不同配比与剂量黄芪当归对药对肺纤维化小鼠肺形态学及羟脯氨酸含量影响

目的:观察黄芪、当归不同剂量与配伍比例对实验性肺纤维化小鼠肺病理形态学及肺组织羟脯氨酸(HYP)含量的影响。方法:SPF级ICR雄性小鼠80只,体重18~22 g,随机分为正常对照组、模型组,以及6个不同配比与剂量的黄芪当归组成的中药治疗组(1.大剂量黄芪当归5∶1组、2.大剂量黄芪当归1∶1组、3.大剂量黄芪当归1∶5组、4.小剂量黄芪当归5∶1组、5.小剂量黄芪当归1∶1组、6.小剂量黄芪当归1∶5组),每组10只,除正常对照组外,其余各组采用气管内注射博莱霉素(5 mg/kg)复制小鼠肺纤维化模型。造模第2天起,正常对照组和模型组用生理盐水灌胃,6个中药治疗组给予不同配比与剂量的黄芪当归水煎液灌胃治疗,于28 d处死小鼠,观察肺组织病理变化及羟脯氨酸的含量。结果:HE染色显示模型组小鼠支气管周围及肺泡间隔有大量炎症细胞浸润,肺泡壁增厚,肺泡结构破坏甚至消失,肺泡间隔纤维化显著。武兆发简化Mallory氏胶原染色显示模型组小支气管壁周围有大量蓝色胶原纤维沉积。6个中药治疗组较模型组均有所改善,其中中药治疗第1、6组改善明显,肺泡结构已基本恢复。与模型组比较,中药第1、6组小鼠肺组织Hyp含明显降低,统计学差异显著(P<0.01)。结论:大剂量黄芪当归5∶1组在降低肺组织Hyp含量及改善肺泡结构方面效果显著。     

当归注射液对大鼠肺纤维化胶原蛋白含量的影响

目的　探讨当归对肺间质纤维化胶原蛋白代谢的影响。方法　雄性SD大鼠 6 0只随机分成模型、当归、激素及对照组 ,前 3组经气管内灌注博来霉素后当天开始分别腹腔注射生理盐水、当归、琥珀酸氢化可的松 ,对照组气管内灌入及腹腔注射相应体积的生理盐水 ,于第 7、14、2 8d分别处死各组大鼠 5只 ,右肺进行HE染色及应用免疫组织化学方法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量。结果　模型组出现典型肺间质纤维化改变 ,当归组及激素组明显轻于模型组 ,第 7、14d各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量无显著差别 ,第 2 8d当归组及激素组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量明显低于模型组 (P <0 .0 1)。结论　当归能有效地减少模型大鼠肺间质中胶原蛋白的含量 ,有防治肺纤维化的作用     

川芎嗪对肺纤维化大鼠CTGF表达及胶原沉积的影响

目的通过观察川芎嗪对肺纤维化大鼠肺内结缔组织生长因子（Connective tissue growth factor,CTGF）表达及胶原沉积的影响,探讨川芎嗪对肺纤维化的治疗作用。方法将72只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、肺纤维化模型组（B组）、川芎嗪治疗组（C组）各24只,采用大鼠气管内一次性滴注博莱霉素造模,Masson染色观察胶原沉积情况及SABC免疫组化法检测CTGF表达变化。结果B组肺内有大量胶原沉积;C组胶原沉积明显轻于B组;A组胶原沉积不明显。免疫组化发现B组CTGF表达最强,C组较弱,A组微弱表达。结论川芎嗪可抑制哮喘大鼠肺组织的胶原沉积。其作用机制可能是通过抑制CTGF的表达来实现。     

肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子β1和前胶原基因的表达

急性肺泡炎是肺纤维化病变基础,在肺泡炎形成过程中涉及炎性细胞、免疫效应细胞和细胞因子。体外试验证明肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1（TGF-β1）可上调人胚肺成纤维细胞前胶原mRNA的表达［1,2］,提示急性肺泡炎时这些细胞因子与肺纤维化发生有一定的因果关系。我们用博莱霉素A5诱发大鼠肺纤维化,并制成动物模型,对大鼠肺组织中TGF-β1,前胶原Ⅰ和前胶原 Ⅲ的mRNA进行观察,以探讨它们与大鼠肺纤维化的关系。 　　一、材料与方法 　　1. 动物与动物模型: 25只 Wistar雄性大鼠,体重140～170 g,购自中国医学科学院动物中心。将大鼠随机分为5组,每组5只。以乙醚麻醉大鼠,其中1组为正常对照组经气管内一次性灌注生理盐水;其余各组经气管内一次性灌注博莱霉素A5 5 mg/kg,博莱霉素3 d组,7 d组,14 d组,30 d组。于灌注后3、7、14、30 d处死大鼠,取右侧肺液氮速冻待检,左侧肺于100 g/L的中性甲醛液中固定,HE染色。 　　2.分子杂交及材料来源：分子杂交按参考文献［3］介绍的方法进行。cDNA 探针片段由北京阜外心血管病医院杨方博士惠赠,此片段是由含编码人的前胶原Ⅰ和前胶原Ⅲ重组质粒菌种PH CAL1 TU,PHFS3 中提取的;TGF-β1 cDNA片段由北京市肿瘤研究所高崇峰提供,β-肌动蛋白（β-actin）cDNA 片段购自中山生物技术公司。     

特发性肺纤维化肺组织胶原分型测定的临床意义

目的 探讨特发性纤维化（ＩＰＦ）经支气管肺活检（ＴＢＬＢ）组织胶原分型测定的临床意义。方法 对２５例ＩＰＦ患者ＴＢＬＢ标本和１０例正常肺组织应用免疫组色染色体，进行Ｉ型和Ⅲ型胶原（ＣｏｌＩ和ＣｏｌⅢ）的半定量测定；并检测１３例的支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）的细胞成分，随访１７例激素疗效，结合病程和病变程度进行综合分析。结果 ＩＰＦ肺组织Ｉ，Ⅲ型胶原沉积量较正常肺组织不同程度增多，病程短（≤３月），     

卡托普利对大鼠肺纤维化及肺上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨卡托普利对实验大鼠肺纤维化的干预作用及可能的作用机制。方法:60只SD大鼠经气管内灌注博来霉素诱导肺纤维化,随机分为博莱霉素(BLM)组、卡托普利(CAP1)和CAP2组,分别给予生理盐水、卡托普利50mg·kg-1·d-1和60mg·kg-1·d-1灌胃,并于1,7,14,28d各处死5只,取肺组织行嗜伊红染色组织学观察及羟脯氨酸测定,评价肺泡炎和肺纤维化程度、免疫组织化学及电镜检查评价肺上皮细胞凋亡程度。结果:与BLM组比较CAP1组和CAP2组肺泡炎及肺纤维化程度明显减轻(P<0.05),气道上皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡程度显著改善(P<0.01),CAP1和CAP2两组间无显著性差异。结论:卡托普利能有效抑制博来霉素诱导的肺纤维化,其可能的抗纤维化机制之一是抑制肺上皮细胞凋亡。     

特发性肺纤维化肺组织胶原分型测定的临床意义

探讨特发性肺纤维化（ＩＰＦ）经支气管肺活检（ＴＢＬＢ）组织胶原分型测定的临床意义。方法对２５例ＩＰＦ患者ＴＢＬＢ标本和１０例正常肺组织应用免疫组化染色法，进行Ⅰ型和Ⅲ型胶原（ＣｏｌⅠ和ＣｏｌⅢ）的半定量测定；并检测１３例的支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）的细胞成分，随访１７例激素疗效，结合病程和病变程度进行综合分析。结果ＩＰＦ肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积量较正常肺组织不同程度增多；病程短（≤３月）、病变程度轻（Ⅰ、Ⅱ级）者，肺组织中ＣｏｌⅢ占优势，病程长（＞２４月）、病变较重（Ⅲ、Ⅳ级）者，则以ＣｏｌⅠ为主；治疗有效组，ＣｏｌⅢ／ＣｏｌⅠ≥１，无效组ＣｏｌⅢ／ＣｏｌⅠ＜１（Ｐ＜０．０１）；ＣｏｌⅢ／ＣｏｌⅠ≥１者，ＢＡＬＦ中性粒细胞百分比明显增高（Ｐ＜０．０５）。结论多部位取材ＴＢＬＢ标本进行胶原分型测定和比例分析，可以较好地辅助判断ＩＰＦ病变程度和活动性。     

血小板源性生长因子对肺纤维母细胞前胶原合成的影响

观察血小板源性生长因子对肺纤维母细胞增殖，胶原合成的。以改良Ｋｕｍａｒ法，分离培养了大鼠肺纤维母细胞，并采用ＭＴＴ、免疫细胞化学、原位分子杂交等方法、结果：ＰＤＧＦ肺纤维母细胞具有促增殖作用，其浓度在１－１０μｇ／Ｌ之间呈剂量依赖性。     

肺纤方对博莱霉素致肺纤维化大鼠一般情况和肺组织形态学的影响

目的 观察肺纤方对博来霉素造模的肺纤维化大鼠肺组织病理形态发展的影响。方法 144只健康Wistar大鼠随机分成对照组,模型组,阳性组,肺纤方高、中、低剂量组,每组各24只,按Szapiel等法建立模型,次日ig给药,肺纤方高、中、低剂量（3.2、1.6、0.8 g/kg）组均为10 mL/kg药液ig给药,阳性对照组用醋酸泼尼松混悬液（6 mg/kg）ig给药,对照组与模型组ig等量生理盐水,1次/d,给药周期21 d。分别在造模7、14、21 d后取材,前后期各随机杀检10只,中期杀检4只对照验证。结果 与模型对照组相比,肺纤方高剂量组在改善大鼠外观、体质量、肺系数、肺脏病理组织形态学等方面效果较好（P＜0.05或P＜0.01）,中剂量组几乎与阳性对照组作用相当,而阳性对照组先期作用好于治疗组,但中后期时肺纤方高剂量组的疗效明显好于阳性组,说明肺纤方抗大鼠肺纤维化病变的长期疗效优于阳性组。结论 肺纤方是防治肺纤维化的一种有效方剂,对博莱霉素致大鼠肺损伤具有一定的保护作用,对肺纤维化具有干预作用,且呈现一定的量效关系。     

Ⅲ型胶原纤维在实验性特发性肺纤维化早期的动态研究

目的　通过动物实验的方法 ,动态地观察Ⅲ型胶原在平阳霉素诱导的兔肺纤维化中的变化。方法　 12只新西兰白兔 ,在经支气管内灌注平阳霉素诱导纤维化模型之后的第 7、14、2 1和 2 8天 ,分别随机取 3只处死 ,分离两侧肺组织取材进行免疫组化染色分析。结果　与正常对照组比较 ,尽管第 1、2周时肺内的改变均以炎性渗出和实变为主 ,但可在增厚的肺泡隔内发现散在的点状、线状红棕色增生Ⅲ型胶原。 3、4周后随炎性反应进行性减弱 ,被染色的Ⅲ型胶原反而显著地进行性增多 ,在病变区形成杂乱的网格样分布。而且Ⅲ型胶原免疫组化染色对胶原显示的敏感性显著高于VG染色。结论　纤维化的早期胶原沉积以Ⅲ型胶原的增生为主 ,大量Ⅲ型胶原的沉积表明纤维化处于活动阶段或早期状态 ,从此意义上这个观察过程均可称作早期阶段。这对于临床通过穿刺组织分析来评价疾病的发展是非常有价值的。     

YKL-40在肺纤维化大鼠中的动态表达

目的　观察YKL-40在博莱霉素诱导的肺间质纤维化大鼠肺组织中的表达。方法　以博菜霉素（7.5mg/kg体重）气管内注入复制大鼠肺纤维化模型。分别于第7天、14天、21天分批处死动物。通过HE染色、Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;采用免疫组化、realtime RT-PCR及Western blot测定肺组织YKL-40表达情况。 结果 光镜下清晰可见博莱霉素组大鼠肺组织肺泡炎、肺纤维化程度增加,肺泡炎在第7天与对照相比差异极显著,第14天、21天肺泡炎症减轻,但仍与对照组间差异显著;纤维化程度在第14天即与对照组有显著性差异。与对照组相比,博莱霉素各组YKL-40上调表达有时间依赖性,且主要来源于平滑肌细胞、肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞及成纤维细胞。YKL-40转录水平在第7天即显著增加,蛋白水平在14 d显著高于对照组(p<0.05),21 d时与对照组相比差异极显著(p<0.01)。结论 YKL-40表达量与肺纤维化程度正相关,YKL-40可能参与肺纤维化过程。     

肺组织血管生成变化与肺纤维化关系探讨

目的观察肺纤维化大鼠肺组织血管生成状态的变化,初步探讨血管生成与肺纤维化形成的关系。方法复制博来霉素诱发肺纤维化大鼠模型,用HE染色结合因子Ⅷ相关抗原(vWf)免疫组织化学方法观察模型组和对照组肺组织血管生成状态,采用羟脯氨酸含量测定法评估肺纤维化程度。结果模型组大鼠肺组织血管生成状态自第1d开始即明显活跃,血管计数升高,第7d达高峰,肺组织胶原沉积也相继出现;随着肺纤维化加重,血管生成逐渐减少,至第21d之后低于对照组水平。结论血管生成在肺纤维化早期显著增加,可能是肺纤维化形成中的重要启动环节。     

实验性肺纤维化肺灌洗液磷脂组分分析

对博莱霉素肺纤维化大鼠模型不同时期作支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数与分类、蛋白含量测定和磷脂及其组分测定,并与肺病理变化作对照分析。结果发现BALF细胞计数和分类与肺组织细胞浸润基本一致,BALF蛋白含量增加,磷脂酰甘油(PG)随病变进展而下降,磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰乙醇胺(PE)升高。PG／PI比值下降,PG／PI比值可作为肺纤维化的一种标志。     

银杏叶提取物对实验性肺纤维化大鼠肺内结缔组织生长因子的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对实验性肺纤维化大鼠肺内结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法:雄性SD大鼠18只,随机分成3组(n=6):①BLM GbE组:气管内一次性注射博莱霉素(Blemycin,5 mg/kg)复制肺纤维化模型,之后,每日灌胃给予GbE(相当于每kg体重12 mg总黄酮);②BLM NS组:气管内一次性注射BLM复制肺纤维化模型后,每日灌胃给予与GbE等体积生理盐水(normal saline,NS);③NS组:一次性气管内注射与BLM-A5等体积的NS.各组均于注射BLM或NS后14 d取材.用Western blotting检测各组肺组织CTGF蛋白含量.结果:NS组大鼠肺组织CTGF蛋白较少;BLM NS组大鼠肺组织CTGF较NS组明显增多(P＜0.01);BLM GbE组大鼠肺组织CTGF蛋白较BLM NS组明显减少(P＜0.01),并与NS组比较无统计学差异(P＜0.05).结论:GbE能阻止肺纤维化形成过程中CTGF的增多.     

白介素-4在博莱霉素致大鼠肺纤维模型中的表达

目的:检测IL-4在博莱霉素致大鼠肺纤维化模型中的表达,从而探讨IL-4在肺纤维化发病机制中的作用.方法:体重170～190g的雌性wistar大鼠,立即气管内灌注博莱霉素5mg/(kg·bw)建立肺纤维化模型,设立生理盐水对照组.第7、14天分别处死大鼠,收获肺组织及血清,右肺行苏木精-伊红(HE)染色,左肺经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肺组织中IL-4mRNA的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中IL-4的水平.结果:灌注博莱霉素后第7天肺组织病变以肺泡炎为主,第14天肺内有纤维化病灶形成.模型组大鼠IL-4mRNA相对表达强度和IL-4蛋白质水平明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.05).结论:在肺纤维化大鼠模型中IL-4的产生明显增高,IL-4在肺纤维化发病机制中具有重要作用.可将调节IL-4的产生及拮抗IL-4的作用作为肺纤维化治疗研究的新方向.     

卡托普利抗大鼠肺纤维化的作用及机制

目的探讨卡托普利对肺纤维化的治疗作用及可能的机制。方法将64只雄性SD大鼠随机分为对照组、博莱霉素模型组、卡托普利治疗组、地塞米松组治疗组,每组16只。采用HE染色、Masson染色行肺泡炎、肺纤维化程度分级,分别测定各组大鼠血浆AngⅡ、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA含量以及羟脯氨酸、超氧化物歧化酶、丙二醛含量,并作各组间的对比分析。结果（1）第14天时：与对照组比较,其他3组大鼠肺泡炎评分、HYP含量、AngⅡ含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显升高（P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著降低（均P〈0.01）,仅模型组肺纤维化评分显著高于对照组（P〈0.01）;与模型组比较,卡托普利组及地塞米松组肺泡炎、肺纤维化评分及HYP含量、AngⅡ含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显降低（P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著升高（均P〈0.01）;地塞米松组显著高于卡托普利组（P〈0.01）,卡托普利组AngⅡ含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显低于地塞米松组（P〈0.05或0.01）。（2）第28天时：与对照组比较,其他3组大鼠肺泡炎及肺纤维化评分、HYP含量及TGF-β1 mRNA表达水平均显著升高（均P〈0.01）,模型组和地塞米松组AngⅡ含量显著升高（均P〈0.01）,仅模型组SOD含量显著降低、MDA含量显著升高（均P〈0.01）;与模型组比较,卡托普利组及地塞米松组肺泡炎及肺纤维化评分、HYP含量、MDA含量及TGF-β1 mRNA表达水平均明显低于模型组（均P〈0.05或0.01）,SOD含量均显著升高（均P〈0.01）,卡托普利组AngⅡ含量显著降低（P〈0.01）,地塞米松组AngⅡ含量显著升高（P〈0.01）;卡托普利组TGF-β1 mRNA表达水平明显低于地塞米松组（P〈0.05）。结论卡托普利可能是通过抑制AngⅡ的生成、减少TGF-β1 mRNA的表达以及纠正氧化／抗氧化失衡而博莱霉素诱导的大鼠     

大鼠肺纤维化转录因子T—bet／GATA3的表达及其与相关细胞因子的关系

目的探讨大鼠肺纤维化时转录因子T—bet／GATA3的表达及与细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-4的相关性。方法腹腔注射博莱霉素（BLM）制作大鼠肺纤维化动物模型。将40只雄性SD大鼠随机均分为对照组、BLM1周组（BLM1组）、BLM2周组（BLM2）及BLM4周组（BLM4组）。病理半定量评估各组大鼠肺组织纤维化的程度,并检测其外周血单个核细胞转录因子T—bet／GATA3mRNA的表达及血清细胞因子IFN—γ、IL-12、1L-4的含量。结果（1）BLM1组肺组织病理改变以肺泡炎为主,BLM2组兼有肺泡炎和纤维化病变,BLM4组以肺纤维化为主。病理半定量分析BLM1组与BLM4组差异有统计学意义（P〈0.01）,BLM2组与BLM1组及BLM4组比较亦有统计学意义（均P〈0.05）。（2）半定量RT—PCR法显示各BLM组大鼠T—bet基因的表达均低于对照组而GATA3基因的表达则高于对照组（均P〈0.01）。（3）各BLM组血清IFN—γ及IL-12含量均显著低于对照组而IL-4含量均高于对照组（均P〈0．01）。结论BLM致大鼠肺纤维化时血清IFN—γ及IL-12含量下降,IL-4含量升高,呈Th2细胞因子优势型变化。BLM致大鼠肺纤维化时转录因子T—bet表达减少,GATA3表达增加,T—bet／GATA3的改变参与了Th1/Th2的失衡,与肺纤维化的发生有关。     

C型钠尿肽对博莱霉素介导的小鼠肺纤维化的保护作用

目的 观察C型钠尿肽对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的抑制作用.方法 经气管注射博莱霉素制作肺纤维化小鼠模型,将实验动物分为三组,包括空白对照组、博莱霉素处理组(BLM组)和C型钠尿肽干预组(CNP组),于第1、3、7、14天进行肺泡灌洗,回收各组肺泡灌洗液并检测炎性细胞和IL-1β量;记录药物处理后小鼠死亡率;第14天处死小鼠,取肺组织制备病理切片后评价各组模型肺组织形态学变化,测定肺组织匀浆中羟脯氨酸含量.结果 BLM组的肺纤维化和炎症反应较明显,死亡率高;CNP组与BLM组相比,肺纤维化程度减轻,炎性细胞较少,组织羟脯氨酸含量减低,死亡率下降.结论 C型钠尿肽能减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,与干预炎症因子的产生及纤维化过程有关.     

肺纤维化动物模型及研究进展

近年来,肺纤维化的发病率呈上升趋势,其病因和发病机制尚不清楚。肺纤维化动物模型在研究肺纤维化发病机制中起重要作用。本文对一些常用和新建立的肺纤维化模型的使用和特点进行了总结,为肺纤维化疾病的基础研究和药物筛选及有效性评价提供参考。