多发性骨髓瘤血管新生的体外研究

探讨多发性骨髓瘤细胞系培养上清液对人骨髓来源内皮细胞系(HBMEC)的增殖、迁移及血管新生的作用。用含2％胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养液培养骨髓瘤细胞系获得上清液,将此培养液培养HBMEC,研究其时HBMEC的增殖及迁移的影响,并将此液放入含有携带HBMEC微珠的三维纤维蛋白中,研究其对血管新生的影响。结果表明,与含2％FBS的RPMI 1640培养液比较,骨髓瘤细胞系培养液对HBMEC的增殖有明显促进作用(P<0.001),并促进HBMEC的迁移,诱导毛细血管管腔的形成(长度及宽度)(P<0.001)。结论:骨髓瘤细胞系可能通过分泌某些细胞因子促进HBMEC增殖、迁移及血管新生。     

反应停治疗多发性骨髓瘤21例分析

多发性骨髓瘤（MM）是一种浆细胞恶性增殖性疾病，其主要治疗措施是化疗，患者痛苦较大，缓解率不高。近年来随着MM发病机制的探讨，认为抗血管新生可能是治疗MM的新的有效措施。目前抗血管新生剂研究较多的为酞咪哌啶酮（商品名反应停）。我院2001～2006应用反应停治疗21例多发性骨髓瘤，取得了良好的疗效，现报告如下。     

维生素D3对血管新生抑制作用的研究

骨病是多发性骨髓瘤(MM)的重要临床表现之一，1．25(OH)2D3(VD3)在治疗骨病的同时，还具有抗血管新生的作用。本实验目的是研究VD3，对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的人骨髓来源内皮细胞系HBME-1的增殖、迁移、微血管形成的抑制作用，以便了解应用VD3治疗MM新的作用机制。     

初诊多发性骨髓瘤患者血管新生的研究

1994年Vacca等首次研究证实，多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓血管新生明显增加，与疾病进程及不良预后有关，提示血管新生在MM的发病机制中可能具有重要的作用。我们在本研究中通过测定新诊断MM患者骨髓微血管密度（MVD）及骨髓、血浆中血管新生因子与基质金属蛋白酶（MMP）的浓度，分析血管新生与MM之间的关系，以探讨血管新生在其发病机制中的意义。     

多发性骨髓瘤治疗的新靶点——血管内皮生长因子

近二十年来血管新生（Angiogesis）在肿瘤发生、转移中的作用日益受到重视。同实体瘤一样，多发性骨髓瘤（MM）骨髓微血管密度（MVD）被认为是有力的预后指标。血管内皮生长因子（VEGF）是众多调节血管新生的细胞因子中的重要一员，近年来对VEGF在MM中的病理生理作用的研究越来越多，我们就此作一综述。     

VEGF反义RNA促骨髓瘤细胞凋亡及抑制内皮细胞形成血管作用的体外研究

本研究探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）反义RNA对人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及内皮细胞ECV304体外血管形成的影响和以VEGF反义RNA进行多发性骨髓瘤（MM）基因治疗的可行性。将VEGF121反向克隆入真核表达质粒pIRES2-EGFP构建重组质粒AS-VEGF，酶切、测序鉴定。用此真核表达重组质粒转染人骨髓瘤细胞系U266，G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR、Westernblot法分别检测阳性克隆中VEGFmRNA和蛋白的表达；利用MTT法、流式细胞术检测转染细胞增殖、凋亡的变化；利用基质胶中内皮细胞ECV304的网络形成检测血管形成。结果表明：获得了携带反义VEGF基因的真核表达重组质粒AS-VEGF；VEGF121反义RNA部分阻断了U266细胞中VEGF的表达，转染重组质粒的U266细胞VEGFmRNA和蛋白表达都较对照组细胞有明显减少，细胞的增殖受到抑制，凋亡增加。转染重组质粒的细胞培养上清在基质胶中作用ECV304细胞后的血管形成较对照组亦有明显减少。结论：VEGF反义RNA可以下调VEGF表达，从而抑制骨髓瘤细胞系U266增殖，增加其凋亡并抑制血管形成。     

多发性骨髓瘤细胞脑源性神经营养因子对血管新生作用的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)细胞脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平及其与MM细胞诱导的血管新生的关系。方法采用RT-PCR法、Western blot法及ELISA法检测MM细胞系KM3、RPMI8226细胞BDNF的表达及分泌。采用MTT法观察MM细胞培养上清液对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的作用;用改良的Boyden小室法观察MM细胞培养上清液对HUVEC迁移的影响;采用体外小管形成实验,观察MM细胞培养上清液对HUVEC分化的影响。结果KM3、RPMI8226细胞不仅表达BDNF mRNA,也表达和分泌BDNF蛋白,BDNF的基础分泌水平在其生物学作用范围内。KM3、RPMI8226细胞培养上清液均可明显促进HUVEC增殖,含50.0%KM3细胞培养上清液组和完全KM3细胞培养上清液组HUVEC数分别为对照组的(1.85±0.23)倍和(2.16±0.29)倍(P<0.05),抗人类BDNF中和抗体可部分抑制其促增殖活性;含50.0%KM3细胞培养上清液组HUVEC迁移指数为1.85±0.23,完全KM3细胞培养上清液组HUVEC迁移指数为2.16±0.29,与对照组比较,差异有统计学意义(P值均<0.05),并可明显促进基质胶中网状毛细血管形成(P<0.01),抗BDNF中和抗体可明显抑制其作用。结论MM细胞表达和分泌BDNF,BDNF可能参与MM细胞诱导的血管新生。     

干扰素-α2b对慢性髓系白血病抗血管生成作用的体外研究

本研究旨在应用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及K562细胞探讨干扰素-α2b在慢性髓系白血病(CML)中抗血管生成作用。用ELISA法检测K562细胞系培养上清液中VEGF和bFGF水平;应用real-time RT-PCR法检测103、102、10U/ml IFN-α2b作用K562细胞24、36、48小时VEGF、bFGF mRNA的表达;通过MTT法、Transwell室及体外微管形成实验研究K562细胞培养上清液及IFN-α2b对HUVEC增殖、迁移及体外分化的影响。结果表明:K562细胞系表达和分泌VEGF和bFGF,细胞培养上清液能明显促进HUVEC的增殖、迁移、体外微管形成,其作用随着细胞培养上清液浓度的增加而增强;IFN-α10U/ml作用K562细胞24、36、48小时,VEGF相对表达量为1.64±0.18、1.49±0.14、1.31±0.05,bFGF相对表达量分别为1.53±0.10、1.29±0.15、0.79±0.13(p=0.002),随着药物浓度增高,细胞VEGF、bFGF相对表达量无明显差异。结论:CML存在血管新生,K562细胞分泌和表达促血管新生因子VEGF和bFGF,促进HUVEC的增殖、迁移、体外微管形成,干扰素通过抑制HUVEC的增殖、迁移、微管形成,下调K562细胞VEGF和bFGF mRNA表达,具有一定程度的抗血管新生作用。     

血管内皮生长因子基因多态性与糖尿病慢性并发症

糖尿病（diabetes）的慢性并发症涉及全身各个系统，如神经、心血管、泌尿、肌肉运动、消化系统等，微血管病变是导致这些慢性并发症的主要原因。糖尿病在增加动脉粥样硬化发病危险性的同时，也导致了视网膜病变、肾病及神经病变等特殊的微血管病变，这些病变反映了潜在的内皮功能异常。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor．VEGF）是在糖尿病微血管并发症中起关键作用的一种细胞因子，又称血管通透因子（vascularpermeabilityfactor．VPF）。具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。缺氧、胰岛素、糖基化终产物、血管紧张Ⅱ（angiotensinII，AngII）、内毒索、生长因子等均可刺激血管平滑肌细胞、胶质细胞、内皮细胞等过度表达VEGF。近年来很多研究表明，VEGF基因多态性与糖尿病的慢性并发症有关，现简单综述如下。     

血管内皮细胞生长因子-A及肿瘤相关巨噬细胞在多发性骨髓瘤中的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是一类浆细胞恶性克隆性疾病,发病机制复杂.MM的发生、发展与新生血管形成及骨髓微环境密切相关.新生血管形成受血管内皮细胞生长因子(VEGF)等血管形成调节因子调节,可促进MM细胞增殖、迁移.肿瘤相关巨噬细胞(TAM)活化后,亦可产生VEGF等促血管生成因子,从而促进骨髓新生血管形成,促进MM发展.笔者拟就VEGF-A、TAM在MM发病中的研究进展进行综述.     

多发性骨髓瘤细胞对共培养内皮细胞分化的影响及其机制的初步研究

目的 研究人多发性骨髓瘤（MM）细胞对内皮细胞分化为管状结构的影响及调控脑源性神经营养因子（BDNF）分泌的初步机制。方法 采用人MM细胞系RPM18226细胞或原代MM细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）混合共培养和隔离共培养；以同期单独培养的HUVEC为对照，对与MM细胞共培养的HUVEC进行Matrigel基质管状结构形成实验，评价MM细胞对HUVEC血管新生能力的影响；采用ELISA方法检测两种共培养体系培养上清中BDNF的含量；用抗人CD29和CD18的单克隆抗体（单抗）对MM细胞进行预处理后，在混合共培养的基础上进行管状结构形成实验并检测培养上清中BDNF的含量。结果 与同期单独培养的HUVEC相比，与RPM18226细胞隔离共培养的HUVEC形成的管状结构数量明显增多，但增加幅度（约75％）低于混合共培养体系（约113％）。原代MM细胞促HUVEC管状结构形成效应在隔离共培养体系和混合共培养体系分别为138％与188％。HUVEC单独培养上清中BDNF的含量为（12．4±5．1）ng／ml，RPM18226细胞混合共培养上清和隔离共培养上清的BDNF含量分别为（38．5±8．2）ng／ml和（31．6±7．2）ng／ml；原代MM细胞混合共培养上清和隔离共培养上清的BDNF含量分别为（37．1±8．7）ng／ml和（27．9±7．6）ng／ml。两种黏附分子抗体能不同程度地阻断混合共培养体系中MM细胞促HUVEC管状结构形成效应，并抑制BDNF的分泌。结论 MM细胞可刺激共培养HUVEC分化为管状结构；并受到MM细胞与HUVEC间可溶性细胞因子和黏附作用的共同调控，其调控机制与BDNF相关。     

EGCG对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的抑制效应及机制初探

本研究探讨绿茶茶多酚成分之一表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的影响及其机制。体外培养多发性骨髓瘤细胞KM3,观察不同浓度EGCG作用后的培养上清对血管内皮细胞株HUVEC迁移和形成血管能力的影响。ELISA法检测KM3细胞培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平;RT-PCR方法检测KM3细胞VEGF mRNA表达水平。结果表明:EGCG以浓度依赖方式抑制KM3细胞培养上清促内皮细胞迁移的作用,5,25,50和100μmol/L的EGCG迁移细胞数目分别为414±27,299±70,202±42及116±13个,且EGCG的浓度与内皮细胞的迁移数目呈负相关(r=-0.952,p<0.05)。同时,内皮细胞形成小管的面积随EGCG浓度的升高而减少,25及50μmol/L时的面积分别是88343.9±3231.1和60897.5±914.1μm2,均明显低于对照组(p<0.01),小管面积与EGCG浓度呈负相关(r=-0.888,p<0.05)。5、25、50、100μmol/L的EGCG作用于KM3细胞48小时后培养上清中VEGF的含量分别为1399.0±47.4pg/ml,660.1±5.7pg/ml,108.5±5.8pg/ml和26.2±18.6pg/ml,与对照组比较,25、50、100μmol/L组均有统计学意义(p<0.01)。RT-PCR结果显示EGCG抑制KM3细胞VEGF的mRNA水平表达,且呈浓度依赖性。结论:EGCG能显著抑制多发性骨髓瘤细胞KM3的促血管新生作用;下调VEGF转录水平的表达,减少VEGF的分泌可能是其药理作用机制之一。     

姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞脑源性神经营养因子所诱导的血管新生作用

为了研究姜黄素对多发性骨髓瘤（MM）细胞脑源性神经营养因子（BDNF）、内皮细胞株TrkB的表达及内皮细胞血管新生的影响，以初步探讨姜黄素通过抑制血管新生治疗多发性骨髓瘤的可能性，采用RT—PCR法分别检测姜黄素处理前后多发性骨髓瘤细胞株KM3中BDNF的基因表达变化与内皮细胞株ECV304中TrkB的基因表达变化，应用内皮细胞迁移试验和内皮细胞小管形成试验评价姜黄素对内皮细胞血管新生的影响。结果显示：外源性BDNF能够有效地促进内皮细胞的迁移和小管形成，但这两个效应均能被姜黄素明显阻断；KM3细胞表达BDNFmRNA，ECV304细胞表达TrkBmRNA，姜黄素对两者的表达均具有抑制作用，并呈剂量-时间依赖性。结论：BDNF是一种具有促进血管增殖活性的细胞因子，姜黄素可以分别下调MM细胞BDNF与内皮细胞T她的表达，阻碍两者间的相互作用，继而抑制血管新生，这可能成为治疗MM潜在的作用靶点。     

三氧化二砷对多发性骨髓瘤骨髓基质细胞增殖及分泌细胞因子的影响

为了探讨三氧化二砷（As2O3）对多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓基质细胞（BMSC）增殖及其分泌白细胞介素-6（IL-6）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）能力的影响，用体外培养MM患者骨髓的方法获得BMSC。BMSC和MM细胞株CZ-1单独或共同培养，给予不同浓度As2O3（1-20．0μmol／L）处理，用MTT法检测细胞活性，用ELISA法检测IL-6、VEGF的分泌水平。结果表明：As2O3对CZ-1细胞有生长抑制作用，48小时后细胞生长抑制50％的浓度（IC50）为2．3μmol／L，但对BMSC的生长无影响；MM患者BMSC高分泌IL-6、VEGF，经As2O3作用后BMSC分泌IL-6、VEGF降低，骨髓瘤细胞和BMSC相互作用导致的过量IL-6、VEGF分泌也可被As2O3抑制，其抑制程度与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）。结论：As2O3不能抑制BMSC的生长，但可以抑制其分泌IL-6及VEGF。     

脑源性神经营养因子(BDNF)在多发性骨髓瘤患者血浆中表达增高及其意义的初步研究

为了研究多发性骨髓瘤 (MM)患者血浆中脑源性神经营养因子 (BDNF)、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达情况和BDNF与血管新生的关系 ,初步探讨BDNF在MM的发生与发展中的潜在作用 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定MM患者与健康体检者血浆BDNF和VEGF的浓度 ;采用MTT法观察BDNF对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的作用 ;用改良的Boyden小室法和体外小管形成实验等体外血管新生模型观察BDNF对HUVEC迁移和形成血管通道的影响 ;采用鸡胚尿囊膜血管生成实验和小鼠matrigelplug方法观察BDNF对体内血管新生的影响。结果表明 :患者血浆BDNF浓度为 (4.2 2± 0 .6 4 )ng ml,与健康体检者 (2 .0 3± 0 .38)ng ml相比 ,差异有显著性意义 (P =0 .0 10 ) ;患者血浆VEGF浓度为 (79.35± 13.2 5 ) pg ml,与健康体检者 (34.4 1± 1.78)pg ml相比 ,差异有显著性意义 (P =0 .0 0 6 )。BDNF与VEGF水平间存在着相关性 (r =0 .4 30 ,P =0 .0 2 5 )。BDNF对HUVEC的增殖没有显著作用 ,但可明显促进HUVEC的迁移和管状结构形成 ;同时可促进鸡胚尿囊膜血管生成和matrigelplug中血管新生。结论 :MM患者血浆BDNF和VEGF显著增高 ,BDNF在体内外均具有明显的促血管新生效应 ,在MM的血管新生中可能起着重要作用。     

The biological sequelae of stromal cell-derived factor-1alpha in multiple myeloma

Stromal cell-derived factor (SDF)-1alpha mediates migration of normal hematopoietic stem cells, but its role in hematological malignancies is undefined. In this study, we detected SDF-1alpha in bone marrow (BM) plasma from 10 patients with MM (multiple myeloma; 2.6 +/- 1.5 ng/ml) and BM stromal cell culture supernatants from 5 patients with MM (0.6 +/- 0.2 ng/ml). We show that SDF-1alpha promotes proliferation, induces migration, and protects against dexamethasone-induced apoptosis in MM cells, but these effects are only modest. In MM cell lines and patient MM cells, SDF-1alpha induces phosphorylation of p42/44 mitogen-activated protein kinase, as well as Akt and its downstream target Bad, and also activates nuclear factor-kappaB. In the BM milieu, SDF-1alpha up-regulates secretion of interleukin 6 and vascular endothelial growth factor in BM stromal cells, which promote tumor cell growth, survival, and migration. These data demonstrate that SDF-1alpha promotes growth, migration and drug resistance of MM cells in the BM microenvironment, but these effects are only modest, SDF-1alpha therefore does not represent a target for novel therapeutics in this disease.     

IB05204, a dichloropyridodithienotriazine, inhibits angiogenesis in vitro and in vivo

In the course of a blind screening program for inhibitors of angiogenesis, IB05204 (4,8-dichloro-12-phenylpyrido[5',6':4',5';3',2':4,5]dithieno[3',2'-d':3,2-d]-1,2,3-ditriazine) was selected for its ability to inhibit endothelial tubule-like network formation on Matrigel. IB05204 inhibits the in vivo angiogenesis in the chorioallantoic membrane (CAM) and the mouse Matrigel plug assays. Antiangiogenic activity seems to be highly dependent on the chloro substituents because their removal results in a complete loss of the in vitro inhibitory activity of endothelial differentiation and in vivo antiangiogenic activity in CAM assay. Although IB05204 inhibits the growth of endothelial and tumor cells in culture, its antiangiogenic activity seems to be mainly dependent on the prevention of endothelial capillary-like tube formation and inhibition of endothelial migration because these effects are recorded at lower concentrations. IB05204 treatment inhibits matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) production in endothelial and tumor cells, down-regulates endothelial cyclooxygenase-2 expression, and represses phosphorylation of endothelial Akt in response to serum stimulation, suggesting that IB05204 interferes with molecular mechanisms of cell migration and survival. IB05204 induces apoptosis in endothelial cells through cytochrome c release and caspase activation. Data here shown altogether indicate that IB05204 is a compound that interferes with several key steps of angiogenesis, making it a promising drug for further evaluation in the treatment of angiogenesis-related pathologies.