）, PD-L1在CAL27细胞的细胞质和细胞核中均有表达。CCK-8法和平板克隆实验,与对照组比较,不同时间点si-PD-L1组CAL27细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,克隆形成...     

姜黄素通过上皮-间质转化过程对口腔鳞癌细胞株HN4侵袭转移的影响

旨在探讨姜黄素对口腔鳞癌细胞株HN4 的增殖、侵袭和凋亡效应及其分子机制。方法0～60μmol/L 姜黄素作用于口腔鳞癌细胞株HN4,24 h后应用MTT 法检测细胞的生长活性;划痕实验检测细胞迁移作用;Transwell 实验测定对细胞的侵袭作用;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot测定P53、E-cadherin和Snail 蛋白表达水平。结果MTT 检测结果显示各浓度姜黄素对癌细胞生长有抑制,其中,20μmol/L姜黄素有明显抑制。随着姜黄素浓度的增加,对细胞凋亡有明显作用。姜黄素处理后细胞周期生长阻滞于G0/G1期。Snail的蛋白表达量随着姜黄素的浓度增加而减少。P53 和E-cadherin的表达量随着姜黄素的浓度增加而增加。结论姜黄素能显著抑制口腔鳞癌细胞株HN4 的体外生长,上调P53 蛋白表达诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。