半巢式聚合酶链反应检测外套细胞淋巴瘤bcl—1／IgH基因重排

外套细胞淋巴瘤 (ＭａｎｔｌｅＣｅｌｌＬｙｍｐｈｏｍａ,ＭＣＬ)是一类具有独特临床病理特征的非何杰金淋巴瘤 ,临床表现为病程进展快 ,对常规化疗耐受 ,但单纯依赖形态学特征进行诊断非常困难[1] 。因此 ,寻找一种敏感而特异的检测方法来明确诊断就显得尤为重要。我们利用半巢式聚合酶链反应 (ｓｅｍｉ ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ)来检测此病患者的ｂｃｌ 1/ＩｇＨ基因的重排 ,得到了较好的结果。一、材料与方法1 病例 :2 8例外套细胞淋巴瘤来自 1987～ 1990年德国病理协会下属的基尔淋巴结登记中心。以淋巴结的新鲜冰冻组织作为实验材料。诊断依…     

实时定量聚合酶链反应检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排

我们利用SYBR Green Ⅰ荧光染料，应用实时定量PCR（RQ-PCR）检测了15例B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者免疫球蛋白重链（IgH）基因重排情况，以探讨克隆性IgH基因重排在B-NHL诊断和鉴别诊断上的价值。     

石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排的检测

目的：探讨克隆性免疫球蛋白重链第三互补决定簇区（IgHCD43）基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B－NHL）诊断方面的价值。方法：采用半巢式PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）及银染技术,检测38例B－NHL、4例T－NHL及10例慢性扁桃腺炎,经福尔马林固定、石蜡包埋病理组织的克隆性IgHCDR3重排。结果：29例B－NHL及1例免疫组化未能明确细胞来源的NHL克隆性IgHCDR3重排阳性;4例T－NHL及10例慢性扁桃腺炎克隆性IgHCDR3重排阴性。结论：克隆性IgHCDR3重排可作为B－NHL与反应性增生鉴别的特生标志,大部分情况下可作为系分化标志。     

非霍奇金淋巴瘤患者骨髓单个核细胞BCL-2/IgH、IgH基因重排的检测

本研究检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者BCL-2/IgH基因主要断裂区重排、IgH基因重排,并探讨其对疾病的早期诊断、疗效评价等方面的意义。分别提取70例NHL(60例B-NHL、10例T-NHL)、7例淋巴结炎性肿大患者、20名正常人的骨髓单个核细胞DNA,通过PCR方法检测BCL-2/IgH、IgH基因重排,以凝胶电泳出现相应条带者为阳性,并与患者病理组织学检查进行比较,探讨此两种基因重排发生的相关因素,比较化疗后的动态变化。结果表明,①30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者(DLBCL)中,10例骨髓BCL-2/IgH重排阳性(33.3%),与30例其它B-NHL(除外滤泡淋巴瘤FL及DLBCL)阳性率(6.7%)、20名正常人阳性率(5%)比较均有显著性差异(p均<0.05)。所有T-NHL及7例淋巴结炎性肿大患者BCL-2/IgH重排均为阴性;②对8例BCL-2/IgH基因重排阳性患者进行动态监测,经2个疗程R-CHOP治疗后BCL-2/IgH基因重排明显减少,PCR半定量结果均值由初治0.59降至0.16(p<0.05),6个疗程R-CHOP治疗后PCR半定量均值为0,BCL-2/IgH基因重排完全转阴;③BCL-2/IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占81.8%,在重排阴性患者中占28.6%,两组间有统计学差异(p<0.05)。然而,BCL-2/IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性;④20例DLBCL(均为初治)骨髓单个核细胞DNA检测显示,9例IgH基因重排阳性(45%);30例其它B-NHL(均为初治或复发患者,DLBCL除外)中14例IgH基因重排阳性(46.7%),其两组间无统计学差异性(p>0.05),但对照组20名正常人、10例T细胞淋巴瘤患者及7例淋巴结炎性肿大患者均为阴性;⑤对7例IgH基因重排阳性患者进行动态监测表明,1个疗程的R-CHOP治疗就能显著减少IgH基因重排,PCR半定量结果均值由初治0.42降至0.13(p<0.05),2个疗程后PCR半定量均值为0,重排完全消除;⑥IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占90%,在重排阴性患者中占30%,两组间有统计学差异(p<0.05);IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性。结论:BCL-2/IgH、IgH基因重排均可作为B-NHL早期诊断及评价疗效的特异性指标,这两种重排均与LDH水平相关;BCL-2/IgH基因重排对DLBCL特异性较高。     

非霍奇金淋巴瘤bcl-2／IgH基因重排及微小残留病变的检测

探索bcl-2基因重排在非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发生及演变中的作用,以bcl-2/IgH重排为克隆标志,建立敏感的检测淋巴瘤微小残留病变的方法。用多聚酶链反应(PCR)检测bcl-2/IgH基因重排,用系列稀释试验检测该方法的灵敏度。经检测9种恶性淋巴瘤细胞系中Su-DHL-4和Su-DHL-6有bcl-2/IgH基因重排,用系列稀释试验检测该方法的灵敏度为1:10~5。29例NHL石蜡包埋的组织标本中,共检出6例有bcl-2基因重排,其中滤泡型NHL(F-NHL)4例(36.4％),弥漫型NHL(D-NHL)2例(18.2％),全部在B细胞性NHL中检出。16例F-NHL患者中,4例外周血和骨髓中同时检出bcl-2(MBR)/IgH基因重排,化疗达CR后依然存在。结论提示,bcl-2基因重排主要与低度恶性的B细胞性淋巴瘤有关,重排方式以bcl-2(MBR)/IgH为主。bcl-2基因重排的检测为对滤泡性淋巴瘤微小残留病变的检测提供了一个快速、敏感、特异的方法,对该疾病的分期、疗效和预后的评估有一定的临床价值。     

Bcl-2/IgH基因重排与非霍奇金淋巴瘤关系的研究进展

t(14;18)(q32;q21)基因重排为Bcl-2与免疫球蛋白重链IgH的基因整合,发生在约85%滤泡性淋巴瘤和30%弥漫大B细胞淋巴瘤患者中,可使Bcl-2基因高表达,从而导致瘤细胞过度增殖.对疾病的辅助诊断、微小残留病监测、疗效评价和评估预后等具有重要指导意义.本文就Bcl-2/IgH基因重排的分子特点、生物学功能及临床意义进行综述.     

外套细胞淋巴瘤bcl-1基因重排的分析

外套细胞淋巴瘤 (Ｍａｎｔｌｅｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ ,ＭＣＬ)的诊断目前主要依靠其形态特征 ,但易与其他淋巴瘤相混淆。因此 ,寻找一种敏感而特异的分子标志将有助于对该病的明确诊断。染色体ｔ( 11;14)主要见于ＭＣＬ ,其分子对应物是ｂｃｌ 1基因重排 ,尽管ｂｃｌ 1的断裂点分散于 11ｑ13区内 ,但其中一半以上的断裂点集中在一个 1ｋｂ大小、被称为主要易位簇 (ｍａｊｏｒｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｃｌｕｓｔｅｒ,ＭＴＣ)的区域内[1 ] 。在ＭＴＣ内 ,断裂点又发生在相对更小的区域内 ,正是断裂点相对集中的特点 ,使得ＰＣＲ技术适…     

IgH基因克隆性重排检测在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

目的建立B-NHL临床诊断中IgH基因克隆性重排检测基本方法.方法应用PCR方法,采用IgH FR3A引物,检测了7例B-NHL及4例反应性增生的淋巴结石蜡样本中IgH基因重排情况.结果黏膜相关型边缘区B细胞淋巴瘤（MALT）3例中有2例（2/3）,弥漫大B细胞淋巴瘤2例中2例（2/2）,滤泡淋巴瘤1例中0例（0/1）,套细胞淋巴瘤1例中1例（1/1）检测到IgH基因的克隆性重排.总检测率为5/7（71%）,4例淋巴结反应性增生病例病例均为IgH基因的多克隆性重排.结论PCR-FR3A在鉴别淋巴组织肿瘤性或反应性增生和最终确诊B-NHL上是一项有效的辅助方法.     

Bcl-6基因与弥漫性大B细胞淋巴瘤

bcl 6基因是近年来研究较多的一类与NHL发生有关的癌基因 ,检测其突变和重排以及Bcl 6蛋白的表达 ,可能对DLBCL预后估计具有指导意义     

弥漫大B细胞性淋巴瘤中bcl-6基因异常及其临床应用价值

目的：观察中国人弥漫大B细胞性淋巴瘤（DLBCL）中bel-6基因突变、基因重排及蛋白表达的特征，探讨其在DLBCL发生中的作用及其临床应用价值。方法：应用聚合酶链反应（PCR）、直接测序和免疫组织化学法分析51例淋巴结内外DLBCL和10例淋巴结反应性增生（RLH）石蜡切片组织中bel-6基因5’非编码区突变高频区段E1．7、E1．8、E1．10、E1．11、E1．12的突变和蛋白表达；应用荧光原位杂交（FISH）技术检测32例淋巴结内DLBCL和5例RLH中bcl-6基因的重排。结果：①12／51（23．5％）DLBCL存在bel-6基因5’非编码区突变，主要集中于E1．11、E1．12和E1．10．2／10（20．0％）RLH的生发中心细胞亦可见有bcl-6突变；②9／32（28．1％）DLBCL有bel-6基因重排，而RLH中均未检测到bcl-6基因重排；③38／51（74．5％）DLBCL中可见bcl-6蛋白细胞核表达，表达形式有滤泡样型、中间型、散在型，RLH中可见生发中心细胞均呈bcl-6阳性表达；④bel-6基因5’非编码区突变、重排和蛋白表达之间均无显著性相关（P〉0．05）。结论：①bel-6基因突变和蛋白表达均可同时发生于DLBCL和RLH的生发中心，表明两者是生发中心和生发中心细胞起源DLBCL的标志，可用于诊断和鉴别诊断；②bcl-6蛋白在不同病例中的不同表达形式不仅反映了DLBCL的异质性，还可能与DLBCL的分子亚型和预后有关；③bcl-6基因重排仅发生于DLBCL而不发生于RLH，表明其可能参与了部分DLBCL的发生，并可作为DLBCL诊断的参考指标。     

IgH基因重排PCR分析在淋巴组织细针穿刺中的辅助诊断价值

目的 探讨Ign基因重排检测在细针穿刺诊断淋巴组织病变中的价值.方法 收集淋巴组织细针穿刺病例159例,应用半巢式PCR检测IgH基因重排.将基因重排检测结果与细胞学诊断及组织学随访结果进行比较.结果 穿刺标本中,IgH基因重排检测B-NHL阳性率为72.22%,RH阳性率仅为3.92%.本法敏感性为72.22%,特异性达到96.08%.结论 IgH基因重排检测对辅助淋巴组织细针穿刺标本的良、恶性判断具有一定价值,并且单克隆性结果更有意义.但在淋巴瘤和转移性非淋巴细胞恶性肿瘤的鉴别上不建议应用.     

Bcl-2与弥漫大B细胞淋巴瘤免疫学亚型及预后的关系

目的 从蛋白水平和基因水平研究Bcl-2在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的表达,分析其与DLBCL不同业型和预后的相关关系.方法应用免疫组化技术(Envision法)对73例DLBCL患者进行免疫学分型,标记抗体包括CD3、CD10、CD20、Bcl-6、Bcl-2、MUM-1.其中57例应用荧光原位杂交(FISH)技术检测t(14;18)和bcl-2基因的异常.结果肿瘤细胞CD10、Bcl-6、MUM-1、Bcl-2的阳性率分别为15.1%、38.4%、71.2%、79.2%,生发中心B细胞型(GCB型)16例(21.9%),非生发中心B细胞型(non-GCB型)57例(78.1%).FISH检测的57例中t(14;18)阳性16例(28.1%),其中GCB型5例(31.2%),non-GCB型11例(68.2%).Bcl-2蛋白表达与免疫学亚型存在相关性(P=0.035),与生存时间之间无相关性(P=0.253).t(14;18)阳性组与阴性组相比,生存时间差异有统计学意义(P=0.022),而t(14;18)与免疫学亚型无相关性(P=0.340).Bcl-2蛋白表达与t(14;18)无相关性(P=0.712).结论 Bcl-2蛋白表达町作为与DLBCL免疫学亚型相关的预后标志物,Bcl-2蛋白表达阳性的GCB型患者预后较差;t(14;18)可作为DLBCL独立的预后因素,阳性者预后较差.Bcl-2蛋白表达与t(14;18)无相关性.靶向治疗患者是否应检测t(14;18)尚待进一步探讨.     

B细胞非霍奇金淋巴瘤bcl—2／JH融合基因的检测及临床意义

目的：研究Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）ｂｃｌ－２／ＪＨ重排发生情况及其临床意义。方法：采用ＤＮＡ多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增２３例Ｂ－ＮＨＬ患者新鲜肿瘤组织、骨髓和外周血标本中ｂｃｌ－２重排的主要和次要断裂点（ＭＢＲ、ｍｃｒ）。结果：易位断裂点分别在１０例新鲜肿瘤组织（其中７例滤泡型中有５例，占７１．４％；１６例弥漫型中有５例，占３１．３％）、８例骨髓和７例外周血标本中被测到，绝大部分断裂点发生在ＭＢＲ，仅１例位于ｍｃｒ。同时还发现１８例骨髓形态学检查正常的患者中，有４例ＰＣＲ阳性，其中包括２例临床Ⅰ、Ⅱ期患者，提示其骨髓已有肿瘤细胞存在。从治疗后观察得知，治疗前骨髓ＰＣＲ阴性患者比阳性患者更易达到缓解。结论：ｂｃｌ－２／ＪＨ融合基因的检测对淋巴瘤的诊断与分期、治疗方案的选择、疗效观察及微量残留病的监测均有重要意义。     

聚合酶链反应检测克隆性免疫球蛋白重链基因重排

目的建立较简便、敏感的Ｂ细胞恶性肿瘤微小残留病（ＭＲＤ）检测方法。方法根据免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因的保守序列设计引物，应用半巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）基因扩增技术检测克隆性ＩｇＨ基因重排。结果该方法敏感性达１０－３。６２例Ｂ细胞恶性肿瘤患者，５１例检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，阳性率为８２％，假阴性率为１８％（１１／６２）。同时检测３５例非Ｂ细胞恶性肿瘤患者和２０例正常人均阴性，无假阳性。检测１４例Ｂ细胞非何杰金淋巴瘤患者形态学检查正常的骨髓标本，ＭＲＤ检出率为７１％（１０／１４）。随访５例处于完全缓解期的Ｂ细胞型急性淋巴细胞白血病患者，６个月内ＭＲＤ均阳性，１２个月后３例转阴性，２例持续阳性，１８个月后持续阳性的２例患者均复发，而转阴性的３例仍处于完全缓解状态。结论半巢式ＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ基因重排，方法简便，敏感性和特异性高，可用于Ｂ细胞恶性肿瘤ＭＲＤ检测     

bcl-2基因转染阻断Fas介导的Jurkat细胞凋亡

目的：通过ｂｃｌ２阻断Ｆａｓ介导的细胞凋亡了解ｂｃｌ２基因在淋巴瘤癌变过程中逃避机体免疫监控的作用机制。方法：应用基因重组技术重组ｐＬＸＳＮｂｃｌ２，采用电穿孔法将其与空载体分别转染包装细胞系ＰＡ３１７，将阳性克隆病毒上清感染人Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ，用Ｇ４１８筛选，其阳性克隆进行免疫组化检测，应用抗Ｆａｓ抗体诱导细胞凋亡来模拟细胞毒Ｔ细胞的杀伤机制，观察ｂｃｌ２在淋巴瘤逃避免疫机制中的作用。结果：转染人ｂｃｌ２基因的Ｊｕｒｋａｔ（Ｊｕｒｋａｔｂｃｌ２）细胞较对照Ｊｕｒｋａｔ及转染空载体Ｊｕｒｋａｔ（Ｊｕｒｋａｔｎｅｏ）细胞，ｂｃｌ２表达量明显增加，而Ｆａｓ基因表达量无明显变化。其Ｊｕｒｋａｔｂｃｌ２能明显耐受抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡。结论：人ｂｃｌ２基因在淋巴瘤中过量表达，能部分阻断抗Ｆａｓ抗体诱导的细胞凋亡，ｂｃｌ２基因过量表达可能是淋巴瘤癌变过程中逃脱机体免疫监控的机制之一。     

弥漫大B细胞淋巴瘤的治疗进展

弥漫大B细胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤中最常见的一种类型,也是发生在成人淋巴瘤中最常见的一种类型。其在临床表现、形态学、免疫表型、细胞遗传学、分子生物学、对化疗的反应及预后上都表现出明显的异质性。随着诊断医学的发展和新的药物的开发和应用,弥漫大B细胞淋巴瘤在诊断和治疗方面取得一些进展,特别是在免疫组化的分类和嵌合抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗联合治疗方面,使弥漫大B细胞淋巴瘤在疗效和预后得到了很大的改善。     

荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品质粒及标准曲线的构建

目的：构建荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因标准品重组质粒和标准曲线，为建立实时荧光定量PCR准确检测淋巴系肿瘤微小残留病奠定基础。方法：对TCR VγI-Jγ基因进行序列分析，利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针。提取急性淋巴细胞白血病患者的DNA，经PCR扩增，产物纯化后与pMD 18-T Vector连接，转化到大肠杆菌DH5α，筛选得到标准品的质粒。结果：重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长，表明TCR VγI-Jγ基因已成功克隆。以10^0～10^-5不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增，Ct值分别为21．08、24．34、27．53、30．58和33．25。统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系，回归系数为0．998。结论：所构建的TCR VγI-Jγ基因荧光定量PCR检测标准品特异性和线性关系好，准确可靠，利于统一标准。     

伴MYC、BCL2和（或）BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤在弥漫大B细胞淋巴瘤中的发生率

目的:探究伴MYC、BCL2和（或）BCL6重排的高级别B细胞淋巴瘤在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的发生率。方法:回顾性收集2013年1月至2020年8月共922例DLBCL患者的临床资料,检测C-MYC及BCL2蛋白表达情况,并应用FISH技术检测MYC、BCL2和BCL6基因断裂及拷贝数变化等结构异常。结果:...     

CARMA1基因在活化B细胞样亚型弥漫大B细胞淋巴瘤中的研究进展

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)为常见的侵袭性淋巴瘤,其中活化B细胞样(ABC)亚型DLBCL患者复发率高、生存率低,预后差.核因子(NF)-κB信号通路持续过度活化,是区分ABC亚型DLBCL与其他亚型DLBCL的显著特征之一,亦为导致ABC亚型DLBCL疾病发生的关键信号通路.近年,多项研究结果证实CARMA1通过调控NF-κB信号通路,进而在ABC亚型DLBCL疾病发生中发挥重要作用.笔者拟就CARMA1功能、基因点突变及翻译后修饰等方面对ABC亚型DLBCL疾病发生的影响进行综述.