自噬基因Beclin1在卵巢癌SKOV3细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响及其与紫杉醇耐药关系实验研究

目的:探究自噬基因Beclin1在卵巢癌SKOV3细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响,并分析其与紫杉醇耐药的关系.方法:以人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TXA作为研究对象,构建自噬基因Beclin1真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,并通过试剂盒将其转染至SKOV3细胞中.采用MTT实验测定各组细胞...     

酪氨酸激酶3对赫赛汀耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/H增殖和成瘤能力的影响

探索erb-b2受体酪氨酸激酶3（HER-3）对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/H的体外增殖和体内成瘤能力的影响。方法采用赫赛汀浓度递增法构建SKOV3 耐药细胞株（赫赛汀起始浓度为5 mg/L,经5～8 次浓度递增,每次提高50%）。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测HER-3在15 对非耐药卵巢癌组织和耐药卵巢癌组织中的表达（SKOV3 和SKOV3/H 细胞中的表达）。MTT 实验验证分别转染sh-HER-3 及其对照质粒vector对SKOV3/H细胞增殖能力的影响。将包含sh-HER-3的重组慢病毒质粒及其阴性对照慢病毒空载体质粒vector（均带egfp荧光标签）分别以病毒/细胞数量=15 的比例感染SKOV3/H 细胞,加入2.0μg/ml 的嘌呤霉素筛选,构建稳定转染sh-HER-3 或vector 的SKOV3/H 细胞,将2 株细胞分别注射到裸鼠皮下,复制卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察体内成瘤情况。结果成功构建卵巢癌SKOV3耐赫赛汀细胞株SKOV3/H,且SKOV3/H的群体倍增时间为SKOV3 细胞的1.4～1.9倍。HER-3在耐药卵巢癌组织中的表达水平高于非耐药癌组织（p <0.05）,且HER-3 在耐药细胞株SKOV3/H中的表达水平也高于非耐药卵巢癌细胞株SKOV3（p <0.05）。转染sh-HER-3后,SKOV3/H细胞的增殖能力低于阴性对照组（p <0.05）。转染sh-HER-3后,耐药细胞株SKOV3/H的裸鼠体内成瘤能力降低（p <0.05）。结论HER-3参与卵巢癌的赫赛汀耐药,并正向影响耐药细胞株SKOV3/H的增殖和体内成瘤能力。     

原花青素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨葡萄籽提取物原花青素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法体外培养的SKOV3细胞与25、50、100、200、400μg/ml的葡萄籽提取物原花青素共孵育,分别在24、48、72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞和TUNEL分析细胞凋亡,RT-PCR检测survivin在mRNA的表达情况,Western blot检测SKOV3细胞survivin在蛋白水平的表达。结果不同浓度（25、50、100、200、400μg/ml）原花青素对SKOV3细胞作用48h的细胞增殖抑制率分别为48.67%、53.85%、67.03%、73.78%、77.39%。流式细胞和TUNEL检测经25μg/ml原花青素处理24、48h后SKOV3细胞凋亡率分别为31.98%、45.78%。葡萄籽原花青素还可以明显降低survivin的mRNA和蛋白水平的表达。这些作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强。结论原花青素可能通过降低survivin的表达,在体外抑制SKOV3细胞增殖,并促进其凋亡。     

茶多酚对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及顺铂敏感性的影响

目的 探讨茶多酚(TP)对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及顺铂(DDP)敏感性的影响.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测单独使用不同浓度TP、DDP及低毒剂量TP联合DDP对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制作用,分别计算抑制率、半数抑制浓度(IC50)及增敏倍数.结果 TP、DDP单药均以剂量依赖的方式抑制卵巢癌细胞株SKOV3的增殖.低毒剂量的TP联合DDP作用于细胞后,增殖抑制率明显增加,IC50由单用DDP时的6.555 mg/L下降到3.021 mg/L,敏感性提高到单用DDP的2.17倍.结论 TP对人卵巢癌细胞株SKOV3有生长抑制作用,低毒剂量TP与DDP联合应用可提高SKOV3细胞对DDP的敏感性,减少DDP的用量.     

Genistein抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖和侵袭能力的体外研究

目的 探讨Genistein对卵巢癌细胞株SKOV3增殖和侵袭能力的影响.方法 用不同浓度的Genistein处理SKOV3细胞,MTT比色法、克隆形成实验测定其对细胞增长的抑制情况,细胞黏附实验、Tran-swell小室观察其对细胞黏附、运动和侵袭能力的影响.结果 Genistein抑制SKOV3细胞的生长,并呈剂量依赖性(P<0.05);其对SKOV3细胞的运动和侵袭能力均有明显抑制作用,其抑制率呈剂量效应曲线(P<0.05).结论 Genistein对卵巢癌细胞株SKOV3的增殖和侵袭能力均有明显抑制作用.     

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抗增殖作用

目的:探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖作用及其机制.方法:采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对SKOV3的抑制增殖效应,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率,透射电镜观察细胞的超微结构变化,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白的表达.结果:姜黄素可抑制SKOV3细胞的生长,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系,72h的中效浓度(IC50)为79.96μmol/L,流式细胞仪分析证实姜黄素能使SKOV3细胞聚积在G2/M,电镜观察发现姜黄素可诱导细胞凋亡,姜黄素作用72h后,免疫细胞化学表明突变型P53蛋白(MTP53)及Bcl-2表达减弱,Bax及Fas表达增强.结论:姜黄素对SKOV3细胞有抑制增殖作用,通过下调MTP53、Bcl-2的表达及上调Bax、Fas的表达而诱导细胞凋亡.     

米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和CEACAM6表达的影响

目的  观察米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和癌胚抗原相关黏附分子6（CEACAM6）表达的影响。方法  不同浓度米非司酮（空白对照、1×10-7、1×10-6、1×10-5、5×10-5mol/L）干预卵巢癌细胞系SKOV3 24、48、72h;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对SKOV3的抑制作用;逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记（Western blot）检测不同浓度米非司酮干预下CEACAM6 mRNA和蛋白表达水平的差异,并进行半定量分析。结果  与空白对照组比较,1×10-7和1×10-6mol/L米非司酮对SKOV3的生长没有明显的抑制作用（P＞0.05）;5×10-5mol/L米非司酮显著抑制SKOV3的生长（P＜0.01）,并降调SKOV3细胞中CEACAM6 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论  米非司酮可明显抑制SKOV3的体外增殖,其作用机制可能与抑制CEACAM6的表达有关。     

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3／DDP顺铂化疗效果的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法：将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核糖体蛋白（rpS6）、磷酸化rpS6（p-rpS6）以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果：PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。 PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论：PI-103抑制PI3 K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。     

舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞作用的初步研究

目的:研究舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长和细胞运动的影响以及对基质金属蛋白酶2(MMP2)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响:方法:将不同浓度的舒林酸加入培养液中观察其对SKOV3细胞形态的影响,采用MTT法观察舒林酸对SKOV3细胞生长的影响,通过划痕试验观察舒林酸对SKOV3细胞运动的影响,利用免疫细胞化学方法研究舒林酸对SKOV3细胞MMP2、COX-2表达的影响。结果:舒林酸与SKOV3细胞体外培养可使肿瘤细胞伪足回缩、细胞变圆,MTT试验提示舒林酸可抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长,划痕试验提示舒林酸可抑制SKOV3细胞的运动,免疫细胞化学实验提示舒林酸显著抑制SKOV3细胞MMP2、COX-2的表达,有时间和剂量依赖效应。结论:舒林酸可能通过抑制MMP2、COX-2的表达而抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长和运动。     

拓扑替康对SKOV3细胞Survivin表达的调控

目的 :观察不同浓度拓扑替康 (TPT)对人卵巢癌细胞系SKOV3中Survivin表达的影响。方法 :采用免疫组化和RT PCR方法 ,检测体外不同浓度TPT(0 .2 4 4 μg/L ,3.90 6 μg/L ,6 2 .5 μg/L ,1mg/L ,1 6mg/L ,1 2 8mg/L)作用于SKOV348h后SurvivinmRNA及蛋白的表达。结果 :随TPT浓度的增加 ,SKOV3细胞中SurvivinmRNA及蛋白的表达明显减少 ,呈正性剂量效应关系 (P <0 .0 5 )。结论 :TPT能够抑制卵巢癌细胞SKOV3中SurvivinmRNA和蛋白的表达。