成年皮肤干细胞原位培植研究的哲学思考

干细胞是动物体内一种独特的基本细胞类型，当分化时，有些可能发展成为特殊类型的细胞、组织和器官，另一些仍维持干细胞，准备替代机体损伤和衰老的细胞。它们本身能自我复制，以供机体终生组织更新的需要。干细胞的培育研究为人类治疗破坏性和消耗性疾病带来了新的希望。国外学着重于干细胞的的离体培育研究，而我国徐荣祥运用整体性原则构建了成年皮肤干细胞生长发育的微环境，已原位培植成功，使烧伤创面达到再生愈合。现就有关干细胞的研究进展作如下阐述。     

透射电镜观察特定原位培养细胞样品的制备

通过透射电镜观察体外培养细胞 ,最早的方法是将细胞培养在载玻片上 ,按照顶扣法制备样品即可得到满意的结果[1] 。现在大部分体外培养的细胞生长在玻璃培养瓶中 ,需要用硅胶刮子将细胞刮下来然后离心 ,再按常规方法制作超薄切片才能在电镜下观察[2 ] 。有些细胞 ,如在塑料培养皿(直径 35mm)中生长的神经细胞 ,如果要求观察该皿中某个特定神经元的超微结构 ,按上述方法制备样品是不能满足要求的。为此 ,我们建立了塑料组织培养皿中特定细胞连续超薄切片的制备技术。1　材料与方法1.1　样品制备送检组织培养皿 (直径 35mm)中的培养细胞 ,先用…     

挑战生命科学前沿—解读徐荣祥和他的干细胞研究

当前,对于生命科学的研究,世界已从对基因的狂热转向对干细胞的关注。西方科学家普遍认为干细胞的研究将为临床医学提供广阔的应用前景。特别是在组织工程学方面,干细胞被认为可以解决长期困扰临床的组织器官不足和免疫排斥的难题,从而实现人类用人工培养的组织和器官自由更换疾病组织和器官的目标。 当整个世界在西方科学家的引导下,集中全力启动并开展干细胞体外组织培养的远征时,我国科学家徐荣祥却独树一帜,在完成烧伤组织的全能修复的基础上独创了原位干细胞培养模式。这一模式的诞生将世界干细胞组织工程研究首次划分为原位和体外两种模式、东方和西方两大阵营。徐荣祥的干细胞研究建立在其成功的临床实践的基础之上,因此,对世界干细胞研究具有现实的指导和借鉴作用。 本刊今日特别刊登记者采写的长篇报道,记述徐荣祥的干细胞研究,并解读这项研究对于世界干细胞研究的意义。     

人类组织器官原位再生科学新时代的开创者北京荣祥再生医学研究所所长——徐荣祥教授

徐荣祥．生于1958年．山东人．1982年毕业于青岛医学院。现任中国中西医结合学会烧伤专业委员会主任委员．中国青科协副会长．《中国烧伤创疡杂志》社主编．北京美宝烧伤创疡研究所所长．北京荣祥再生医学研究所所长。他创立发明烧伤湿性医疗技术和湿润烧伤膏（国家卫生部推广项目、国际专利）．创立组织器官原位再生科学．发现动物成体组织中的潜能再生细胞（美国专利）．发明创立细胞体内、体外克隆器官技术（美国专利），发明细胞、器官再生的再生物质（美国专利）．创立组织器官再生医学（国际著作权）。著有：《烧伤医疗技术蓝皮书》．《再生医学研究》．人类第一部器官原位再生应用医学专著《BURNS REGENERATIVE MEDICINE ANDTHERAPY强（KARGER版）．国家科技丛书《烧伤再生医学与疗法临床手册》、《胃肠再生复原保健》．主编现代医学进展丛书《当代外科学进展》等。     

种子细胞双相接种技术促进组织工程骨体外成熟的研究

目的 比较观察双相接种法和静置接种法构建组织工程骨对种子细胞增殖、分化和成骨表达的影响。方法 取健康志愿者骨髓，密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞并进行体外扩增、诱导分化，然后应用双相接种法和静置接种法与脱钙骨基质（DBM）复合构建组织工程骨，体外培养3周，用倒置显微镜、扫描电镜观察细胞密度、形态及基质分泌情况，并在不同时相点测定组织块中DNA含量、碱性磷酸酶（ALP）活性及钙含量变化。结果 倒置显微镜下双相接种法构建的组织块可见大量具有一定折光性的梭形细胞存在于胶原基质中。扫描电镜见双相接种法构建的组织块切面较平坦，孔隙较小，细胞包埋在胶原中，而静置接种法构建的组织块可见细胞、细胞外基质较少。在体外培养过程中，双相接种法组织块中细胞的DNA含量、ALP活性均高于静置接种法，钙含量在培养2周后高于静置接种法。结论 双相接种法是一种高效的组织工程骨构建方法，有利于提高接种效率和促进组织工程骨的体外成熟。     

组织工程化子宫片层构建的实验研究

目的利用组织工程方法体外构建了与子宫壁内膜和肌层相近的子宫片层。方法将分离培养的兔子宫平滑肌细胞和基质细胞分别与液态Ⅰ型胶原支架材料混合,依次接种于自制静态力学拉伸模具中,再将上皮细胞接种在基质层上,形成组织工程化子宫组织。采用组织学和免疫组织化学方法观察所构建的组织工程化子宫的组织学特征,扫描电镜检测上皮细胞微结构。结果分离培养的兔子宫平滑肌细胞、基质细胞和内膜上皮细胞的纯度均达到95％以上。在静态力学拉伸下培养14天后,在胶原凝胶上生长的平滑肌细胞和基质细胞按拉伸方向有序排列,上皮细胞生长在最上层。激素处理后,扫描电镜观察显示上皮细胞表面有羽状突或纤毛,并且附有大量的微绒毛。结论由平滑肌细胞、基质细胞、上皮细胞和Ⅰ型液态胶原构建,并经静态力学拉伸构建的组织工程化子宫片层能较好地模拟自然子宫的形态结构和功能。     

体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和胶原表达特性的研究

目的　研究体外单层培养条件下猪半月板纤维软骨细胞增殖和胶原的表达,为构建自体组织工程化半月板奠定基础。　方法　采用改良的Klagsbrun法,从8只45d龄长枫杂交仔猪的半月板消化获取细胞进行体外单层培养。形态学观察、群体倍增时间(populationdoubletime,PDT)、增殖速度趋势图、原位杂交及免疫细胞化学染色法作为评定指标。　结果　半月板组织的平均细胞获得率为(2.31±0.66)×10     

食蟹猴骨髓基质干细胞体外诱导分化的实验研究

为观察食蟹猴骨髓基质干细胞（BMSC）体外培养及诱导分化情况，分离食蟹猴的BMSC，以神经干细胞培养液和分化诱导因子进行体外培养和诱导分化。结果发现，分离得到的食蟹猴BMSC能在体外培养中增殖，分化，这些具有克隆能力的BMSC能表达神经干细胞特异性抗原Nestin，并能进一步诱导分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞，免疫细胞化学检测可见有GFAP和NSE抗原表达。提示灵长类BMSC是多分化潜能细胞，具有较强的自我更新和多分化能力，在适当的诱导分化条件下可形成具有神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）特征的细胞；BMSC可作为神经干细胞的种子细胞。     

恒河猴骨髓基质细胞体外诱导分化成神经干细胞的实验研究

为研究恒河猴骨髓基质细胞（BMSC）体外培养及诱导分化为神经干细胞的可行性，分离恒河猴BMSC，在体外应用神经干细胞培养液和细胞因子进行诱导分化，利用免疫细胞化学方法进行鉴定。结果发现，恒河猴BMSC能在体外培养中增殖，分化和表达干细胞特异性抗原神经巢蛋白（Nestin)，并最终能分化为胶质细胞样细胞和神经元样细胞；免疫细胞化学检测可见有神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原性纤维酸性蛋白（GFAP）抗原表达；未发现维甲酸（RA），表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对骨髓基质干细胞的诱导分化具有明显影响作用。提示恒河猴BMSC是具有较强的自我更新能力和多分化潜能的细胞，在一定条件下，可分化为表达神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）抗原的细胞，可作为神经细胞的种子细胞。     

体外培植干细胞复制肠粘膜组织的研究——在第十九届夏威夷国际烧伤会议上的报告

目的：探索利用干细胞培植技术体外再生复制器官，并在体内验证。方法：取孕17天胚胎小鼠肠组织块在体外培养，实验分对照组和实验组，实验组培养液中加适量的促使肠粘膜复制的组合物GIC。连续观察、记录各组织细胞生长情况。另在小鼠胃溃疡模型、胃和十二指肠溃疡病人观察GIC的疗效。结果：胚胎鼠小肠组织块体外培养，对照组10天后逐渐死亡；而实验组则持续生长、增殖、不断复制形成新的粘膜组织。GIC对动物和人消化道溃疡也有明显疗效，可使粘膜组织再生修复，无瘢痕愈合。结论：体外复制肠粘膜组织器官是完全可以实现的，这不仅具有重要的组织修复医疗价值，而且为人体生命科学研究提供了从来没有过的肠粘膜组织活动动态模型。     

Imaging of Abdominal Complications Associated With Hematopoietic Stem Cell Transplantation

Complications associated with hematopoietic stem cell transplantation are common and frequently involve the gastrointestinal tract and other abdominal organs. Imaging is often used to help to confirm or exclude a suspected complication and to facilitate management. In this article, we review the imaging findings of abdominal complications related to hematopoietic stem cell transplantation.     

神经元蜡样质脂褐质沉积病的神经干细胞移植治疗(附3例报道)

目的 研究应用神经干细胞移植治疗神经元蜡样质脂褐质沉积病的效果.方法 2005年6月～2006年12月我们对3例神经元蜡样质脂褐质沉积病患者采用立体定向技术,选取基底节区作为靶点进行神经干细胞移植术.结果 全部接受神经干细胞移植的神经元蜡样质脂褐质沉积病患者均取得一定疗效,无手术并发症.3例患者神经功能均获得一定的提高,其中1例1年后正电子发射体层摄影术结果显示大脑皮质代谢明显提高.结论 神经干细胞移植可作为神经元蜡样质脂褐质沉积病的一种有效治疗方法,但其长期疗效仍需进一步观察.     

International Society for Stem Cell Research (ISSCR) Guidelines for the Conduct of Human Embryonic Stem Cell Research (December 2006)

The International Society for Stem Cell Research (ISSCR) Guidelines for the Conduct of Human Embryonic Stem Cell Research, prepared by an international group of leading stem cell scientists, bioethicists and lawyers, build on the proposals previously drafted by agencies active in the conduct and funding of stem cell science. They aim not to duplicate existing codes of ethics in research with humans or animals, but to address special sensitivities about human embryo research and acquisition of ova, sperm, embryos and somatic tissues from often vulnerable or dependent donors. Guidelines concern the procurement of research materials, the derivation of stem cells, and banking , distribution and use of cells and cell lines derived from pre-implantation stages of human development. They categorize research that on ethical grounds requires special stem cell research oversight (SCRO), and indicate how that should be undertaken. They emphasize international collaboration in these activities, to maximize benefits to humanity.     

Stem cell induced inflammatory hypertrophy of the cauda equina

Stem cell therapy can present clinicians with challenging clinical scenarios, as access to such treatments outpaces the research into their efficacy and safety due to the burgeoning trend of international travel to acquire stem cell therapy, or “stem cell tourism.” Treatment of neurologic conditions remains an enticing potential application of stem cell therapy, often administered intrathecally. In response to such therapy, multiple adverse events have been described in the literature, including neoplasms, demyelinating disease, and seizures, among others. We present a case of symptomatic inflammatory cauda equina nerve root hypertrophy due to intrathecal stem cell infusion, representing a rare but significant complication.     

原位干细胞皮肤再生复制研究的背景

198 8年 8月 1 6日 ,中央各大新闻媒体联合在北京举行大型徐荣祥烧伤湿性医疗技术新闻发布会。中央电视台作为重大新闻播出 ,人民日报、光明日报、健康报等均以头版头条和重要位置刊登新闻和报道。发布会引起国内外医学专家的关注 ,先后有数十个国家烧伤专家访华团来华考察和学习。大家对烧伤湿性医疗技术能治愈深ＩＩ度烧伤不留疤痕愈合感到震憾。但对其机理均尚等待徐荣祥教授新的研究成果。这些年来 ,徐荣祥利用分子生物学技术全面系统地重新对深度烧伤进行治疗和研究 ,在临床上不仅使深ＩＩ度烧伤无疤痕愈合 ,而且使Ⅲ度烧伤可再生新皮…     

体外磁共振成像对神经干细胞标记后弛豫活性的实验研究

目的:研究超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)标记细胞后在细胞成像领域的应用价值。方法:SPIO与多聚赖氨酸(PLL)联合标记神经干细胞,使用4.7T磁共振对标记细胞进行T1WI、T2WI及T2*WI扫描,并测量标记细胞及未标记细胞的弛豫率R2和R2*。结果:①与未标记细胞相比,标记细胞于T1WI时信号强度平均上升24.06%,T2WI时信号强度平均下降50.66%,T2*WI时信号强度平均下降53.70%。②未标记细胞和标记细胞的T2分别为516 ms和77 ms,弛豫率R2分别为1.94/s及12.98/s;T2*分别为109 ms和22.9 ms,其弛豫率R2*分别为9.17/s及43.67/s。标记细胞的R2及R2*分别约增强了5倍及4倍。结论:SPIO能够有效的标记神经干细胞,明显提高标记细胞的R2及R2*,T2WI和T2*WI序列对显示标记细胞与未标记细胞间的信号差异较敏感。     

胚胎干细胞的研究进展与前景

本文综述了胚胎干细胞的全能性或多能性、生物学特性及研究现状和胚胎干细胞的应用,并对其的应用前景进行了展望。