霍乱弧菌O139菌毛的提取及鉴定

为给霍乱弧菌亚单位菌苗的研制提供基础,作者对霍乱弧菌Ｏ１３９菌毛的提取和鉴定方法进行了探讨。结果发现,菌毛的最佳表达条件为ＡＫＩ或ＣＦＡ培养基中３０℃静止培养２４～３６小时。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳证实了ＴｃｐＡ蛋白的存在,分子量为２０．５ｋｄ。用鼠抗毒素共调菌毛（ＴＣＰ）的单克隆抗体和羊抗鼠ＩｇＧ－ＨＲＰ作斑点酶免疫试验,结果为阳性。用ＴＣＰ免疫大白兔所获得的免疫血清与Ｏ１３９型和ＥｌＴｏｒ型霍乱弧菌菌株作常规凝集试验,可见ＴＣＰ与Ｅ１Ｔｏｒ型菌株发生交叉反应。由此表明ＴＣＰ可作为一种有效的保护抗原,用于霍乱菌苗的研制     

人源性抗EB病毒IgG/VCA抗体在SCID小鼠中的诱导

将人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）和腹腔淋巴结淋巴细胞（ＰＬＮＬ）移植入严重联合免疫缺陷疾病（ＳＣＩＤ）小鼠腹腔，２个月后，小鼠血清内产生人源性ＩｇＧ和抗ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＧ抗体（ＩｇＧ／ＶＣＡ）。比较结果显示，用Ｂ９５－８细胞作为ＶＣＡ来源所诱导的实验组１０只小鼠，ＩｇＧ／ＶＣＡ阳性率为７０％（７／１０），对照组为１７％（２／１２）。ＩｇＧ／ＶＣＡ的几何平均滴度（ＧＭＴ）和血清ＩｇＧ浓度，在１４只ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠中为１∶１０８和（９６．２±５６．４）μｇ／Ｌ；在８只ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠为１∶７．８和（１３．８４±６．０）μｇ／Ｌ。该结果提示，ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠较ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠更适合用于人源性特异ＩｇＧ的诱导。     

单纯性肾病儿童可溶性免疫应答抑制物对IL—6活性及体外IgG产…

在１０例ＩＮＳ发作期儿童中观察到其血浆存在ＳＩＲＳ抑制ＰＷＭ诱导的正常人ＰＢＭＣ ＩＬ－６活性及ＩｇＧ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２产生，而ＩｇＧ３无变化。ＩＬ－６活性受抑与ＰＷＭ诱导ＩｇＧ、ＩｇＧ１产生受抑程度呈相关。提示ＩＮＳ血浆可通过激活ＴＳ产生ＳＩＲＳ，控制ＴＨ功能，降低ＩＬ－６活性，影响Ｂ细胞分化及ＩｇＧ转换，导致低ＩｇＧ血症。     

CEA单抗介导的间接细胞毒作用

用活化的抗癌药物氨甲喋呤（ＭＴＸ）和羊抗鼠ＩｇＧ（ＳＡＭＩｇＧ）共价结合，制备ＳＡＭＩｇＧ－ＭＴＸ结合物，通过ＣＥＡ单抗（ＭｃＡｂ）的介导，ＳＡＭＩｇＧ－ＭＴＸ能选择性地杀伤ＣＥＡ＋细胞，其选择细胞毒作用是ＣＥＡＭｃＡｂ－ＭＴＸ结合物的２倍，提示间接导向治疗具有简便、经济、高效的特点。     

脑梗塞与肺心病抗磷脂抗体的对比研究

了解抗磷脂抗体在慢性肺疾病和缺血性脑血管病中的因果关系，寻找预防脑动脉硬化的方法。脑梗塞组与肺心病组各３０例，抽血清以酶联免疫吸附法原理，结合指数方式 定量测定血清ＡＰＬ－ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ水平，同时测定患的血压，胆固醇（Ｔ－ＣＨＯ）、甘油三脂、载脂蛋白Ａ等进行对比。脑梗塞组ＡＰＬ－ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ三项指标明显高于心病组，统计学差异显，（Ｐ〈０．００１），Ｔ－ＣＨＯ、ＴＧ、ＡＰＯＡ及     

重症肌无力病人抗乙酰胆碱受体抗体的检测及其临床意义

用与乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ）特异性结合的α－银环蛇毒素（α－ＢＧＴ）包被酶标板提纯肌肉粗提液中的ＡｃｈＲ作为抗原，按ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ间接法检测了５１例正常对照组，５２例临床对照组及９６例（１１０次）重症肌无力（ＭＧ）病人血清中的ＩｇＧ乙酰胆碱受体抗体（ＩｇＧ－ＡｃｈＲａｂ）。结果发现ＩｇＧ－ＡｃｈＲａｂ在ＭＧ组有３９例阳性（４４次）（４０．６３％）。临床对照组４例阳性（７．６９％）。正常对照组２例阳性，统计学处理发现ＭＧ组与其它组差异均有显著性（Ｐ＜０．０５），而临床对照组与正常对照组差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。     

移植沉默ＴＳＧ－６基因的骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

摘要：【目的】在大鼠肝脏缺血再灌注模型中,观察移植沉默ＴＳＧ－６基因的骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣ）对大鼠肝脏缺血再灌注损伤（ＨＩＲＩ）的影响。【方法】全骨髓培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞学鉴定,慢病毒载体（ＬＶ３－ｓｈＴＳＧ－６）感染下调ＴＳＧ－６基因的表达;６０只ＳＤ雌性大鼠７０％肝脏缺血再灌注损伤模型的建立,随机分４组,ＰＢＳ组、ＢＭＳＣ组,ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组、ＴＳＧ－６－ｓｈＲＮＡ－ＢＭＳＣ组;各组大鼠分别于恢复灌注后３、６、２４ｈ取血检测血清中ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６含量,恢复灌注后６ｈ取中叶肝脏组织,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测ＴＳＧ－６蛋白表达,切片ＨＥ染色后光镜观察肝组织显微结构。【结果】体外分离培养的ＢＭＳＣ状态稳定,增殖能力强,表达ＣＤ２９及ＣＤ４４,不表达ＣＤ３４及ＣＤ４５,慢病毒感染下调ＢＭＳＣ的ＴＳＧ－６基因表达效率达７３．９９％;大鼠肝脏７０％缺血再灌注损伤模型稳定,各时间点ＴＳＧ－６－ｓｈＲＮＡ－ＢＭＳＣ组的ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６含量均高于ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组（Ｐ＜０．０５）;ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组的ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６含量均低于ＰＢＳ组（Ｐ＜０．０５）;ＴＳＧ－６－ｓｈＲＮＡ－ＢＭＳＣ组的肝脏ＴＳＧ－６蛋白表达低于ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组（Ｐ＜０．０５）,ＰＢＳ组未见ＴＳＧ－６蛋白表达;ＴＳＧ－６－ｓｈＲＮＡ－ＢＭＳＣ组的肝组织损伤较ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组重,与ＰＢＳ组无明显区别,ＢＭＳＣ组和ｓｈＲＮＡ－ＮＣ－ＢＭＳＣ组的肝组织损伤较ＰＢＳ组明显减轻。【结论】移植ＢＭＳＣ能改善肝缺血再灌注损伤,移植沉默ＴＳＧ－６基因的骨髓间充质干细胞削弱了其对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。     

硬红斑患者免疫复合物检测及其临床意义

应用直接免疫荧光（ＤＩＦ）技术及抗Ｃ３－酶联免疫吸附试验（ＥＩＴＳＡ）分别检测了２５例硬红斑（ＥＩ）皮损血管壁上组织沉积免疫复合物（ＴＩＣ）和血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ），结果显示：（１）ＥＩ血管壁上存在着ＩｇＧ、ＩｇＭ及ＩｇＣ，其总阳率为８４％（２１／２５），且ＩｇＭ、ＩｇＧ－ＴＩＣ为主（７２％，５２％），ＴＩＣ有两种方式，（２）８４％ＥＩ血清ＣＩＣ阳性，且以ＩｇＭ、ＩｇＧ－ＣＩＣ为主（７６％，５６％），ＩｇＭ－ＣＩＣ与ＩｇＧ－ＴＩＣ、ＩｇＧ－ＣＩＣ与ＩｇＧ－ＴＩＣ之间呈显著性一致，治疗后ＩｇＭ、ＩｇＧ－ＣＩＣ明显降低。上述结果首次证实ＥＩ为ＩＣ型血管炎，ＴＩＣ来自ＣＩＣ，Ⅲ型变态反应参与了ＥＩ的发病机理，动态观察ＥＩ血清ＣＩＣ可以做为ＥＩ的发病机理，动态观察ＥＩ血清ＣＩＣ可以做为ＥＩ治疗效果评估的指标。     

Tc—99m标记抗AFP抗体在人肝癌裸鼠模型中的定位显像研究

目的：揭示锝（Ｔｃ）－９９ｍ标记的单克隆抗体在肿瘤定位中的应用。方法：通过ＳＭＣ－７７２１－ＣＳ细胞株诱导原发性肝癌实体瘤裸鼠模型，将Ｔｃ－９９ｍ标记抗ＡＦＰ单克隆抗体（ＡｎｔｉＡＦＰ－ＭｃＡｂ）和正常鼠免疫球蛋白（ＮＭＩｇＧ）通过尾静脉注射荷瘤裸鼠，分别在１５ｍｎ、１２ｈ、２４ｈ作单光子发射计算机断层显像（ＳＰＥＣＴ），结果：在注射标记抗体２４ｈ能得到清晰的肿瘤显像，对照组无肿瘤显像，其中靶与非     

关节灵对小鼠体液免疫功能影响的实验研究

目的：为进一步探讨关节灵注射液对类风湿关节炎的治疗机理。方法：ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠经不同抗原免疫后，用ＥＬＩＳＡ测定并分析比较实验组（ 用关节灵组）和对照组（未用关节灵组）ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠血清ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＥ含量。结果：试验组血清ＩｇＭ、ＩｇＥ含量显著低于对照组（Ｐ＜０－０１） ，血清ＩｇＧ含量与对照组比较，无显著差异（Ｐ＞０－０５）。结论：关节灵能选择性抑制实验动物异常增高的ＩｇＥ、ＩｇＭ 产生；而对发挥主要免疫作用的ＩｇＧ的产生无明显影响，结果表明关节灵具良好的免疫调节作用。     

复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究

目的对1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究.方法通过灌胃和滴鼻2种途径对BALB/c小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析.结果初次免疫后,2组小鼠均有应答,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同.再次免疫后,显示出明显的加强效果.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA,灌胃组仅在肠道检测到SIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较,发现IgG的应答水平明显高于SIgA.免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明,抗体可长期持续至少半年以上.结论重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础.     

沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位重组DNA诱导小鼠体液免疫有效剂量的探讨

目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据.方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化质粒,分3个免疫剂量组,即50、100和150μg剂量组,同时设PBS对照组.肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,于免疫的0、2、4、6、8周分别尾静脉取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中Ct MOMP多表位特异性抗体IgG的生成量,并于0、1、3、5、7周取小鼠阴道冲洗物,检测Ct MOMP多表位特异性SIgA的生成量,分别进行统计学分析.结果:3个不同免疫剂量组,血清特异性抗体IgG生成量于免疫第4周后均开始随免疫时间延长而逐步增加,150μg剂量组抗体IgG的生成水平高于其他剂量组(P＜0.05).免疫小鼠阴道分泌物中特异性抗体SIgA生成较快,免疫开始后1周,150 μg剂量组SIgA的产生水平高于其他组,7周后SIgA开始下降,但150 μg剂量组抗体水平仍高于其他剂量组(P＜0.05).结论:重组质粒DNA免疫小鼠的特异性抗体生成显示了剂量依赖关系,高剂量(150μg)免疫组小鼠血清特异性抗体IgG和阴道分泌性特异性抗体SIgA生成水平优势显著.     

白细胞介素-12和白细胞介素-18质粒对HBcAgDNA疫苗诱导小鼠(H-2d)体液免疫应答的影响

目的：观察编码白细胞介素（IL）－12和IL－18的真核表达载体[pcDNA3.1/IL-12(以下简称IL－12质粒）和pcDNA3.1/IL-18(以下简称IL－18质粒）]对HBcAg DNA疫苗（pJW4303/HBc)诱导BalB/c(H-2^d)小鼠免疫应答的影响。方法：肌肉注射接种IL－12质粒、IL－18质粒和HBcAg DNA疫苗，ELISA法检测小鼠血清抗HBc IgG亚类（IgGl,IgG2a)水平。结果：免疫6周后，联合注射IL－12、IL－18和IL－12＋IL－18组小鼠血清的抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠（P＜0．05），抗HBc IgG亚类以IgG2a占优。结论：IL－12、IL－18以及IL－12＋IL－18联合HBcAg DNA疫苗注射能够提高小鼠血清中抗HBc水平。     

空肠弯曲菌口服全菌佐剂疫苗研究

目的采用明胶为空肠弯曲菌死疫苗的佐剂,灌胃免疫小鼠,评价佐剂全菌死疫苗的免疫原性。方法采用空肠弯曲菌全菌死疫苗肌肉注射(A组),用明胶为佐剂全菌死疫苗(B组),全菌死疫苗(C组)及PBS(正常对照组)灌胃免疫Balb/c小鼠;接种3次,间隔7d,末次接种1周后收集小鼠血清和小肠粘液。采用ELISA间接法检测各组血清抗体IgGI、gAI、gM和肠道粘液抗体SIgA水平。结果A、B、C组血清抗体IgGI、gAI、gM和肠道粘液抗体SIgA水平均高于正常对照组,B组明显高于C组有统计学差异(P<0.05),A组与B组间没有统计学差异(P>0.05)。结论明胶作佐剂的全菌死疫苗口服具有良好的免疫原性,可作为口服疫苗佐剂后选。     

霍乱弧菌O139菌毛的提取及鉴定

为给霍乱弧菌亚单位苗菌的研制提供基础,作者对霍乱弧菌Ｏ１３９菌毛的提取和鉴定方法进行了探讨。结果发现,菌毛的最佳表达条件为ＡＫＩ或ＣＦＡ培养其中３０℃静止培养２４－３６小时。     

DNA防龋疫苗经TSG途径免疫BALB/c小鼠实验研究

目的观察编码PAc结构基因A-P片段的重组质粒pCIA-P以经肌肉和颌下腺周围区域皮下注射(TSG)两种途径免疫BALB/c小鼠后的特异性免疫反应,并观察表面蛋白抗原PAc在小鼠颌下腺中的表达。方法将25只BALB/c小鼠随机分为4组,分别以重组质粒pCIA-P经肌肉、颌下腺区周围区域皮下注射两种途径免疫小鼠及pCI质粒和生理盐水肌肉免疫小鼠,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平动态变化。将pCIA-P经颌下腺区周围区域皮下注射以免疫组化技术观察表面蛋白抗原PAc。结果颌下腺区皮下注射法免疫后唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体均明显升高,并持续数周。肌肉注射法后血清IgG型特异性抗体明显升高,但未有效诱导产生唾液IgA型特异性抗体。在小鼠颌下腺中检测到PAc蛋白的表达。结论重组质粒pCIA-P是一种有效的免疫原,该DNA防龋疫苗经颌下腺周围区域皮下注射免疫是可诱导长期粘膜免疫的有效途径。     

DNA防龋疫苗诱导长期免疫反应及机制初探

目的:观察编码pac结构基因A-P片段的重组质粒pCIA-P以经肌肉和颌下腺周围区域皮下注射(TSG)两种途径免疫BALB/c小鼠后的特异性免疫反应,并观察表面蛋白抗原PAc在小鼠颌下腺中的表达。方法:将20只BALB/c小鼠随机分为4组,分别以重组质粒pCIA-P经肌肉、颌下腺区周围区域皮下注射两种途径免疫小鼠及pCI质粒和生理盐水肌肉免疫小鼠,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平动态变化。将pCIA-P经颌下腺区周围区域皮下注射以免疫组化技术观察表面蛋白抗原PAc的表达。结果:颌下腺区皮下注射法免疫后唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体均明显升高,并持续24周以上。肌肉注射法后血清IgG型特异性抗体明显升高,但未有效诱导产生唾液IgA型特异性抗体。在小鼠颌下腺中检测到PAc蛋白的表达。结论:DNA防龋疫苗经颌下腺周围区域皮下注射免疫是可诱导长期黏膜免疫的有效途径。     

EV71-VP1抗原在双歧杆菌中表达的免疫效果检测

目的 检测表达肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）VP1基因的重组双歧杆菌免疫后小鼠IgG、IgA表达变化,并对免疫的孕鼠产下的新生小鼠注射EV71病毒,以检测免疫保护作用可否从母代传给子代。方法 ELISA法检测免疫小鼠血清IgG、IgA抗体效价;用EV71毒株对免疫孕鼠所产下的新生小鼠攻毒。结果 两种抗体效价都有明显升高（P<0.01）;实验组受病毒攻击新生小鼠存活率明显高于对照组。结论 口服表达VP1蛋白的双歧杆菌能够激活体内免疫系统产生特异性抗体,重组双歧杆菌可通过免疫孕鼠而使新生幼鼠获得保护性抗体。为研制EV71亚单位口服活疫苗奠定了研究基础。     

Enhancing DNA vaccine potency against hantavirus by co-administration of interleukin-12 expression vector as a genetic adjuvant

Background The heavy incidence and mortality of hemorrhagic fever with renal syndrome, as well as no specific drugs in curing the disease, clearly indicate the need for development of the more effective hantavirus vaccine. Refining the DNA vaccination strategy to elicit more clinically efficacious immune responses is now under intensive investigation. In the present study, we examined the effects of using an interleukin-12 expression plasmid as a genetic adjuvant to enhance the immune responses induced by a DNA vaccine based on the S gene encoding nucleocapsid protein against hantavirus.Methods BALB/c mice were immunized three times by intramuscular inoculations of DNA vaccine encoding of hantanvirus nucleocapsid protein alone or in combination with a plasmid expressing murine interleukin-12 (pcIL-12). Booster immunizations were employed 2 times at 2-week interval. To evaluate the humoral and cellular immune responses, antigen-specific lymphocyte proliferation and antibody production were assayed by MTT method and ELISA respectively. The level of interleukin-4 and interferon-γ in the splenic lymphocytic cultured supernatant were detected with ELISA kit at day 5, 10, 17, 35 and 42 after primary immunization.Results Antigen-specific IgG antibodies was increased markedly at day 17 in the experiment groups and reached a plateau after day 35. As pcIL-12 co-injected, a significant inhibition of antigen-specific IgG levels was displayed over the period and the antibody mean titre was decreased to only about 1 : 50 at day 42 after primary immunization, significantly lower than the group immunized with pcDNA3.1 S alone, in which the mean titre was about 1 : 70. Interferon-γ was increased remarkably by the co-injection of pcIL-12 compared with the injection of pcDNA3. 1 S alone. However, the production of interleukin-4 was inhibited by pcIL-12 coinjection. Furthermore, pcIL-12 co-injection efficiently enhanced antigen-specific lymphocyte proliferation.Conclusion Humoral and cytokine responses elicited by pcDNA3.1 S inoculation can be modulated by coinoculation with pcIL-12 and efficiently induced Thl-dominant immune responses.     

树鼩经甲型肝炎减毒活疫苗、乙型肝炎疫苗及联合硫酸乙酰肝素佐剂免疫后的免疫效果评价

目的 探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-1、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响.方法 按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免疫后的4周、8周、12周、16周和20周尾静脉采血,用ELISA法检测树鼩血清中的特异性IgG抗体水平.结果 除空白对照组外,实验组均在末次免疫的第四周检测到抗甲型肝炎病毒(HAV)及抗乙型肝炎病毒(HBV)抗体,抗体水平随着免疫时间延长而逐渐升高并于12周达到峰值,此后逐渐下降.同时,联合HS佐剂组的体液免疫效果均优于单纯疫苗免疫组.并且不同抗原以及联合佐剂采用不同的免疫途径免疫树鼩其免疫效果存在显著性差异.结论 通过对树鼩进行疫苗免疫原性和增强免疫效果检测,证实以树鼩作为动物模型进行疫苗评价的可行性.