犬细小病毒血凝抑制抗体和中和抗体的关系

对８份犬细小病毒免疫的犬血清同时进行中和（ＳＮ）抗体和血凝抑制（ＨＩ）抗体检测。结果,ＳＮ抗体和ＨＩ抗体具有正比线性关系,ＳＮ抗体近似于６倍ＨＩ抗体,其中ＨＩ抗体检测可在３ｈ内获得结果,操作简便,通过测定ＨＩ抗体效价即可推算出ＳＮ抗体的效价。     

应用微量血凝抑制试验和气管环中和试验检测传染性支气管炎抗体…

应用家兔Ａ型魏氏梭菌培养液处理的鸡传染性支气管炎病毒作血凝抑制抗原，建立了血凝抑制（ＨＩ）试验方法，监测ＩＢ疫苗的免疫鸡血清ＨＩ效价，结果表明与气管环中和试验测得的中和抗体效价呈正相关，ｒ＝０．５２５，两组抗体效价ｔ检验差异极不显著（Ｐ＜０．０１）。用其监测卵黄抗体、灭活的血清抗体以及用高岭土处理的血清抗体，结果与相应示处理的血清抗体效价一致，用以对江苏、山东两省的７个未作ＩＢ疫苗免疫的鸡场２０个     

牛传染性鼻气管炎病毒gB ELISA抗体与中和抗体相关性分析

牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）是牛传染性鼻气管炎（IBR）的病原体,常引起流产和呼吸道感染等综合征,给养牛业造成了巨大经济损失。gB作为IBRV中最保守的抗原蛋白,是IBRV诊断的重要靶蛋白。为探究牛gB–ELISA抗体水平与VNT效价的相关性,本研究采用阻断ELISA和VNT两种不同的方法对某一牛场50份血清进行IBRV gB ELISA抗体检测和中和抗体测定。gB ELISA结果显示,阳性血清19份,阴性血清31份;中和抗体结果阳性17份,阴性33份。通过统计学相关系数分析,gB抗体阻断率和中和抗体效价值的相关系数为1.0,从而说明IBRV gB ELISA抗体和中和抗体呈较强的正相关。本研究为使用IBRV gB ELISA抗体水平评估牛群中IBRV抗体保护效果提供理论依据。     

我国部分城乡犬狂犬病中和抗体水平调查

以国际兽疫局(OIE)推荐的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对随机采自广东、河北、北京等地区的573份犬血清进行了狂犬病病毒中和抗体效价的测定,以确定犬群中狂犬病的免疫状况。结果显示,在不同地区或不同城市的动物防疫区域中,犬体内狂犬病病毒中和抗体平均水平存在着明显的差异,城市犬的中和抗体水平较高,有的中和抗体保护水平(0.5IU/mL)阳性率高达100%,少数则达不到保护水平,不同防疫区域狂犬病中和抗体水平为(0.08±0.03)~(4.39±1.45)IU/mL,平均保护水平阳性率为46.3%;乡村看家犬病毒中和抗体水平普遍较低,大部分犬体内无中和抗体,只有个别犬体内存在水平较低的中和抗体,平均保护水平阳性率为1.8%。     

MDCK细胞感染犬传染性肝炎病毒后的超微结构观察

MDCK细胞感染犬传染性肝炎病毒(ICHV)BJ—1株后6h未见明显改变;12～18h胞核肿大,核内形成黑色颗粒样球状体;24h胞核内偶见病毒粒子,36h许多细胞内含病毒、病毒副晶体、形态各异的包涵体和多种板层样结构;48h感染细胞核膜以破损或出芽方式将成熟病毒粒子释入胞浆.     

犬传染性肝炎病毒提纯及其部分物理化学特性的分析

用聚乙二醇提纯犬传染性肝炎病毒(ICHV)。对提纯病毒,测定其完整粒子和不完整粒子的浮密度分别为1.336g/ml和130g/ml,沉降系数分别为747S和285S;用PAGE分析病毒蛋白质,含12种多肽,用SDS—PAGE测定其分子量,分别为11.5、7.8、7.0、6.4、5.8、5.4、3.2、2.7、2.4、1.8、1.6和1.3KD;提纯病毒核酸,测定其沉降系数为28S,分子量为18.77×10~6D,解链温度约为82℃,病毒核酸为线状双链DNA,核酸含量为12.5％。     

犬细小病毒自家灭活疫苗的血凝抑制抗体测定

犬细小病毒病是由犬细小病毒感染引起的一种急性传染病,以剧烈呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少为主要特征,并可引起犬急性心肌炎,症状与猫泛白细胞减少症相似,是危害我国养犬业最为严重的传染病之一。     

犬传染性肝炎病毒的细胞质内发生途径

应用免疫金电子显微镜技术,研究了犬传染性肝炎病毒(ICHV)在犬肾传代细胞内的形态发生及抗原定位,发现ICHV除了在宿主细胞核内发生外,还有细胞质内发生途径.在细胞质内,病毒核壳体的装配以均质致密包涵体和副晶格包涵体为“基地”,这与细胞核内形态发生方式相似.免疫金标记显示,细胞质包涵体中含有大量的ICHV抗原成分,是核壳体在细胞质内装配的病毒结构蛋白来源.同时,在感染的细胞质内也观察到与细胞核内相同的病毒核心样结构.     

应用电镜原位杂交技术对宿主细胞内犬传染性肝炎病毒DNA定位

应用电镜原位杂交技术，在超微水平上对犬传染性肝炎病毒（ＩＣＨＶ）ＤＮＡ在感染的犬肾传代细胞内的分布进行了定位研究。结果胶体金颗粒不仅特异地标记在细胞核致密型包涵体上，而且在细胞质致密型包涵体上也有胶体金颗粒的特异标记，提示细胞质内含有大量ＩＣＨＶＤＮＡ成分，从而为ＩＣＨＶ的细胞质内装配途径提供了证据。     

犬传染性肝炎微量HA诊断研究

作者对犬传染性肝炎(ICH)微量血凝诊断法(MHA)从试剂、术式和样品处理方面进行了研究。肝脏样品采用60℃加热,3000 r/min离心的处理方法。术式采用总量为0.1mL的3排微量法,即血清样品的第1、2排分别加4单位1型犬腺病毒(CAV-1)和2型犬腺病毒(CAV-2)HA抗原,第3排加稀释液作为血清对照,同时测定CAV-1和CAV-2的HI抗体;检测肝脏和培养物样品HA效价,则用HA增强法,即第1、2排分别加稀释液和CAV-2血清为测定排,第3排加CAV-2和CAV-1两种血清为特异性抑制排。结果60份肝脏样品、80份细胞培养物和60份血清样品全部正确检出,与微量补反(MCF)检验结果全部相符。另外进行了新鲜和醛化人O型RBC比较试验,结果两者完全一致。     

LAMP快速检测犬传染性肝炎方法的建立及应用

根据GenBank上公布的犬腺病毒I型（CAV-I）E3基因序列,设计了3对特异性环介导等温扩增（LAMP）引物,以CAV-I DNA为模板,通过条件优化建立了犬传染性肝炎LAMP快速检测方法,该方法能够在63℃恒温下30min内实现目的核酸的大量扩增,在可见光下即可直接观察扩增产物荧光颜色变化来判定结果。特异性和灵敏度试验表明,该LAMP检测方法只对CAV-I有特异性扩增,对其他无关核酸无扩增。与常规PCR检测相比,LAMP的检测灵敏度较好,最低检出限为10-7TCID50,是PCR检测方法的100倍。临床样品检测结果表明, LAMP阳性检出率为36%,与病毒分离鉴定的结果符合率达96.8%,与PCR检测的结果符合率达100%,且快速简便,成本低,适用于基层实验室的快速疾病诊断。     

犬传染性肝炎病毒的形态发生学及抗原定位研究

应用免疫金电子显微镜技术研究了犬传染性肝炎病毒(ICHV)在犬肾传代细胞内的增殖过程及其病毒抗原在感染细胞内外的定位.结果显示:(1)吸附在细胞膜表面的病毒粒子,主要通过细胞吞饮作用侵入细胞,而吸附在微绒毛膜表面的病毒粒子则可直接“渗入”细胞;(2)在病毒感染不同时用的细胞核内观察到均质型、微粒型、颗粒型、副晶格型、病毒包涵体型及致密型等6种类型包涵体,其中前5种能被免疫金标记,它们是尚未形成病毒粒子的抗原蛋白、病毒装配后剩余的抗原蛋白或ICHV的病毒粒子结晶,致密型包涵体未被免疫金标记,可能是病毒DNA;(3)感染细胞内出现的某些特殊结构均不具有病毒抗原性,其中纤维样结构和管状结构在病毒增殖过程中起支持作用.     

犬瘟热病毒免疫蛋鸡血清抗体与卵黄抗体消长规律的研究

试验旨在了解产蛋鸡对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)抗原的免疫反应及其血清抗体和卵黄抗体的消长规律,为制备卵黄抗体提供依据。将CDV接种Vero细胞和DF1细胞进行传代并测定其病毒滴度,选取细胞病变出现早、病毒滴度高的Vero细胞毒作为接种病毒抗原免疫蛋鸡。每10 d免疫蛋鸡1次,第4次免疫后每30 d加强免疫1次。免疫前及免疫后每10 d采血分离血清,每5 d收集鸡蛋提取卵黄抗体,用琼脂扩散法和间接ELISA法测定其抗体水平。结果显示,血清抗体比卵黄抗体的滴度高,两者呈正相关性,卵黄抗体出现较血清抗体迟3~5 d,卵黄抗体在第3次免疫后3~5 d就已达到较高水平,此时即可开始收集鸡蛋制备卵黄抗体。     

玉树地区流浪犬传染性肝炎血清学调查

采用血凝/血凝抑制试验对青海玉树地区的30份流浪犬血清样品进行了犬传染性肝炎病毒抗体检测,结果检出阳性犬2只,阳性率为6.67%。表明玉树地区流浪犬存在传染性肝炎病毒的感染,应引起相关部门的重视,加大该地区犬传染性肝炎防控力度,控制该病的发生和流行。     

实验性犬传染性肝炎肝胆的扫描电镜和透射电镜观察

透射电镜下,犬传染性肝炎急性坏死型病例肝细胞线粒体高度肿胀,嵴断裂。病变严重的,肝细胞胞浆固有结构崩解、碎裂。核内包涵体由基质和ICHV粒子构成;在不含包涵体的核内也见到ICHV粒子。核内的ICHV粒子通过溶解的核膜或由于核崩解而释入胞浆;当细胞膜局部破裂或整个细胞崩解时,细胞内的ICHV粒子释放于细胞外。在嗜酸性小体的胞浆内观察到ICHV粒子。窦状隙内皮细胞和星状细胞呈现与肝细胞类似的变化。扫描电镜下,组织学呈凝固性坏死的胆囊粘膜袁面平坦无结构;亦见胆囊粘膜有局部灶坏死,与周围界限明显,坏死灶外围的上皮细胞结结构不整,上皮顶部凸出的颗粒大小不一或脱落。透射电镜下,呈坏死的胆囊粘膜上皮细胞固有结构消失,呈均质状;其余部位的上皮细胞微绒毛断裂、脱落;线粒体肿胀,嵴溶解,上皮顶部堆集大量的致密小体,细胞间连接复合体结构消失;亦见血管均质坏死,血管内皮的坏死与粘膜上皮的坏死同步或先于其发生。     

犬传染性肝炎的诊断与防治

由犬传染性肝炎病毒(CAV-Ⅰ)引起的疾病在犬、狐、熊等动物中有很强的致病性。犬传染性肝炎病毒主要引起犬传染性肝炎和熊、狐脑炎。该病毒广泛分布于全世界,是对犬业、毛皮动物养殖业危害最大的疫病之一。本文主要就CAV-Ⅰ的流行状况、诊断及免疫作一简介。     

抗犬瘟热病毒VHH抗体噬菌体库的构建与筛选

为构建特异性犬瘟热病毒（CDV）的纳米抗体库,获得抗CDV的VHH抗体,本试验利用CDV免疫羊驼,四免后采集外周血淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,利用巢式PCR扩增纳米抗体序列。将目的片段连接至pComb3x噬菌体展示载体,并电转至TG1宿主菌,挑取40个克隆进行菌液PCR验证,随机挑选13个阳性单克隆进行测序,计算抗体库库容量,加入辅助噬菌粒拯救获得的噬菌体展示抗体库。经过3轮淘选,富集对CDV结合力高的噬菌体。利用毕赤酵母系统表达两株结合力高的噬菌体,经Ni柱纯化后,利用ELISA进行噬菌体结合力的鉴定。结果表明,四免后羊驼血清效价达1：25 000,达到建库要求,构建的噬菌体展示文库库容量达3.41×10⁹ PFU。经过3轮淘选,特异性抗体库经稀释100倍后,ELISA检测仍为阳性,表明特异性结合CDV的噬菌体得到明显的富集。ELISA结果表明,两株纯化的纳米抗体与CDV的反应性显著高于对照组。以上结果提示,本研究成功筛选出2株特异性结合CDV的VHH抗体,为VHH抗体在犬瘟热的诊断和治疗方面的应用奠定了基础。