脂肪干细胞定向分化的影响因素

脂肪干细胞是一类由脂肪组织分离出来的间充质干细胞,具有自我更新和多向分化潜能,可长期自我更新并在特定的条件下分化形成多种终末细胞。本文总结近年来关于脂肪干细胞定向分化的研究成果、介绍脂肪干细胞的分离培养技术、影响脂肪干细胞成脂成骨定向分化能力的主要因素,以及在各种终末分化细胞之间"转分化"的作用条件,从而为寻找治疗肥胖的新靶点以及骨组织工程学提供新思路。     

脂肪来源干细胞体外成骨和成脂及成神经的诱导分化研究

目的:探讨脂肪来源干细胞体外成骨和成脂及成神经的诱导分化情况。方法:选取10只SPF级雄性SD大鼠,将其不同部位的脂肪组织取出,分别采用不同方法对其向成骨、成脂及成神经等方向进行诱导分化并对其结果进行鉴定。结果:ADSC表达中,CD29占(99.11±0.13)%,CD44占(95.94±0.71)%,CD45占(0.12±0.09)%。经4周的成骨诱导后,茜素红S染色在细胞团中央发现红色钙化结节存在,碱性磷酸酶染色在细胞的胞质内观察到紫红色颗粒,经7d成脂诱导后,油红"O"染色在细胞质内观察到橙红色脂滴;经过6d的神经干培养基诱导后,通过免疫荧光染色证明诱导的Nestin细胞、神经丝蛋白-200以及GFAP等均出现阳性表达。结论:ADSC具备向脂肪、成骨及神经元等细胞进行多向分化的潜能,具有来源广、易于操作、体外增殖快速等优越性,并且不存在免疫排斥及医学伦理学问题,发展前景广阔。     

体外诱导小鼠脂肪来源干细胞向内皮细胞分化的实验研究

目的：探索体外小鼠脂肪来源干细胞（Adipose—derivedstemcells,ASCs）诱导分化为内皮细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）的可行性。方法：利用I型胶原酶消化法和传代培养纯化法从小鼠脂肪组织中分离、培养及扩增ASCs,通过流式细胞仪检测ASCs特异性表面抗原CD29和CD44、CD105的表达;取第2代ASCs进行内皮诱导：即BD基质胶包被＋内皮细胞生长诱导培养基（M199＋10％血清＋10ng／mL血管内皮细胞生长因子VEGF＋10ng／ml碱性生长因子bFGF）。诱导两周左右,倒置显微镜观察诱导前后细胞的一般形态学特征;同时通过成血管实验观察成管腔能力;通过免疫荧光鉴定CD31表型分子的表达。结果：成功培养小鼠ASCs;CD29、CD44、CD90、呈阳性表达,而CD31、CD34、CD45呈阴性表达;诱导后的细胞形态呈三角形或多边形;HE染色观察可见明显的管腔样结构;免疫荧光法CD31表达阳性;MTT法成功记录EPCs增殖生长曲线。结论：成功的诱导小鼠脂肪来源干细胞分化为血管内皮细胞,为后续体内移植实验提供理论基础,同时也为临床受损组织或器官的重建再生提供实验基础。     

脂肪干细胞的诱导分化及其来源的研究

目的:通过组织块培养法得到脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),探讨其诱导分化潜能,并初步研究ADSCs的来源。方法:用脂肪组织块培养法培养原代人ADSCs。第三代ADSCs进行成脂和成骨诱导分化,分别用油红O和茜素红S染色进行鉴定。脂肪组织块培养七天后取脂肪组织进行Hematoxylin-eosin Staining(HE)染色观察ADSCs组织分布。结果:用脂肪组织块培养法成功培养出原代人ADSCs。ADSCs传代到第8代,依然保持着良好的增殖能力和细胞形态。ADSCs能成功诱导成脂肪细胞和骨细胞。通过对培养七天后的脂肪组织块进行HE染色,发现ADSCs主要分布在脂肪组织的间质血管和结缔组织周围。结论:用脂肪组织块培养出来的ADSCs具有成脂和成骨分化的潜能。ADSCs主要定位于间质血管和结缔组织周围。     

脂肪来源间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展

脂肪来源的间充质干细胞具有较强的体外增殖能力,因具有生物学特性稳定、来源充足、体外培养条件低等优势已引起各国学者的关注。脂肪间充质干细胞凭借其多向分化潜能,是人体干细胞库潜在的重要来源之一。目前,研究人员已成功地在体外将其诱导为内皮细胞,成骨细胞、成软骨细胞、脂肪前体细胞、平滑肌细胞,心肌细胞、神经样细胞等。就脂肪来源的间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展作一综述。     

大鼠脂肪干细胞向雪旺细胞诱导分化能力的研究

目的：研究脂肪干细胞（ADSCs）向雪旺细胞的诱导分化,为神经组织工程提供新的种子细胞。方法：取SD大鼠项背处的皮下脂肪,分离出脂肪干细胞并培养传代,流式细胞仪检测细胞表面特异标记CD29,CD34,CD44,CD45,CD90,以评价干细胞的生物学特性;采用b-FGF和forskolin等诱导脂肪干细胞向雪旺细胞分化,光镜观察诱导后细胞形态的变化;免疫荧光染色鉴定雪旺细胞特异性标记物S100、P75和GFAP的表达;PCR检测诱导前后雪旺细胞特异性标记物S100、P75的表达。结果：分离培养的鼠脂肪干细胞CD29、CB90表达呈阳性,而CD34、CD44和CD45表达呈阴性,具有脂肪干细胞的生物学特性;脂肪干细胞经过胶质细胞生长因子的作用,光镜下发现诱导的细胞形态与雪旺细胞相似;免疫荧光染色S100、P75和GFAP阳性;RT-PCR结果显示诱导的雪旺细胞标记物S100和P75表达上调。结论：脂肪干细胞可诱导分化成雪旺细胞,其表型和分子特征与雪旺细胞相似,诱导分化的脂肪干细胞是一种理想的神经组织工程的种子细胞。     

小鼠造血干细胞增殖与分化性能的研究

本文选择Ｙ染色体特异的性别决定基因作为新的细胞遗传标志,采用ＰＣＲ技术研究了小鼠造血干细胞的增殖与分化性能。将雄鼠骨髓细胞输注给经致死剂量射线照射的雌性受体小鼠、ＰＣＲ测试结果表明,所有ＣＦＵ－Ｓ均为供体起源。供体来源的ＣＦＵ－Ｓ在其输入体内后,可通过增殖,分化形成各系造血细胞,但ＣＦＵ－Ｓ中的纤维母细胞和ＣＦＵ－Ｓ重建造血后受体小鼠骨髓中的纤维母细胞均为受体起源。由此可见,小鼠骨髓中的ＣＦＣ－Ｓ     

冻存时间对脐血造血细胞体外增殖潜能的影响

目的研究冻存时间对脐血造血细胞增殖潜能的影响.方法在所分离的脐血有核细胞中加入联合低温保护剂Dextran-40+10%DMSO,经梯度降温后置液氮深低温保存.采用无血清造血细胞扩增液对冻存不同时间的脐血造血细胞进行体外扩增,动态监测扩增潜能.结果将冻存1个月、4个月脐血造血细胞体外扩增5周,其总有核细胞分别被扩增了(1499.0±115.6)倍和(1513.0±110.4)倍,FCs均于体外扩增的第3周达到高峰,分别扩增了(53.8±6.3)倍和(54.8±6.7)倍,D34+造血细胞于体外扩增的第2周均达到高峰,分别扩增了(63.8±6.1)倍和(62.4±5.7)倍;统计分析冻存1个月与4个月后造血细胞扩增结果,不存在显著性差异,>0.05.结论在适宜深低温条件下冻存脐血造血细胞,在一定时间内,冻存时间的长短不会导致其增殖潜能下降.     

适宜电刺激促进脂肪干细胞向神经方向分化

目的:研究不同强度电刺激对脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ADSC)向神经元方向分化的作用。方法:在细胞电刺激室内对ADSCs进行电刺激(10Hz,1h),强度选用五个强度,分别为0 V/cm、0.5 V/cm、1.0 V/cm、3.0 V/cm、5.0 V/cm;电刺激后,对细胞进行流式凋亡检测及CCK-8活性检测,明确不同电刺激对ADSCs的影响;同时,应用免疫荧光染色、Western Blotting评估各组细胞神经特异性标志物microtubule-associated protein 2(MAP-2)与β-tubulin的表达情况。应用RT-PCR检测MAP-2、β-tubulin和neurofilaments 200(NF-200)的mRNA水平,评价不同强度电刺激对ADSCs其向神经方向分化的影响。结果:1V/cm的电刺激,未引起明显的细胞凋亡,同时促进了细胞增殖。此外,1V/cm电刺激后,细胞中的MAP-2和β-tubulin的免疫荧光染色强度及蛋白含量显著提高;MAP-2、β-tubulin和NF-200的mRNA及蛋白量显著提高。3V/cm及更高强度的电刺激可导致凋亡细胞数目显著增加。结论:强度为1V/cm的电刺激可促进脂肪干细胞的增殖,并促进其向神经方向分化,为神经损伤的治疗提供了新的可行方法。     

大鼠脂肪基质细胞成脂分化及慢病毒感染的实验研究

目的诱导大鼠脂肪基质细胞成脂分化,观察慢病毒感染效果。方法大鼠脂肪基质细胞培养至第3代后,间接免疫荧光法鉴定细胞表面抗原CD44,并采用MTT法绘制生长曲线;第3代基质细胞成脂诱导分化为脂肪细胞,油红O染色法鉴定,并行慢病毒感染。结果第3代脂肪基质细胞表面抗原CD44表达呈阳性;细胞生长曲线呈"S"形。细胞经成脂诱导分化剂诱导10d后,胞内有大量脂滴形成,脂滴大小不等。油红O染色显示脂滴被染成红色;携带GFP报告基因的慢病毒可感染成熟脂肪细胞,感染率约为80%,且细胞被感染后状态良好。结果 慢病毒可高效感染由大鼠脂肪基质细胞成脂诱导分化成的脂肪细胞,为研究脂肪细胞的基因功能、相关疾病的基因治疗提供了一个有效工具。     

成年猴雪旺细胞的在体增殖和体外迁移的研究

为了探讨成年猴雪旺氏细胞的在体增殖和体外迁移的能力,我们对用神经结扎术结扎的A组6只3-13岁雄性恒河猴的腓肠神经进行植块培养,部分细胞培养在聚酯纤维上,2-4周后作抗S-100抗体免疫组化染色和电镜观察;B组2只未做结扎的新生猴腓肠神经培养作为对照.结果显示A组雪旺氏细胞平均在培养的第5天从神经段中迁出,年幼者早于成年猴;细胞在纤维上以螺旋状向前迁移;雪旺氏细胞抗S-100蛋白抗体染色阳性;电镜显示,雪旺氏细胞包卷纤维,但是,未见髓鞘形成.B组神经段培养2周仍无雪旺氏细胞迁出.研究表明,结扎神经使其发生瓦勒氏变性,经植块培养、纯化,能够获得可用于移植的成年猴的雪旺氏细胞.     

EPA对草鱼前体脂肪细胞增殖分化的影响

体外培养草鱼前体脂肪细胞,并用不同浓度(0-100 μmol/L)二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)进行处理,噻唑兰比色法(Methyl thiazolte trazoliu,MTT)和油红O染色提取法检测EPA对细胞增殖及分化的影响,Real-time qPCR检测过氧化物酶增殖激活受体家族(Peroxidase proliferation activated receptor,PPARs)、脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipase,LPL)、过氧化物酶体增殖激活受体γ辅助活化因子1α (Peroxisome proliferatoractivated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α)等基因的表达情况.结果显示,不同浓度EPA在2d内均显著促进草鱼前体脂肪细胞增殖(P＜0.05);不同浓度EPA处理ld后均显著抑制草鱼前体脂肪细胞分化(P＜0.05),且100μmol/L EPA处理细胞2d可显著促进LPL和PGC-1α基因的表达(P＜0.05).研究表明,EPA可促进草鱼前体脂肪细胞增殖,抑制其分化,该抑制作用与其调控PGC-1α、LPL等脂代谢基因的表达有关.     

大鼠原生殖细胞培养和分化的研究

研究大鼠胚胎原生殖细胞（primordial germ cells,PGCs)的培养及分化,取受精后11-12.5天大鼠PGCs进行原代培养,光、电镜观察PGCs及其分化细胞的微细结构,碱性磷酸酶染色检测细胞的分化程度,结果显然显示大鼠PGCs大而圆,散在分布,或多个聚集成团,胞质中含有椭圆形的线粒体和丰富的核糖体,在鼠胚成纤维细胞饲养层存在的情况下,PGCs保持未分化状态,碱性磷酸酶反应呈强阳性,在缺乏饲养层的条件下PGCs很快分化,形态不规则,有伪足,碱性磷酸酶反应减弱,进一步分化可形成具有细长突起的神经元样细胞,胞质中含有细丝束的表皮细胞,可见节律性跳动的心肌细胞,具有分泌颗粒的分泌细胞及似血管,心脏形状的管腔结构等,由PGCs分化来的细胞碱性磷酸酶反应均呈阴性,结果表明大鼠PGCs能够分化形成三个胚层的衍生物,生殖嵴来源的PGCsp是一种具有发育全能性的胚胎多能干细胞,本研究同时证明鼠胚饲养层能抑制大鼠PGCs的分化。     

不同的人大肠癌细胞体外侵袭力及相关生物学特性的比较研究

本文对两种高分化人大肠癌细胞的体外侵袭力及相关生物学特性进行了比较研究。利用人羊膜基底膜模型分析结果显示:CCL229细胞对人羊膜基膜的侵袭力及粘附能力均明显高于CX-1细胞。常规扫描电镜观察到CCL 229细胞具有铺展能力强、细胞间相互粘着性差、细胞表面有许多长短不一、形态各异的指状伪足和针状突起等特征。琼脂糖滴分析结果表明,CCL 229细胞体外移动性亦明显高于CX-1细胞。两者的增殖情况未见有显著性差异。     

流式双参数检测在肿瘤增殖,分化与凋亡中的应用

流式细胞术已在生物医学研究中有广泛应用,双参数流式术显著特点是给同一细胞群提供双重信息。本文成功地将这一先进技术用于食管癌增殖、分化与凋亡的检测,显示流式双参数的广阔应用前景。     

高压力对体外培养动脉中膜平滑肌细胞增殖及增殖相关蛋白和生长因子的影响

为了探讨力学因素在血管重建中的作用和机制,观察在单纯高压力条件下血管平滑肌细胞增殖及其相关蛋白和生长因子的变化。应用血管体外应力培养系统,在施加单纯压力的条件下培养猪颈总动脉。按压力大小,将培养的血管分为高压力(21．3kPa)组和正常压力(13．3kPa)组。两组血管均分别培养1、4和7d。免疫组织化学检测血管中膜平滑肌细胞的α-肌动蛋白,增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子A、转化生长因子13l及P53蛋白的变化。结果显示：在高压力的作用下,随着培养时间的延长,α-肌动蛋白呈减少的趋势;增殖细胞核抗原,转化生长因子131、P53持续增多;血小板源性生长因子A先增加而后有所减少。说明高压力可明显促进血管平滑肌细胞表型的转变,发生增殖现象。提示高压力可能通过调节血小板源性生长因子A、转化生长因子131及P53蛋白的表达来调控血管平滑肌细胞的增殖。     

唾液酸对正常造血细胞及白血病细胞增殖分化的影响

本实验以测定细胞电泳率(EPM)反映细胞表面唾液酸相对含量。发现胎肝细胞电泳率明显高于成年骨髓细胞,经神经氨酸酶(NA)处理胎肝细胞、骨髓细胞、L_(801)急性白血病细胞和KCL-22慢性白血病细胞后,细胞EPM均明显下降。细胞集落数及细胞形态学检测表明,NA处理后,多向造血干细胞(CFU-S)增殖能力减弱,向粒系的分化增强;KCL-22细胞生成的集落数明显减少,成熟细胞的比例明显增加。     

氧胁迫对人肝癌细胞生长分化和凋亡的影响

采用不同浓度的抗坏血酸(50—800μmol/L)和硫酸亚铁(2.5—40μmol/L)系统生成以羟自由基为主的各种程度氧胁迫,使之作用于人肝癌细胞。本文所采用的不同程度的氧胁迫均能抑制癌细胞的生长。低水平氧胁迫可使肝癌细胞失去某些恶性特征,趋向分化,表现为细胞表面对Con-A的凝集力、甲胎蛋白含量、γ-谷氨酰转肽酶和酪氨酸-α-酮戊二酸转氨基酶活性都朝着分化方向变化,差异显著。分化后的细胞克隆形成能力显著降低。在分化过程中,出现一定量的凋亡细胞。随着氧胁迫程度的增高,凋亡细胞增多,表现为非贴壁细胞增多,细胞体积变小,染色质凝缩在核膜边缘,呈新月形,核碎裂,但质膜完整。细胞核中DNA降解成大约21.2kbp大小的大片段DNA。有望通过严格控制氧胁迫程度来减慢肝癌细胞增殖,促进分化和凋亡,使恶性细胞逆转成良性细胞。     

五味子甲素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的　探讨五味子甲素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法　用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,五味子甲素以不同浓度加入细胞培养体系 ,作用不同时间后 ,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况 ;用对硝基苯二钠基质动力学法 (PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性 ,用改良的Lowry法测蛋白含量。 结果　五味子甲素在 0 75× 10 -5mol/L及 0 75× 10 -9mol/L浓度范围内 2 4h ,72h ,0 75× 10 -4 ～ 0 75× 10 -7mol/L 48h促进成骨细胞增殖 ,在 0 75× 10 -5～ 0 75× 10 -6mol/L浓度范围内 48h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论　五味子甲素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。