γ射线对啮齿动物细胞DNA聚合酶β活力的影响

采用＾３Ｈ－ＴＴＰ掺入法和ＤＮＡ聚合酶α、γ选择性抑制剂－乙基马来酰亚胺，研究了不同剂量、不同剂量率γ射线照对重组大鼠ＤＮＡ聚合酶β、ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠肝细胞和ＳＭＭＣ－ＬＴＮＭ肝细胞核内ＤＮＡ聚合酶β活力的影响。     

DNA聚合酶β—在分子放射生物学中的作用

介绍了ＤＮＡ聚合酶β三个方面的研究进展：（１）ＤＮＡ聚合酶β参与ＤＮＡ修复合成的功能区域以及重要活性氨基酸；（２）ＤＮＡ聚合酶β活性调控机制；（３）ＤＮＡ聚合酶β在放射生物学中的作用和意义。     

突变型DNA聚合酶β碱基切除修复活性的分析

目的分析162位Val→Ala突变型DNA聚合酶β（DNA polymerase β,polβ）碱基切除修复活性的变化,为探讨修复基因DNA聚合酶β突变在肿瘤发生发展中的作用积累实验依据。方法异丙基-β—D-硫代半乳糖苷（IPTG）分别诱导含有野生型和162位Val→Ala突变型DNA聚合酶β表达载体（pQE80L—Wpolβ和pQE80L-Mpolβ）的大肠杆菌DH5α;通过镍柱亲和层析法纯化蛋白,复性后蛋白定量;退火合成含有单碱基缺失的DNA底物,与纯化的野生型和突变型DNA聚合酶β蛋白进行BER修复试验。结果通过诱导、纯化得到38kd野生型和突变型DNA聚合酶β蛋白;在BER实验中。野生型DNA聚合酶β能够在DNA底物的酶切位点处将其完全切开,而突变型DNA聚合酶β仅部分将其切开。结论162位Val→Ala突变型DNA聚合酶β碱基切除修复能力显著减弱,提示肿瘤发生发展与polβ基因修复活性降低密切相关。     

输血传播病毒-DNA聚合酶链方法的建立及应用

目的：建立输血传播病毒（ＴＴＶ）－ＤＮＡ聚合酶链反应方法并应用于新疆地区不同人群ＴＴＶ感染的检测。方法：根据已报道的ＴＴＶ基因痛列（ＤＤＢＪ序列号：ＡＢ００８３９４）,通过引物设计软件ＳＱＮＣＥ和ＯＬＩＧＯ在其ＯＲＦ１区设计一对ＰＣＲ引物,扩增产生一个３１５ｂｐ的扩增片段,产物经ＢｇⅠⅡ酶切分别产生一个２１９ｂｐ和９６ｂｐ的酶切片段。结果：用建立的ＰＣＲ方法在１５例维存尔族转氨酶升高的非甲－非庚型     

转化生长因子β的临床应用及其前景

转化生长因子β是多功能的细胞因子，参与了体内多种病理和生理过程，并在创伤愈合，免疫抑制等方面具有重要的临床应用前景。局部或全身应用的ＴＧＦβ已被用于软组织修复，骨修复和缺血损伤修复，全身应用的ＴＧＦβ还可用于自身免疫疾病的防治；而ＴＧＦβ拮抗剂则可望应用于慢性炎性纤维化，艾滋病和其他疾病。     

抵抗素研究进展及其在肿瘤核医学中的应用

抵抗素是脂肪细胞分泌的一种多肽类细胞因子,是肥胖与胰岛素抵抗和糖尿病联系的纽带,其在体内分布广泛,但现阶段研究还存在很大的争议.目前,抵抗素的检测方法主要是酶联免疫吸附分析、相对定量实时聚合酶链反应技术、放射免疫分析和蛋白质印迹法.乳腺癌患者血清抵抗素水平为(5.23±6.90)mg/L,明显高于对照组的(1.46±2.00)mg/L.通过对抵抗素在肿瘤核医学中的应用研究,可进一步研究其与乳腺癌在分子水平上的关系.     

乙型肝炎病毒聚合酶片段的表达及其在血清学检测中的应用

目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并与HBV-DNA实时荧光定量检测结果比较。结果成功将HBV-Pol基因插入原核表达载体pQE30,并在大肠埃希菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,在检测的274例乙型肝炎患者中,HBsAg+/HBeAg+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBe+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBc+患者血清中的抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率58.8%,而正常人血清抗-HBp均为阴性。运用此法测得的血清抗-HBp阳性率和实时定量PCR检测结果无统计学差异(P=0.359)。结论成功表达了HBV-Pol片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究乙型肝炎患者血清HBV-Pol抗体的血清学意义奠定了基础。     

聚合酶链反应(PCR)检测水中钩体DNA方法的建立和初步应用

目的:为了建立一个检测水中钩体DNA的技术方法。方法:本研究采用了根据1993年C.Gravekamp设计的引物G_1G_2序列自行合成的引物G_1G_2建立了检测致病钩体DNA的PCR方法。运用此方法并结合“优筛法”对采自云南河口、蒙自等地区108份水样进行检测,并与分离培养后经中国药品生物制品检定所鉴定结果进行了比较。结果:两组方法检测所有水样呈阴性,其精确度和一致性达100％,但分离培养方法漏检率为8.3％(9/108)。结论:建立了PCR检测水中钩体DNA方法。此方法简单、快速、准确,适用于一般实验室及大规模水样钩体DNA的检测,值得推广应用。     

尿液小分子物质检测及其应用前景

尿液小分子物质检测因其具有采样方便、无创等优点,在疾病筛查中受到关注。但有关尿液疾病标志物的报道十分有限,究其原因是尿液中小分子有机物含量低、抗原性弱而难以检测。近年来,随着各领域检测技术的进步,这一难题有望得到解决。本文系统介绍几种具有前景的检测技术,如间接竞争酶联免疫吸附测定、实时定量免疫聚合酶链反应、气相色谱-质谱联用仪等,以及尿样检测中的注意事项。     

一种高效T载体的构建及其对人端锚聚合酶HPS结构域的克隆

目的：制备一种高效T载体，并检测其克隆PCR产物的效率。方法：构建质粒pGH-T，它包含2个Xcm Ⅰ酶切位点，并在两位点间插入一段约600 bp的DNA序列。用Xcm Ⅰ彻底消化质粒pGH-T后，回收线性化大片段，即得T载体。利用此T载体克隆人端锚聚合酶(tankyrase)HPS结构域的PCR产物，并用限制酶切鉴定克隆的结果。结果：自制T载体可高效克隆PCR产物，其效率可达80％～100％。结论：自制T载体对PCR产物的克隆效率与商品完全相同，但使用方便且价格低廉。     

应用荧光定量聚合酶链反应检测血清、肝组织中HBV-DNA含量观察HGV感染对慢性乙型肝炎HBV复制的影响

目的　探讨庚型肝炎病毒 (HGV)感染对慢性乙型肝炎 (CH B)患者乙型肝炎病毒 (HBV)复制的影响。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、过氧化物酶与抗过氧化物酶复合物 (PAP)法免疫组织化学、荧光定量PCR(FQ PCR)技术对 5 6例CH B患者血清HGV RNA、肝组织HGV Ag、血清及肝组织中HBV DNA含量分别进行了检测 ,并将血清HGV RNA与肝组织HGV Ag的表达、HGV RNA ,HGV Ag阳性与阴性患者HBV DNA含量进行了对比研究。 结果　血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性分别为 8例 (1 4 3 % )、1 0例 (1 7 9% )。血清HGV RNA阳性与肝组织HGV Ag表达显著相关 (P <0 .0 1 ) ,但部分肝组织HGV Ag阴性患者亦有血清HGV RNA表达。血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性与阴性患者血清及肝组织中HBV DNA含量均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　HGV感染对CH B患者HBV复制无影响。肝脏是HGV的复制场所 ,但可能亦有肝外组织器官中复制。HGV至多具有微弱的致病性 ,但仍然需要进一步研究。     

利用2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）测定细胞活力的方法与应用

目的：利用细胞内脱氢酶对2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）的催化作用建立比目前常用的3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四氮唑（噻唑蓝,MTT）法更可靠的测定细胞活力的方法。方法使用不同浓度的TTC溶液测定细胞活力,并确定TTC的有效浓度范围。在计算所测定值与细胞数量函数关系的基础上,通过与传统测定细胞活力的MTT法进行比较,分析该方法的可行性。结果0．5％～1．0％浓度范围内的TTC溶液可用来测定细胞活力,测定值与细胞数量之间存在线性关系,与MTT法得到的结果基本一致,可避免MTT法测定过程中来自于细胞培养体系中其他抗氧化物质的非特异性干扰。结论 TTC可用于测定细胞活力,可替代常规的MTT法,具有操作简便,费用经济,结果可靠等优点。     

人可溶性OX40L蛋白ELISA检测试剂盒的研制及其在自身免疫性疾病诊断中的应用

目的研制特异性检测人可溶性OX40L蛋白（sOX40L）的ELISA试剂盒,探讨其在自身免疫性疾病临床诊断中的应用。方法利用两株识别不同抗原表位的鼠抗人OX40L单克隆抗体1G1和4C12分别作为包被抗体和检测抗体,采用双抗体酶联免疫夹心法研制特异性检测人sOX40L的ELISA方法,并对其稳定性、精确性和特异性进行分析。结果①建立的检测人sOX40L酶联免疫试剂盒在抗原浓度为3.91～250ng/ml范围内有良好的线性关系,并具有良好的稳定性、较高的准确性和特异性。②利用该ELISA方法检测到sOX40L蛋白在肾病综合征和Graves’病患者血清中表达水平均显著高于健康对照组。结论成功建立了检测人sOX40L蛋白的ELISA试剂盒,应用该方法检测到sOX40L在多种自身免疫病患者血清中异常高表达。该试剂盒在OX40L分子基础研究以及自身免疫病的临床诊断方面具有潜在的应用价值。