尼古丁所致宫内发育迟缓发生的 HPA 轴相关神经内分泌干扰机制研究

目的：探讨孕期尼古丁暴露是否存在母源性糖皮质激素过暴露现象,以及尼古丁所致宫内发育迟缓（ IUGR）发生的下丘脑－垂体－肾上腺轴（ HPA轴）相关神经内分泌干扰机制。方法健康Wistar雌性大鼠32只,雄性大鼠16只,将孕鼠随机分为4组,尼古丁组从孕12 d起皮下注射尼古丁0．5 mg／kg （小剂量组）、1．0 mg／kg（中剂量组）和2．0 mg／kg（大剂量组）,每天分2次给予,给药容积为2 mL／kg,直至孕20 d。正常对照组给予等容量的生理盐水。7．5％乙二胺四乙酸抗凝,制备血浆,用于检测皮质酮（ CORT）和促肾上腺皮质激素（ ACTH）。在正常对照组和尼古丁大剂量组中各选取1只胎鼠,取胎脑、胎肾上腺和对应胎盘,用4％多聚甲醛固定后,用于HE染色观察组织形态学的变化。用荧光定量PCR和Western blot方法,分别检测海马糖皮质激素受体（ GR）、下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、肾上腺甾体激素急性调节蛋白和细胞色素P450侧链裂解酶（P450scc）和胎盘2型11β－羟基类固醇脱氢酶（11B－HSD－2）的mRNA和蛋白表达。结果（1）与正常对照组相比,尼古丁组均可降低胎鼠体重（P＜0．01）,增加IUGR发生率（P＜0．01）;（2）实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,尼古丁组可增加海马GR的mRNA（大剂量组P＜0．05）和蛋白（小、中剂量组P＜0．05,大剂量组P＜0．01）表达,降低下丘脑CRH的mRNA（大剂量组P＜0．05）和蛋白（中、大剂量组P＜0．05）表达,并且降低肾上腺StAR （大剂量组P＜0．01）和P450scc（中剂量组P＜0．05,大剂量组P＜0．01）的mRNA表达;（3） ELISA和放免检测结果显示,尼古丁组胎血CORT （中、大剂量组P＜0．01）和ACTH （大剂量组P＜0．01）的含量均增加,同时,胎盘11β－HSD－2的mRNA（中、大剂量组P＜0．05）和蛋白（中、大剂量组P＜0．01）表达降低。以上结果均具有良好的剂量依赖关系;（4）HE染色结果显示,与正常对照组相比,尼古丁大剂量组胎鼠的海马神经核团有明显的增生,下丘脑的神经核团有所减少,胎盘绒毛区有明显的出血现象,肾上腺束状带细胞排列紊乱。结论尼古丁可引起IUGR,其机制与“母源性糖皮质激素过暴露”所导致的胎儿HPA轴发育异常有关。     

母体孕期维生素D缺乏对胎盘甾体激素合成的影响

目的 探讨母体孕期维生素D缺乏(VDD)诱发胎儿宫内生长受限(IUGR)的机制。方法 4周龄雌性CD-1小鼠随机分成2组：对照组(CTRL组)和维生素D缺乏组(VDD组),低维生素D饲料喂养5周构建VDD动物模型,然后与正常雄鼠交配,在孕第16天剖杀部分孕鼠,收集胎盘、母血以及胎血,Western blot法检测胎盘甾体激素合成关键酶以及氧化应激信号蛋白表达水平,用放射免疫分析法检测母血雌激素、孕激素和25-(OH)-D水平;在孕第19天剖杀剩余孕鼠,称量胎盘和胎鼠重量,测量胎鼠身长和胎盘直径,观察妊娠结局。结果 5周低维生素D饲料喂养成功构建VDD小鼠模型;母体孕期维生素D缺乏减轻胎鼠重和胎盘重量,降低胎鼠身长和胎盘直径。VDD组胎盘芳香化酶P450 (CYP19)表达升高,孕鼠雌激素合成增多。此外,维生素D缺乏上调胎盘血红素加氧酶-1 (HO-1)、NADPH氧化酶-4(NOX-4)和3-硝基酪氨酸(3-NT)蛋白表达水平,促进了胎盘核因子E-2相关因子2(Nrf-2)核转位水平。结论 母体孕期维生素D缺乏可能部分通过诱发胎盘氧化应激损伤胎盘内分泌功能,促进胎盘雌激素合成进而诱发I...     

养胎方改善胎鼠宫内发育迟缓的实验研究

目的:观察养胎方改善胎儿宫内发育迟缓(IUGR)胎鼠生长发育的作用,并探讨其作用机理。方法:以被动吸烟法建立IUGR动物模型,将大鼠随机分为正常对照组、模型组及养胎方小剂量组、中剂量组、大剂量组,孕21d剖腹取胎,观察养胎方对胎鼠生长发育的影响及血清NO水平和胎盘的发育。结果:养胎方可增加胎鼠出生体重,降低IUGR发生率,增加胎鼠身长、尾长、肝重、脑重等指标,并且升高IUGR孕鼠血清NO水平,促进胎盘的发育。结论:养胎方可以改善孕鼠胎盘血循环障碍的状况,可明显促进IUGR孕鼠胎盘的发育,从而促进了母胎之间的营养及氧气的供应。     

雌激素受体及胆汁酸代谢相关基因在胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达

目的探讨雌激素受体(estrogen receptor,ERα)与胆汁酸代谢相关基因胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、胆固醇27α羟化酶(cholesterol 27-hydroxylase,CYP27A1)、胆固醇12α羟化酶(cholesterol 12α-hydroxylase,CYP8B1)mRNA在妊娠期肝内胆汁淤积孕鼠胎鼠肝脏中的表达及其意义。方法将60只清洁级SD孕鼠自孕第13天均分为2组:对照组孕鼠皮下注射精制植物油2.0 mL.kg-1.d-1;研究组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇1.25 mg.kg-1.d-1。2组孕鼠分别于妊娠第13、17、21天断尾采母鼠血2 mL检测血清生物化学指标,于妊娠第21天处死。抽取母鼠、胎鼠血并提取母鼠、胎鼠肝脏组织。应用酶联免疫吸附试验检测2组孕鼠以及胎鼠血清中胆酸浓度;应用实时定量PCR技术检测各组胎鼠肝脏ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的mRNA表达量。结果①胆酸指标比较:在妊娠第17天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(24.6±1.3)μmol/L、(58.7±3.2)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度明显高于对照组(t=2.462,P<0.05);在妊娠第21天时对照组、研究组母鼠胆汁酸浓度分别为(26.5±3.1)μmol/L、(66.4±2.7)μmol/L,研究组母鼠胆汁酸浓度与妊娠第17天时研究组以及对照组相比(F=5.43,P<0.05),差异有统计学意义。②胎鼠肝脏CYP7A1 mRNA、CYP27A1 mRNA、CYP8B1 mRNA表达:研究组中CYP7A1 mRNA(1.25±0.01)、CYP27A1 mRNA(2.05±0.03)、CYP8B1 mRNA明显高于对照组(0.35±0.02、0.75±0.03、0.85±0.02),P值均<0.05,差异有统计学意义。③胎鼠肝脏雌激素受体的表达:研究组中ERαmRNA(0.75±0.02)明显高于对照组ERαmRNA(0.45±0.01)。结论妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕鼠胎鼠肝细胞ER、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1的表达升高,胆汁酸的合成与代谢调节机制存在障碍,可能是导致ICP胎儿围生期死亡发生的原因之一。     

全氟辛烷磺酸盐对大鼠胚胎发育及胎盘IGF-1表达的影响

目的探讨不同剂量全氟辛烷磺酸盐(perfluorooctane sulphonate,PFOS)染毒对大鼠胚胎发育及胎盘胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)表达的影响。方法将孕12 d的48只SD雌性大鼠,随机分为4组给予不同剂量的PFOS(0,5,10,20 mg/kg),连续灌胃7 d,在孕19 d时处死孕鼠,检测孕鼠和胎鼠的体质量、胎鼠肝系数、孕鼠血清PFOS和糖皮质激素(glucocorticoid,GC)水平、胎盘IGF-1表达水平。结果与对照组相比,随着PFOS剂量增加,染毒组孕鼠血清PFOS显著蓄积,孕鼠体质量、胎鼠体质量和体长、胎盘质量均逐渐下降,PFOS 20 mg/kg组差异有显著性(P0. 001);胎鼠肝系数也表现相同趋势,低中高剂量染毒组均显著低于对照组(P0. 05),血液生化丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)与天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)也随着PFOS给药剂量的增加而增高(P0. 05); PFOS 10 mg/kg组,孕鼠血清GC水平升高(P0. 05);胎盘IGF-1表达水平随PFOS剂量升高而降低。结论孕期长期暴露PFOS会导致孕鼠血清PFOS含量蓄积,进而导致胎鼠肝毒性,GC含量升高,胎盘IGF-1表达水平降低,最终影响胎鼠的生长发育。     

邻苯二甲酸二丁酯暴露对青春期雌性大鼠卵巢P450scc基因表达的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对青春期雌性大鼠的生殖毒性作用及作用机制.方法:21d龄SPF级雌性SD大鼠,随机分为DBP250 mg/kg、500 mg/kg、1 000 mg/kg3个染毒组和溶剂对照组(玉米油),连续8周灌胃染毒.染毒结束后,在动情前期对大鼠实施处死,取动脉血,利用放射免疫荧光法检测血清中孕酮(P)水平;取卵巢组织提取mRNA,实时荧光定量RT-PCR检测大鼠卵巢组织细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达水平.结果:各处理组间大鼠血清P水平有统计学差异(F=4.306,P=0.014),与对照组比较,DBP 1 000 mg/kg剂量组大鼠血清P水平降低(P＜0.05),与对照组比较,250mg/kg及500mg/kg剂量大鼠血清P水平无统计学差异.各处理组间大鼠卵巢P450scc mRNA表达水平有统计学差异(H=15.591,P＜0.01),与对照组比较,DBP 250 mg/kg、500 mg/kg、1 000 mg/kg剂量组大鼠卵巢P450scc mRNA表达水平降低(P＜0.01),各剂量组间卵巢P450scc mRNA表达水平比较无统计学差异(P＞0.05).结论:DBP可使青春期雌性大鼠卵巢P450scc表达降低,提示DBP对雌性大鼠产生生殖毒性.     

宫内发育迟缓胎鼠肝脏PGC-1和PEPCK基因的表达变化

目的宫内发育迟缓(IUGR)是胰岛素抵抗的独立危险因素,通过检测IUGR胎鼠肝脏糖代谢相关酶的表达,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法通过孕期蛋白质营养不良法建立大鼠IUGR模型,孕21天时剖宫产,测量胎鼠的体重和肝重,采用RT-PCR和蛋白印迹技术检测胎鼠肝脏PGC-1和PEPCK的mRNA及蛋白表达的变化。结果与正常对照相比,IUGR胎鼠肝脏PGC-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.01),肝中PEPCKmRNA的表达也明显增高(P<0.01)。结论IUGR胎鼠肝脏PGC-1表达增加诱导了糖异生关键酶PEPCK的表达,促进肝脏糖异生,这是IUGR鼠成年后发生胰岛素抵抗的原因之一。     

围生期宫内生长迟缓胎鼠的发育及其肝胰岛素信号转导蛋白的表达

目的:研究大鼠妊娠期营养不良对围生期胎鼠肝胰岛素信号转导蛋白表达的影响.方法:饥饿组雌性大鼠受孕后第1天控制进食鼍为对照组的50%至分娩,从而建立宫内生长迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)大鼠模型.于雌性大鼠妊娠第15、17、19、21天(E15、E17、E19、E21)取胎,称量胎鼠体重,胎盘、胎鼠肝、脑的重量,计算胎盘重/体重(placenta weight/body weight ratio,PWR)、肝重/体重(liver weight/body weight ratio,LWR),脑重/体重(brain weight/body weight ratio,BWR)的比值;RT-PCR检测E15,E17,E19,E21及生后第1天(P1)新生大鼠肝胰岛素受体(insulin receptor,IR)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、胰岛素受体底物-2(insulin receptor substrate-2,IRS-2)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K)mRNA的表达.结果:(1)IUGR胎鼠E15时PWR低于对照组,E17后PWR逐渐增加(P<0.05);IUGR组E15胎鼠的LWR值与对照组相比,差异无统计学意义,E17～E21则明显下降(P<0.05);IUGR胎鼠平均BWR水平高于对照组(P<0.05);(2)IUGR胎鼠肝IRS-1 mRNA的表达在E15、E17与对照相似,E19则下降(P<0.05),并持续低表达至P1(P<0.05);E15 IUGR胎鼠肝IRS-2 mRNA的表达已显著减少,并持续到P1(P<0.05);围生期IUGR胎鼠肝IR mRNA,PI3KmRNA的表达与对照组相近(P0.05).结论:(1)雌性大鼠妊娠期饥饿致胎盘、胎鼠体重、肝、脑组织重量下降,以体重和肝为著,使肝重与体重比值下降而脑重与体重的比值增加,即"脑保护效应";(2)雌性大鼠妊娠期营养不良仔大鼠围生期肝胰岛素信号转导蛋白IR mRNA、PI3K mRNA的表达尚未明显受损;但IRS-1 mRNA和IRS-2mRNA呈低水平表达,可能与其生长迟缓及成年期胰岛素抵抗有关.     

宫内生长受限子鼠肝脏脂肪代谢关键酶表达的研究

目的 通过检测胎儿宫内生长受限(intrauterine growth restriction,IUGR)子鼠肝脏中脂肪代谢关键酶及可促进脂肪合成的核转录因子固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)的表达,探讨IUGR个体发生脂肪性肝病的分子机制.方法 通过孕期低蛋白饮食法复制大鼠IUGR模型,采用定量逆转录-聚合酶链反应和Western blotting技术检测孕20 d(E20)胎鼠和12周成年子鼠(A12)肝脏中SREBP1c的mRNA和蛋白含量,同时检测肝脏脂肪酸合酶(FAS)和肝脂肪酶(HL)的表达变化.结果 IUGR成年子鼠肝脏三酰甘油浓度增加(P＜0.01).IUGR胎鼠和成年子鼠肝脏SREBP1和FAS的mRNA和蛋白表达均明显高于同龄对照,且FAS与SREBP1c的mRNA水平成正相关(均P＜0.05).IUGR胎鼠肝脏HL表达正常但成年后表达增高(均P＜0.05).结论 “胎儿程序化”影响使IUGR子代自围产期至成年肝脏中脂肪合成的调控因子SREBP1表达增加,诱导生脂酶FAS的表达,可能是成年肝脏脂质堆积及脂肪性肝病高发的机制之一.     

激活LXR对海马神经元神经甾体合成的促进作用

目的:研究肝X受体(LXR)激活对海马神经元神经甾体合成的影响.方法:将大鼠海马神经元体外培养至第7日,在培养液中加入2.0μmol/L T0901317,继续培养48 h.应用高效液相.质谱联用(HPLC-MS)分离测定培养液中游离型神经甾体孕烯醇酮(PREG)、脱氢表雄酮(DHEA)和结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)、脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)的含量;RT-PCR方法观察海马神经元P450侧链裂解酶(P450scc)、甾体合成快速调节蛋白(StAR)和3β-羟基甾醇脱氢酶(3β-HSD)等神经甾体合成关键酶基因的mRNA的表达.结果:T0901317激活LXR,促进P450scc,StAR和3β-HSD的mRNA表达,增加海马神经元培养液中神经甾体PREG,DHEA,PREGS和DHEAS含量.结论:LXR激活时,可通过上调海马神经元P450scc,StAR和3β-HSD的mRNA表达.促进神经甾体的合成.     

衰老对雄性大鼠睾丸类固醇合成功能的影响

目的:研究老年SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(StAR)、17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD)和芳香化酶(P450arom)的变化,探讨衰老对睾丸类固醇合成的影响.方法:用人绒毛膜促性腺激素(hCG)连续刺激青年和老年雄性SD大鼠,测定基础状态和hCG刺激后血清睾酮(T)和雌二醇(E2)水平,睾丸StAR mRNA、17β-HSDⅢ和P450arom mRNA的表达.结果:(1)基础状态和hCG刺激后,老年SD大鼠血清T水平、17β-HSDⅢmRNA的表达显著低于青年大鼠(P＜0.05,P＜0.01).老年SD大鼠StAR mRNA表达降低不明显.(2)老年大鼠血清E2/T水平升高(P＜0.01),但睾丸P450acrom mRNA表达没有明显变化.结论:衰老雄性大鼠睾丸17β-HSDⅢ的降低可能是睾酮合成减少的主要影响因素.     

芳香烃受体(AhR)及Th17相关细胞因子在类风湿关节炎中的表达水平及其对疾病的预测价值

目的 观察芳香烃受体(AhR)及Th17相关细胞因子在类风湿关节炎中的表达水平及其对疾病的预测价值.方法 选择2014年1月-2015年12月于我院就诊的RA患者60例作为观察组,选取同期于我院进行健康体检的正常人60例作为对照组,采用酶联免疫吸附法检测血清中 IL-17、IL-23及AhR的表达水平,并分析其与疾病活动度的关系.结果 RA患者血清IL-17、IL-23及AhR水平高于对照组(P<0.05).而根据病情严重程度,RA 非早期组IL-17、IL-23及AhR水平较早期组增高(P<0.05).血清 IL-17 水平与除CRP以外的病情活动度指标均呈正相关关系(P<0.05).IL-23 水平与SJC、TJC、HAQ 、DAS28 评分呈正相关关系(P<0.05),但其他指标无明显相关性(P>0.05).RA患者PBMC中AhR的表达水平与各项临床指标无相关性(P>0.05).IL-17和IL-23水平与Sharp评分呈正相关关系(r=0.895,P<0.01;r=0.708,P<0.01).AhR的表达与血清IL-17和IL-23水平呈正相关(r=0.415,P<0.01).经荧光定量PCR检测结果显示,RA患者AhR及其下游因子CYP1A1、IL-17、FOXP3 mRNA的表达水平高于对照组(P<0.05).且RA 非早期组AhR及其下游因子CYP1A1、IL-17、FOXP3 mRNA的表达水平较早期组增高(P<0.05).经相关关系检测,RA患者AhR及其下游因子CYP1A1、IL-17、FOXP3 mRNA的表达水平与Sharp评分呈正相关关系(r=0.715,P<0.01;r=0.734,P<0.01;r=0.812,P<0.01;r=0.755,P<0.01).结论 Th17相关细胞因子IL-17和IL-23在RA病理生理过程中发挥重要作用,其表达增高,提示关节炎症处于活跃状态,骨质破坏较重,可作为评估RA病情的重要指标.RA患者体内AhR蛋白及其相关下游信号通路均呈高表达状态,AhR通路在RA患者的发病过程中可能发挥关键作用.     

左旋精氨酸对被动吸烟孕鼠作用的实验研究

目的　研究左旋精氨酸对被动吸烟孕鼠及胎仔生长发育的影响及其与NO ,MDA和SOD的关系。方法　被动吸烟法建立大鼠IUGR模型 ,孕鼠随机分为 5组 :对照组、模型组、左旋精氨酸低剂量、中剂量、高剂量治疗组。孕 2 1d剖宫取胎 ,观察胎仔体重、脑重、肝重及胎盘重 ;检测孕鼠血清及胎盘组织中NO含量及MDA ,SOD活性。结果　低剂量及中剂量治疗组与模型组相比 ,胎仔体重、脑重、肝重及胎盘重均明显增加 (P <0 0 1) ,NO及SOD升高 ,MDA降低 (P <0 0 1) ,但高剂量治疗组与模型组比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　适量左旋精氨酸可有效防治被动吸烟孕鼠IUGR ,促进胎仔生长发育 ,其作用与调节机体的氧化与抗氧化失衡有关。     

胎仔宫内生长迟缓孕鼠的药物治疗及其胎盘病理学研究

本研究在用更生霉素建立IUGR动物模型的基础上,应用人参茎叶皂甙、丹参、舒喘灵、硫酸锌和人参蜂王浆对胎仔宫内生长迟缓(IUGR)孕鼠进行治疗。结果表明,各治疗组孕鼠妊娠第20天体重明显高于更生霉素组孕鼠(P<0.01)、IUGR胎仔的发生率明显降低(P<0.01);在胎盘组织学上,胎盘的厚度及迷路层血管和血窦成分,各治疗组不同程度地有别于更生霉素组。并对各药物治疗组IUGR进行了讨论。     

地西泮结合抑制因子调控胎盘滋养细胞合成类固醇激素基因的表达

目的:探讨地西泮结合抑制因子(diazepam binding inhibitor,DBI)是否参与胎盘滋养细胞合成类固醇激素基因表达的调控.方法:收集自然流产以及正常孕6～8周绒毛组织,Western blot比较2组样本DBI蛋白的表达,免疫组织化学分析DBI在绒毛组织中的表达和定位.利用siRNA分别敲低DBI表达并采用Forskolin FSK诱导BeWo滋养细胞合体化,免疫荧光检测DBI的蛋白表达、RT-qPCR检测激素合成酶的表达水平,EdU试剂盒检测细胞增殖能力.结果:自然流产绒毛中的DBI较正常组呈现下调表达;FSK可诱导DBI及激素合成酶P450scc、HSD3β1和CYP19A1上调表达;而敲低DBI不仅可以抑制合体化进程,同时也抑制激素合成酶的表达.结论:DBI可能通过调控P450scc介导滋养细胞类固醇激素合成功能,进而参与胎盘发育.     

左归饮对围绝经期大鼠卵巢P450芳香化酶表达的影响及调节

目的研究左归饮对围绝经期大鼠卵巢P450芳香化酶(P450 arom)及CYP19 mRNA表达的影响及机制。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8周。用放射免疫法(RIA)检测血清中雌二醇(E_2)含量;用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢CYP19mRNA及P450 arom的表达。未成年大鼠注射孕马血清后收集培养颗粒细胞,用RT-PCR方法检测给予不同处理后CYP19 mRNA的表达水平。结果围绝经期大鼠血清E_2水平及卵巢P450 arom及其基因CYP19的表达明显低于青年组(P0.01),给予中、高剂量左归饮处理后,血清E_2水平及P450 arom、CYP19表达显著升高(P0.01)。培养颗粒细胞给予不同处理因素,结果显示,与对照组相比,染料木黄酮(Genistein)、福司考林(Forskolin)、左归饮提取物可促进CYP19 mRNA表达(P0.05);与单纯加入左归饮提取物相比,同时加入左归饮提取物和佛波酯或Genistein可进一步促进CYP19 mRNA的表达(P0.05)。结论中、高剂量左归饮可通过上调卵巢CYP19及其产物P450 arom的表达,使围绝经期大鼠血清E_2含量升高。左归饮对CYP19 mRNA表达的促进作用可能是通过激活PKC途径或加强Genistein的作用实现的。     

老年人睾丸间质细胞结构及StAR和P450scc蛋白表达的变化

目的：观察老年人睾丸间质细胞结构以及类固醇激素合成快速调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）和胆固醇侧链裂解酶（cholesterol-side-chain cleavage enzyme,P450scc）蛋白表达的变化,以探讨迟发性性腺功能减退症的机制。方法：青年人（20~30岁）及老年人（70~90岁）睾丸标本各10例,对患者进行AMS(Aging Male’s Symptoms)评分。应用HE染色观察睾丸组织形态学变化,电子显微镜观察睾丸间质细胞的超微结构改变,Western blot法比较青年组和老年组睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平的差异,并用ELISA法检测其血清总睾酮水平的差异。结果：老年组AMS评分显著高于青年组（61.25±7.08 vs. 20.75±3.73,P<0.001）,且血清总睾酮水平显著低于青年组（3.12±0.58 μg/L vs. 6.29±1.17 μg/L,P<0.05）。HE染色显示,老年人睾丸呈老年退行性改变,电子显微镜下观察到老年睾丸间质细胞线粒体肿胀,线粒体嵴消失。睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平显著低于青年组（P<0.05）。结论：老年人睾丸间质细胞结构、线粒体的损伤,以及StAR和P450scc蛋白表达水平的下降等病理变化均与老年人迟发性性腺功能减退症症状和血清总睾酮水平变化密切相关,其确切机制有待深入研究。     

宫内发育迟缓对大鼠肝糖异生关键酶的影响

目的：通过检测宫内发育迟缓(IUGR)仔鼠肝组织中糖异生关键酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄
糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的mRNA表达变化,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的机制。方法：通过孕期全程给予孕鼠10%
低蛋白饲料建立IUGR仔鼠模型,对照组给予孕鼠21%正常蛋白饲料建立正常出生体质量仔鼠模型。每组仔鼠出生1
周、3周、8周时测定其体质量、空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数,并采用反转录-聚合酶链反应(RTPCR)
法检测仔鼠肝组织中PEPCK和G-6-Pase的mRNA表达。结果：IUGR组仔鼠出生体质量明显低于对照组(P<0.001),
1周、3周、8周时亦低于对照组(P<0.05)。各时间点IUGR仔鼠空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数与对照组
无明显差异(P>0.05)。IUGR仔鼠各时间点肝组织PEPCK和G-6-Pase mRNA的表达水平均高于对照组(P<0.01)。结论：
IUGR仔鼠肝糖异生关键酶PEPCK和G-6-Pase的表达明显增高,可能增加肝糖异生,是IUGR个体发生胰岛素抵抗和糖
尿病的重要机制之一。     

补肾益气活血方对宫内发育迟缓胎鼠肝脏 IGF-Ⅰ表达的影响

目的观察补肾益气活血方对宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)胎鼠肝脏胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)基因在转录和翻译水平上的影响,探讨其防治IUGR的作用机制.方法采用被动吸烟法复制胎鼠IUGR模型,分为正常对照组、IUGR组、IUGR精氨酸治疗组(精氨酸组)、IUGR补肾益气活血方治疗组(中药组).采用Northern blot和免疫组织化学的方法分别检测胎鼠肝脏IGF-Ⅰ mRNA和蛋白的表达.结果IUGR组IGF-Ⅰ mRNA及蛋白表达水平与对照组比较明显下调(P＜0.01),而精氨酸组和中药组两者表达水平较IUGR组有所增加,其中,中药组IGF-Ⅰ的表达强度高于精氨酸组(P＜0.05),接近正常组(P＞0.05).结论补肾益气活血方可能通过直接(或间接)促进IGF-Ⅰ的合成和分泌,或者防止某些致病因素对IGF-Ⅰ基因表达细胞信息传导途径的阻断而起到防治IUGR的作用.     

孕期和哺乳期暴露壬基酚对仔鼠肝脏细胞色素P450 2E1 mRNA及蛋白表达的影响

目的 探讨孕期和哺乳期暴露壬基酚(NP)对仔鼠肝脏细胞色素P450 2E1 (CYP2E1) mRNA和蛋白表达的影响.方法 将孕鼠分为低、中、高剂量染毒组(分别给予50、100、200 mg·kg-1·d-1 NP染毒)和对照组,孕鼠受孕第6天到仔鼠出生21 d灌胃染毒NP.仔鼠出生90 d后处死,检测血清肝功能指标及血脂水平,观察肝脏病理学变化,测定肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,检测CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平.结果 与时照组比较,各染毒组仔鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及AST/ALT比值均升高(P＜0.05),且随染毒剂量的增加呈上升趋势;血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均较对照组升高(P＜0.05).对照组仔鼠肝组织结构正常,低剂量染毒组仔鼠肝脏肝窦轻度扩张,中剂量染毒组仔鼠肝脏有轻度炎性细胞灶性浸润,高剂量染毒组仔鼠肝脏有大量脂滴存在.各染毒组仔鼠肝组织SOD、GSH-PX活性明显低于对照组(P＜0.05),MDA水平明显高于对照组(P＜0.05).中、高剂量染毒组与对照组比较CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P＜0.05).结论 孕期和哺乳期暴露NP,可致仔鼠肝脏脂质代谢紊乱及炎性损伤,可能与肝脏CYP2E1表达上调有关.