高活性漆酶产生菌的发酵条件优化

对云芝菌产漆酶的发酵条件进行优化,考察C源、N源和诱导剂等因素对产酶的影响.结果表明:杂色云芝菌摇瓶产漆酶的最佳条件为葡萄糖1.25 g/L,羧甲基纤维素钠15 g/L,酵母膏15 g/L,KH2PO41 g/L,CaCl20.05 g/L,MgSO40.25 g/L,30℃、150 r/m条件下振荡培养,在72 h加入2 mmol/L 2,5-二甲基苯胺作为诱导剂,在96 h加入2 mmol/L Cu2+,经过7 d培养,菌的漆酶比活达到3 319.2 U/mL.     

IMBH-2固态发酵产漆酶条件的优化及酶学性质的初步研究

通过单因素和正交实验对菌株IMBH-2固态发酵培养基优化;并对IMBH-2漆酶进行了酶学性质的初步研究。结果表明在固态培养基中添加蔗糖和有机氮源可以促进漆酶发酵。优化后的培养基为蔗糖2.5%(w/w),牛肉膏0.8%(w/w),KH_2PO_40.4%(w/w),Mg SO_4·7H_2O 0.15%(w/w),麦麸100 g,固液比1∶1.5。优化后发酵漆酶活力较优化前提高了3倍。漆酶的最适反应温度为40℃,最适p H为4.0,且在低pH下比较稳定。     

糙皮侧耳Ax3产漆酶条件及部分酶学性质研究

对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)Ax3菌的漆酶产生条件进行了研究，该菌产漆酶较高的条件是：培养温度25℃，培养基pH5．5，每升C／N含量0．252g／0．021g；加入0．05％～0．1％的吐温可提高漆酶酶活12倍。对漆酶的部分生化性质研究表明：最适反应温度25℃；最适反应pH2．8；琥珀酸缓冲液效果最好；金属离子：Mn^2 ，Cu^2 ，Zn^2 对漆酶有较强的激活作用，其中Mn^2 相对活性最高，Ag^ ，K^ ，Ca^2 ，Fe^2 对漆酶活性有抑制能力，其中Ag^ 的抑制作用明显。     

云芝漆酶同工酶的分离纯化及酶学性质

采用DEAE-Sephrose Fast Flow和Sephadex G-100两步柱层析,得到2种漆酶同工酶,分别命名为LccA和LccB.以ABTS为底物在适当条件下与酶带反应呈绿色谱带鉴定出漆酶谱带.LccA的纯化倍数和回收率分别为53.88和7%,LccB的纯化倍数和回收率分别为208.21和29%.用SDS-PAGE测定两漆酶的分子量分别为64.2 ku和60.7 ku;LccA和LccB的最适作用温度分别是40℃和50℃;最适反应pH值为3.5和4.0;其N-末端部分氨基酸序列为AIGPK和GIGPV,与其他真菌漆酶相比显示很高的同源性,以ABTS为底物的Km值分别为68.96μmol/L和76.92μmol/L.Cu2 对两同工酶都有明显的激活作用,Fe2 ,Ag 完全抑制两同工酶的活性.     

青霉菌产漆酶条件及酶学性质的研究

通过对青霉菌产漆酶条件的优化,提高酶活,将其应用于生物制浆中。采用单因素对产酶条件进行研究,同时考察了漆酶的酶学性质。研究结果表明最佳培养条件为:麦麸16 g/L,酵母膏2 g/L,Al3+0.6 g/L,KH2PO43 g/L,30℃,pH 6.0摇瓶培养192 h。优化后漆酶的酶活提高了12.34倍。经过酶学性质的研究得出该酶的最适反应温度为30℃,而热稳定性为20~40℃,pH稳定性为3.6~4.0。     

白腐菌产漆酶的发酵条件研究

漆酶(E.C.1.10.3.2)是一类含铜的氧化还原酶,其可以催化对苯二酚(也叫氢醌)氧化生成对苯醌,也常被称为对苯二酚氧化酶。漆酶一般存在于真菌和植物中,由于具有较高的稳定性和较好的底物专一性,在印染和环境有机毒性化合物的降解、专用生物传感器的构建、以及造纸领域有机废弃物的生物加工利用等方面具有实际工业应用。考察了白腐菌的培养和产漆酶条件,对白腐菌产漆酶的培养条件和培养基进行了优选。结果显示,以小麦皮为碳源,硫酸铵和尿素为氮源,白腐菌生长产酶的适宜培养温度为28℃,pH值为3.5~6.0,培养基的C/N比以20合适。当培养基中添加一定的木质素沉淀物和葡萄糖时对白腐菌液体发酵产漆酶具有明显的促进作用,菌体发酵液中加入10 g/L的葡萄糖、6 g/L木质素时发酵产漆酶的活力达到最大值。     

云芝胞外漆酶活性研究

研究了云芝在PDY培养基中的漆酶活性;漆酶的产酶高峰在第9天出现,酶反应的最适温度为25℃,最适酸碱度为pH4.6,K~ 、(Zn)~(2 )等离子可提高漆酶的活性,而Ag~ 离子则对漆酶活性有明显的抑制作用。     

云芝胞外漆酶活性研究

研究了云芝在ＰＤＹ培养基中的漆酶活性;漆酶的产酶高峰在第９天出现,酶反应的最适温度为２５℃,最适酸碱度为ｐＨ４．６,Ｋ＾＋,Ｚｎ＾２＋等离子可提高漆酶的活性,而Ａｇ＾＋离子则以漆酶活性有明显的抑制作用。     

碳、氮源对云芝胞外漆酶分泌的影响

研究了不同碳源、氮源对云芝漆酶分泌的影响。实验表明,淀粉和麸皮是最好的碳源,干酪素和大豆粉是最好的氮源。     

灵芝固态发酵产漆酶及对秸秆木质素的降解

为探索木质素的生物降解新途径,采用平板显色法从三株白腐真菌中筛选出一株灵芝属漆酶高产菌,以农作物秸秆等为培养基进行固态发酵,该菌主要产漆酶和少量木质素过氧化物酶.在优化条件下,该菌发酵18d,漆酶活力最高达2056U/g干曲.该菌以玉米秸秆、油菜秸秆及稻草作为唯一营养源固态发酵30d,对玉米秸秆的木质素降解率最大,达到23.7%,油菜秸秆也达到了16.2%.     

木质素降解真菌粗毛栓菌(Trametes gallica)蓝色漆酶的分离纯化及性质研究

作者对粗毛栓菌(Trametesgallica)在PAG培养基条件下摇瓶培养产生漆酶的情况进行了研究.15d左右达到产酶高峰,随后进入平台期.对15d产生的漆酶进行分离纯化.4L发酵液经硫酸铵沉淀,DEAE SepharoseFastFlow柱层析和SephadexG 100柱层析,漆酶被纯化了36.9倍.经SDS PAGE验证为一条带,表观分子量约为60,000Da.纯化漆酶是一种含糖量6%的糖蛋白,且在605nm处具有蓝色漆酶Ⅰ型铜离子典型的吸收峰.以ABTS,DMP和愈创木酚为底物,反应的最适pH值分别为2.2,3.0和4.0;Km值分别为0.172×10-2,0.51,0.48mmol/L.以ABTS为底物,最适反应温度为70℃.在pH7～9处理24h,纯化漆酶仍保持较高活性.EDTA,卤素离子,NaCN和NaN3对酶活有抑制作用,其中NaN3是最强的抑制剂.纯化的蓝色漆酶不具有氨酸酶活性,但能够氧化非传统底物酚红.     

Coriolus versicolor木素降解酶研究

研究了彩绒革盖菌在液体培养条件下的漆酶、多酚氧化酶、愈创木酚氧化酶和锰过氧化物酶的部分特性;结果表明,不同酶类的产酶曲线,酶作用的最适pH值、最适作用温度,金属离子对酶活的影响各不相同.     

彩绒革盖菌CV-8胞外酶活性研究

测定了彩绒革盖菌在PDY液体培养基中的过氧化物酶、漆酶、邻苯二酚氧化酶和意创木酚氧化酶的活性。结果发现,4种酶均有酶活性,产酶高峰也不尽相同。     

Corilus versicolor锰过氧化物酶的产生及活性研究

本文研究了不同碳源和氮源对 Corilus versicolor锰过氧化物酶分泌的影响，并研究了该酶的部分特性；结果表明，淀粉为碳源，玉米粉为氮源有利于该酶的分泌；在恒温振荡（ 30℃， 110rpm）培养下，第 9天达产酶高峰，酶活为 345.2u/ml；最适酶解条件为： 30℃， pH4.0; Mg2＋、 Mn2＋对酶有激活作用， Ag＋、 Cl－对酶有明显的抑制作用 .     

亚热带木腐真菌产漆酶及其酶学性质

对选育的一株木腐真菌Psathyrella candolleana进行液体深层发酵生产漆酶,通过硫酸铵盐析和离子交换色谱等纯化技术分离发酵酶液后,得到纯度较高的漆酶,并对其酶学性质进行研究.结果表明:P.candolleana在发酵罐中的漆酶产量最高可达9 100 U/L;分离纯化后得到漆酶活性组分,其比活力达到438...