重组人血白蛋白在药用辅料中的应用

<正>随着生物技术的不断发展和进步,人们对生物药物尤其是疫苗的安全性要求越来越高。为了使与传染源相关的风险降到最低,生产过程中不使用人或动物来源成分(如牛血清、白蛋白等)已经成为各国生物制药的发展趋势,我国对生物药物安全性的要求也逐步与国际接轨。辅料作为药品的重要组成部分,其来源及质量直接影响终产品的质量、安全及有效性。白蛋白作为生物药物中常用的辅料,主要是从牛或人血浆中提取,目前在我国生物药物尤其是疫苗生产     

重组人血白蛋白在哺乳动物细胞培养中的应用

正目前,哺乳动物细胞大规模培养技术已经成为生物制药中不可缺少的一部分,利用动物细胞培养技术生产的生物制品越来越多,而组织工程和干细胞疗法又拓宽了细胞培养技术的应用范围。人血白蛋白(human serum albumin,HSA)作为动物细胞培养基中的重要组分之一,在动物细胞培养中已经应用了很多年。本文就重组人血白蛋白(recombinant HSA,r HSA)在哺乳动物细胞培养中的应用情况作一     

人血白蛋白制品中铝含量的分析

目的通过对国产人血白蛋白制品的铝含量分析,使该制品适应即将执行的《中国药典》相关标准的要求。方法以《欧洲药典》的铝含量(200μg/L)为标准,采用原子吸收分光光度法检测制品中的铝含量。结果国内压滤生产的人血白蛋白制品合格率为54%,离心法为28%,生产工艺改进后,铝含量下降幅度平均为62%,且基本达到了欧洲药典的合格标准。结论国内人血白蛋白生产厂家通过对生产工艺的改进,铝含量完全可以控制在欧洲药典的合格标准内。     

新型人血白蛋白分离介质吸附性能及重组人血白蛋白分离

针对毕赤酵母发酵液中分离重组人血白蛋白(rHSA),采用新型介质IAA-CYS,探讨HSA吸附性能,优化分离条件,实现rHSA高效分离.考察了不同pH和盐浓度下IAA-CYS介质对HSA的吸附,发现pH为4.5是最佳条件,HSA饱和吸附容量达到157.6 mg.mL-1,盐浓度影响较小.测定了不同NaCl浓度和线性流速...     

应用思维导图构建人血白蛋白含量测定方法的教学研究

人血白蛋白是人血浆中含量最多的一种蛋白质,其蛋白含量是人血白蛋白等血液制品的关键性生化指标。蛋白质的本质是由氨基酸通过肽键连接而成的含氮高分子化合物,其含量测定方法较多,除了基于其生物学特性的方法外,也可基于其特定的理化性质设计、开发出一系列新的测定方法。在蛋白质类生物药物分析的教学中引入思维导图构建层次分明的知识框架,可将琐碎、繁杂的知识点串联起来,帮助学生理解和记忆。本文借助思维导图构建了人血白蛋白基于光学特性、配位特性、离子特性、分解特性、密度特性、免疫特性等特性而建立的分析方法,通过直观形象、层级联系的知识网络,提高学生发散性思维能力,激发学生学习兴趣,教学效果良好,值得推广。     

重组人血白蛋白与小分子药物结合功能研究

目的研究重组人血白蛋白与小分子药物的结合功能。方法在366nm下检测地西泮与人血白蛋白结合前后吸收值的变化,计算二者的结合常数;华法令与人血白蛋白结合后,用SephadexG-25HPLC柱进行分离,对游离华法令和二者结合产物分别积分,得到华法令与人血白蛋白的结合率。结果重组人血白蛋白与地西泮的结合常数为14·68mol Diaze-pam/mol rHSA,天然人血白蛋白与地西泮结合常数为12·82mol Diazepam/mol HSA。重组人血白蛋白中华法令的结合率为8·69%,而天然人血白蛋白中华法令的结合率为6·73%。结论重组人血白蛋白与天然人血白蛋白小分子药物结合功能基本一致。     

人血白蛋白渗透压摩尔浓度控制方法的研究

人血白蛋白原液配制时,通过补充氯化钠来调节制品的渗透压摩尔浓度,尽可能使人血白蛋白制品的渗透压摩尔浓度控制在正常人血浆渗透压范围,即280~310mOsmol/kg。研究结果表明,为达到这一目的,蛋白质浓度为20%时,钠离子含量应控制在130mmol/L~140mmol/L。     

人血白蛋白的不良反应分析

对近年国内公开报道的人血白蛋白在临床应用过程中出现的不良反应进行总结和分析,促进合理用药。人血白蛋白的不良反应主要有过敏样反应、热原样反应、精神障碍等,在使用中应密切观察其不良反应,慎重使用。     

人血白蛋白的热处理工艺-Cohn's F-IV沉淀中白蛋白的回收

采用热处理为主的工艺流程回收纯化Cohn’sF－IV沉淀中的白蛋白。回收的白蛋白呈淡黄色,澄清透明,纯度≥98％;单体≥95％;吸收度≤0．03,均符合要求;免疫电泳呈一条沉淀弧。每kgF－IV沉淀可回收白蛋白约60g。回收白蛋白可耐受57℃50h热稳定试验。     

检测人血白蛋白制品中微量铝荧光分析法的建立

目的　建立一种人血白蛋白铝含量的检测方法。方法　采用Lumogallion(荧光镓 )作为荧光试剂 ,以 10 %三氯乙酸去除蛋白 ,0 1%邻菲啉消除Fe3+ 的干扰 ,建立人血白蛋白中铝含量的荧光分析法。结果　检测限度为 6ng ml,CV值为 3 99%～ 5 74 % ,回收率为 92 5 %～ 10 5 4 %。结论　该方法操作较为简便 ,速度快 ,适于在原子吸收光谱仪缺乏的条件下 ,作为人血白蛋白制品中微量铝的检测方法     

重组人粒细胞集落刺激因子活性测定标准品的研制

目的 建立效价检测用的重组人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）国家标准品。方法 标准品按 ＷＨＯ有关要求进行制备、分装、冻干、检测,用Ｇ－ＣＳＦ国际标准品为标准进行协作标定。结果 冻干重组人Ｇ－ ＣＳＦ标准品经检测,外观、无菌实验合格,水分为０．９０％,加速热稳定实验表明其生物学活性在－２０、４和２５℃条件 下２０个月保持稳定。该标准品经４家实验室协作标定共３２次测定,加权平均效价为 ５．１５×１０６ＩＵ／支;几何平均效 价为 ４．９１×１０６ＩＵ／支。实验均数的９５％可信区间为４．６４×１０６～５．２０×１０６ＩＵ／支,单次实验的９５％参考值范围为 ３．４５×１０６～６．４７×１０６ＩＵ／支,平均可信限卒为５．４６％。结论 该批重组人Ｇ－ＣＳＦ国家标准品各项指标均符合要 求,可作为国家标准品使用,效价定为５．０×１０６ＩＵ／支,编号为９８／０１。     

检测人血白蛋白中铝含量的石墨炉原子吸收分光光度法的建立

目的 建立一种人血白蛋白铝含量的检测方法。方法 用石墨炉原子吸收分光光度法检测人血白 蛋白（ＨＡＳ）中的铝含量,并对该方法进行分析。结果 检测限度达１ｎｇ／ｍｌ,检测精确度的ＣＶ值为７．６２％,均达满意标 准。结论 该方法可检测出的铝含量符合ＷＨＯ铝含量应≤２００ｎｇ／ｍｌ的要求,可作为实验室常规的铝含量检测方法。     

重组5型腺相关病毒基因组滴度测定用国家标准品的研制

目的 研制重组5型腺相关病毒(recombinant type 5 adeno-associated virus,rAAV5)基因组滴度测定用国家标准品。方法 对三质粒系统制备的rAAV5-GFP原液,按《中国药典》三部(2020版)相关要求进行鉴别、外观、pH、无菌、基因组滴度、纯度、感染滴度等检定,根据结果稀释、分装,制备成候选标准品;采用热加速试验对候选标准品进行稳定性考察;组织3家实验室,采用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)法对候选标准品进行协作标定。结果 候选标准品原液及候选标准品的各项检测指标均符合相关要求;在25、4、-20、-40、-80℃条件下,1、3、4、6个月基因组滴度均无明显下降;经3家实验室协作标定,候选标准品赋值为2.56×10¹²copies/mL,95%置信区间为2.48×1012～2.64×10¹²copies/mL。结论 研制的rAAV5基因组滴度测定用国家标准品具有良好的稳定性,可用于rAAV5相关产品的质量评价。     

高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量

目的应用高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量。方法参照《中国药典》三部(2005版)附录ⅢD,采用凝胶色谱柱,以紫外吸收检测器在280nm波长处检测,按照《中国药典》三部(2005版)附录ⅢB中的公式计算人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量。分析线性关系,计算加标回收率,并验证该方法的重复性。结果乙酰色氨酸含量在0.16～0.64mmol/L的范围内与峰面积有良好的线性关系,相关系数为0.99992;3个浓度梯度(0.16、0.32和0.48mmol/L)乙酰色氨酸的加标回收率分别为100.4%、103.9%和102.8%;连续5次检测人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量,变异系数为0.46%。结论应用高效液相色谱法测定人血白蛋白制品中乙酰色氨酸的含量,结果准确可靠。     

氨基酸分析法对蛋白含量国家标准品定量的初步分析

目的探讨氨基酸分析的方法对蛋白含量国家标准品定量的可行性。方法采用常规酸水解的方法,通过Hitachi L8800型氨基酸分析仪对白蛋白标准品进行分析。先确定最佳水解时间,再按照最佳水解时间对样品进行水解,通过氨基酸分析,采用氨基酸加合法测定其含量。并验证方法的精密性和准确性。结果经7次测定,求得现行蛋白含量国家标准品[(2005)国生标字0009]的蛋白含量值为(95.02±3.99)mg/100 mg,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为4.20%。多次试验中,标准品中各氨基酸的回收率在93.56%~105.12%之间。推算标准品中白蛋白含量值为20.52 mg,是凯氏定氮测定值的103.48%。结论氨基酸分析法测定蛋白含量自动化程度高,重复性好,可用于重组蛋白含量的分析。     

人血白蛋白制品浊度与稳定性的分析

目的 研究和确定浊度测定方法用于人血白蛋白的外观和热稳定性试验。方法 采用美国HACH公司2100N Turbidimeter测定人血白蛋白浊度值。结果 压滤法制备的产品的浊度及其热稳定性试验后的浊度增加百分比明显高于离心法。pH值和稳定剂不影响制品的浊度。结论 人血白蛋白浊度及浊度增加百分比可用于制品的外观和热稳定性试验。     

首批Vero细胞蛋白质标准品的研制

目的制备首批Vero细胞蛋白质国家标准品,用于人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主残留量检测。方法采用Vero细胞分泌蛋白质为原料,加入蔗糖冻干制成Vero细胞蛋白质国家标准品。本标准品的赋值由两步完成:第一步采用Lowry法对Vero细胞蛋白质标准品原液进行蛋白含量测定;第二步采用酶联免疫法以Vero细胞蛋白质标准品原液绘制标准曲线对标准品进行蛋白含量赋值。随机选取16支蛋白质标准品,测定pH值,采用方差分析统计检验其均匀性;随机选取标准品,分别在不同温度(4、25、37℃)下放置不同时间(1、2、3和4周),各时间点取3支,酶联免疫法检测抗原含量,采用方差分析统计检验其稳定性。结果经协作标定,Vero细胞蛋白质标准品的标示量为2.6μg/mL,标准偏差为0.4,95%可信区间为2.51～2.78μg/mL。该批标准品的均匀性及稳定性良好。结论目前该Vero细胞蛋白质标准品已获批使用,批号为250022-201901,该标准品的建立,对提高人用狂犬病疫苗的质量控制具有重要意义。     

95%乙醇循环系统对人血白蛋白质量的影响分析

目的分析采用低温乙醇工艺制备人血白蛋白时,95%乙醇循环系统对人血白蛋白原液的超滤收率和成品各项质量指标的影响。方法在多批次规模化生产中,分别测定对95%乙醇新增乙醇循环系统前后人血白蛋白原液的超滤收率和成品的纯度、多聚体含量、激肽释放酶原激活剂(prekallikrein activator,PKA)等指标,并将测定结果进行对比。结果新增乙醇循环系统后,人血白蛋白成品的纯度明显升高(P0.001),多聚体含量明显下降(P0.001),PKA无明显变化;同时,人血白蛋白原液超滤收率呈稳定趋势,未表现出明显变化。结论在低温乙醇工艺制备人血白蛋白的过程中,对95%乙醇使用乙醇循环系统自动控制添加过程,可降低操作难度,提高工作效率及操作精细度,更好地实现制品分离过程,进一步提升人血白蛋白产品的质量。     

头孢哌酮标准品含量与检测时间的变化关系液相色谱分析

1前言注射用头孢哌是头孢系列药品中的新一代抗生素类用药,随着企业的不断发展,药品市场的供求变化,加速了头孢哌酮的研制开发,取得了可喜的成绩,其中头孢哌酮的中间体,原料酚、原粉、成品的含量各项检测宜接关系到药品的质量,且影响到生产条件,工艺的改进和完善,通过近年来研制检测的工作实践,总结得出了头孢哌酮标准品在一定温度（20℃）条件下的含量-时间变化关系并以此制出曲线,经反复对比实验证明检测数据结果可信,节省了四~五倍以上的标准品并保证了企业的正常生产。质量的及时检测。2实验部分2．1仪器与试剂SP80010型液…     

毛细管电泳法分析人血白蛋白纯化工艺的有效性

目的通过毛细管电泳法分析人血白蛋白纯化工艺的有效性。方法将人血浆经Blue Bestarose FF亲和层析、EzFast Phenyl FF疏水层析、EzFast CM FF阳离子层析、EzFast DEAE FF阴离子层析4步纯化后,采用毛细管电泳法对市售人血白蛋白及各层析步骤产物纯度进行分析,并计算回收率。结果市售人血白蛋白纯度为96.6%,出峰时间为19.68 min,包含二聚体、单聚体和多聚体。亲和层析、疏水层析、阳离子交换层析和阴离子交换层析产物的出峰时间分别为19.667、19.867、19.867、20.075 min,与市售人血白蛋白基本一致,纯度分别为90.0%、93.4%、99.9%和99.9%,回收率分别为49.59%、35.49%、24.12%和17.56%。结论人血白蛋白纯化工艺的有效性良好,获得的人血白蛋白纯度较高,但回收率较低。