云南省建水县番茄上Tospovirus属病毒的初步鉴定

 2005－2006年对云南省主要蔬菜种植区昆明、红河和楚雄等3个地区进行调查，获得9份疑似番茄斑萎病毒属病毒的样本。通过Tospovirus组引物（Tospovirus Group Primer）进行RT-PCR扩增，其中1份来自红河州建水县番茄上的样品获得约500 bp核酸片段，通过NCBI BLAST网络数据库比对，确定为Tospovirus属的病毒；应用DNAMAN软件与已经公布的Tospovirus属病毒RNA L序列比对分析，从得到的相似性树状图可以看出，云南获得的该样品与血清组Ⅳ的Tospovirus属病毒聚为一簇。     

广东辣椒上首次检测到西瓜银斑驳病毒

2014 年在广东辣椒产区发现疑似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒侵染引起的辣椒褪绿坏死环斑症状。Dot-ELISA 检测显示,该病毒分离物与番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）单克隆抗体不产生血清学反应,表明该病毒不属于TSWV。利用Tospovirus 属病毒通用引物gL3637/gL4435C进行RT-PCR 检测,可以从所有辣椒病样总RNA 中扩增出预期大小约800 bp 的目的片段。基因克隆与序列分析表明,该片段序列与西瓜银斑驳病毒（Watermelon silver mottle virus,WSMoV）中国广州分离物的同源性最高,为97.5%。系统进化分析也显示,该病毒分离物与WSMoV 各分离物亲缘关系最近,并聚类在一个分支。因此,侵染广东辣椒的病毒分离物为WSMoV。     

侵染鸢尾的番茄斑萎病毒鉴定

2020年,在云南中医药大学校园发现叶片表现褪绿斑点、坏死环斑症状的鸢尾植株。用电子显微镜在病叶汁液中观察到典型的正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒粒子。在用感病叶片汁液摩擦接种的普通烟、本生烟上观察到系统坏死斑症状,中国辣椒(PI152225)的接种叶片出现局部坏死斑,但无系统侵染。为进一步明确病原,用RT-PCR扩增番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)的NSs和N基因,序列测定发现,分别与分离自云南番茄和旱金莲的TSWV分离物具有最高的氨基酸序列相似性(99.79%和100%)。结果表明引起鸢尾褪绿斑点病的病原是番茄斑萎病毒。     

番茄斑萎病毒病研究进展

番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）于1915年在澳大利亚被首次报道,现已蔓延至世界各地,自1989年在广州出现以来,已在云南、贵州、四川、广东、广西、山东、河南、河北、北京、天津、陕西、宁夏等番茄主产区大面积发生,成为继番茄黄化曲叶病毒病之后的又一种重要病害。对番茄斑萎病毒的基因组结构特征特性、危害情况以及番茄抗性资源的鉴定等研究进行综述,以期为抗病育种、抗病基因的分子标记开发、基因定位以及克隆等技术提供参考。     

云南澳洲坚果苗木感染番茄斑萎病毒属病毒初报

 在云南省临沧市永德县海拔约800 m 的澳洲坚果（Macadamia sp.）种苗繁育基地发现叶片 褪绿、黄化、叶脉间呈现近似圆形或不规则褐色枯斑的植株。为了确认植株病因,采集典型病株,应用 电子显微镜负染色法、超薄切片和DAS-ELISA 进行检测,在澳洲坚果苗木病叶分离物Maca-LC 的粗汁 液和病叶超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒粒体。该病毒粒子为球形,直径 80 ~ 85 nm。进一步应用DAS-ELISA 方法鉴定,病叶与Tospovirus 的西瓜银色斑驳病毒（Watermelon silver mottle virus,WSMoV）/花生芽坏死病毒（Groundnut bud necrosis virus,GBNV）复合抗血清呈阳性反应。 通过病症典型症状、病毒形态学观察及血清学方法检测表明,侵染云南澳洲坚果种苗的病毒分离物 Maca-LC 为番茄斑萎病毒属Tospovirus 病毒。     

陕西杨凌地区番茄斑萎病毒外壳蛋白基因的克隆与分析

番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）是世界上危害最大的十大病毒之一，为了确定陕西杨凌地区的番茄感染TSWV 情况，采集该地区4 份疑似感染TSWV 的番茄样品，通过表型观察以及PCR 分子鉴定进行分析。结果显示，2 份材料扩增出234 bp 的特异性条带，表明样品感染了TSWV。采用同源克隆方法获得了杨凌地区757 bp TSWV 的外壳蛋白基因（CP），其与西班牙TSWV 分离物同源性最高，为99%，而与昆明的TSWV 分离物亲缘关系较远。     

宁夏银川地区番茄斑萎病毒和南方番茄病毒复合侵染分子鉴定

2021年在宁夏银川地区病害调查时发现番茄植株茎秆和未成熟果实上出现了褐色、不规则形病斑等疑似病毒病的症状.采用Trizol法提取番茄病株样品的总RNA,使用常见侵染番茄的病毒特异性引物进行RT-PCR检测.结果显示:番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)和南方番茄病毒(south...     

北京地区莴苣中番茄斑萎病毒的鉴定

番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是目前已知的寄主范围最广、危害最严重的植物病毒之一。采集北京市顺义地区疑似感染病毒病的莴苣叶片,症状表现为严重的叶片斑驳褪绿、矮化,甚至整株枯萎死亡,发病率可达25%以上;结合发病症状和分子检测技术,证明其病原为番茄斑萎病毒属的TSWV。进一步基于TSWV外壳蛋白基因序列对不同国家和国内其他地区TSWV的进化关系进行了比较分析,结果显示北京地区莴苣中的TSWV与国内已报道的TSWV差异较大,而与西班牙分离的TSWV进化关系最近,表明该TSWV病毒非国内其他地区传播,而是由国外直接输入的病例。     

危害我国番茄的重要病毒病及防控措施

我国鲜食番茄产量稳居世界第一,而番茄病毒病是限制番茄产业发展的重要因素之一,尤其是新型流行性番茄病毒病日益增多,常造成严重危害,已经成为番茄高产稳产的一大障碍。尽管危害番茄的病毒种类比较多,但是目前对番茄产业危害潜力最大的分别来自于菜豆金黄花叶病毒属、毛形病毒属、番茄斑萎病毒属和烟草花叶病毒属。从危害我国番茄的病毒种类、危害番茄生产的4种重要病毒及番茄病毒病综合防控措施等方面进行综述,以期为番茄重要病毒病绿色防控提供参考。     

杏衰退萎黄病病毒的siRNA高通量测序和RT-PCR鉴定

为了明确引起杏衰退萎黄病的病毒种类，利用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）高通量测序技术，结合生物信息寻找杏衰退萎黄样品中的病毒序列，发现存在亚洲李属病毒1（Asian prunus virus 1，APV1）和亚洲李属病毒3（Asian prunus virus 3，APV3）。为了验证该结果，采用RT-PCR对10个待测杏样品进行APV1、APV2和APV3检测，所有样品中未检测到APV2，检出APV1和APV3的样品数分别为3和4个。对检测到病毒的外壳蛋白（coat protein，CP）进行测序和系统进化分析，分别获得了3条653 bp的APV1和4条1 031 bp（或1 032 bp）的APV3 CP基因片段；3条APV1 CP基因核苷酸序列一致性为99.2% ~ 99.8%，与NCBI中已发表的26个APV1 CP基因序列一致性为44.0% ~ 99.8%；4条APV3 CP基因序列一致性为78.5% ~ 99.5%，与NCBI中已发表的26个APV3 CP基因序列一致性为44.7% ~ 99.5%。     

萱草叶斑病的病原鉴定及其生物学特性

为明确在贵州发现的萱草（Hemerocallis fulva）叶斑病病原菌及其生物学特性，采用组织分离法和离体接种法分别对其病原菌进行分离和致病性测定，利用形态学及ITS基因序列分析对病原菌进行鉴定并对其生物学特性进行研究。鉴定结果表明：分离得到的萱草叶斑病病原菌菌株（编号为XCS369）的菌丝为灰白色、绒毛状，菌落中心隆起呈灰褐色，背面橄榄绿色，培养15 d表面可产生白色孢子粉；分生孢子光滑，无色，椭圆至长椭圆形。在以ITS基因序列构建的系统发育树中，XCS369与古巴炭角菌（Xylaria cubensis）聚于一支，且支持率达99%，结合形态特征与系统发育分析将其鉴定为古巴炭角菌。该菌菌丝最适生长温度为25 ~ 28 ℃，最适pH 7，在马铃薯葡萄糖培养基上生长最快，对碳源麦芽糖、氮源酵母浸粉的利用最高，菌丝生长对光照不敏感。     

柑桔黑斑病的发病特点及检测方法研究进展

柑桔黑斑病(Citrus Black Spot,CBS)是一种真菌性病害,主要为害果实,并产生褐色斑点,严重时蔓延至全果,造成果实腐烂,显著影响果实的品质和外观,降低经济价值,被欧美等国列为重要的检疫性病害,近年来该病在我国一些柑桔产区已上升为主要病害。本文主要从柑桔黑斑病的病原菌、发病特点及检测方法等几个方面进行简要的概述。     

避雨栽培对大棚梨病虫害发生及果实品质的影响

以翠冠梨为试材,以避雨期卸掉顶膜作露地栽培为对照,研究避雨栽培对大棚梨果实品质和病虫害发生的影响。结果表明,避雨栽培明显减少大棚梨叶片病害尤其是黑斑病的发生。两种栽培模式的前期(6月29日)病害发生率均很低,发病种类以斑纹病为主。9月13日,避雨栽培的叶片病斑总数比对照减少96.6%,发病种类以灰斑病为主,占病斑总数的70.5%;其次是黑斑病,黑斑病叶片病斑总数比对照减少99.2%。避雨栽培期间,蚜虫的发生量比对照提高了862.1倍,并引发烟煤病。同时,避雨栽培显著减少了翠冠梨锈斑的发生,锈斑指数比对照减少了50.5%～58.2%,可溶性固形物含量比对照减少了0.42～0.71个百分点。在大棚梨的生产上,应优先实行避雨栽培,以减少黑斑病的发生和提高果实品质;对蚜虫及其诱发的烟煤病发生严重的大棚梨园,可采用避雨与露地栽培间隔实施的方法来控制蔓延。     

山药漆腐叶斑病病原菌的鉴定及其生物学特性研究

在河南山药(Dioscorea opposita)主产品种‘铁棍山药’生产中出现了一种新的叶部病害,田间发病株率为6.6%。该病害主要发生在植株下部叶片,病斑圆形褐色,具同心轮纹,后期病斑上产生大量黑色孢子堆。对该病害的病原菌进行了组织分离培养和柯赫氏法则验证。其分生孢子座碗状或浅盘状,分生孢子梗呈笤帚状分枝,分生孢子梗顶端着生棒状产孢细胞;分生孢子长椭圆形、棒形、长卵形或梨形,透明无色,不分隔,两端钝圆,大小为1.7~2.5μm×4.9~6.8μm。病原菌菌落白色绒毛状,产生大量墨绿色胶质状分生孢子团,呈环状排列。用ITS通用引物对病原菌的基因组DNA进行扩增并测序(序列在GenBank的登录号为KY369166),同源性比对结果显示其与露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)的一致性达到99%,结合形态学鉴定结果,确定该病害的病原菌为露湿漆斑菌。病原菌的最适生长温度为30℃,分生孢子致死温度为52℃,pH 5~10之间该菌生长良好,光暗(12 h/12 h)交替最有利于病原菌产孢,菌丝生长的最适碳氮源为乳糖和丙氨酸,产孢的最适碳氮源为果糖和酵母。     

不同形态氮素营养对大白菜芝麻状斑点病发生的影响

 选择高感“大白菜芝麻状斑点病”品系03B9大白菜为试材,调查不同形态氮素营养对其发病的影响;并选择高抗品系C24、P8-1和高感品系03B9、P8-2为试材,在总氮素浓度为25 mmol · L-1,NO3- -N︰NH4+ -N分别为3︰7、5︰5和7︰3的水培条件下,研究氮代谢和抗氧化系统生理指标的变化。结果表明：铵态氮促进芝麻状斑点病发生的作用高于硝态氮和酰胺态氮。随铵态氮比例的增大,感病品系03B9和P8-2较抗病品系病斑数显著增多,叶柄中PPO活性和铵态氮、MDA含量及电导率升高,NR活性和多酚含量降低;抗病品系C24和P8-1叶柄中GDH活性和多酚含量升高,PPO活性、MDA含量及电导率变化不明显。推测营养液中铵态氮的比例增加,影响感病品系氮素代谢中有关酶类的活性,使体内铵态氮过量积累,导致细胞膜系统受到伤害,使液泡内的酚类物质与细胞质中的多酚氧化酶接触,引起褐变,在叶柄表面表现出芝麻斑点症状。     

‘福山包头’大白菜叶柄黑点病发生特点及抗性分析

以‘福山包头’大白菜为试材,利用田间调查、显微观察和叶片离体培养的方法,对‘福山包头’系列大白菜叶柄黑点病的发生特点及抗性进行了研究,以期为改善‘福山包头’大白菜抗病性及新品种选育提供参考依据。结果表明:(1)大白菜叶柄黑点病主要发生于叶柄表皮细胞且起始于细胞周质或细胞壁,该病可发生于大白菜的整个生育期,且进入包心期后发展较快;(2)氮素能诱导叶柄黑点病的发生,且铵态氮较硝态氮诱导效果更明显;(3)氮素浓度与叶柄黑点病的发病程度呈正相关,但氮素并不是影响叶柄黑点病发生的唯一因素;(4)‘福山包头’系列大白菜种质资源中,‘福东2号’‘福山82’对叶柄黑点病的抗性较强,‘福小87-13-13’‘皱福’的抗性较弱。     

铜处理对大白菜芝麻状斑点病发生及总酚含量的影响

选择感病品系03B9 与抗病品系C24 为试材,在水培条件下,研究不同铜浓度处理对大白菜芝麻状斑点病发生、总
酚含量及多酚氧化酶活性的影响。结果表明：随着铜处理浓度的升高,两品系芝麻状斑点病的斑点数明显增加,03B9 芝麻
状斑点病发生程度明显高于C24。铜处理期间C24 总酚含量、PPO 活性较03B9 平均高出25.6% 和77.0%。试验结果初步表
明,水培条件下铜胁迫促进了大白菜芝麻状斑点病的发生,铜浓度与芝麻状斑点病发生程度有关,同时影响了叶柄总酚含量
及PPO 活性。     

Spatial preference heterogeneity in policies for improving urban green spaces

Urban green spaces (UGSs) enhance the quality of urban dwellers’ lives. Thus, efficient policies for improving UGSs—which should reflect urban residents’ needs—are necessary. Additionally, it is crucial to manage the spatial distribution of residents’ preferences to find regions that can produce greater utility within limited budgets. Using online surveys conducted in 2015, which obtained 414 valid responses, this study analyzed urban residents’ preferences for UGS improvement policies and investigated spatial preference heterogeneity for such policies in the planned city of Seongnam, South Korea. A mixed logit model was applied to analyze policy preferences, and the preference heterogeneity level was assessed by coefficient of variation. Additionally, hot spot analysis was performed to examine spatial heterogeneity. The Getis-ord Gi* was computed to identify the spatial clusters of the estimated coefficients and the marginal willingness to pay (WTP). The results indicated a high preference for enhancing quality and connectivity. While the results showed that preference heterogeneity existed in each UGS improvement policy, heterogeneity levels differed per attribute. Statistically significant local spatial clusters of estimated coefficients and marginal WTP were observed for each UGS improvement policy despite global autocorrelation being insignificant. It was observed that estimate coefficients with low coefficient of variation can make extensive spatial clusters; otherwise, the opposite trend might occur. Additionally, marginal WTP hot spots did not change according to attribute but appeared in similar locations. Therefore, spatial heterogeneity analysis is necessary to manage UGSs with higher net utilities given limited budgets. These findings will ensure the satisfaction of all urban residents by identifying their preferences for UGS policies. They will also help prioritize cost-effective implementation of policy considering spatial preference heterogeneity.     

盐胁迫下枣叶片蛋白质组差异的分析

【目的】为了探明盐胁迫下枣蛋白表达的差异,【方法】以较耐盐碱的‘七月鲜’枣品种的扦插苗为材料,经过临界浓度(0.60%)的钠盐(NaCl)处理,取其叶片进行蛋白质双向电泳,经ImageMaster 2D分析,【结果】结果表明,处理与对照之间总蛋白的整体分布模式非常相似,在pH 3~10和MW50~90 kD内的蛋白点分布最多,处理与对照之间量变倍数大于1.5倍的差异点有26个,其中6个蛋白受胁迫上调,20个蛋白受胁迫下调。在上调的蛋白质点中,3个点受盐胁迫诱导增加了近4倍,2个蛋白质点相对丰度增加了2倍以上,表现出强烈的盐诱导特性。说明他们可能在枣的抗盐机制中发挥重要作用。在下调的蛋白质点中,2个点相对丰度降低至对照的5倍左右,表现出强烈的盐抑制特性,说明其可能是对盐胁迫比较敏感的2个蛋白质或多肽,并且在枣的抗盐性机制中也发挥比较重要的作用。【结论】在临界浓度钠盐胁迫下,枣叶片蛋白质表达有显著差异。     

Screen of novel candidate regulators involved in oxidative stress-reprogrammed LPS signaling pathway by comparative phosphoprotein-affinity profiling

AIM: To determine the differences in phosphoproteome between LPS stimulated THP-1 cells with and without previous oxidative stress for screening of more potential regulators.METHODS: Differentiation of THP-1 cells into macrophages was induced by treatment with 100 μg/L PMA for 36 h. Differentiated cells were rested for additional 36 h without PMA treatment, then treated with 100 μmol/L H₂O₂ or medium for 1 h followed by LPS or medium treatment for 30 min. After desalted, phosphoproteins were enriched by phosphoprotein metal affinity column, and were run on 2-D electrophoresis, then the spots were analyzed to show the difference between LPS group (cells treated with LPS alone) and H₂O₂+LPS group (LPS stimulated cells also pretreated with H₂O₂). Finally, some of these spots were identified by MS and subsequent bioinformatic analysis was also conducted. RESULTS: Compared to LPS group, 29 reproducibly changed spots on the 2-D map in H₂O₂+LPS group were visualized and selected for MS analysis. Among these, 12 down-regulated spots (include those disappeared), 17 up-regulated spots (include those newly emerged) were selected. Up to now, 5 of these were identified, which were shown to be involved in various cellular processes such as proteolysis, signal transduction and protein folding. Among these, proteasome beta-4 subunit, which was dramatically down-regulated in H₂O₂+LPS group, was a major component of the proteasome complex and might participate in LPS signalling through various ways.CONCLUSION: With comparative phosphoprotein-affinity profiling, the interference brought by highly abundant house-keeping proteins is minimized, rendering us to detect less abundant signalling molecules. Aforementioned 5 proteins, especially proteasome beta-4 subunit, might be involved in LPS pathway reprogrammed by oxidative stress.