TGF-β1作用下Smad3蛋白在绒癌细胞中的表达

目的：观察不同浓度的转化生长因子β1（transforming growthfactor-β1,TGF-β1）对绒癌细胞系JEG-3细胞Smad3蛋白表达的影响,探讨TGF—D／Smads信号通路在绒癌中的功能状况。方法：以绒癌细胞系JEG-3为研究对象,分别用0ng／ml、100ng／ml及200ng／ml浓度的TGF-β1处理48h后,采用蛋白印迹法检测JEG-3细胞Smad3蛋白的表达。结果：随着TGF-β1浓度的升高,Smad3蛋白的表达水平逐渐升高,呈一定的量效关系。结论：绒癌细胞系JEG-3中不存在Smad3的缺失,且其对外源性TGF-β1刺激具有良好的反应性。     

转化生长因子-β1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法（1）体外培养小鼠足细胞株;（2）应用不同浓度（10^-1～104ng／L）TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;（3）10^3ng／LTGF-β1诱导不同时间（12、24、48h）后观察足细胞凋亡情况;（4）采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3;（5）实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果（1）小鼠足细胞在不同浓度（10^-1～10^4ng／L）TGF-β1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组（均P〈0.05）;（2）随着TGF-β1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高（P〈0．05）;p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达增加;TGF-β1 103ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;（3）与正常对照组比较,10^3ng／LTGF-β1诱导后Caspase3阳性细胞比率显著增加（P〈001）．p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加（P〈0．01）。结论TGF-β1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。     

熊果酸对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨熊果酸（UA）对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法观察UA对SiHa细胞增殖的影响,流式细胞术检测UA对细胞周期和凋亡率的影响,Hoechst33258荧光染色和透射电镜观察凋亡细胞的形态变化,RT-PCR技术检测SiHa细胞中转化生长因子（TGF）-β1mRNA和Smad 4 mRNA表达的变化。结果 UA可明显抑制SiHa细胞生长,并呈时间和浓度依赖趋势（P〈0.05或0.01）;流式细胞术检测发现,UA作用24 h、48 h和72 h后SiHa细胞周期阻滞在G0/G1期,并检测到凋亡峰,凋亡率分别为1.16%、16.37%、18.70%（P〈0.05或0.01）;Hoechst33258荧光染色观察可见胞核染色质不均,呈颗粒状或块状荧光,透射电镜观察出现胞质浓缩、胞核染色质凝聚、边集等典型凋亡细胞核形态变化;RT-PCR检测到TGF-β1mRNA表达减弱,并呈时间依赖趋势,Smad 4 mRNA表达随时间延长而增强。结论熊果酸在体外对SiHa细胞具有抗增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与TGF-β/Smads信号传导通路有关;UA可能通过上调Smad 4的表达恢复TGF-β/Smads信号传导通路,从而诱导细胞凋亡。     

转化生长因子TGF-β诱导成骨细胞自噬活性的实验研究

目的:探讨转化生长因子-β (transforming growth factor-β,TGF-β)对成骨细胞自噬活性的调控作用?方法:应用TGF-β 处理成骨细胞系hFOB1.19细胞,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测hFOB1.19细胞自噬相关基因Beclin 1及微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)在mRNA及蛋白水平的表达变化;透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察TGF-β 处理后成骨细胞自噬小体的形成;SPSS19.0统计软件进行数据分析?结果:与对照组相比,TGF-β处理hFOB1.19细胞3 h后,Beclin 1 mRNA的表达开始下调(P < 0.05),同时LC3 mRNA开始升高,在6 h达到最高(P < 0.05),随后依作用时间的延长不断下降;在TGF-β 作用后3 h,Beclin 1蛋白的表达水平升高,随后6?12?24 h表达量下降(P < 0.05),而LC3-Ⅱ的蛋白表达自TGF-β作用后6 h开始升高,12 h蛋白表达达到最高(P < 0.01);TGF-β 作用后12 h,TEM可观察到细胞中自噬小体形成?结论:TGF-β 能够上调成骨细胞hFOB1.19的自噬活性?     

TGF-β1对白血病KG-1细胞株Gli1表达的影响

目的证明在白血病KG-1细胞株中存在TGF-β信号通路对Gli的调控作用。方法 (1)用0.1、1、10ng/mL TGF-β1分别作用于KG-1细胞,时间分别为6、12、24h。处理结束后收集细胞,提取mRNA,检测Gli1的表达。(2)5ng/mL TGF-β1、5ng/mL TGF-β1联合5μmol SIS3分别作用于KG-1细胞24h。处理结束后收集细胞,提取mRNA,检测Gli1的表达。结果 (1)1～10ng/mL TGF-β1分别作用于KG-1细胞6、12、24h,从12h起并至少持续至24h,其Gli1的mRNA表达较对照组明显减少;(2)5ng/mL TGF-β1、5ng/mL TGF-β1联合5μmol SIS3分别作用于KG-1细胞24h,其Gli1的mRNA表达与对照组比较:5ng/mL TGF-β1组较对照组降低,而5ng/mL TGF-β1联合5μmol SIS3组较对照组明显增高。结论应用TGF-β1可以降低KG-1细胞Gli1的表达,TGF-β1降低KG-1细胞细胞Gli1的表达是通过TGF-β/Smad3途径介导的,可被SIS3所抑制,不依赖于Ptch/Smo途径。     

TGF-β_1作用下JEG-3绒癌细胞Smad7蛋白表达的定量分析

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)作用下JEG-3绒癌细胞中Smad7蛋白的表达情况,探讨TGF-β/Smads信号通路在绒癌中的功能作用.方法:分别用0ng/ml、100ng/ml及200ng/ml的TGF-β1处理JEG-3绒癌细胞48h,采用蛋白印迹法定量检测JEG-3细胞Smad7的表达.结果:JEG-3绒癌细胞系可明确表达Smad7;不同浓度TGF-β1作用下JEG-3细胞Smad7蛋白的表达无明显差别(P＞0.05).结论:绒癌细胞系JEG-3中Smad7对于外源性TGF-β1的刺激无应答反应.     

转化生长因子β_2对人视网膜色素上皮细胞Ⅰ型胶原蛋白表达和Smad 2/3磷酸化水平的影响

目的:探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)表达及细胞内Smad 2/3蛋白磷酸化水平的影响。方法:传代培养人RPE-19细胞,采用不同浓度的TGF-β2(0.1,1,5,10μg/L)分别刺激RPE细胞6,12,24h。RT-PCR测定各个不同浓度、时间干预的RPE细胞COLⅠA2mRNA的表达,Western blot检测COLⅠ蛋白水平表达。选择干预效果最好的TGF-β2浓度刺激RPE细胞,检测各时间点RPE细胞内Smad 2/3蛋白磷酸化水平的变化。结果:不同浓度TGF-β2可刺激RPE细胞COLⅠA2mRNA及COLⅠ蛋白表达上调,其中10μg/L最明显,作用24h达到高峰,为对照组的2.74倍。各组间差异有统计学意义(P<0.05)。在浓度为10μg/L TGF-β2刺激24h后,细胞内Smad 2/3蛋白的磷酸化水平明显升高,是对照组的2.33倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β2能以剂量和时间依赖的方式上调COLⅠA2mRNA及COLⅠ蛋白的表达,这种表达可能与TGF-β/smad通路中Smad 2/3蛋白的磷酸化水平相关。     

Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的探讨Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响。方法将小鼠胚胎成纤维前脂肪细胞3T3-L1诱导分化为成熟脂肪细胞,随机分为对照组、Adropin组、自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组。对照组细胞不予特殊处理,Adropin组细胞加入Adropin (终浓度为1 000 nmol·L-1),自噬激动剂组加入西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),Adropin+自噬激动剂组细胞加入Adropin(终浓度为1 000 nmol·L-1)和西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),继续培养2 h;采用单丹磺酰尸胺染色检测各组细胞中自噬空泡情况,细胞免疫荧光染色法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)表达,采用Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62及PI3K/AKT通路蛋白PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)的表达。结果与对照组比较,Adropin组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。与对照组比较,自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。Adropin+自噬激动剂组与对照组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1、p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与Adropin组比较,自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。与自噬激动剂组比较,Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。4组细胞中PI3K、AKT蛋白相对表达量两两比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论 Adropin可抑制脂肪细胞自噬,其机制可能是通过激活PI3K/AKT通路而实现。     

TRIM21调控人结直肠癌细胞增殖分子机制研究

目的:探讨TRIM21通过正调控转化生长因子-β1(TGF-β1)-Smad2/3信号通路影响人结直肠癌细胞增殖的分子机制。方法:在人结直肠癌细胞HCT116中转染TRIM21 siRNA沉默TRIM21的表达,采用荧光定量PCR和Western blot检测转染效果;采用MTT法检测转染后24 h、48 h、72 h和96 h时的细胞增殖情况,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1的表达;采用Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况;荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad2和Smad3在mRNA水平上的表达,Western blot检测TGF-β1、Smad2/3在蛋白水平上的表达及Smad2/3的磷酸化,验证TRIM21 siRNA转染后对TGF-β1—Smad2/3通路的影响。结果:TRIM21 siRNA转染组HCT116细胞中的TRIM21表达量明显下降(P<0.01),转染后24 h、48 h、72 h和96 h的细胞活力显著高于阴性对照组(P<0.05),Cyclin D1表达量上调(P<0.01)。TRIM21 siRNA转染后的凋亡细胞比例显著下降(P<0.01)。TRIM21 siRNA转染组TGF-β1的表达降低(P<0.01),Smad2和Smad3的表达量基本不变(P>0.05),但Smad2/3的磷酸化水平显著下降(P<0.01)。结论:干扰TRIM21的表达促进人结直肠癌细胞HCT116细胞增殖、抑制凋亡,其作用机制可能与影响TGF-β1—Smad2/3信号通路的激活和CyclinD1表达有关。     

斑蝥素对卵巢癌细胞中Smad3、TGF-β1、c-JUN表达的影响

目的:探讨斑螯素对卵巢癌细胞中Smad3、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、氨基端激酶(cJun N-terminal kinase,c-JUN)表达的影响,探究其抗肿瘤的作用机制。方法:将卵巢癌细胞进行常规复苏培养,选取对数生长期细胞分为两组,观察组加入斑螯素培养,对照组加入体积分数0.1%的DMSO培养。于培养12 h、24 h两个时间点进行检测。采用实时荧光定量PCR法检测(real-time PCR,RT-PCR)卵巢癌细胞中Smad3、TGF-β1、c-JUN的mRNA水平。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测卵巢癌细胞中Smad3、TGF-β1、c-JUN的蛋白水平。分析Smad3、TGF-β1、c-JUN的mRNA与其蛋白水平的相关性,以及斑螯素对Smad3、TGF-β1、c-JUN表达的影响。结果:观察组24 h时,卵巢癌细胞中Smad3、TGF-β1、c-JUN的mRNA及蛋白水平均显著低于12 h(P0.05),其细胞增殖抑制率显著高于12 h(P0.01)。对照组24 h时,卵巢癌细胞中Smad3、TGF-β1、c-JUN的mRNA及蛋白水平均显著高于12 h(P0.05),其细胞增殖抑制率与12 h比较,差异无统计学意义(P0.05);在培养12 h、24 h时,观察组卵巢癌细胞中Smad3、TGF-β1、c-JUN的mRNA及蛋白水平分别低于对照组12 h、24 h的水平(P0.05),其细胞增殖抑制率显著高于对照组(P0.01);各组不同时间点卵巢癌细胞中Smad3、TGF-β1、c-JUN的mRNA分别与其蛋白表达呈正相关(r0)。结论:斑螯素抗肿瘤、抑制细胞的增殖作用与卵巢癌细胞Smad3、TGF-β1、c-JUN的表达有密切关系。     

NS-398通过转化生长因子-β/Smad信号通路对肾小球系膜细胞环氧化酶-2表达的影响

目的:探讨COX-2抑制剂NS-398对转化生长因子-β(TGF-β)影响肾小球系膜细胞表达环氧化酶-2(COX-2)及Smad2 mRNA表达的作用。方法:传代培养系膜细胞后取第4代系膜细胞进行分组实验,用RT-PCR方法测定各组COX-2 mRNA及Smad2 mRNA的表达,观察不同浓度TGF-β在4、12、24h对COX-2 mRNA及Smad2 mRNA表达的影响,及NS-398对其的抑制作用。结果:不同浓度TGF-β作用不同时间后,系膜细胞COX-2 mRNA和Smad2 mRNA表达均增加,呈浓度和时间依赖性。与TGF-β组相比,加入COX-2抑制剂NS-398后,COX-2 mRNA和Smad2 mRNA表达均减少。结论:TGF-β刺激肾小球系膜细胞COX-2表达的信号通路之一是Smad信号通路。而COX-2抑制剂NS-398对COX-2表达的抑制机制之一是通过此信号通路。     

肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的:观察肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞(MC)TGF-β1/Smad信号通路的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的分子作用机制。方法:体外培养大鼠MC,将细胞分为6组,培养72 h后,ELISA法检测MC上清中TGF-β1含量;RT-PCR法检测MC中TGF-β1mRNA表达;Western blot法检测MC中Smad 2、3和7蛋白表达。结果:与正常葡萄糖组比较,高糖组MC上清中TGF-β1含量增加,MC中TGF-β1mRNA表达上调(P<0.01),Smad 2和3蛋白表达增加,而Smad 7蛋白表达降低。肾康丸和开搏通治疗后可以降低高糖诱导的TGF-β1分泌和mRNA表达的增加(P<0.01或P<0.05);减少Smad 2、3蛋白的表达,增加Smad 7蛋白的表达。结论:肾康丸可以抑制高糖激活MC细胞中TGF-β1/Smad信号通路。     

阿魏酸联合脂肪间充质干细胞调节TGF-β/Smad信号转导通路对肝星状细胞凋亡的影响研究

目的 探讨阿魏酸(FA)联用大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)调节TGF-β/Smad信号转导通路对肝星状细胞(HSCs)凋亡的影响.方法 实验将HSCs分为4组:空白组、FA组、ADMSCs组、FA+ADMSCs组.流式细胞术检测各组HSCs的凋亡率;qRT-PCR检测HSCs中TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达水平;Western blot检测HSCs中TGF-β1和Smad7蛋白、Smad2/3磷酸化(p-Smad2/3)表达变化.结果 与其他3组比较,FA+ ADMSCs中HSCs凋亡率明显升高(P＜0.05);TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达明显下降,Smad7 mRNA表达明显升高(P＜0.05);TGF-β1蛋白、p-Smad2/3表达明显降低,而Smad7蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论 FA能增强ADMSCs对HSCs中TGF-β1表达的下调作用,进而导致下游p-Smad2/3活性下降及Smad7表达升高,从而参与促进细胞凋亡.     

泛素系统在人近端小管上皮细胞Smad信号传导通路中的作用

目的:观察Smad7在TGF-β致近端小管上皮细胞转分化中的变化,泛素系统对该过程中Smad信号的调节及对TGF-β所致的小管上皮细胞转分化的作用。方法:体外培养的人近端小管上皮细胞(HK-2),随机分为对照组、TGF-β1(5μg/L)组和TGF-β1(5μg/L)+MG-132(5 mmol/L)组。Western blot检测细胞中Smad2/3磷酸化水平的改变和Smad7蛋白水平的改变;半定量RT-PCR方法观察细胞中Smad7 mRNA表达的改变。结果:West-ern blot的结果显示:①MG-132+TGF-β1组中,Smad2/3磷酸化蛋白的表达减少90%(P<0.01)。②TGF-β1作用于细胞后,Smad7蛋白表达进行性减少,30 min较0 min降低20%(P<0.05),24 h时几乎无表达(P<0.01);MG-132+TGF-β1组中Smad7蛋白表达与对照组无明显差异,与TGF-β1组相比,Smad7蛋白水平上调。③半定量RT-PCR显示:TGF-β1(5μg/L)作用于细胞后,与Smad7蛋白表达不同,Smad7 mRNA迅速升高,24 h其表达增高近1倍(与0 min比较,P<0.01);MG-132+TGF-β1组中Smad7 mRNA的表达与对照组无明显差异。结论:TGF-β可诱导Smad7 mRNA表达上调,但Smad7蛋白的表达显著减少,其机制与泛素系统活化导致Smad7蛋白的降解增加有关。     

桔梗皂苷D基于TGF-β/Smad通路调控上皮-间质转化对人子宫内膜癌Ishiwaka细胞迁移及侵袭的作用

目的 探讨桔梗皂苷D调控上皮间质转化（EMT）对人子宫内膜癌Ishiwaka细胞迁移、侵袭的影响,及对转化生长因子β（TGF-β）/Smad信号通路的调节作用。方法 取第4代对数生长期的人子宫内膜癌Ishiwaka细胞,随机分为对照组、桔梗皂苷D组、激动剂组和桔梗皂苷D+激动剂组。桔梗皂苷D组细胞加入桔梗皂苷D 18 μmol/L培养24 h,激动剂组细胞加入重组人TGF-β 20 ng/mL刺激24 h,桔梗皂苷D组+激动剂组细胞先加入重组人TGF-β 20 ng/mL刺激24 h后,再加入桔梗皂苷D培养24 h。MTT法检测细胞存活率,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力及蛋白印迹法检测TGF-β1、p-smad2/3、上皮钙粘蛋白（E-cad）和神经钙粘蛋白（N-cad）相对表达量。结果 与对照组比较,桔梗皂苷D组细胞存活率及TGF-β1、p-smad2/3和N-cad蛋白相对表达量降低,细胞迁移和侵袭能力减弱,E-cad蛋白相对表达量升高,激动剂组TGF-β1、p-smad2/3和N-cad蛋白相对表达量升高,细胞迁移和侵袭能力增强,E-cad蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与桔梗皂苷组比较,桔梗皂苷D+激动剂组细胞存活率及TGF-β1、p-smad2/3和N-cad蛋白相对表达量升高,细胞迁移和侵袭能力增强,E-cad蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与激动剂组比较,桔梗皂苷D+激动剂组细胞存活率及TGF-β1、p-smad2/3和N-cad蛋白相对表达量降低,细胞迁移和侵袭能力减弱,E-cad蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。结论 桔梗皂苷D可能通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路调控上皮间质转化降低人子宫内膜癌Ishiwaka细胞迁移及侵袭能力。     

鹿茸Ⅰ型胶原对MC3T3-E1细胞TGF-β1/Smad基因蛋白表达的影响

目的研究梅花鹿茸I型胶原(SDC-I)对MC3T3-E1细胞TGF-β1及Smad2/3基因蛋白的影响,探究SDC-I治疗骨质疏松的作用机制。方法分别用不同浓度的SDC-I处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1。采用MTT法检测MC3T3-E1细胞增殖活性;应用RT-PCR及ELISA方法检测MC3T3-E1细胞TGF-β1/Smad通路相关因子TGF-β1、Smad2和Smad3的m RNA及蛋白表达水平。结果 SDC-I促进MC3T3-E1细胞的增殖;SDC-I不同浓度作用于MC3T3-E1细胞48 h以后,能显著上调TGF-β1、Smad2以及Smad3基因蛋白表达的水平。与空白对照组相比具有显著性差异,同时SDC-I的浓度越高,效果越明显。结论 SDC-I能刺激MC3T3-E1细胞Smad 2/3和TGF-β1的表达,可通过TGF-β1/Smad信号通路促进骨的形成,为骨质疏松症的防治提供理论依据。     

Smad3选择性调节TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）信号转导通路下游信号分子Smad2、Smad3在TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）成骨分化中的作用。方法采用RT-PCR、Western blot检测TGF-β1促MSCs成骨分化过程中Smad2、Smad3mRNA和蛋白表达的变化;脂质体介导稳定转染Smad3ΔC,间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶（ALP）和核心结合因子（cbfa1）mRNA的表达,用对硝基苯磷酸盐（PNP）法检测细胞ALP活性,用茜素红染色法检测细胞矿化能力,观察Smad3ΔC对MSCs成骨分化的影响。结果在TGF-β1刺激后24h,MSCs中Smad3的mRNA和蛋白表达量明显减少（P〈0.01）,而整个刺激过程中,Smad2的mRNA和蛋白表达量无明显变化（P〉0.05）;稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSCs和V-MSCs（空载体转染组）中ALP、cbfa1mRNA的表达水平、矿化能力明显高于Smad3ΔC-MSCs;随TGF-β1刺激时间延长,Smad3ΔC-MSCs中ALP活性增加缓慢,仅于48h有明显增加（P〈0.05）,但与同时段MSCs和V-MSCs中ALP活性相比,差异有极显著性意义（P〈0.01）。结论TGF-β1促进MSCs成骨分化这一生物学效应的输出受Smad3特异性和选择性的调节。     

尿酸对人尿道成纤维细胞TGF-β1、Smad3的影响

目的 观察人尿道成纤维细胞在尿液、尿酸刺激下TGF-β1、Smad3的表达变化,探讨尿道瘢痕的形成机制.方法 体外培养人尿道成纤维细胞,以尿液、350 μmol/L浓度的尿酸刺激溶液刺激人尿道成纤维细胞,通过免疫荧光染色和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测各组细胞TGF-β1、Smad3因子表达变化,ELISA法比较各组细胞上清液Ⅰ型胶原蛋白差异.结果 免疫荧光检测提示TGF-β1与Smad3蛋白在人尿道成纤维细胞中均有表达,尿液及生理浓度的尿酸刺激后,TGF-β1与Smad3的mRNA表达上调,蛋白表达明显升高(P＜0.05);ELISA法检测显示,尿液和尿酸刺激人尿道成纤维细胞24、48 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量显著升高(P＜0.05).结论 尿酸刺激引起人尿道成纤维细胞TGF-β1、Smad3的表达升高;尿酸可能对尿道瘢痕的形成起促进作用.     

丹参酮ⅡA对肺纤维化细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导大鼠肺成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响,阐明丹参酮ⅡA干预肺纤维化的机制。方法：体外培养大鼠肺成纤维细胞,经TGF-β1、TGF-β1/丹参酮ⅡA处理24h,用ELISA法测定细胞中TGF-β1受体表达情况,荧光定量PCR法及免疫印迹法检测Smad2、Smad7表达情况。 结果：TGF-β1处理后TGF-β1受体和Smad2表达量增加,Smad7表达量降低,丹参酮ⅡA处理后TGF-β1受体和Smad2的表达量均有下降趋势,Smad7表达量升高。结论：丹参酮ⅡA可以抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Smad2及TGF-β1受体表达,增强抑制性信号蛋白Smad7的表达,从而发挥抑制肺纤维化的作用。     

转化生长因子β1刺激系膜细胞的Smad2表达及对结缔组织生长因子产生的影响

目的研究在转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激下系膜细胞表达Smad2及对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)产生的影响.方法培养第4代大鼠肾系膜细胞分为4组对照组、1ng/ml TGF-β1刺激组、5ng/ml TGF-β1刺激组、Staurosporine抑制组.在15min、30min、1 h、2 h时用RT-PCR测Smad2 mRNA的表达,用免疫组化测Smad2蛋白的表达;同样在24h时用RT-PCR测CTGF mRNA的表达,用免疫组化测CTGF蛋白的表达.结果体外培养的大鼠肾系膜细胞,在TGF-β1刺激下,Smad2 CTGFmRNA和蛋白的表达明显增加(P＜0.05),应用丝、苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine抑制Smad2磷酸化,可以明显减少TGF-β1刺激下系膜细胞表达CTGF(P＜0.05).结论在系膜细胞,TGF-β1主要依赖Smad信号通路调节CTGF的表达.