沙丁胺醇人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

为了合成沙丁胺醇(Sal)人工抗原、制备沙丁胺醇多克隆抗体,试验采用碳二亚胺法和琥珀酸酐法合成了免疫抗原Sal-HS-BSA和检测抗原Sal-HS-OVA,通过紫外扫描(UV)法和SDS-PAGE电泳法进行鉴定,并以Sal-HS-BSA免疫新西兰大白兔,获得了高效价和高敏感性的多克隆抗体。结果表明:Sal与载体蛋白上的牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵白蛋白(OVA)耦联成功,耦联比分别为7.7∶1和8.6∶1;抗体效价达到1∶1×105,对Sal的半数抑制浓度(IC50)为9.12 ng/mL。说明对人工合成抗原进行免疫可获得高效价、敏感的多克隆抗体。     

氯霉素人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

将氯霉素以重氮化方法使之分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HSA)载体蛋白连接．三种偶联物选择其中两个分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验，结果产生了特异性抗体。交叉试验表明：产生的特异性抗体与氯霉素反应明显，与其他类似物交叉反应不明显。     

氨基脲人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

目的合成氨基脲人工抗原并制备其多克隆抗体。方法以氨基脲(SEM)和对醛基苯甲酸(CP)为原料合成半抗原(CP-SEM),并采用碳化二亚胺法和混合酸酐法将其分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成氨基脲人工抗原。以氨基脲人工抗原(CPSEM-BSA)为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA法测定其抗体效价。结果经薄层层析、红外光谱和元素分析等方法鉴定合成半抗原即为CP-SEM。紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明人工抗原合成成功。免疫获得抗氨基脲的多克隆抗体,其抗体效价为1:64000。结论氨基脲人工抗原合成成功,并获得抗氨基脲的多克隆抗体。     

链霉素人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

利用直接化学交联法将链霉素(SM)与蛋白载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用紫外扫描和麦芽酚试验鉴定偶联成功。用免疫原免疫BALB/C小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA测IC50,获得了效价为1:51200,IC50为23.62ng/ml的链霉素多克隆抗体,与双氢链霉素的交叉反应率为107%,与同类的其它药物均无交叉反应。     

呋喃它酮代谢物人工抗原及多克隆抗体的制备

本文利用对醛基苯甲酸(CPA)与呋喃它酮代谢物(AMOZ)进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,并通过质谱法对其结构进行确证。然后采用混合酸酐法将CPAMOZ与载体蛋白偶联,采用紫外扫描(UV)法对偶联物进行验证。用偶联成功的人工全抗原(CPAMOZ-BSA)免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定小鼠血清抗体效价为1∶8×104,对NPAMOZ的半数抑制量为26.55μg/L,间接竞争ELISA鉴定小鼠血清多克隆抗体,与NPAMOZ、CPAMOZ的交叉反应率分别为100%、44.8%,与AMOZ、对醛基苯甲酸、对硝基苯甲醛以及同类其他三种药物呋喃妥因、呋喃西林、呋喃唑酮等原药及其代谢物以及代谢物衍生物的交叉反应均小于0.01%。结果表明,制备的AMOZ多克隆抗体效价高、特异性强,灵敏度高,为进一步制备AMOZ单克隆抗体和研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。     

牛奶中AFM_1人工抗原的合成及多克隆抗体血清的制备

本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成免疫抗原AFM1-BSA和检测抗原AFM1-OVA,经过薄层色谱、紫外扫描和凝胶电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。经过测定,免疫的3只小鼠效价均达到了1:104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为37.61ng/m L,且具有良好的特异性。本研究成功合成了黄曲霉毒素M1人工抗原和多克隆抗体血清,为黄曲霉毒素M1单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

齐帕特罗人工抗原合成及其多克隆抗体制备

为制备齐帕特罗(ZIL)完全抗原,获得抗ZIL多克隆抗体(pAb),将ZIL与4-溴丁酸乙酯反应后,采用EDC/NHS方法使ZIL-丁酸盐中间体与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别用紫外全波长扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定后,通过免疫新西兰大白兔获得抗ZIL多抗血清...     

赭曲霉毒素A人工抗原合成及多克隆抗体的制备

试验采用活性酯法将赭曲霉毒素A(OTA)分别与BSA、KLH偶联,合成人工免疫抗原OTA-BSA和人工检测抗原OTA-KLH,并通过紫外光谱扫描(UV)、SDS-PAGE验证偶联成功,OTA-BSA的偶联比为12.5∶1,OTA-KLH的偶联比为10∶1。用OTA-BSA免疫BALB/c小鼠,获得高效价、高特异的小鼠多抗血清,多抗血清效价达1∶2×105以上,在0.1 ng/m L~8.1 ng/m L的范围内,线性关系良好,R2=0.996 1,IC50为0.18 ng/m L。鼠多抗血清除与赭曲霉毒素B有18%的交叉反应率外,与玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B 1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇等类似物的交叉反应率(CR)均小于0.2%,特异性良好。     

氯霉素全抗原合成及多克隆抗体的制备

用重氮化方法将氯霉素与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联，制备免疫抗原和包被抗原，用ELISA方法进行鉴定。将偶联抗原用弗氏佐剂乳化后免疫德国大白兔。制备多克隆抗体，并用硫酸铵沉淀法初步纯化。用亲和层析法进一步纯化。用所得抗体建立竞争酶联免疫吸附分析法（ELISA）用于氯霉素检测，最低检查限为0.3ng/mL。     

氯霉素人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

将氯霉素以重氮化方法使之分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HSA)载体蛋白连接,三种偶联物选择其中两个分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验熏结果产生了特异性抗体。交叉试验表明:产生的特异性抗体与氯霉素反应明显熏与其他类似物交叉反应不明显。     

氨苄青霉素人工抗原的合成及单克隆抗体的制备

用酸酐法将氨苄青霉素(Ampicillin,AMP)偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和匙孔血蓝蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin,KLH),合成了免疫抗原AMP-KLH和检测抗原AMP-BSA,并进行了鉴定;用免疫抗原AMP-KLH免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术筛选出了3株分泌抗AMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。特性分析显示,单克隆抗体2C3、4E5和4C7的腹水效价分别为1∶1.02×106、1∶5.12×105和1∶5.12×105,其中2C3的AMP半数抑制浓度(IC50)为9.3 ng/m L,与青霉素类抗生素有明显交叉反应,其他类别抗生素的交叉反应率均小于0.01%。     

磺胺地索辛抗原合成及多克隆抗体的制备

磺胺地索辛（Sulfadimethoxine，SDM）是具有对氨基苯磺酰胺结构的磺胺类药物的一种，是一种小分子药物，本身不具有免疫原件，不能直接免疫动物产生抗体，必须与载体蛋白偶联后，才具有免疫原性。     

雌二醇人工抗原合成及其多克隆抗体的制备

雌二醇(estradiol,EST)具有很强的生理功能,对畜禽有广泛的药理作用,但是在动物食品中残留会危害人类健康。雌二醇属于半抗原生物小分子,具有免疫反应性,但不具有免疫原性。本文中雌二醇采用混合酸酐法将肟化产物与牛血清蛋白(bovine serumalbumin,BSA)偶联,同时与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶联,紫外分光光度法测定其交联率。用此合成产物进行动物体免疫,获得了雌二醇的多克隆抗体。经间接酶联免疫测定,其抗血清的稀释度可以达到1:10240,证明雌二醇免疫原的合成成功,为雌二醇酶联免疫试剂盒的研究奠定基础。     

氯羟吡啶抗原合成和多克隆抗体制备

本研究以氯羟吡啶原药为基础,合成了带羧基的氯羟吡啶衍生物,经质谱鉴定结构正确,并用活性酯法和氯甲酸异丁酯法合成抗原,紫外测定偶联比率和最终抗原蛋白浓度,免疫制备抗血清并测定血清特异性和灵敏度,为建立氯羟吡啶酶联免疫法(ELISA)奠定坚实基础。     

牛乳中α-酪蛋白完全抗原的合成及多克隆抗体的制备

In order to gain polyclonal antibody against α-casein, the commercial α-casein were linked with carrier protein BSA and OVA, respectively， as immunogen (α-casein-BSA) and coating antigen (α-casein-OVA). The reaction products were identified by nondenaturing PAGE and SDS-PAGE. New Zealand White rabbits were immunized with the immunogen (α-casein- BSA) to produce polyclonal antibody. The results showed that the titer of the antibody was 1∶256000 and had high cross reactivity with κ-casein. It could be used to detect the total amount of α-casein and κ-casein in milk.     

雌二醇多克隆抗体的制备与鉴定

制备雌二醇完全抗原,并通过免疫家兔得到多克隆抗体,为下一步制备雌二醇单克隆抗体和雌二醇检测ELISA试剂盒奠定基础。试验以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用碳化二亚胺法,合成了雌二醇(E2)的2种免疫偶合物:免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功与否,并对偶合物的蛋白含量、结合比进行测定并以免疫原E2-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,用包被原E2-OVA进行ELISA,对多克隆抗体特异性及效价进行检测。结果表明成功合成了雌二醇人工抗原即免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA,二者的蛋白浓度分别为5.455和7.533mg/mL,结合比分别为7:1和8:1;制备的多克隆抗体特异性好,血清效价为1:106。     

大观霉素人工抗原的合成及其多克隆抗体制备

Using spectinomycin (SPE), carboxyl methyl hydroxylamine hydrochloride （CMO）， glycol diglycidyl ether （EDE）, bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin （OVA） as the main stuff, four artificial-immunogens had been obtained by the N-hydroxysuccinimide-activated ester method and the EDE double functional group method. Ten female rabbits were immunized with this two artificial-immunogens. Animal immune test demonstrated that there were antibodies against SPE in rabbits sera. The polyclonal antibody was measured with indirect ELISA test. The titer was 1∶160000 and the IC₅₀ was 0.484 ng/mL. This study laid the basis for further research on the immune test kit for the SPE remnant.     

己烯雌酚完全抗原的合成和多克隆抗体的制备

采用混合酸酐法,将己烯雌酚与牛血清白蛋白或卵清蛋白偶联形成完全抗原.经紫外分光光度计扫描鉴定,并通过聚丙烯酰胺电泳实验,推算出牛血清白蛋白与DES-HS的结合比是1:25～1:30.以己烯雌酚-牛血清白蛋白为抗原免疫家兔,制备出多克隆抗体,经酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验进行鉴定,并采用酶联免疫吸附方法进行效价测定,抗血清效价均超过了1:10 000.     

多西环素人工抗原的合成与鉴定

建立多西环素人工抗原(Doxycycline,DOX)的合成及鉴定方法。采用戊二醛偶联法将DOX分别与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原(DOX-BSA)和包被抗原(DOX-OVA)。经SDS-PAGE电泳法、紫外可见吸收光谱鉴定,证实人工抗原成功合成,偶联比分别为8.6∶1和3.8∶1。结果表明建立了一种新的DOX抗原合成方法,为进一步制备特异性DOX抗体和建立检测食品中DOX的酶联免疫方法奠定了基础。     

沙丁胺醇人工抗原的合成与鉴定

通过沙丁胺醇(SAL)与琥珀酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,用EDC法将SAL琥珀酸衍生物偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SAL和包被原OVA-SAL,用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SAL免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-SAL的UV与BSA、SAL的相比发生了改变;通过UV分析,SAL-HS与BSA的分子结合比约为7.2∶1;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。