青蒿琥酯诱导白血病细胞凋亡及机理的实验研究

目的:研究中药青蒿提取物青蒿琥酯对诱导体外培养的U937细胞凋亡作用.方法:采用细胞体外培养,MTT显色法观察青蒿琥酯对U937细胞的生长抑制作用;通过细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量分析检测青蒿琥酯对U937细胞的凋亡诱导作用;上流式细胞仪检测经CD95标记的U937细胞在青蒿琥酯作用前后Fas表达的变化.结果:青蒿琥酯能抑制U937细胞生长,且呈时间和剂量依赖关系;经青蒿琥酯作用后的U937细胞出现凋亡细胞的特征;在青蒿琥酯作用后的U937细胞DNA凝胶电泳可见明显的梯形条带;DNA含量分析出现典型的凋亡峰.青蒿琥酯提高了U937细胞Fas的表达.结论:青蒿琥酯在体外能抑制U937细胞的增殖并诱导其发生凋亡.在一定浓度范围内,青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡随时间和浓度增加而增加.青蒿琥酯能增加U937细胞Fas的表达.     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562凋亡的实验研究

目的观察青蒿琥酯对人白血病细胞株K562抑制增殖和凋亡作用.方法通过MTT显色法观察不同浓度青蒿琥酯对K562的生长抑制作用,通过Annexin V/PI双标记法检测青蒿琥酯对K562细胞的凋亡诱导作用.结果青蒿琥酯在1～8μg/ml浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性;在2～8μg/ml浓度范围内青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系;4μg/ml浓度组的青蒿琥酯在0～72h内,诱导K562凋亡具有明显的时效关系.结论青蒿琥酯在体外能抑制K562细胞的增殖,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用.     

青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株凋亡抑制的实验研究

[目的]观察青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株的增殖抑制作用及凋亡机制探讨。[方法]应用不同浓度青蒿琥酯作用U937、HL60、Jurkat细胞株,MTT法检测抑制率;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡;Western-blot法检测细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase 8和ICAD蛋白表达的变化。[结果]青蒿琥酯能够明显抑制U937、HL60、Jurkat细胞增殖;8μg/ml以上浓度青蒿琥酯作用三种细胞24h、48h、72h抑制率均为Jurkat〉HL60〉U937(均P<0.01);其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase8蛋白出现明显的剪切激活带。[结论]青蒿琥酯既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导急性白血病细胞凋亡,对Jurkat的抑制最强。     

青蒿琥酯对HeLa细胞生长的抑制作用

目的 研究青蒿琥酯对HeLa细胞生长抑制作用。方法 MTT法测定青蒿琥酯对HeLa细胞增殖抑制；用透射电镜观察青蒿琥酯对肿瘤细胞形态学影响；用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期变化和细胞凋亡率；用免疫组化法观察肿瘤细胞端粒酶活性。结果 MTT实验表明青蒿琥酯作用HeLa细胞72h后，细胞存活率明显下降，而且随着药物浓度的增加，抑制作用增强；流式细胞仪检测青蒿琥酯可引起HeLa细胞阻滞于G1期，细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度呈正比；透射电镜观察细胞超微结构呈现典型的凋亡特征；免疫组化检测细胞端粒酶活性降低。结论 青蒿琥酯可抑制HeLa细胞生长，诱导细胞发生凋亡，可降低细胞端粒酶活性。     

青蒿琥酯对人急性白血病原代细胞线粒体膜电位的影响

[目的]观察青蒿琥酯作用于人急性白血病原代细胞后线粒体膜电位的变化.[方法]选取急性白血病患者的骨髓进行原代细胞培养,将终浓度为50、25、12.5μg/mL的青蒿琥酯分别作用于细胞,经线粒体膜电位荧光探针Jc-1染色并固定后,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞形态的变化,并计算红、绿荧光细胞数.[结果]不同浓度青蒿琥酯...     

青蒿琥酯联合硼替佐米对T细胞淋巴瘤细胞的抑制作用观察

[目的]观察青蒿琥酯联合硼替佐米对T细胞淋巴瘤细胞的增殖抑制作用.[方法]MTT法观察青蒿琥酯、硼替佐米对Jurkat细胞的增殖抑制效应及协同效应,瑞氏染色油镜下观察细胞形态变化.[结果]青蒿琥酯、硼替佐米都能够明显抑制Jurkat细胞增殖,表现出凋亡形态学改变.以远低于IC50剂量的青蒿琥酯(4μg·mL-1)联合10～320 ng·mL-1硼替佐米作用Jurkat细胞24h,硼替佐米的JC50从(137.64±6.82 )ng· mL-1降为( 17.72±2.75 )ng·mL-1,联合组生长抑制率均显著高于硼替佐米单药组(P＜0.01),药物联合作用均呈协同方式.[结论]青蒿琥酯能协同硼替佐米抑制Jurkat细胞,有望成为有前途的治疗T细胞淋巴瘤方案.     

青蒿琥酯联合阿霉素对人舌鳞癌Tca8113细胞抑制作用的实验研究

目的研究青蒿琥酯(Art)与阿霉素(ADM)联合应用对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响。方法通过MTT法测定Art和ADM对Tca8113细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术分析细胞周期变化;利用吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色观察经Art作用前后Tca8113细胞形态的改变;应用透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。结果 Art和ADM对Tca8113有显著地抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈明显的时间-剂量效应(P0.05);Art(25μg.mL-1)和ADM(0.39～1.56μg.mL-1)联合给药可对Tca8113产生增强的联合杀伤效果(P0.01);流式细胞术检测Art可使细胞周期阻滞于G2/M期和S期;透射电镜和荧光染色观察可见凋亡细胞染色质凝聚、边集呈新月形。结论 Art对Tca8113细胞有显著地抑制作用,其机制可能为阻滞细胞周期于G2/M期和S期以及诱导细胞凋亡。Art与ADM合用具有较好联合效应,可增强Tca8113对ADM的敏感性。     

青蒿琥酯诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡

目的研究青蒿琥酯(artesunate,ART)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡以及细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响。方法ART处理PC-3细胞后,透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,激光共聚焦扫描显微镜检测PC-3细胞[Ca2 ]i变化。结果ART诱导PC-3细胞发生典型的凋亡形态学变化和G2/M期阻滞;ART100,10,1μmol/L组及阳性对照组的凋亡率分别是8.9%,10.7%,21.0%,24.6%,均高于阴性对照组(P<0.05)。ART作用PC-3细胞后,[Ca2 ]i在15~30min内显著升高,0.5~1h维持在较高水平,4~24h后降到阴性对照组水平。结论青蒿琥酯有诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡和周期阻滞的作用,上调[Ca2 ]可能在其抗肿瘤机制中起重要作用。     

青蒿素和青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用比较研究

目的 对比研究青蒿素及其衍生物青蒿琥酯对人乳腺癌MCF—7细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法 采用体外培养的人乳腺癌MCF—7细胞株，利用SRB法测定青蒿素和青蒿琥酯对MCF—7细胞增殖的影响，FCM法测定细胞周期的变化，亚Gl期含量测定和DAN荧光染色法观察细胞凋亡。结果 10μmol/L青蒿素和lμmol/L青蒿琥酯能明显改变MCF—7细胞的细胞周期，使S期细胞显著减少，G0 Gl期细胞明显增加。青蒿素对MCF—7细胞增殖仅有微弱抑制作用，但其衍生物青蒿琥iB却有显著的抑制作用，IC50为0．3lμmol/L。同样，lμmol/L青蒿琥酷引起MCF—7细胞的凋亡和直接的细胞毒作用明显强于10μmol/L青蒿素的作用。结论 体外研究表明，对肿瘤细胞增殖的抑制青蒿琥酯比青蒿素作用强。     

青蒿琥酯对Tca8113细胞的抑制作用及对RECK蛋白表达的影响

目的探讨青蒿琥酯(ART)对Tca8113细胞的抑制作用及对RECK蛋白表达水平的影响。方法将不同浓度的ART刺激体外培养的Tca8113细胞,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期情况;划痕实验检测ART对细胞迁移能力的影响;免疫细胞化学检测细胞RECK蛋白表达水平。结果不同浓度ART作用Tca8113细胞后可抑制细胞增殖,并能有效诱导细胞凋亡,且均呈现时间、剂量依赖性;ART能将Tca8113细胞阻滞在G0/G1期;ART可降低Tca8113细胞的迁移能力;高浓度ART可上调RECK蛋白的表达水平。结论 ART在体外对Tca8113细胞具有抑制作用;其可能通过上调RECK蛋白表达水平抑制肿瘤的侵袭转移。     

儿童急性淋巴细胞白血病MOST-1基因表达研究

目的 研究MOST-1基因在儿童急性淋巴细胞白血病骨髓单个核细胞中的表达,了解其与免疫分型和治疗反应的关系。方法 采用半定量RT-PCR方法测定了17例新发儿童急性淋巴细胞白血病(其中ALL-L3 3例)患者骨髓单个核细胞MOST-1基因的表达水平;PCR产物经DNA序列测定证实。结果 MOST-1基因仅表达于儿童急性淋巴细胞白血病L3型,而L1和L2均无表达;3例ALL-L2患者治疗前外周血幼稚细胞比例分别为72％、67％和12％,骨髓白血病细胞比例分别为98％、94％和67％,前两例L2患者MOST-1 mRNA的表达水平分别为另一例L3患者的3倍和2倍。2例L3患者经正规诱导完全缓解后无MOST-1基因表达。结论 MOST-1基因表达于儿童急性淋巴细胞白血病L3型,其表达水平与患者治疗前外周血幼稚细胞比例可能有关。     

人急性T淋巴细胞性白血病小鼠模型研究

急性T淋巴细胞性白血病(T-ALL)是一种具有高侵袭性特征的恶性血液肿瘤,建立稳定的动物模型是研究其发病机制及进行潜在治疗药物的前临床研究的重要前提。日益广泛应用的稳定的T-ALL小鼠动物模型主要有小鼠的异种移植模型和转基因小鼠模型。现就T-ALL的小鼠异种移植模型从小鼠品系、移植用细胞株、建模方式及模型的应用进行综述。     

急性淋巴细胞性白血病和非何杰金氏淋巴瘤患者外周血淋巴细胞CD2、CD4和CD8mRNA的表达

采用ＲＮＡ斑点杂交技术检测了Ｔ细胞系来源的９例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）和１０例非何杰金氏淋巴瘤（ＮＨＬ）以及１６例正常人外周血淋巴细胞ＣＤ２、ＣＤ４和ＣＤ８ｍＲＮＡ表达水平，发现ＡＬＬ和ＮＨＬ患者ＣＤ２ｍＲＮＡ与正常人相比明显升高，ＮＨＬ患者的ＣＤ４／ＣＤ８比值有极显著性升高。本结果为首次报道。     

Resveratrol Induces Apoptosis and Autophagy in T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cells by Inhibiting Akt/mTOR and Activating p38-MAPK

Objective To explore the effects of resveratrol-induced apoptosis and autophagy in T-cell acute lymphoblastic leukemia （T-ALL） cells and potential molecular mechanisms. Methods The anti-proliferation effect of resveratrol-induced, apoptosis and autophagy on T-ALL cells were detected by using MTI- test, immunofluorescence, electronic microscope, and flow cytometry, respectively. Western blotting was performed for detecting changes of apoptosis-associated proteins, cell cycle regulatory proteins and state of activation of Akt, mTOR, p70S6K, 4E-BP1, and p38-MAPK. Results Resveratrol inhibited the proliferation and dose and time-dependent manner. It also induced cyclin-dependent kinase （CDK） inhibitors p21 and induced apoptosis and autophagy in T-ALL cells in a cell cycle arrest at G0/G1 phase via up regulating p27 and down regulating cyclin A and cyclin D1. Western blotting revealed that resveratrol significantly decreased the expression of antiapoptotic proteins （Mcl-1 and Bcl-2） and increased the expression of proapoptotic proteins （Bax, Bim, and Bad）, and induced cleaved-caspase-3 in a time-dependent manner. Significant increase in ratio of LC3-11/LC3-1 and Beclin 1 was also detected. Furthermore, resveratrol induced significant dephosphorylation of Akt, mTOR, p70S6K, and 4E-BP1, but enhanced specific phosphorylation of p38-MAPK which could be blocked by SB203580. When autophagy was suppressed by 3-MA, apoptosis in T-ALL cells induced by resveratrol was enhanced. Conclusion Our findings have suggested that resveratrol induces cell cycle arrest, apoptosis, and autophagy in T-ALL cells through inhibiting Akt/mTOR/p7OS6K/4E-BP1 and activating p38-MAPK signaling pathways. Autophagy might play a role as a self-defense mechanism in T-ALL cells treated by resveratrol. Therefore, the reasonable inhibition of autophagy in T-ALL cells may serve as a promising strategy for resveratrol induced apoptosis and can be used as adjuvant chemotherapy for T-ALL.     

急性淋巴细胞白血病细胞遗传学改变及其意义

近年来,细胞遗传学在血液病中发挥越来越重要的作用。急性淋巴细胞白血病(ALL)是一类以常染色体结构或数量改变为特征的恶性疾病。ALL最重要的染色体结构改变包括t(9;22)(q34;q11)、t(12;21)(p13;q22)、t(1;19)(q23;p13),形成BCR-ABL、TEL-AML1、E2A-PBX1融合基因。染色体数量异常包括超二倍体、假二倍体、亚二倍体/近单倍体。现就ALL的细胞遗传学改变,细胞遗传学改变与发病机制,细胞遗传学改变与预后的关系以及细胞遗传学指导治疗进行综述。     

不同浓度碘伏液含漱预防大剂量甲氨蝶呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病口腔溃疡的疗效分析

目的：分析不同浓度碘伏液含漱预防大剂量甲氨蝶呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病口腔溃疡的疗效。方法：将本院在2011年2月-2013年3月收治的80例使用大剂量甲氨蝶呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病的患儿随机分为观察组（n=40）和对照组（n=40）,在一般常规治疗基础上观察组患者加用0．5％碘伏液含漱,对照组加用0．1％碘伏液含漱。结果：观察组口腔溃疡发生情况及溃疡愈合时间都显著地优于对照组患儿（P〈0．05）。结论：0．5％碘伏液含漱预防大剂量甲氨蝶呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病口腔溃疡疗效更确切,无明显副作用,值得临床推广。     

胸苷酸合成酶基因多态性与儿童急性淋巴细胞白血病风险的Meta分析

目的 综合评价胸苷酸合成酶（TS）基因del6多态性与儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）易感性的关系。方法 系统检索Pubmed、Science Direct、Google Scholar、中国知网（CNKI）和万方数据库,获取有关TS基因del6多态性与儿童ALL发生风险的文献资料,评估纳入研究的方法学质量并提取相关数据。以比值比（OR）和95%可信区间（CI）作为效应指标评估关联强度,纳入研究之间的异质性检验和合并OR值计算采用Revman 5.3软件,发表性偏倚应用漏斗图评估。结果 共纳入6个病例-对照研究,包括ALL患儿2104例,对照2320例。Meta分析结果显示,在整体人群比较中4种遗传模型均未发现TS基因del6多态性与儿童ALL易感性有显著性关联（杂合子模型：OR=0.99,95% CI：0.85~1.15,P=0.87;纯合子模型：OR=1.11,95% CI：0.90~1.38,P=0.33;隐性模型：OR=0.97,95% CI：0.76~1.25,P=0.84;显性模型：OR=1.01,95% CI：0.88~1.17,P=0.86）;根据种族进行分层分析也未发现显著性关联。漏斗图未检测到显著性发表性偏倚,敏感度分析表明合并结果是稳健可靠的。结论 目前的Meta分析表明TS基因del6多态性与儿童ALL易感性无关联。     

DNA甲基化、miRNA与急性淋巴细胞白血病的相关性研究

急性淋巴细胞白血病(ALL)是造血系统增生性疾病,是造血干细胞在分化过程中于某一阶段发生分化阻滞、凋亡障碍和恶性增殖的疾病。目前研究证实,DNA甲基化和miRNA表达水平异常在ALL的发病中起重要作用,并影响临床治疗效果。因此研究DNA甲基化和miRNA的异常表达与ALL发生、发展以及预后的关系,可以指导ALL患者个体化治疗,并在基因水平上对ALL患者的预后进行评估。