miR-181a-5p调控LIF的表达调节胰腺腺泡细胞凋亡的分子机制

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病迅速,并发全身感染,因此早期的高效治疗对控制病情起到关键作用.微小RNA(microRNA, miRNA)在AP中的作用机制及临床应用的研究成为近几年的热点.其在AP发生发展及转归中的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新思路.目的探讨miR-181a-5p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J凋亡的影响及机制.方法运用ELISA法检测雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞中AMY、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达;将Cerulein+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Cerulein+si-con组(转染si-con)、Cerulein+si-白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)组(转染si-LIF),均用脂质体法转染至AR42J细胞,再用15 nmol/L的雨蛙素处理8h;流式细胞术法检测各组细胞的凋亡; qRT-PCR检测各组细胞中miR-181a-5p mRNA和LIF mRNA的表达; Western blot检测各组细胞中LIF、caspase-3的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性.结果与对照组相比,雨蛙素处理8 h是AMY、TNF-α和IL-6的含量均升高的时间点,且细胞凋亡率显著降低(P 0.05);与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-181a-5p mRNA表达显著下调, LIF mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05);过表达miR-181a-5p、敲减LIF均可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡的促进作用; miR-181a-5p可抑制野生型LIF细胞的荧光活性,且可负向调控LIF的蛋白表达.结论 miR-181a-5p可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞的凋亡,其机制可能与靶向LIF有关,将可为AP的治疗提供新方向.     

miR-181a-5p靶向PIAS1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)引起的急性炎症对人们健康的危害性极大,严重时会危及生命.其发病机制复杂,尚未完全清楚,研究发现miRNA参与了AP的发病过程.研究发现miR-181a-5p可抑制癌细胞迁移、侵袭和血管生成; miR-181a-5p还能抑制胃癌细胞增殖、侵袭,转移和上皮间充质转化.抑制miR-181a-5p表达可通过负向靶向INPP5A抑制细胞增殖和侵袭,增强宫颈癌细胞凋亡. miR-181a可抑制胰腺癌细胞系的生长、减少迁移,增加凋亡.但miR-181a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-181a-5p对AP腺泡细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法用100nmol/L的雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J和MPC-83构建AP模型,设置Con组、Caerulein组、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-181a-5p组(转染miR-181a-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Caerulein+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p后进行Caerulein处)、Caerulein+pcDNA组(转染pcDNA后进行Caerulein处理)、Caerulein+pcDNA-PIAS1组(转染pcDNA-PIAS1后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-NC组(anti-miR-181a-5p和si-NC共转染后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+siPIAS1组(anti-miR-181a-5p和si-PIAS1共转染后进行Caerulein处理),用脂质体法转染至AR42J和MPC-83细胞.酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达;qRT-PCR检测AR42J和MPC-83细胞中miR-181a-5p、PIAS1mRNA的表达水平; Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞后, TNF-α和IL-6的表达显著升高; miR-181a-5p的表达水平显著升高;PIAS1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低. miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达抑制TNF-α和IL-6的表达,抑制细胞凋亡. miR-181a-5p靶向负调控PIAS1;抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用.结论抑制miR-181a-5p表达可以抑制雨蛙肽诱导的AP腺泡细胞损伤,其机制可能与靶向调控PIAS1有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

miR-21对急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-21对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞凋亡的影响及其机制。方法以雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,构建AP模型;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞中淀粉酶(AMY)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6检测造模情况。采用RT-PCR检测miR-21的表达;以脂质体转染miRNA-21 inhibitor后,流式细胞仪检测AR42J细胞凋亡,Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切caspase)-3与第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达。结果雨蛙素处理后,AR42J细胞中AMY、TNF-α和IL-6的表达均升高,建模成功。miR-21在AP环境下低表达,转染miRNA-21 inhibitor后,由雨蛙素诱导的细胞凋亡明显受到抑制,PTEN蛋白表达上调,酶切caspase-3蛋白表达下调。结论 miR-21在AP腺泡细胞中低表达,可能通过上调PTEN和下调酶切caspase-3蛋白表达抑制胰腺腺泡细胞凋亡,进而加重胰腺炎的发展。     

miR-216a-5p调控XIAP对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响

背景重症急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是消化系统常见的危重急症,临床救治难度大,病死率高,严重危及患者生命.近几年来多种miRNA在AP中的差异表达,与其发生发展及诊断和预后密切相关,进一步探索其在AP发生发展、并发症等各环节的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新的思路和方法.研究发现miR-216a-5p通过下调MMP16可抑制肺癌细胞的侵袭; miR-216a-5p通过靶向抑制PAK2基因可抑制膀胱癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡. miR-216a-5p可抑制小细胞肺癌的恶性进展,影响前列腺癌细胞的增殖、迁移和宫颈癌细胞的肿瘤发生.仅发现miR-216a在AP患者外周血中高表达,但miR-216a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-216a-5p对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制.方法用雨蛙素(caerulein, CAE)处理大鼠胰腺腺泡AR42J构建AP模型,设置miR-NC组(转染miR-NC)、miR-216a-5p组(miR-216a-5pmimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-216a-5p组(转染anti-miR-216a-5p)、pcDNA3.1组(转染pc DNA3.1)、pcDNA3.1-XIAP组(转染pcDNA3.1-XIAP)、anti-miR-216a-5p+si-NC组(共转染anti-miR-216a-5p和si-NC)、anti-miR-216a-5p+si-XIAP(共转染anti-miR-216a-5p和si-XIAP)组,均用脂质体法转染. qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-216a-5p的表达水平; Western Blot检测蛋白表达; MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果CAE处理AR42J细胞后,miR-216a-5p的表达水平显著升高(P0.05).抑制表达miR-216a-5p和过表达XIAP细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低, Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著升高,P21、Bax蛋白的表达水平显著下降(P0.05). miR-216a-5p靶向负调控XIAP;抑制XIAP表达逆转了抑制miR-216a-5p对CAE处理的AR42J细胞增殖促进、凋亡抑制的作用.结论抑制miR-216a-5p表达可以抑制胰腺炎腺泡细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能与靶向调控XIAP有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

miR-375调控PIAS1对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨微小RNA-375(miR-375)对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞增殖及凋亡的影响及其对信号转导和转录激活子1的活化抑制蛋白(PIAS1)的调控作用。方法用雨蛙素(CAE)处理胰腺腺泡细胞株(AR42J细胞)构建AP模型,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹分别检测miR-375与PIAS1的表达。利用脂质体转染技术分别将anti-miR-NC、anti-miR-375、si-NC、si-PIAS1转染至AR42J细胞,同时将anti-miR-375与si-NC、si-PIAS1分别共转染至AR42J细胞后加入CAE处理细胞。噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞仪分别检测AR42J细胞增殖及凋亡。双荧光素酶报告基因实验检测miR-375对PIAS1的靶向作用。Western印迹检测CyclinD1、P21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果 CAE处理后AR42J细胞中miR-375的表达升高,而PIAS1的表达降低;双荧光素酶报告基因实验证实PIAS1是miR-375的直接靶点;转染anti-miR-375后,由CAE诱导的AR42J细胞凋亡明显受到抑制,而细胞增殖能力明显增强,CyclinD1、Bcl-2蛋白表达上调,P21、Bax蛋白表达下调(均P<0.05);共转染si-PIAS1后,明显促进CAE诱导的AR42J细胞凋亡,而抑制细胞增殖,CyclinD1、Bcl-2蛋白表达下调,P21、Bax蛋白表达上调(均P<0.05)。结论 miR-375在AP腺泡细胞中高表达,而PIAS1低表达,沉默miR-375可通过上调PIAS1表达而抑制腺泡细胞凋亡并促进细胞增殖进而减缓AP发展进程。     

MiR-499靶向HMGB1保护缺氧复氧心肌细胞损伤的分子机制探讨

目的研究miR-499对缺氧复氧心肌细胞H9c2损伤的影响,并探讨其作用机制。方法运用免疫印迹法(Western blot)检测缺氧复氧心肌细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、免抗人单克隆抗体(Bax)、caspase-3的蛋白表达;将H/R+miR-con组(转染miRcon)、H/R+miR-499组(转染miR-499 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、miR-499组(转染miR-499mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-499组(转染anti-miR-499)、H/R+si-con组(转染si-con)、H/R+si-HMGB1组(转染si-HMGB1)、H/R+miR-499+Ctrl组(miR-499 mimics和pcDNA3.1共转染)、H/R+miR-499+HMGB1组(miR-499 mimics和pcDNA3.1-HMGB1共转染),均以脂质体法转染至H9c2细胞;实时荧光定量聚合酶链锁反应(q RT-PCR)检测各组细胞中miR-499的表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与NC组相比,H/R组细胞中HMGB1蛋白表达显著升高,miR-499表达显著降低(P0.05);过表达miR-499或敲减HMGB1均可显著下调H/R H9c2细胞凋亡率,显著下调Bax、caspase-3的蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达(P均0.05);过表达HMGB1可逆转miR-499对H/R H9c2细胞凋亡的抑制作用。结论 MiR-499可抑制缺氧复氧心肌细胞H9c2凋亡,保护心肌细胞,其机制与靶向HMGB1有关,将可为心脏病的治疗提供新靶点。     

miR-324-5p靶向调控CARD9对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨微小RNA-324-5p(miR-324-5p)靶向调控胱天蛋白酶募集域蛋白(CARD)9对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法采用雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建急性胰腺炎模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与Western印迹技术分别检测miR-324-5p、CARD9 mRNA及蛋白表达。应用脂质体转染技术分别将miR-NC、miR-324-5p mimic、si-NC、si-CARD9转染入AP腺泡AR42J细胞,噻唑蓝(MTT)与流式细胞仪分别检测AR42J细胞增殖及凋亡。双荧光素酶报告实验验证CARD9与miR-324-5p的作用关系。Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、Bcl-2、Bax、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3蛋白表达。结果雨蛙肽素处理后AR42J细胞中miR-324-5p表达水平显著低于对照组,而CARD9 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);分别转染miR-324-5p mimic、si-CARD9后,由雨蛙肽素诱导的AR42J细胞凋亡明显受到抑制,而细胞增殖能力明显增强,CyclinD1、Bcl-2蛋白表达上调,p21、p27、Bax、酶切caspase-3蛋白表达下调(均P<0.05);CARD9是miR-324-5p的靶基因;CARD9过表达逆转了miR-324-5p过表达对雨蛙肽诱导的胰腺炎腺泡细胞AR42J增殖和凋亡的作用。结论miR-324-5p可通过抑制CARD9表达进而促进AR42J细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

miR-217靶向SPRY1调控血管内皮细胞增殖和凋亡的分子机制

目的探讨miR-217对血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法运用25μmol/ml高糖建立血管内皮细胞EAhy926损伤;运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-217、软脂酰化磷蛋白(SPRY1)的表达;将HG+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、HG+anti-miR-217组(转染anti-miR-217)、HG+pcDNA组(转染pcDNA)、HG+pcDNA-SPRY1组(转染pcDNA-SPRY1)、HG+anti-miR-217+si-con组(共转染anti-miR-217和si-con)、HG+anti-miR-217+si-SPRY1组(共转染anti-miR-217和si-SPRY1)用脂质体法转染至EAhy926细胞,再用高糖处理;Western印迹检测细胞中SPRY1、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测miR-217与SPRY1的靶向结合关系。结果成功建立高糖诱导的血管内皮细胞EAhy926;与NG组相比,HG组细胞中miR-217表达明显上调,SPRY1表达明显下调(P 0.05);抑制miR-217、过表达SPRY1均可促进高糖诱导的EAhy926细胞增殖,抑制凋亡,上调p21、Bcl-2,下调Bax;miR-217可抑制野生型SPRY1细胞的荧光活性,负向调控SPRY1表达;敲减SPRY1可逆转抑制miR-217对高糖诱导的EAhy926细胞增殖、凋亡的调控及相关蛋白表达的影响。结论 miR-217可调控血管内皮细胞的增殖、凋亡,其机制可能与靶向SPRY1有关,可为高糖引起的心血管疾病的治疗提供新方向。     

miR-370靶向FoxO1抑制TNF-α诱导的肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 研究miR-370对肿瘤坏死因子(TNF)-α 诱导的肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制.方法 运用溴化噻唑蓝四唑(MTT)法、Transwell法检测TNF-α处理的肝癌细胞HepG-2的增殖、迁移和侵袭;用脂质体法将pcDNA(TNF-α+pcDNA组)、pcDNA-叉头框基因(Fox)O1(TNF-α+pcDNA-FoxO1组)、anti-miR-con(TNF-α+anti-miR-con组)、anti-miR-370(TNF-α+anti-miR-370组)、anti-miR-370和si-con(TNF-α+anti-miR-370+si-con组)、anti-miR-370和si-FoxO1(TNF-α+anti-miR-370+si-FoxO1组)转染至HepG-2细胞,再用TNF-α处理48 h;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性.结果 与对照组相比,TNF-α 处理的肝癌细胞HepG-2中细胞增殖、迁移和侵袭均显著升高,FoxO1表达显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);过表达FoxO1、抑制miR-370均可抑制TNF-α 对HepG-2细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用;miR-370可抑制野生型FoxO1细胞的荧光活性,并负向调控FoxO1的蛋白;敲减FoxO1可逆转抑制miR-370对TNF-α诱导的肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用.结论 抑制miR-370可靶向FoxO1抑制TNF-α 诱导的肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,miR-370可能是肝癌的潜在分子靶点.     

lncRNA PCAT19靶向miR-143-3p通过信号通路PI3K/Akt对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨lncRNA PCAT19对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法实验分为miR-con组、miR-143-3p组、si-con组、si-PCAT19组、pcDNA组、pcDNA-PCAT19组、si-PCAT19+anti-miR-con组、si-PCAT19+anti-miR-143-3p组、miR-con+WT-PCAT19组、miR-con+MUT-PCAT19组、miR-143-3p+WT-PCAT19组、miR-143-3p+MUT-PCAT19组。qRT-PCR检测miR-143-3p和PCAT19的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测PCAT19和miR-143-3p的靶向关系。结果相较于正常甲状腺细胞HT-ori3,甲状腺癌细胞BCPAP、TPC-1、SW1736中PCAT19的表达水平显著升高,miR-143-3p的表达水平显著降低(P<0.05)。敲低PCAT19和高表达miR-143-3p抑制甲状腺癌细胞BCPAP增殖,促进细胞凋亡;促进裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3蛋白的表达,抑制细胞周期蛋白(Cyclin)D1的表达。PCAT19靶向负调控miR-143-3p,miR-143-3p低表达可以部分逆转PCAT19低表达对BCPAP细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。敲低PCAT19抑制p-AKT和磷脂酰肌醇3-激酶的p1102催化亚基(PI3Kp110α)的表达,miR-143-3p低表达可逆转PCAT19低表达对p-AKT和PI3Kp110α的抑制作用。结论lncRNA PCAT19可抑制甲状腺癌细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与miR-143-3p及PI3K/AKT信号通路有关。     

普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制

[目的]探讨普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制。[方法] N9细胞、PC12细胞分为对照组、缺氧组、低、中、高剂量普鲁卡因组(缺氧+2、6、18 mg/L普鲁卡因)、anti-miR-con组、anti-miR-369-3p组、miR-con+高剂量普鲁卡因组(转染miR-con+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)、miR-369-3p+高剂量普鲁卡因组(转染miR-369-3p+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)。流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,RT-qPCR检测miR-369-3p表达水平。[结果]相比于对照组,缺氧组N9细胞、PC12细胞凋亡率升高,MDA、ROS含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,miR-369-3p表达水平升高(P<0.05)。相比于缺氧组,低、中、高剂量普鲁卡因组N9细胞和PC12细胞凋亡率降低,MDA、ROS含量...     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

沙利度胺通过miR-29c-3p/TGIF2途径调控血管内皮细胞增殖凋亡的分子机制

目的研究沙利度胺对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用qRT-PCR检测沙利度胺处理的HUVECs细胞中miR-29c-3p、同源异型结构域蛋白转化生长影响因子(TGIF)2的表达;miR-29c-3p组(转染miR-29c-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、沙利度胺+anti-miR-29c-3p组(转染anti-miR-29c-3p再用沙利度胺处理)、沙利度胺+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC再用沙利度胺处理)、si-con组(转染si-con)、si-TGIF2组(转染si-TGIF2)、沙利度胺+pcDNA组(转染pcDNA再用沙利度胺处理)、沙利度胺+pcDNA-TGIF2组(转染pcDNA-TGIF2再用沙利度胺处理)均用脂质体转染至HUVECs,再用20μg/ml沙利度胺处理48 h;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测各组细胞中TGIF2的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组HUVECs细胞相比,沙利度胺处理的HUVECs增殖显著下降,细胞凋亡率和miR-29c-3p的表达明显上升(P0.05);过表达miR-29c-3p、敲减TGIF2均可抑制HUVECs增殖,促进凋亡;抑制miR-29c-3p、过表达TGIF2均可逆转沙利度胺对HUVECs的增殖抑制和凋亡促进作用。miR-29c-3p靶向TGIF2。结论沙利度胺可抑制血管内皮细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与调控miR-29c-3p/TGIF2信号通路有关,为沙利度胺用于疾病治疗提供依据。     

miR-141-3p靶向CBX1抑制乳腺癌细胞增殖和细胞迁移侵袭

目的探讨miR-141-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法实验设置miR-con组、miR-141-3p组、si-con组、si-染色体同源物(CBX)1组、anti-miR-con组、anti-miR-141-3p组、miR-141-3p+pcDNA组、miR-141-3p+pcDNA-CBX1组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p和CBX1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与正常乳腺细胞HBL-100相比,乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和BT474中miR-141-3p的表达水平显著降低,CBX1的表达水平显著升高(P0.05);过表达miR-141-3p、沉默CBX1均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CBX1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-141-3p靶向调控CBX1的表达,过表达CBX1能逆转miR-141-3p对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-141-3p可能通过下调CBX1表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

LncRNA LUCAT1通过靶向miR-199a-5p调控宫颈癌细胞活性、侵袭迁移及其分子机制

目的研究长链非编码RNA肺癌相关转录产物(LUCAT)1对宫颈癌细胞的活性、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞Hela、正常宫颈细胞Ect1/E6E7中LUCAT1、miR-199a-5p的表达;将si-con组(转染si-con)、si-LUCAT1组(转染si-LUCAT1)、miR-199a-5p组(转染miR-199a-5p模拟物)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-con+anti-miR-199a-5p组(共转染si-con和anti-miR-199a-5p)、si-LUCAT1+anti-miR-199a-5p组(共转染si-LUCAT1和anti-miR-199a-5p),均用脂质体法转染至Hela细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Hela中LUCAT1表达显著升高,miR-199a-5p表达显著降低;敲减LUCAT1、过表达miR-199a-5p均可明显抑制Hela细胞的活性、迁移和侵袭;miR-199a-5p可抑制野生型LUCAT1细胞的荧光活性,且LUCAT1可负向调控miR-199a-5p的表达;抑制miR-199a-5p可逆转敲减LUCAT1对Hela细胞的活性、迁移、侵袭的抑制作用。结论 LUCAT1可促进宫颈癌细胞的活性、迁移、侵袭,其机制可能与靶向miR-199a-5p有关,将可为宫颈癌的治疗提供靶点。     

miR-183靶向DDR1调控乳腺癌细胞迁移侵袭的分子机制

目的研究miR-183对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、正常细胞MCF-10A中miR-183、盘状结构域受体(DDR)1的表达;将miR-183组(转染miR-183 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con),miR-183+pcDNA组(共转染miR-183 mimics和pcDNA)、miR-183+pcDNA-DDR1组(共转染miR-183 mimics和pcDNA-DDR1)均用脂质体法转染至MDA-MB-231细胞;MTT和Transwell法检测各组细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-183表达显著降低,DDR1表达显著升高(P0.05);过表达miR-183、敲减DDR1均可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-183可靶向负调控DDR1表达;过表达DDR1可逆转miR-183对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-183可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向DDR1有关,可为乳腺癌的治疗提供新靶点。     

miR-194-5p靶向MEX3A调控肝癌细胞活性和凋亡的机制

目的研究miR-194-5p对肝癌细胞活性和凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测肝癌细胞HepG2、正常肝细胞L02中miR-194-5p和MEX3A的表达;根据分组:miR-194-5p组(转染miR-194-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-MEX3A组(转染si-MEX3A)、si-con组(转染si-con)、miR-194-5p+pcDNA-MEX3A组(共转染miR-194-5p mimics和pcDNA-MEX3A)、miR-194-5p+pcDNA组(共转染miR-194-5p mimics和pcDNA),均用脂质体法将相关质粒转染至HepG2;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2中miR-194-5p表达明显降低,MEX3A表达明显升高(P0.05);过表达miR-194-5p、敲减MEX3A均可抑制HepG2细胞的活性,促进细胞凋亡;miR-194-5p可抑制野生型MEX3A细胞的荧光活性;过表达MEX3A能逆转miR-194-5p对HepG2细胞活性的抑制和凋亡的促进作用。结论 miR-194-5p可抑制肝癌细胞的活性,促进凋亡,其机制可能与靶向MEX3A有关,将可为肝癌的治疗提供新靶点。     

雨蛙素诱导的急性胰腺炎体外细胞模型的信号转导通路研究

目的 观察急性胰腺炎(AP)体外细胞模型Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)信号转导通路及细胞因子表达的变化,探讨其机制.方法 应用雨蛙素处理大鼠胰腺外分泌细胞株AR42J细胞建立AP体外模型,再用雷帕霉素(RPM)及AG490干预.采用Western blotting检测细胞JAK1、磷酸化JAK1(P-JAK1)、STAT1、P-STAT1及TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达水平;RT-PCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达;台盼蓝染色测定细胞存活率.结果 未经雨蛙素处理的AR42J细胞的JAK1、P-JAK1、STAT1、P-STAT1及TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白的相对表达量分别为0.09±0.04、0.14±0.08、0.21±0.09、0.12±0.12、0.10±0.02、0.08±0.03、0.02±0.02.雨蛙素处理后,AR42J细胞上述蛋白的表达呈时间依赖性增加,24 h时的表达量分别为0.53±0.09、0.53±0.13、0.56±0.09、0.55±0.10、0.25±0.04、0.25±0.09、0.27±0.07,均较雨蛙素未处理组显著增加(P＜0.05).再分别应用RPM和AG490抑制24 h后,细胞TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达量显著降低到0.17±0.03和0.17±0.01、0.15±0.05和0.14±0.07、0.19±0.04和0.19±0.05,它们的mRNA表达量也显著降低(P值均＜0.05);RPM和AG490抑制组的细胞存活率分别为(72.4±11.2)%、(69.7±9.8)%,均显著高于单用雨蛙素处理细胞组的(42.2±12.3)%(P＜0.05).结论 JAK1/STAT1信号通路早期参与雨蛙素诱导的AP细胞促炎症细胞因子释放.早期抑制JAK1/STAT1信号通路有利于控制AP的炎症反应.     

circ＿0081666/miR-330-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的 探讨circ＿0081666对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 选取30例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁组织；A549细胞分为si-con组(转染si-con)、si-circ＿0081666组(转染si-circ＿0081666)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ＿0081666组(转染pcDNA-circ＿0081666)、miR-con组(转染miR-con)、miR-330-5p组(转染miR-330-5p)、si-circ＿0081666+anti-miR-con组(共转染si-circ＿0081666和anti-miR-con)、si-circ＿0081666+anti-miR-330-5p组(共转染si-circ＿0081666和anti-miR-330-5p)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circ＿0081666和miR-330-5p表达水平；四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性；Transwell检测细胞迁移和侵袭；双荧光素酶报告实验检测circ＿0081666和miR-330-5p的靶向关系。结果...