天花粉蛋白诱导H22肝癌细胞凋亡的研究

目的观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)在体外诱导H22肝癌细胞凋亡的效果.方法以不同剂量的TCS加入到H22肝癌细胞溶液中,在24孔培养板上培养72h后荧光染色并涂片,激光共聚焦显微镜下观察TCS诱导H22肝癌细胞凋亡的作用效果.结果10μg/ml浓度的TCS就可诱导H22肝癌细胞出现典型的凋亡形态学特征.经统计学分析,100μg/mlTCS组与50μg/mlTCS组间差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.01).TCS的作用浓度与凋亡指数间有正相关关系(r=0.9713,P<0.01).结论TCS在体外可诱导H22肝癌细胞发生凋亡,诱导H22肝癌细胞凋亡是TCS抗肝癌作用的机制之一,具有成为肝癌治疗新药的潜在价值.     

FBXO22调控凋亡诱导因子的分子机制及其在肿瘤细胞凋亡中的作用

目的·挖掘F-box蛋白22(F-box only protein 22,FBXO22)的底物并明确其作用机制,进一步探讨FBXO22在肿瘤细胞凋亡中的作用.方法·利用免疫沉淀联合质谱分析寻找并验证FBXO22的相互作用蛋白凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF).采用变性条件下泛素化...     

鹤莲克癌临对肝癌H22细胞周期及其细胞凋亡的影响

应用流式细胞术（ＦＣＭ）分析了中药复方制剂鹤莲克癌临对小鼠移植性肝癌Ｈ２２细胞周期影响及其细胞凋亡作用的影响。结果表明,鹤莲克癌蝇药组）ＤＮＡ合成期（Ｓ细胞明显减少,百分率下降,而ＤＮＡ合成前期（Ｇ１）细胞显著增强,在ＤＮＡ直方图上Ｇ１峰前出现明显的细胞凋亡峰,其细胞凋亡率为２８％,而模型组和５－Ｆｕ组的细胞凋亡率分别为２０．５％和１７．８％,提示鹤莲克癌临抗癌细胞学机制是阻滞癌细胞增殖周期并诱导     

含硒桥联环糊精诱导体外培养H22小鼠肝癌细胞凋亡的作用

目的：研究含硒桥联环糊精（2-SeCD）对体外培养H22小鼠肝癌细胞凋亡的促进作用,探讨2-SeCD的抗肿瘤活性。方法：体外培养的H22细胞分别加入80、160、320和640 μmol·L^-1 2-SeCD作为实验组,并设阴性对照组。倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;MTT法检测细胞生长抑制率,计算中效抑制浓度（IC₅₀）;流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡。结果：320和640 μmol·L^-12-SeCD组细胞生长抑制率分别为（25.90±2.13）%和（49.40±3.66）%,与对照组比较差异有显著性（P<0.01）,2-SeCD 48 h的IC₅₀为611.29 μmol·L^-1;320和640 μmol·L^-12-SeCD组凋亡率分别为5.52%和12.47%,2-SeCD可使细胞阻滞于G0/G1期。结论：2-SeCD可抑制H22细胞增殖并促进其凋亡,2-SeCD对肝癌具有潜在的治疗价值。     

Elabela对同型半胱氨酸诱导的H9C2细胞凋亡的影响与机制

目的探究多肽Elabela（ELA）对同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）诱导的H9C2细胞凋亡的作用及机制。方法采用CCK-8检测细胞活性,根据试验结果选择Elabela和Hcy的适宜浓度建立细胞实验模型。随机将细胞分成NC组（正常对照组）、ELA组、Hcy组、Hcy+ELA组。使用试剂盒检测ROS含量;利用TUNEL荧光染色和流式细胞术检测细胞的凋亡程度;通过Western印迹法检测H9C2细胞中PARP、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase3蛋白以及MAPK信号通路相关蛋白的表达水平。使用ERK特异性抑制剂U0126验证相关信号通路作用,检测细胞中凋亡相关蛋白的表达水平。结果与NC组相比,1mmol/L的Hcy处理使H9C2细胞活性明显下降（P<0.001）,而10μmol/L的Elabela显著逆转了Hcy诱导的H9C2细胞活性下降（P<0.001）。与Hcy处理组相比,Elabela的干预使细胞内ROS的产生减少,凋亡率下降,促凋亡蛋白cleaved-PARP、Bax、cleaved-Caspase3蛋白的表达水平下调,而Bcl-2、p-ERK蛋白的表达水平上调,p-P38、p-JUNK蛋白的表达水平下调（均P<0.05）。与Hcy+ELA组相比,U0126的干预抑制了Elabela对H9C2细胞的保护作用,使细胞促凋亡相关蛋白的表达水平上调,而Bcl-2的表达水平下调（均P<0.05）。结论多肽Elabela可能通过调节ERK/MAPK信号通路抑制Hcy诱导的H9C2细胞的凋亡。     

车前子提取物对膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制

目的:探讨车前子提取物(SPE)对膜性肾病大鼠肾脏的保护作用,并阐明其作用机制.方法:将50只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组,低、中和高剂量SPE组,每组10只.除对照组外,其余各组大鼠采用阳离子化牛血清白蛋白诱导建立膜性肾病模型.造模成功后,低、中和高剂量SPE组大鼠分别灌胃给予剂量为1.5、3.0和4.5 mg...     

黄芩苷联合顺铂体外诱导人肝癌细胞HepG2.0凋亡的实验研究

目的观察黄芩苷联合顺铂是否能诱导HepG2.0细胞凋亡及探讨其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用体外细胞培养方法,分别用黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂干预HepG2.0细胞。用CCK-8法检测细胞活性;光学显微镜观察HepG2.0细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测HepG2.0细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc表达的影响。结果光学显微镜下可观察到药物组细胞凋亡的形态改变;各药物组细胞早期凋亡率显著升高;各药物组细胞Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、c-myc和Caspase-3表达升高。结论黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂均能诱导HepG2.0细胞凋亡,其机制可能通过调控Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc蛋白的表达有关。     

线粒体凋亡途径在H2O2诱导耐阿霉素人乳腺癌细胞凋亡中的作用

目的 探索耐阿霉素的乳腺癌细胞株MCF-7/Adr凋亡的可能途径.方法 采用耐药株MCF-7/Adr和野生株MCF-7/wt2种细胞株进行对比,以噻唑蓝分析(MTT)法探索H2O2导致其线粒体功能下降的浓度,观察细胞形态学和线粒体超微结构的改变.应用DNA凝胶电泳、Annexin Ⅴ和PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡发生,Rh123共聚焦显微镜检测线粒体膜电位和P-gP功能,Western blot检测细胞色素C(Cyto C)的释放状况.结果 4 mmol/L H2O2引起MCF-7/Adr线粒体整体功能不可逆的进行性下降,线粒体空化,嵴肿胀.MCF-7/Adr凋亡率(96.52%)显著高于MCF-7/wt(18.57%,P<0.01).凋亡DNA电泳仅见800、1 600 bp 2个分子片段.MCF-7/Adr线粒体数量较MCF-7/wt减少,McF-7/Adr膜电位下降.4 mmol/L H2O2处理使MCF-7/Adr线粒体Cyto C释放至细胞质,McF-7/wt仅少量Cyto C释放.结论 P-gp阳性细胞因其线粒体的结构和功能改变的特点,较其野生株细胞更易经线粒体途径凋亡.提示以线粒体为靶点的药物有助于克服与P-gp表达有关的多药耐药.     

蒺藜皂苷对H2O2诱导PC12细胞凋亡保护作用及其机制研究

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin of Tribulus terrestris,GSTT)对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法实验分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.001),凋亡比率下降(P<0.01),线粒体膜电位回升(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

IP_6诱导肝癌细胞HepG2凋亡及其对Bcl-2和Bax蛋白表达影响

目的研究肌醇六磷酸（IP6）对人肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用及其对相关蛋白表达的影响。方法将不同浓度IP6作用于体外培养的HepG2细胞,应用Hoechst 33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测IP6对HepG2细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达的变化。结果荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;IP6作用后的HepG2细胞凋亡率升高且与药物剂量呈依赖关系（F=342.15,q=2.98～28.53,P〈0.05）;与0 mmol/L IP6组相比,1.0、2.0、3.0 mmol/L IP6组均有效抑制Bcl-2的表达（F=110.21,q=5.88～16.92,P〈0.05）,上调Bax的表达（F=26.00,q=2.97～8.19,P〈0.05）。结论 IP6可能通过调控Bcl-2及Bax蛋白的表达而诱导HepG2细胞的凋亡。     

Bax抑制因子1过表达对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨过表达B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)抑制因子1(BI-1)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制.方法:60只大鼠随机分为假手术组、模型组、空载腺病毒(Ad-NC)组和BI-1腺病毒(Ad-BI-1)组,每组15只.除假手术组外,其他各组大鼠均采用冠状动脉左前降支结...     

茅苍术麸炒品对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抑制作用

目的探讨茅苍术麸炒品对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抑制作用。方法 (1)取对数生长期SMMC-7721细胞,给予0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL和600μg/mL茅苍术麸炒品干预24 h后,检测SMMC-7721细胞的存活率;给予0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL茅苍术麸炒品干预24 h后,观察SMMC-7721细胞形态学,同时行Hoechst染色后于倒置荧光显微镜观察细胞凋亡情况,并应用流式细胞术检测细胞的凋亡率。(2)取24只裸鼠,皮下注射SMMC-7721细胞建立移植性肝癌模型。待肿瘤体积达到100 mm³时,将裸鼠随机分为模型组和茅苍术麸炒品低、中、高剂量组,每组6只。低、中、高剂量组裸鼠分别每天灌胃0.8 g/kg、1.6 g/kg、3.2 g/kg的茅苍术麸炒品,模型组灌胃等体积的磷酸缓冲盐溶液。14 d后剥取肿瘤组织称质量,计算抑瘤率,并检测肿瘤组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关性X蛋白(Bax)和Survivin的蛋白表达水平。...     

IP6诱导肝癌细胞HepG2凋亡及其对Bcl-2和Bax蛋白表达影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用及其对相关蛋白表达的影响。方法将不同浓度IP6作用于体外培养的HepG2细胞,应用Hoechst 33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测IP6对HepG2细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达的变化。结果荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;IP6作用后的HepG2细胞凋亡率升高且与药物剂量呈依赖关系(F=342.15,q=2.98～28.53,P<0.05);与0 mmol/L IP6组相比,1.0、2.0、3.0 mmol/L IP6组均有效抑制Bcl-2的表达(F=110.21,q=5.88～16.92,P<0.05),上调Bax的表达(F=26.00,q=2.97～8.19,P<0.05)。结论 IP6可能通过调控Bcl-2及Bax蛋白的表达而诱导HepG2细胞的凋亡。     

色素上皮衍生因子对缺氧条件下H9C2心肌细胞保护作用

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对H9C2心肌细胞在低氧无血清条件下的保护作用及其可能的机制.方法 体外培养H9C2细胞进行低氧无血清处理,将细胞分为对照组(H9C2)、缺氧组(缺氧+H9C2)、PEDF组(缺氧+H9C2+PEDF)、残粒体分裂抑制剂(Medivi-1)组(缺氧+H9C2+Mdivi-1).TUNEL染色检测H9C2心肌细胞凋亡率;Western blot检测动力相关蛋白1(Drp1)、活化半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase3)的蛋白水平;电镜及MitoTracker Red检测线粒体形态;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测线粒体膜电位,MitoSOXTM检测线粒体活性氧簇(ROS)水平.结果 缺氧诱导H9C2细胞线粒体分裂,缺氧组(6 h)与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),PEDF减少缺氧条件下线粒体分裂,PEDF组与缺氧组(6 h)比较差异有统计学意义(P＜0.05),PEDF和Mdivi-1可以减少缺氧条件下(24 h)细胞凋亡,与缺氧组(24 h)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PEDF通过抑制缺氧条件下H9C2细胞线粒体分裂减少细胞凋亡.     

维生素C与顺铂联合用药对人乳腺癌细胞MCF-7的杀伤作用及机制研究

目的探讨维生素C与顺铂联合用药对人乳腺癌细胞MCF-7的杀伤作用及机制。方法将不同浓度的维生素C和顺铂单独用药或联合加入对数生长期的人乳腺癌细胞MCF-7,以不加药同期培养的细胞作为对照组。采用四氮唑盐比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白[胱天蛋白酶3(caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)]的表达。结果随着顺铂和维生素C(> 1 mmol/L)药物浓度升高,其对MCF-7细胞增殖的抑制率逐渐增大。1 mmol/L的维生素C与1. 25～10μg/m L的顺铂有协同效应。所有单独用药或联合用药组内高剂量用药后MCF-7细胞的凋亡率均明显高于对应低剂量用药,且维生素C和顺铂联合用药的MCF-7细胞凋亡率明显高于维生素C或顺铂单独用药。5μg/m L顺铂单独用药或与0. 5 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L维生素C联合用药后MCF-7细胞的促凋亡蛋白caspase-3表达增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达减少。结论维生素C和(或)顺铂可抑制MCF-7细胞增殖并促进其凋亡,且联合用药效果优于单独用药。维生素C对顺铂抑制MCF-7细胞增殖有增敏作用,顺铂和维生素C单独用药或联合诱导MCF-7细胞凋亡的机制可能通过促进caspase-3和抑制Bcl-2表达实现。     

柯萨奇病毒A16型3C蛋白对人横纹肌肉瘤细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的:探讨柯萨奇病毒A16型(CA16)3C蛋白对横纹肌肉瘤RD细胞凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:体外培养RD细胞,分为对照组(转染0.4μg空载体质粒pCMV-HA)、0.1μg pCMV-HA-3C组(转染0.1μg pCMV-HA-3C和0.3μg pCMV-HA)、0.2μg pCMV-HA-3C组...     

5-溴甲基-2(5H)呋喃酮诱导人肝癌HepG-2细胞株凋亡的作用机制

[目的]研究5-溴甲基-2(5H)呋喃酮诱导人肝癌HepG-2细胞株凋亡的作用机制.[方法]应用细胞体外传代培养方法培养人肝癌HepG-2细胞;利用四唑盐比色(MTT)法检测5-溴甲基-2(5H)呋喃酮对人肝癌HepG-2细胞株的抗增殖及细胞毒作用;采用流式细胞术检测癌细胞周期分布及药物对细胞凋亡的影响;采用免疫细胞化学技术检测5-溴甲基-2(5H)呋喃酮作用前后细胞凋亡相关基因Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Survivin,Livin,NF-κB,Bcl-2,Bax,Fas蛋白的表达情况,并探讨其诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用机制.[结果]MTT检测结果显示,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮对人肝癌HepG-2细胞的抑制作用表现出质量浓度和时间依赖性,IC50值为5 mg/L,48 h.流式细胞仪检测结果显示,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮5 mg/L作用于人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后可见典型的亚二倍体峰,且G1期细胞数量增多,48 h时对照组G0/G1期细胞占40.30%,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮组占46.21%,提示细胞阻滞在G0/G1期;对照组细胞凋亡率为0.02%,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮组为19.74%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).免疫细胞化学检测结果显示,与对照组比较,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮组Survivin,Livin,NF-κB,Bcl-2蛋白的阳性表达率明显减少(P<0.05),Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Fas及Bax蛋白的阳性表达率明显增加(P<0.05).[结论]5-溴甲基-2(5H)呋喃酮对人肝癌HepG-2细胞株具有明显的抑制增殖作用,且呈量-效和时-效关系,并将细胞阻滞于G0/G1期.5-溴甲基-2(5H)呋喃酮对人肝癌HepG-2细胞株有明显的诱导凋亡作用,作用机制可能是通过死亡受体途径和线粒体途径共同介导的.