MiR-590-5p对ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡以及LOX-1表达的影响

目的:研究miR-590-5p对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的调节作用,观察miR-590-5p对HUVECs凋亡的影响。方法:HUVECs经ox-LDL(50μg/mL)作用不同时间(0~48 h)。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-590-5p的表达变化。HUVECs转染miR-590-5p模拟物(miR-590-5pmimics)后ox-LDL继续作用48 h。RT-qPCR和Western印迹分别检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达情况。FCM检测HUVECs凋亡率的变化。结果:随ox-LDL作用时间的延长,HUVECs凋亡率逐渐升高,miR-590-5p表达逐渐下调。miR-590-5p模拟物转染后可以降低LOX-1 mRNA和蛋白的表达,并抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡。结论:miR-590-5p可抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与下调LOX-1基因表达有关。     

氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞(H-UVEC)孤儿核受体NOR1表达的影响

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)孤儿核受体NOR1表达的影响。方法:采用ox-LDL建立人脐静脉内皮细胞损伤模型,将细胞分为空白组、ox-LDL高、中、低剂量组(25μg/ml、50μml、100μg/ml、200μg/ml),采用CCK8法检测HUVEC活性,采用实时荧光定量PCR分析NOR1转录水平变化,采用Western-Blot分析NOR1蛋白表达的变化。结果:在HUVEC中加入不同浓度ox-LDL共同培养12h后,CCK8值与ox-LDL呈现明显的剂量反应关系,与空白对照组相比具有显著性差异(P<0.01)。Ox-LDL能够诱导NOR1 mRNA转录和蛋白表达,NOR1 mRNA峰值出现在ox-LDL共同培养后的3h,NOR1蛋白质最大值出现在ox-LDL共同培养后的6 h。结论:ox-LDL能够损伤HUVEC,并能诱导NOR1的表达上调,其在内皮细胞损伤和动脉粥样硬化炎性反应中的作用有待进一步研究。     

螺内酯对醛固酮诱导的人脐静脉内皮细胞LOX-1mRNA表达的影响

目的通过体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)并加醛固酮(ALD)诱导,观察氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达的影响。方法体外培养的HUVECs按细胞不同处理方式分为6组:阴性对照组(1640培养基,A组)、不同浓度ALD组(10、100、1 000 nmol/L,分别为B、C、D组)、ALD+LOX-1受体阻滞剂多聚肌苷酸(Poly I)组(E组)、ALD+螺内酯组(F组)加入HUVECs中共孵育24 h,RT-PCR的方法测定HUVECs中LOX-1mRNA的表达。结果用不同浓度的ALD(10、100、1 000 nmol/L)与HUVECs培养24 h后,同A组相比LOX-1mRNA表达呈浓度依赖性增加(P<0.05);而在用螺内酯(1μmol/L)与1 000 nmol/L的ALD共培养24 h或Poly I(250 mg/L)与HUVECs预先作用2 h后再加入1 000 nmol/L的ALD共培养24 h,同D组相比E,F组LOX-1mRNA的表达明显减少(P<0.05)。结论ALD可以促进培养的HUVECs LOX-1基因的表达,而其拮抗剂螺内酯可以抑制LOX-1mRNA的表达,因此ALD的致动脉粥样硬化(AS)作用可能与LOX-1有关,而螺内酯则可能通过此途径发挥抗AS作用。     

人参皂苷Re对人脐静脉内皮细胞 PARP-1表达的抑制作用

目的：筛选对多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1（PARP-1）有潜在抑制作用的中药单体,研究中药单体对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）PARP-1表达的抑制作用。方法在中国天然产物数据库中通过计算机虚拟筛选初步得到对PARP-1有潜在抑制作用的6种中药单体,对加入中药单体的细胞分设高、低剂量组,浓度分别为1×10-4、1×10-6 mol/L,另将加入3-氨基苯甲酰胺（3-AB）的细胞作为阳性对照组、只加2×10-4 mol/L ONOO -的细胞作为模型组。Western blotting检测PARP-1表达。若待筛药物对PARP-1表达有抑制作用,则以1×10-4～1×10-8 mol/L的药物进行浓度依赖性实验。结果1×10-4、1×10-6 mol/L人参皂苷Re与1×10-4 mol/L人参皂苷Rb1对ONOO -引起的PARP-1激活有抑制作用。1×10-4～1×10-8 mol/L人参皂苷Re对 PARP-1的表达有明显的抑制作用,且呈现出剂量依赖性（P＜0．05）。结论人参皂甙Re对HUVEC上ONOO -激活的PARP-1蛋白表达有抑制作用,对ONOO -引起的细胞损伤具有保护作用,其效应呈现出剂量依赖性。     

LOX-1介导oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞高通透性反应

目的 探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮高通透性反应中的作用。方法 采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察oxLDL或和LOX-1阻断抗体对单层血管内皮细胞LDL通透性的影响以及下室THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;用Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜检测oxLDL或和LOX-1阻断抗体对桥粒芯糖蛋白1 （DSG1） 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中表达和分布的改变。结果 oxLDL可以增加单层内皮细胞对LDL的通透性和下室THP-1巨噬细胞脂质的蓄积,同时降低DSG1的表达及其在细胞间分布的连续性,而抑制LOX-1可以减弱内皮细胞的高通透性反应和巨噬细胞脂质蓄积。结论 oxLDL可能是通过降低桥粒蛋白表达使内皮细胞构型改变来诱导内皮高通透性,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积,其机制可能涉及LOX-1的介导。     

LOX-1在D-葡萄糖培育人肾小球系膜细胞的表达

目的 研究血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在D-葡萄糖培养人肾小球系膜细胞(HGMC)的表达,探讨糖尿病肾脏损伤的机制.方法 体外培养HGMC,用RT-PCR法检测LOX-1 mRNA的表达,用Western blot法检测p38MAPK蛋白质的相对含量.结果 D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1 mRNA的表达,该作用可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制;D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式上调p38MAPK蛋白的表达,该作用也可被LOX-1特异性阻滞剂JTX92部分抑制.结论 D-葡萄糖能以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1的表达.高浓度D-葡萄糖可能通过上调LOX-1 mRNA表达,激活细胞内的p38MAPK信号传递途径,参与糖尿病肾病的发生发展.     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖及IL18分泌的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖及白介素18（IL18）分泌的影响，以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株，3～6代用于实验。实验分空白对照组和不同浓度ox-LDL组。将不同浓度的ox-LDL（10、20、50、100、200mg／L）与内皮细胞共同孵育12、24、36、48h。采用细胞酶联免疫吸附分析（ELISA）检测培养上清液中IL18含量；采用四唑盐比色法检测各孔的吸光值（0D），以评价增殖效果。结果10mg／L ox-LDL促进内皮细胞增殖，20～200mg／Lox-LDL呈剂量依赖性抑制内皮细胞增殖（P〈0．05，P〈0.01）。正常内皮细胞不分泌IL18。ox-LDL诱导HUVECs分泌IL18，呈浓度依赖性，100mg／L浓度时IL18分泌达高峰。ox-LDL诱导HUVECs分泌IL18亦呈时间依赖性，与12h比较，24、36、48h均有统计学意义（P〈0.05，P〈0.01）。结论ox-LDL诱导HUVECs分泌IL18，抑制HUVECs增殖，这可能与ox-LDL致动脉粥样硬化作用机制有关。     

三七总皂苷对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞CD40, VCAM-1表达的影响

目的    探讨三七总皂苷(TPNS)对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）白细胞分化抗原40（CD40）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）表达的影响。方法    原代培养HUVECs。细胞分为空白组、刺激组、小剂量（100mg/L）TPNS组、大剂量（200mg/L）TPNS组及辛伐他汀组并予相应处理。采用MTT法测定HUVECs活性,实时定量RT-PCR检测VCAM 1的基因表达,Western blot 分析CD40蛋白表达量。结果    TPNS及辛伐他汀均可以升高HUVECs的活性（P＜0.05, P＜0.001）,下调HUVECs表达免疫炎症因子CD40 (P＜0.05, P＜0.01)及VCAM-1（P均＜0.001）的水平。且大剂量TPNS作用优于小剂量TPNS（P＜0.05）。结论    TPNS能够减轻oxLDL对内皮细胞的损伤,降低内皮细胞免疫炎症因子的表达,在防治动脉粥样硬化中具有重要作用。     

胰蛋白酶诱导人脐静脉内皮细胞分泌内皮素-1

目的：探讨胰蛋白酶对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌内皮素（ET）-1的影响。方法：分离、培养HUVECs,细胞免疫荧光技术检测内皮细胞表达蛋白酶活化受体（PAR）-2。内皮细胞生长添加物和肝素培养体系培养HUVECs,激活剂为胰蛋白酶和丝-亮-异亮-甘-赖-缬（SLIGKV-NH2）,ELISA检测细胞上清中ET-1水平。结果：FITC标记的抗人PAR-2抗体染色细胞的荧光主要存在于细胞周边及突起处,说明HUVECs表达PAR-2。随着胰蛋白酶和SLIGKV-NH2浓度升高（与单纯细胞培养液比,P〈0.05）,HUVECs分泌ET-1的水平也相应升高。两种刺激剂诱导的ET-1水平正相关。α1-抗胰蛋白酶、大豆胰蛋白酶抑制剂和PAR-2抑制肽显著抑制胰蛋白酶或SLIGKV-NH2诱导的ET-1释放。结论：胰蛋白酶很可能通过PAR-2促进内皮细胞分泌ET-1。     

LOX-1受体启动子基因调控及其抗大鼠肾脏损害的作用

目的:研究吡咯-咪唑聚酰胺(PIP)对凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)受体启动子基因的调控,并探讨其对抗大鼠肾脏损害的作用。方法:雄性SD大鼠50只,按随机数字法将大鼠分为五组,每组10只。A组:普通饲料,未用PIP。B组:高脂饲料(含3%胆固醇+10%猪油),未用PIP。C组:高脂饲料,PIP干预组,C1组按10μg/(kg·d)静脉注射;C2组按5μg/(kg·d)静脉注射。D组:高脂饲料,他汀干预组,瑞舒伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃给药。治疗时间均为8周。检测肾组织LOX-1 m RNA、MMP-9 m RNA表达水平,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,测定24 h尿蛋白定量、血尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)水平。结果:C1组、C2组大鼠肾组织LOX-1 m RNA、MMP-9 m RNA表达水平均较B组低,差异均有统计学意义(P<0.01);C1组、C2组大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平与B组比较差异均无统计学意义(P>0.05);C1组、C2组大鼠24 h尿蛋白定量较B组明显降低(P<0.01),而血BUN、Scr水平与A组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:PIP化合物能明显下调高脂血症大鼠肾组织LOX-1 m RNA表达,改善肾功能及抑制肾脏损害。     

p38MAPK/eNOS信号通道在胰高血糖素样肽-1抑制AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨p38MAPK信号通道在胰高血糖素样肽-1（GLP-1）拮抗糖基化终末产物（AGEs）诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡
的作用。方法实验组分为对照组、AGEs组、GLP-1组、AGEs+GLP-1组、AGEs+抑制剂组及AGEs+GLP-1+抑制剂组,western
blot技术检测p-p38MAPK/p38MAPK、p-eNOS/eNOS蛋白表达情况,Annexin V/PI流式检测细胞凋亡率。结果与对照相比较,
单独加入AGEs或GLP-1可分别导致p-p38MAPK蛋白表达水平明显上升（P=0.001）或下降（P<0.001）;与对照组相比AGEs可
显著降低p-eNOS表达水平（P=0.007）,而予以GLP-1或p38MAPK抑制剂（SB203580）预处理后,受抑制的eNOS蛋白表达水平
再次显著升高（P=0.004）;在AGEs 组加入SB203580 或GLP-1 预处理后,AGEs诱导的细胞凋亡率均显著下降（P<0.001,P<
0.001）。结论GLP-1至少部分通过抑制p38MAPK蛋白磷酸化,上调磷酸化eNOS蛋白的表达,对人脐静脉内皮细胞起到抗凋
亡的保护作用。
     

LOX-1在ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞TGF-β1表达的作用

目的:探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人肾小球系膜细胞(HGMC)表达转化生长因子(TGF-β1)中的作用。方法:体外培养HGMC,在不同时间加入不同浓度的ox-LDL及LOX-1阻滞性抗体JTX92,用半定量RT-PCR法检测细胞LOX-1和TGF-β1mRNA表达,用Westernblot法检测细胞LOX-1蛋白合成,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中TGF-β1浓度。结果:ox-LDL以时间和浓度依赖的方式增加LOX-1mRNA和蛋白表达的同时,也以时间和浓度依赖的方式增加细胞内TGF-β1mRNA表达和培养液中TGFβ1蛋白的含量,JTX92(10μg/ml)可以明显抑制LOX-1和TGF-β1的表达(P<0.01)。结论:ox-LDL通过激活LOX-1调节HGMCTGF-β1基因表达、蛋白合成与分泌。     

阿托伐他汀对人内皮细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:探讨不同浓度的阿托伐他汀(atorvastatin)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮(HUVECs)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长到融合状态时加人ox-LDL(100μg/ml),作用24小时后分别加入不同浓度的阿托伐他汀(1～30μmol/L),采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术测定ICAM-1 mRNA的表达.结果:Ox-LDL可诱导ICAM-1 mRNA的表达,不同浓度的阿托伐他汀可抑制ox-LDL诱导的ICAM-1 mRNA的表达,并呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:阿托伐他汀可抑制ox-LDL诱导的HUVECsICAM-1 mRNA的表达,并呈浓度依赖性.     

胰高血糖素样肽-1对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（glucagon—like peptide-1,GLP—1）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞huma numbilica lvein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及相关机制。方法：HUVECs加入不同处理因素后分组,分别培养48h后,MTT检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率;Westernl印迹测定细胞P-Akt,p-eNOS水平;NO试剂盒检测NO浓度。结果：高糖（33mmol／L）培养48h后HUVECs细胞活力下降p〈0．05）,细胞凋亡率增加（p〈0．01）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均下降（P〈0．05）;高糖条件下加人GLP．1（3nmol／L）培养48h,与高糖组相比较,HUVECs细胞活力增加（P〈0．01）,细胞凋亡率减少（p〈O．05）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均增／JH（V〈0．05）;P13K抑制剂wortmannine（100nmol／L）可以阻断GLP-1的抗凋亡作用及其对P—Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO水平的影响;eNOS抑制剂L—NAME（100umol／L）仅能阻断GLP-1的抗凋亡作用及对NO水平的影响,不影响p-Akt蛋白的表达。结论：GLP．1可改善高糖诱导的HUVECs凋亡,该抗凋亡作用可能与P13K／Akt／eNOS通路的上调相关。     

强化降脂治疗非ST段抬高型急性冠脉综合征的效果及对血清s LOX-1、ox-LDL水平的影响

目的探讨强化降脂治疗非ST段抬高型急性冠脉综合征(ACS)的效果以及对血清可溶性血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平的影响。方法采用随机数表法将该院2018年3月至2018年9月收治的90例非ST段抬高型ACS患者分为对照组(瑞舒伐他汀10 mg)和观察组(瑞舒伐他汀20 mg),各45例,分别于治疗前后检测两组患者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、sLOX-1和ox-LDL的变化情况,并评价安全性。结果观察组和对照组治疗后TC、TG、LDL-C、sLOX-1及ox-LDL水平比治疗前均显著下降,HDL-C水平显著提高,且观察组比对照组下降或提高更明显,差异具有统计学意义(P 0.05);两组患者用药治疗后,药物不良反应发生率间差异无统计学意义(P0.05)。结论给予非ST段抬高型ACS患者强化降脂治疗,不仅能降低血脂水平,还可明显降低血清sLOX-1、ox-LDL的水平,减轻血管和内皮炎性反应。     

血浆MCP-1 、LOX-1及D-二聚体在急性冠状动脉综合征患者诊断、危险分层及预后中的意义

目的 探讨血浆单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)及D-二聚体(D-D)在急性冠状动脉综合征(ACS)患者诊断、危险分层及预后中的意义.方法 选取93例ACS患者为ACS组,另选46名体检健康者为对照组.根据全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分将ACS组分为低危组(...     

金属硫蛋白和同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞PAI-1活性及mRNA表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)与金属硫蛋白(metallothionein,MT)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)纤溶酶原激活物抑制剂(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)活性及mRNA表达的影响.方法0.1 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L Hcy及1.0 mmol/L Hcy加不同浓度MT(1nmol/L,5 nmol/L,10 nmol/L,50 nmol/L)分别作用HUVECs 6 h后,用PAI-1发色底物法检测PAI-1活性;用RT-PCR技术检测PAI-1 mRNA.结果Hcy呈浓度依赖性地增加HUVECs PAI-1活性及其mRNA表达(P均＜0.01);不同浓度的MT均可显著降低Hcy所致的PAI-1活性及其mRNA表达的增高(P均＜0.05),且呈剂量依赖性.结论MT可降低Hcy所致的PAI-1活性及其mRNA表达增高作用.     

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达中的作用

目的研究凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-type oxidized LDL receptor1,LOX-1)在C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)组织因子(tissue factor,TF)表达中的作用。方法用人重组质粒pTracer CMV2-CRP转染HUVECs细胞,分正常对照组、空质粒GFP组和CRP-GFP组(n=3),RT-PCR、Western blot检测TF、LOX-1 mRNA和蛋白表达。Western blot检测各组P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表达。CRP-GFP组分别加LOX-1阻断剂、ERK1/2阻断剂(U0126)、JNK阻断剂(SP600125),Westernblot检测TF蛋白。结果用表达人CRP的质粒转染HUVECs显著增加LOX-1 mRNA和蛋白表达[(0.70±0.03)vs(0.24±0.01),(0.661 6±0.020 0)vs(0.255 8±0.040 0),P<0.05]、TF的mRNA和蛋白表达[(0.442±0.040)vs(0.146 0±0.030 0),(0.727 4±0.020 0)vs(0.217 4±0.020 0),P<0.05]。CRP启动了ERK1/2 MAPK,未启动JNKMAPK。CRP上调TF表达被ERK1/2阻断剂而非JNK阻断剂阻断.抗LOX-1的中和抗体显著减少CRP诱导的TF mRNA和蛋白表达[(0.264 0±0.030 0)vs(0.442 0±0.040 0),(0.324 4±0.040 0)vs(0.727 4±0.020 0),P<0.05]。结论CRP诱导HUVECs细胞LOX-1表达上调,并通过LOX-1受体这一新途径上调TF表达,且CRP通过ERK1/2 MAPK信号途径非JNK MAPK途径上调了HUVEC细胞TF的表达。     

金雀异黄素抑制ox-LDL诱导的人脐静脉平滑肌细胞MCP-1表达的信号途径初探

目的研究金雀异黄素抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA和蛋白表达的作用机制.方法采用逆转录聚合酶链反应技术和酶联免疫吸附试验测定细胞中单核细胞趋化蛋白-1mRNA的表达量及蛋白的含量.观察雌激素受体拮抗剂他莫昔芬对金雀异黄素抑制单核细胞趋化蛋白-1表达作用的影响.结果他莫昔芬不能阻断金雀异黄素抑制单核细胞趋化蛋白-1mRNA和蛋白表达的作用(P＞0.05).结论金雀异黄素下调氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达可能主要是通过非雌激素受体途径所介导.