来氟米特预防小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的实验研究

目的 评估来氟米特（LEF）对小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）术后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用.方法 以SPF级雄性C57BL/6（H-2b）为供鼠,雌性BALB/C（H-2d）为受鼠,建立allo-BMT/aGVHD动物模型,并将大鼠随机分为：A组（模型对照组）、B组（环孢菌素A组,剂量为10 mg·kg^-1·d^-1）、C组（LEF组,剂量为10 mg·kg^-1·d^-1）,同时根据临床表现、病理组织学检查、平均生存时间评估各组aGVHD的严重程度.结果 B组和C组受鼠平均生存时间均较A组显著延长（均P〈0.01）,B组和C组间平均生存时间的差异均无统计学意义（均P〉0.05）;B组和C组受鼠的aGVHD临床表现和病理改变均较A组明显减轻.结论 LEF可有效预防小鼠allo-BMT术后出现的aGVHD,并可减轻其症状和病理损害程度,同时显著延长平均生存时间.     

异基因骨髓移植后肾病综合征的临床与病理分析

目的探讨异基因骨髓移植后肾病综合征的临床和病理特点。方法对1例异基因骨髓移植后发生肾病综合征患者的临床、病理资料及治疗进行综合分析。结果本例患者在骨髓移植后28个月发生肾病综合征,在此之前患者有皮肤、口腔和肝脏损害表现;肾脏病理表现为膜性肾病。糖皮质激素及霉酚酸酯治疗后肾病综合征完全缓解。结论异基因骨髓移植后肾病综合征是慢性移植物抗宿主病的肾脏表现,可能为自身免疫性疾病,是移植物对宿主产生的一种排斥反应。肾穿刺活检对该病的诊断和预后判断具有重要价值,免疫抑制剂治疗有效。     

FTY720对小鼠异基因骨髓移植后急性GVHD的预防作用

目的 评估FTY720对小鼠异基因骨髓移植诱发急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用。方法36只受体BALB／c小鼠,接受直线加速器一次性全身照射后4～6h内,经尾静脉注射供体小鼠骨髓和脾脏细胞。受体小鼠分为移植方式对照组（A组）和异基因移植治疗组（B组）;同时A组分未移植组（A1）、同基因移植组（A2）和异基因移植对照组（A3）,B组分CsA5mg／kg组（B1）,FTY7200．3mg／kg组（B2）和FTY7201mg／kg组（B3）。移植后受体小鼠,根据生存时间、体重变化和病理组织学检查,评估各组aGVHD严重程度。结果 异基因移植各组在移植后第7d造血开始恢复,第14d流式细胞仪检测显示异基因骨髓细胞已植入,病理组织学检查A3组发生重度aGVHD;与B1和B2组比较,B3组aGVHD严重程度最低。结论小鼠异基因骨髓移植后给予FTY720具有预防aGVHD作用．以剂量为1mg／kg时作用显著。     

mFasL基因转移诱导异基因骨髓移植受者获得免疫赦免的实验研究

目的 :通过导入外源FasL cDNA ,诱导异基因骨髓移植物中针对受者MHC的淋巴细胞凋亡 ,从而防止移植物抗宿主病 (GVHD)的发生。方法 :pBillneo mFasL质粒经酶切鉴定后 ,采用脂质体转移法导入Balb c鼠骨髓单个核细胞 (BMNC) ,体外与BAC鼠骨髓移植物混合培养后 ,输注给经致死量照射的Balb c小鼠 ,通过观察受者存活率、GVHD的表现、肠、肝、皮肤病理组织学检查 ,以观察受者鼠GVHD的发生情况 ,同时观察受者鼠的脾结节以了解其造血功能重建。受者鼠骨髓细胞Y染色体分析 ,以查明供者来源的造血干细胞是否植入。结果 :pBillneo mFasL内mFasL cDNA酶切鉴定提示可以按顺序合成出功能蛋白质 ,采用脂质体法传导入BMNC后 ,Westen Blot显示出抗FasL抗体识别的条带。转基因BMNC与BAC鼠脾单个核细胞 (SMNC)混合培养后 ,经流式细胞仪检测 ,SMNC凋亡率明显高于对照组 [(14 .76 %± 0 .36 ) %vs(1.8± 0 .4 2 ) % ,t=3.0 1,P <0 .0 0 1]。骨髓移植 (BMT)后 ,受者GVHD的发生率实验组明显低于对照组 (4 0 %vs10 0 % ,χ2 =6 .0 0P <0 .0 5 )。Y染色体分析 ,提示有供者来源的造血干细胞植入并增殖活化。移植 10d后受者即有脾结节形成 ,2 0d达正常水平。结论 :采用脂质体转移法 ,能将mFasL cDNA转入鼠BMNC并能有效地表达 ,转基因     

异基因骨髓移植与异基因外周血造血干细胞移植治疗慢性髓系白血病的疗效比较

目的比较HLA相合同胞异基因骨髓移植(allo-BMT)与异基因外周血造血干细胞移植(allo-PB-SCT)治疗慢性髓系白血病(CML)的临床疗效。方法allo-BMT 24例,allo-PBSCT 29例。预处理采用全身照射加环磷酰胺(TBI/Cy)或白消安加环磷酰胺(Bu/Cy)为主的方案。结果BMT组造血重建23例(95.8%),PBSCT组29例;PBSCT组外周血象恢复至中性粒细胞(ANC)>0.5×109/L、WBC>1×109/L、PLT>20×109/L的速度快于BMT组(P均<0.01)。BMT组急性移植物抗宿主病(aGVHD)15例(62.5%),PBSCT组21例(72.4%),2组比较差异无显著性(P>0.05);BMT组慢性GVHD(cGVHD)4例(18.2%),PBSCT组14例(53.8%),PBSCT组高于BMT组(P<0.05);BMT组移植相关死亡(TRM)3例(12.5%),复发4例(16.7%),5年无病生存率(DFS)(76.6±11.8)%,而PBSCT组TRM 7例(24.1%),复发1例(3.4%),5年DFS(75.5±8.1)%,2组比较差异均无显著性(P均>0.05)。结论allo-BMT和allo-PBSCT治疗CML疗效相当,allo-PBSCT组造血重建迅速,但cGVHD发生率高。     

Graft-versus-leukemia effects from donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation in mice

Background Nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation has been used since the 1990s as a new hematological stem cell transplantation strategy for treating hematological diseases. The purpose of this study was to explore the graft-versus-leukemia (GVL) effects of donor lymphocyte infusions (DLIs) after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantations, while assessing the declines in treatment-associated morbidity, mortality, and graft-versus-host disease (GVHD).Methods A total of 615 (H-2k) mice were injected with L615 tumor cells and received 500 cGy (60Coγ-ray) irradiation three days later, followed by an allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT). The allo-grafts consisted of 3×10（7） bone marrow cells and 1×10（7） spleen cells from BALB/C (H-2d) donor mice. Two days after the allo-BMT, the recipient mice were given 200 mg/kg of cyclophosphamide. Subsequently, recipient mice were infused with either donor spleen cells ［2×10（7）］ on day 14 or 21, or donor spleen cells ［5×10（7）］ pretreated with hydrocortisone and cyclosporin A (CsA) in vitro on day 14 post-BMT.Results The median survival time of mice that received DLI on day 21 and pretreated DLI on day 14 post-BMT was longer than that of controls and the day 14 DLI group (P&lt;0.01). No evidence of severe GVHD was observed in the day 21 DLI group nor in the day 14 treated DLI group. Mixed chimerism was confirmed in the day 14 DLI group, the day 14 treated DLI group, and the day 21 DLI group on the thirteenth day post-transplantation; full donor chimerism was observed two weeks after DLI.Conclusion Donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative bone marrow transplantation may reduce transplantation-associated morbidity and mortality while strengthening graft-versus-leukemia effects.     

建立大鼠异基因骨髓移植模型的实验研究

目的：建立较稳定的异基因骨髓移植模型,为异基因骨髓移植的相关研究提供实验参照。方法：以雄性SD大鼠为供鼠,雌性Wistar大鼠为受鼠,受体大鼠随机分成A（对照组）、B（移植组）两组,移植当天A、B组均接受8.5Gy的全身照射（TBI）,于照射后6h,A组回输等量培养液,B组经尾静脉输注供鼠骨髓细胞（2×10^8个/kg）。观察生存期外周白细胞计数,B组存活鼠检测Y染色体及观察有无移植物抗宿主病（GVHD）临床及病理表现。结果：A组大鼠于15d内全部死亡,外周白细胞计数明显减低,骨髓病理示造血组织减少,提示死于造血衰竭。B组大鼠均达到造血重建,8只存活超过50d,骨髓中能检测到供鼠Y染色体,另2只鼠分别于18、31d死亡,肝及小肠病理未见明显GVHD。结论：B组大鼠异基因骨髓成功植入,预处理的方式是可行的,同时单纯输入异基因骨髓细胞不能引起明显的GVHD。     

延迟连续移植预防小鼠移植物抗宿主病的实验研究

目的研究延迟连续移植对小鼠异基因移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的影响。方法近交系BALB/c（H-2d）受鼠接受8.0 Gy全身放疗（TBI）后,分4组（每组n=20）输注供鼠C57BL/6（H-2b）骨髓和脾细胞的混合液：①经典移植组（TBI后4 h输注）;②连续移植组（TBI后4 h、1-3天连续输注）;③延迟移植组（TBI后4天输注）;④延迟连续移植组（TBI后4-7天连续输注）。流式细胞仪检测移植后各组T细胞亚群、NK细胞、H-2b的表达,比较各组受鼠生存率、aGVHD情况及造血重建。结果经典移植组均于3周内死于aGVHD,连续移植组、延迟移植组60天生存率分别是30%、50%。延迟连续移植组60天生存率为70%,高于其他3组（P＜0.05）。延迟连续移植组20天时外周血白细胞计数恢复正常,30天时T细胞亚群和NK细胞的表达恢复正常,60天时H-2b细胞的百分率为98.13%±1.11%。结论延迟连续骨髓移植可减轻小鼠异基因移植后的aGVHD,提高生存率,同时不影响骨髓植入、造血和免疫重建,是一种简单有效的预防aGVHD的新方法。     

异种骨髓移植后1例慢性移植物抗宿主病动物模型的观察

目的 探讨异种造血嵌合体模型中慢性移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,GVHD）发生的特点及机制。方法 本研究对40余只异种造血嵌合体模型中出现的一只慢性GVHD实验兔行血常规、肝功、骨髓涂片检查，对其肝、肺、小肠、皮肤等脏器行常规病理、胶原纤维染色等检查，并同时用PCR测其外周血中供体细胞嵌合情况。结果 该实验兔外周全血细胞减少，PCR检查未发现供体细胞，骨髓轻度增生不良；病理结果显示其病变仍以皮肤为重但均较同种GVHD轻，其病变侵犯部位与同种GVHD无明显区别。结论 异种骨髓移植的慢性GVHD出现时间晚，较罕见，临床表现不如同种慢性GVHD典型，病变较同种GVHD轻；其病变侵犯器官与同种GVHD无明显区别。     

NK细胞对小鼠H-2单倍体相合骨髓移植后GVHD及造血重建的影响

目的:研究自然杀伤(NK)细胞在单倍体相合骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)及造血重建的影响. 方法: 以近交系Balb/c(H-2d)×C57BL/6(H-2b)杂交F1代小鼠(H-2d/b)为供鼠、Balb/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行半相合骨髓移植,根据临床表现、病理检查及外周血白细胞(WBC)数,比较不同移植组GVHD发生及造血重建情况. 结果: 骨髓 T细胞组中90%的小鼠出现GVHD,外周血WBC平均在移植后4 wk恢复正常;而骨髓 T 低浓度NK细胞组中20%小鼠出现GVHD, 外周血WBC平均在移植后3 wk恢复正常;骨髓 T 高浓度NK细胞组中仅10%出现GVHD,外周血WBC也平均在移植后3 wk恢复正常. 后两组较骨髓 T细胞组GVHD发生率显著下降(P＜0.01),外周血WBC恢复时间显著提前(P＜0.01). 结论:在小鼠单倍体相合骨髓移植中,同种反应性NK细胞可降低GVHD发生率,促进造血重建.     

间充质干细胞联合NK细胞输注抑制DC减轻aGVHD

【目的】 观察骨髓MSC联合NK细胞输注对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的影响,初步探讨其作用机制?【方法】 分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,体外培养MSC;取C57BL/6小鼠脾脏细胞,磁珠分选NK细胞;建立C57BL/6→BALB/c小鼠异基因骨髓移植模型,接受移植小鼠随机分为4组,每组10只小鼠,MSC和NK细胞移植组,MSC移植组,NK细胞移植组和培养基对照组?根据aGVHD分值,肝?脾?小肠aGVHD病理损害和平均存活时间,评价aGVHD的程度?ELISA法检测小鼠血清中IFNγ和IL-12的含量?流式细胞术检测受鼠脾脏细胞CD11c和CD86的表达情况?【结果】 根据GVHD分值,肝?脾?小肠aGVHD病理损害和平均存活时间综合评价,与培养基对照组比较,MSC联合NK细胞移植组,MSC移植组和NK细胞移植组,发生aGVHD的程度均减轻,以MSC联合NK细胞移植组减轻最为明显?IFNγ的含量,NK细胞组明显高于MSC联合NK细胞移植组,MSC移植组和培养基对照组?IL-12的含量,MSC联合NK细胞移植组低于NK细胞移植组和培养基对照组,MSC移植组低于培养基对照组?脾脏DC细胞的含量,MSC联合NK细胞移植组未成熟DC(CD11c+CD86-)和成熟DC(CD11c+CD86+)均低于MSC移植组,NK细胞组和培养基对照组?【结论】 MSC联合NK细胞输注降低DC细胞数量,减轻aGVHD,延长小鼠生存时间?     

Effect of NK cells on GVHD in H-2 haploidentical bone marrow transplantation in mice

Objective To study the effect of natural killer (NK) cells on graft-versus-host disease (GVHD) after H-2 haploidentical bone marrow transplantation (BMT) in mice. Methods Murine model of H-2 haploidentical BMT was established by using Balb/c (H-2d) mouse as recipient, and Balb/c(H-2d)×C57BL/6 (H-2b) (H-2d/b) mouse as donor. Lethally irradiated Balb/c (H-2d) mice were transplanted with the bone marrow cells from Balb/c(H-2d)×C57BL/6(H-2b) (H-2d/b) mice containing donor spleen cells and/or NK cells. GVHD and survival rates were studied by observation of clinical manifestations and pathological changes. ResultsIn the group of bone marrow spleen cells, GVHD was induced in 90% mice; but in the group plus with low amount of NK cells,GVHD was induced in 20% mice; and in the group transplanted with high amount of NK cells, GVHD was induced only in 10% mice. Compared to the group transplanted only with BM plus spleen cells, the incidences of GVHD in the latter two groups decreased significantly (P＜0.01) and the survival rates at different periods of 15, 30, 45 and 60 days increased obviously (P＜0.01 ). Conclusion In mouse H-2 haploidentical BMT, alloreactive NK cells can reduce the incidence of GVHD and increase the survival rate.     

免疫抑制剂在异体造血干细胞移植中的应用

异体造血干细胞移植的重要并发症是移植物抗宿主病(GVHD),免疫抑制剂是有效防治GVHD的一类药物.在异体造血干细胞移植后应用免疫抑制剂,使得GVHD发生率下降,严重程度减轻.本文对几类主要的免疫抑制剂的作用机理以及在异体造血干细胞移植中作为预防和治疗GVHD的应用作一综述.     

白介素-11对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的预防作用

目的 评估白介素-11(Interleukin-11,IL-11)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT) 后急性移植物抗宿主病(aGVHD) 的预防作用. 方法 用主要组织相容性抗原(MHC) 完全不合的纯种近交系SPF级小鼠,雄C57BL/6(H-2b)为供鼠,雌性BALB/C(H-2d)为受鼠,建立allo-BMT/aGVHD 动物模型,随机分3组:模型对照组、IL-11组(剂量为500μg/(kg·d)、环孢菌素A(CsA)组(剂量为10mg/(kg·d),观察其对aGVHD 的预防作用. 结果 IL-11组、CsA组受鼠生存时间均长于模型对照组(P<0.01);IL-11组、CsA组受鼠aGVHD临床表现和病理改变均较模型对照组明显轻.IL-11组、CsA组之间平均生存时间比较无统计学差异(P=0.901). 结论 IL-11可有效预防小鼠allo-BMT后aGVHD,减轻其症状和病理损害程度,显著延长平均生存时间.     

不同成分淋巴细胞输注对荷瘤小鼠异基因骨髓移植的影响

目的:建立荷瘤小鼠非清髓异基因骨髓干细胞移植模型,探讨不同成分的供者淋巴细胞输注(DLI)对移植效果的影响及抗肿瘤机制. 方法: 受者鼠为Balb/c(H-2Kd)小鼠,供者鼠为C57bl/6(H-2Kb)小鼠,受者小鼠腹腔接种小鼠肝癌细胞株H22细胞,观察腹水生成情况及生存状况. 于接种瘤细胞后d5给予全身照射预处理,随后给受者小鼠尾静脉输注供者鼠的骨髓细胞,建立荷瘤小鼠的MHC不相合亚移植模型. 依据不同DLI将荷瘤鼠受者鼠随机分为A,B,C,D,E组,每组10只. A,B,C,D组均给予预处理,A组预处理后于移植d1,7给予供者小鼠全脾细胞0.5×107个;B组分别于移植d1,7给予去除CD8 细胞供者鼠脾细胞0.5×107个;C组于移植d1,7给予去除CD4 细胞供者鼠脾细胞0.5×107个;D 组只接受预处理不作移植及DLI;E组为对照组,既不作预处理,也不接受骨髓细胞移植及DLI. 观察各组成瘤率、生存期、嵌合状态、造血恢复情况及移植物抗宿主病(GVHD). 结果:所有小鼠均产生腹水,成瘤率100%;生存期C组最长为(35.6±3.1)d,B组为(23.7±10.9)d,B,C两组相比有统计学差异(P＜0.05);接受移植的A,B,C组嵌合率均高于0.80,只接受预处理的D组鼠白细胞计数自行恢复正常;GVHD评分C组与B组有明显差异(P＜0.05). 结论:建立非清髓荷瘤小鼠异基因骨髓干细胞移植模型条件适宜,说明去除CD4 细胞的DLI能够有效地减轻GVHD反应,延长荷瘤鼠生存期;去除CD8 细胞的DLI会加重GVHD反应,影响移植.     

Influence of partially purified lymphocyte chalone on bone marrow transplantation in mice

Lymphocyte chalone was partially purified by ultrafiltration and chromatography onSep hadex G75 column.Its inhibitory effect on proliferation of T,B lymphoctes was demonstratedby[~3H]-TdR incorporation method.In mouse bone marrow transplantation model,the treatmentwith lymphocyte chalone in vivo and in vitro was found to have significantly improved the 30 daysurvival rate and mean survival time,suggesting its inhibitory effect on acute graft-versus-host dis-ease(GVHD)and the helpful effect on H-2 incompatible tone marrow transplantation in mice.     

自然杀伤细胞对小鼠异基因骨髓移植中移植物抗宿主病效应的影响

目的:研究自然杀伤细胞(NK)在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法:以近交系小鼠C57BL/6(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行异基因骨髓移植,根据临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率和GVHD发生情况.结果:增加1×106供鼠NK细胞的移植组中40%小鼠出现GVHD,增加2×106供鼠NK细胞的移植组中仅30%出现GVHD;与单纯异基因骨髓移植细(80%急性GVHD、20%慢性GVHD)和骨髓 T细胞组(100%急性GVHD)比较,GVHD发生率显著下降(P＜0.01),30、60和120 d存活率显著增高(P＜0.01).结论:在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性NK细胞可抑制GVHD效应,延长存活期.     

Selective Depletion of the Allo-Antigen Specific T Cells by Fas/FasL Pathway by Cytokine IFN-γ and IL-2

Severegraft versus hostdisease (GVHD)isthemajorcauseoffailureofallogeneichematopoieticstemcelltransplantation (allo HSCT) .Thedonormatu rateTlymphocytesareactivatedwhentheyrecognizeallo histocompatibilityantigenofrecipients ,anddi rectlyswitchongraft versus hostreactionandcausetargettissueinjury[1] .DepletionofTcellsingraftorinhibitionoftheirfunctioncoulddeceleratetheoccur renceanddevelopmentofGVHD[2 ] .However ,Tcellsareabletoresistinfection ,killtumorcellsandsecretecytokinessuchasIL 3…     

异基因外周血造血干细胞和骨髓混合移植治疗白血病12例

目的探讨异基因外周血造血干细胞和骨髓混合移植治疗白血病的疗效。方法 12例白血病患者,人白细胞抗原（HLA）配型全相合11例,2个位点不相合1例,采用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员的外周血造血干细胞和骨髓联合移植,环孢素A联合甲氨蝶呤加/不加吗替麦考酚酯方案预防移植物抗宿主病（GVHD）。结果 12例患者均获得异体植活,中性粒细胞（ANC）〉0.5×109L-1,血小板（BPC）〉20×109L-1的中位时间分别为移植后的11 d（10-15 d）和14.5 d（11-43 d）。有3例发生了Ⅰ度急性GVHD,1例发生了Ⅱ度急性GVHD。在可评估的7例患者中有1例出现了局限的慢性GVHD。有3例患者因白血病复发而死亡,另1例因植活后感染死亡,其余8例中位随访时间13个月（2-29个月）,均无病生存。结论外周血造血干细胞和骨髓混合移植对HLA配型全相合和部分相合患者是安全有效的移植方法。     

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立和评价

目的 采用化疗药物预处理方案建立异基因造血干细胞移植的慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并进行评价.方法 以BALB/cH-2kd小鼠作为供鼠,C57BL/6H-2kd小鼠为受鼠.对受鼠使用不同的化疗药物进行预处理[方案1:白消安20mg/(kg·d)×4d+环磷酰胺150mg/(kg·d)×2 d;方案2:白消安20mg/(kg·d)×4 d+环磷酰胺100mg/(kg·d)×2 d],然后经尾静脉注射不同剂量的供鼠脾细胞(6×107或4×107个)和(或)相同剂量的骨髓细胞(2×107个),建立慢性移植物抗宿主病小鼠模型;采用嵌合体分析、临床评分、组织病理学等进行评价.结果 采用白消安20mg/(kg·d)×4d-+环磷酰胺150mg/(kg·d)×2d的方案进行预处理、2×107个骨髓单个核细胞+6×107个脾单个核细胞进行移植可形成较高水平的供受者混合嵌合体.移植物抗宿主病发生时间多集中在供鼠脾细胞输注后30～90 d,化疗药物剂量大的预处理方案及移植细胞数高的移植组小鼠的临床评分和慢性移植物抗宿主病的发生率高于化疗药物剂量小的预处理方案及移植细胞数少的移植组(P＜0.05).模型小鼠肠、肝脏、皮肤、脾脏等器官出现细胞和结构异常、炎症细胞浸润等病理改变.结论 采用白消安和环磷酰胺预处理、给予2×107个骨髓单个核细胞+6×107或4×107个脾单个核细胞可形成较稳定的慢性移植物抗宿主病小鼠模型,为进一步指导临床治疗慢性移植物抗宿主病奠定了实验基础.