蓬乱蛋白2 干扰和过表达慢病毒载体的构建 及其在hUVECs 中的表达

目的 获得蓬乱蛋白2（DVL2）基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并在人脐静脉内皮细胞中（hUVECs） 稳定表达。方法 ①聚合酶链反应扩增目的基因,设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒为基础构建DVL2 干扰 和过表达载体,酶切电泳、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和测序技术鉴定载体构建是否成功;② 以3 质粒系统在HEK293T 细胞中包装病毒,通过荧光显微镜观察计数并计算病毒滴度;以嘌呤霉素筛选稳定转 染的hUVECs,通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为BC 组（hUVECs 空白对照）、NC 组（HBLV-GFP-PURO 阴性对照）、干扰组（pHB-shRNA-HDVL2）及过表达组（pHBLV-HDVL2）。③通过 qRT-PCR 与Western blotting 检测分别从mRNA 和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平。结果 ①插 入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致。干扰序列峰形图为单峰,无突变。②病毒包装 后,NC 组、干扰组、过表达组滴度分别为2×108、2×108 和1×108 TU/ml,感染人脐静脉内皮细胞的感染效率 达98%。③干扰组DVL2 的表达较BC 组降低,差异有统计学意义（P <0.05）,过表达组较BC 组升高,差异有统 计学意义（P <0.05）,其中干扰效率为61%,蛋白质过表达水平为BC 组的2.7 倍。结论 DVL2 基因干扰和过表 达慢病毒载体构建成功,并能够在原代hUVECs 中稳定表达。     

YAP基因及蛋白在肾癌中的表达及意义

目的：观察Ｙes相关蛋白（Yes-associated protein,YAP）基因及蛋白在肾癌组织中的表达情况及其意义。方法：采用RT-PCR技术及免疫组化检测42例肾癌组织和癌旁正常肾组织中YAP基因及蛋白的表达情况。结果：YAP基因在肾癌组织中阳性表达率为88.10%,而在癌旁正常组织中仅为14.29%。YAP蛋白在肾癌组织中阳性率也高于癌旁正常组织（95.23% vs.30.95%）,两者相比有统计学差异（P<0.05）。结论：YAP可能与肾癌的发生发展密切相关,YAP在肾癌中的异常表达可为肾癌的诊断,治疗提供实验依据,尤其为诱导细胞凋亡和基因治疗肾癌打下基础。     

细胞周期蛋白A在成人急性白血病中的表达及意义

目的　探讨细胞周期蛋白A(cyclinA)在成人急性白血病 (AL)患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法　采用RT PCR法对 10 0例初治及复发的AL患者进行cyclinAmRNA水平的检测 ,对其阳性表达的PCR扩增产物进行DNA测序分析。对其中 75例AL患者 ,用流式细胞术检测cyclinA蛋白表达水平 ,10例正常人作为对照。 结果　 (1)AL患者cyclinA蛋白表达在细胞周期中的分布无异常 ,cyclinA蛋白及mRNA的阳性率 (分别为 6 6 7% ,5 9 0 % )和中位表达水平 (分别为18 5 % ,0 5 39± 0 4 90 )明显高于正常人 ,同一实验条件下未发现在正常人中有cyclinA蛋白及mRNA阳性表达 (P <0 0 1) ;经测序分析发现cyclinA阳性扩增片段序列与基因库中的目标序列完全一致 ;(2 )cyclinA蛋白及mRNA水平与S期、G2 /M期细胞所占的比例呈正相关 (P <0 0 1)。 (3)复发组急性淋巴细胞性白血病 (ALL)患者的cyclinA蛋白表达水平 (15 4 % )明显低于初治组(2 9 5 % ) ,差异有统计学意义 (t=14 4 18,P =0 0 2 2 )。 (4 )cyclinA蛋白或mRNA高表达患者的完全缓解率 (分别为 87 9%、85 7% )明显高于低表达患者 (分别为 38 2 %、5 3 3% ) (P <0 0 5 )。结论　cyclinA在AL患者中是一种增殖标志 ,是影响AL患者完全缓解率的因素 ,其高表达可能是AL患者     

骨形态发生蛋白在胶原诱导关节炎小鼠模型中的表达

目的：建立DBA／1J小鼠胶原诱导关节炎（CIA小鼠）模型,初步研究CIA小鼠外周血单个核细胞中及病变关节组织中BM Ps的表达水平。方法利用牛Ⅱ型胶原诱导DBA／1J小鼠发生关节炎病理改变;利用荧光定量PCR检测发病外周血单个核细胞中及关节组织BM Ps的mRNA的表达水平,利用免疫荧光技术检测关节组织中BM P9蛋白表达水平。结果成功建立了CIA小鼠模型,检测发现BMP4 mRNA和BMP9 mRNA在发病的CIA小鼠外周血单个核细胞及病变关节组织中表达明显下调（P＜0．05）,荧光免疫技术显示BMP9蛋白在CIA小鼠病变关节组织中表达明显下调（P＝0．002）。结论在基因水平BMP4、9在CIA小鼠外周血单个核细胞中及病变组织中表达明显下调,蛋白水平BM P9在CIA小鼠病变组织中表达明显下调。     

包皮岛状皮瓣尿道下裂成形术

目的　探讨应用包皮岛状皮瓣成形尿道治疗尿道下裂的疗效评价。方法　 1996年至 2 0 0 3年治疗尿道下裂 11例 ,平均 6 8岁 ,其中头下型 3例 ,阴茎体型 8例。结果　 11例术后均随访半年以上 ,发生尿瘘 1例 ,尿道狭窄 1例。一次手术成功率 81%。结论　该术式操作简便 ,设计合理 ,安全可靠 ,疗效确切 ,便于普及     

精子蛋白17 mRNA在卵巢癌中的表达及临床意义

目的：测定精子蛋白(Sp)17mRNA在肿瘤组织中表达情况。方法：设计合成特异性引物，建立测定人Sp17mRNA的RT-PCR的方法，以β-肌动蛋白(β-actin)作为内标。检测13份原发卵巢癌组织标本、3份卵巢癌腹水标本和13份其他肿瘤组织标本。用正常睾丸组织RNA作模板进行RT-PCR作为阳性对照，正常卵巢组织为阴性对照。阳性对照可出现2个条带，其中Sp17扩增产物近500bp，β-actin产物234bp。阴性对照仅出现β-actin条带。结果：13份原发卵巢癌组织标本中，11例表达Sp17mRNA，阳性率为84．6％。3份卵巢癌腹水标本中，1份检出Sp17mRNA。其他肿瘤组织标本全部阴性。结论：Sp17mRNA在原发卵巢恶性肿瘤中高水平表达，可以作为临床诊断的辅助指标。     

热休克蛋白60在子宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的研究热休克蛋白60(heat shock protein,HSP60)在子宫颈癌中的表达及意义。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹分析法检测子宫颈癌手术切除组织57例,正常子宫颈组织57例,观察热休克蛋白60的表达与子宫颈癌发生发展的关系。结果①正常子宫颈组织HSP60 mRNA表达明显少于子宫颈癌组织(t=2.65,P<0.05)。②57例子宫颈癌组织和57例正常子宫颈组织中,HSP60的表达阳性检出率分别为:82.5%、19.3%;HSP60的过表达率为57.9%、7.0%。③HSP60在子宫颈癌组织的不同分期中表达差异无显著性(P>0.05)。④子宫颈正常组织HSP60蛋白的表达水平明显低于子宫颈癌组织(t=3.132,P<0.05)。结论HSP60的表达与子宫颈癌组织的发生密切相关。HSP60的表达与子宫颈癌组织的不同分期无关。     

嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白mRNA在支气管哮喘中的表达及意义

目的探讨嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白(MBP)mRNA在支气管哮喘中的表达及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)对40例哮喘患者及20例正常对照者的MBPmRNA表达水平进行半定量分析。探讨了外周血MBPmRNA表达水平与患者嗜酸性粒细胞数量、肺功能的关系。结果(1)哮喘患者组的嗜酸性粒细胞计数(0.86±0.52)和MBPmRNA表达水平(0.37±0.11)均远高于正常对照组(0.21±0.10,P<0.001)和(0.17±0.04,P<0.001);(2)在哮喘患者中,中度持续哮喘组MBPmRNA表达水平(0.42±0.05)和重度持续哮喘组(0.47±0.05),远高于轻度持续哮喘组MBPmRNA表达水平(0.25±0.06,P<0.001)。同时,在中度和重度持续哮喘组间,MBPmRNA含量也存在显著差异(P<0.05);(3)哮喘患者的MBPmRNA表达水平同患者肺功能呈负相关(r=-0.7490,P<0.001)。结论哮喘患者中MBPmRNA表达水平的增高可能与哮喘病情的严重程度密切相关。MBP可能在哮喘疾病的发展过程中起着非常重要的作用。     

游离包皮内板一期矫正尿道下裂

近年来对先天性尿道下裂的治疗方法有较大改进,特别是带蒂包皮内板在尿道下裂修补术中被广泛应用,国内报道较多,但游离包皮内板一期矫正尿道下裂术不多.     

细丝蛋白A在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨细丝蛋白A(filamin A,FLNa)在胃癌组织中的表达水平及其临床意义。方法本研究应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法(SP法),检测47例胃癌组织,及距胃癌组织边缘5 cm以上的显微镜下无癌浸润的正常组织中mRNA及蛋白的表达情况。结果 FLNa蛋白和mRNA在胃癌组织及正常胃组织中的表达阳性率分别为0.345±0.048、0.562±0.085和29.8%、78.7%,较正常胃组织明显降低(P<0.05)。结论胃癌组织中FLNamRNA和蛋白的表达较正常组织均降低,这可能与胃癌的发生、发展有关。因此,检测FLNa的表达可能对胃癌的临床治疗及预后判断有一定价值。     

凋亡抑制蛋白Livin在胃癌组织中的表达

目的: 探讨一种新的凋亡抑制蛋白Livin的2种异构体在胃癌组织中的表达.方法: 采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测胃癌组织中的Livin α和Livin β的表达.结果: 46例胃癌组织中Livin表达的阳性率为58.7%,相应的癌旁组织中Livin不表达或表达很低.结论: Livin的两种异构体在胃癌组织中的表达使其可能成为胃癌的分子标记物或胃癌治疗的新靶点.     

金属硫蛋白及其基因在人胰腺癌细胞株中的表达及意义

目的比较金属硫蛋白(MT)及其基因在人胰腺癌细胞株和耐药细胞株中的表达,探讨MT表达与胰腺癌细胞耐药的关系.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MT基因的mRNA表达情况,采用镉/血红蛋白饱和-电化学分析法检测MT表达情况.结果人胰腺癌细胞株中的MT可由MT-1A、MT-1B、MT-1E、MT-1F、MT-1G、MT-1X及MT-2A基因编码:MT-1B、MT-1E、MT-1X及MT-2A基因和MT在人胰腺癌耐药细胞株中的表达水平显著增高(P＜0.05).结论人胰腺癌细胞株中的MT及其基因表达与胰腺癌细胞株的增殖及化疗耐药性相关.     

游离包皮内板─期矫正尿道下裂

游离包皮内板─期矫正尿道下裂解恒条，郁万福（临沂市人民医院，临沂卫生学校）关键词矫正，尿道下裂近年来对先天性尿道下裂的治疗方法有较大改进，特别是带蒂包皮内板在尿道下裂修复术中被广泛采用，国内报告较多，但有阴茎扭曲、外观不佳等缺点；笔者１９９０年３月至...     

食管癌组织中存活蛋白的异常表达

目的通过比较食管癌组织和癌旁组织中存活蛋白的表达情况,探讨凋亡抑制因子存活蛋白与食管癌之间的关系。方法 T-A克隆制备存活蛋白定量PCR标准品pTA/存活蛋白;采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和免疫组织化学法检测33例经病理证实的食管癌组织(实验组)及其相应的癌旁组织(对照组)中存活蛋白的mRNA和蛋白质表达水平,并分析存活蛋白表达与食管癌临床病理特征间的关系。结果 FQ-PCR结果显示,实验组中存活蛋白的阳性表达率为81.82%(27/33),对照组中阳性表达率为39.40(14/33),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学结果在实验组和对照组中的阳性率与FQ-PCR结果一致,但对照组中的阳性细胞多为炎症细胞(非上皮细胞);存活蛋白的表达与患者年龄、性别及肿瘤分化程度无关(P>0.05),与肿瘤分期和淋巴结转移高度相关(P<0.05)。结论存活蛋白在食管癌组织中的阳性表达可能与肿瘤发生、浸润和淋巴结转移密切相关。     

微小RNA-221作用蓬乱蛋白2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能研究

目的:探讨微小RNA-221(microRNA-221,miR-221)在前列腺癌细胞系中的表达,对神经内分泌样(NE)转化及其侵袭功能的影响.方法:以Northern blot检测雄激素依赖性前列腺癌(LNCaP) 细胞系,雄激素非依赖性前列腺癌(LNCaP-AI) 细胞系中miRNA的表达;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCaP和LNCaP-AI细胞系中miR-221的作用;细胞增殖检测法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;定量逆转录聚合酶链反应和Western blot检测转染细胞中神经元特异性烯醇化酶及蓬乱蛋白2 (DVL2)表达的变化.结果:与LNCaP相比,miR-221在 LNCaP-AI中明显高表达.通过转染使miR-221在LNCaP中高表达可促进细胞的神经元特异性烯醇酶的表达,加速NE转化.而在LNCaP-AI中下调miR-221水平可增强靶基因DVL2的表达,并增强LNCaP-AI的迁移和侵袭能力(P<0.01).结论:LNCaP和LNCaP-AI中miR-221表达有差异.miR-221可促进前列腺癌细胞的NE转化,可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因.MiR-221可通过作用DVL2调节前列腺癌细胞的转移和侵袭.     

双调蛋白在人体子宫内膜组织中的表达特征

目的:研究双调蛋白在人体子宫内膜组织中的表达特征.方法:取增殖期和分泌期的人体子宫内膜,采用实时定量RT-PCR方法,检测双调蛋白mRNA在子宫内膜增殖期和分泌期的表达差异;采用原位杂交和免疫组织化学的方法,从基因和蛋白水平检测双调蛋白在人体子官内膜组织中的表达特征.结果:定量RT-PCR结果显示,双调蛋白mRNA在增殖期和分泌期的子宫内膜均有表达,在分泌期其表达量显著升高,是增殖期的32倍.原位杂交和免疫组织化学结果显示,双调蛋白主要分布于子宫内膜腺体,定位于细胞浆内;双调蛋白mRNA在增殖期和分泌期子宫内膜的表达分别为0.54±0.22和2.96±0.47(P<0.01);双调蛋白在增殖期和分泌期子宫内膜的表达分别为0.77±0.47和2.60±0.43(P<0.01).双调蛋白在分泌期子宫内膜中的表达显著升高,与荧光定量RT-PCR分析的结果相符.结论:双调蛋白在子宫内膜分泌期的表达显著增加,提示该蛋白可能与子宫内膜细胞分化或胚胎着床有关.     

Survivin基因与NET-1 蛋白在膀胱癌中的表达及相互关系

目的:探讨survivin基因和NET-1蛋白在膀胱癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应和免疫组化方法分别检测27例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织survivin基因和NET-1蛋白的表达,并将结果进行相关分析。结果:27例膀胱癌组织中survivin基因阳性17例(62.96%),NET-1蛋白阳性21例(77.78%);10例正常膀胱组织未见survivin基因表达,NET-1蛋白表达10.00%(1/10),二者差异有统计学意义(P<0.01);survivin基因与NET-1蛋白表达有相关性(χ2=7.09,P<0.01),survivin基因和NET-1蛋白表达与膀胱癌WHO分级和TNM分期有关,与患者年龄和性别无关。结论:survivin基因和NET-1蛋白在膀胱癌中过度表达表明膀胱癌发生、发展与细胞凋亡和细胞增殖有关,survivin基因对膀胱癌早期诊断和靶向治疗有重要意义。     

巨噬细胞炎性蛋白1α mRNA在人炎症牙髓组织中的表达及意义

目的:探讨炎症牙髓中巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)的表达,揭示MIP-1α在牙髓炎发生及发展中的可能作用.方法:选择正常牙髓组织及炎症牙髓组织各4例,采用HE染色观察正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织形态学改变,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织中MIP-1α的表达.结果:正常牙...     

新的端粒酶相关蛋白T-STAR在胃癌组织中的表达

目的:探讨新的端粒酶相关蛋白(T-STAR)与胃癌发生、发展的关系. 方法:用半定量RT-PCR的方法检测32例人胃癌及相应癌旁组织中T-STAR mRNA的表达水平. 结果:T-STAR在胃癌组织及癌旁组织中的表达水平分别为4.28±1.31,1.62±0.56(P＜0.01),低分化胃癌T-STAR的表达水平为4.75±1.13,显著高于中分化胃癌中的表达水平3.39±1.19(P＜0.05). 结论:T-STAR在胃癌组织中高表达,且与病理分化程度相关,在胃癌的发生和发展中起重要作用.