昆虫细胞凋亡蛋白酶caspase-1的表达纯化及活性分析

依赖于天冬氨酸的半胱氨酸蛋白酶(caspase)在细胞凋亡途径中起着不可替代的关键酶作用.本研究采用原核表达载体pET32a表达和纯化了家蚕细胞Bm-caspase-1及粉纹夜蛾细胞Tni-caspase-1蛋白酶,序列分析表明二者具有相同的内部剪切识别序列,且酶活性位点均为QACQ↓G.纯化获得大量可溶性蛋白酶,Western-blotting分析表明Bm-caspase-1在大肠杆菌中已自我剪切活化,而Tni-caspase-1没有自我剪切,无酶活性;活性Bm-caspase-1蛋白酶对caspase-3特异性底物Ac-DEVD-AMC的降解酶活性可被Z-VAD-FMK呈剂量依赖性抑制,半抑制浓度约20nmol/L.此外,活性Bm-caspase-1蛋白酶能够转活化无活性的Tni-caspase-1蛋白酶原.结果揭示了昆虫细胞caspase同样具有与哺乳动物细胞caspase相似的底物降解活性并可相互剪切激活,为进一步研究昆虫细胞凋亡的分子途径奠定了基础.     

养殖大黄鱼溃疡病的病原菌及其防治药物

研究了浙江省沿海网箱养殖大黄鱼溃疡病病原菌的生物学特性、对化学药物和中草药的敏感性及其胞外产物活性等．从症状典型的网箱养殖患病大黄鱼体内分离到1株可疑细菌824-1,经人工感染试验证实为是引起该病的病原菌．经鉴定,菌株824-1为溶藻弧茵（Vibrio alginolyticus）．利用杯碟法研究了其胞外产物的性质,结果表明：其胞外产物具有淀粉酶、明胶酶、酪蛋白酶、卵磷脂酶、脂酶和几丁质酶活性以及溶血活性,其中以淀粉酶、明胶酶和酪蛋白酶的活性最强,但没有脲酶活性．检测了18种化学药物和15种中草药对病原菌的抑菌作用．结果表明,复方新诺明和庆大霉素等2种化学药物和石榴皮、地榆、五味子、大黄等4种中草药的抑菌能力最强,可作为防治该病的有效药物。     

通风量对餐厨垃圾堆肥中氮素转化及N2O释放的影响

通风量对餐厨垃圾好氧堆肥过程中氮素的演变和氧化亚氮(N2O)释放均有重要影响. 研究以通风量作为影响因子, 设置3组初始温度均为35℃的餐厨垃圾好氧堆肥化实验, 其通风量分别为(A)0.2L·min-1、(B)0.4L·min-1、(C)0.6L·min-1, 分析餐厨垃圾堆肥过程中温度、pH、NH4+-N、NO3--N和N2O等参数变化. 结果表明 B、C组堆肥均能在50℃保持5d以上; B、C组氧容量在10.87%~18.62%之间能够满足微生物活动需要; 3组实验结束时的pH值在7.32~8.10之间, 符合相关堆肥产品的要求; 各组NH4+-N与NO3--N含量分别为0.48、0.68、0.52g·kg-1和0.09、0.12、0.11g·kg-1; 各组N2O总排放量为464.07、293.92、313.99g. 综上所得, 通风量0.4L·min-1能够较好地促进生化反应过程, 对氮素进行有效地矿化与保留, 对N2O排放取得相对明显的控制效果, 可为N2O减排提供参考依据.     

NaN3抑制过氧化氢酶反应的微量热法研究

利用微量热法研究了过氧化氢酶反应及NaN3 对该反应的抑制动力学 .在 310 .15K、0 .1mol·L-1的Na2 HPO4 NaH2 PO4缓冲体系中 ,用初始速率法测定过氧化氢酶反应的表观二级反应速率常数kcat为 7.32× 10 6L·mol-1·s-1,与文献结果相符 .NaN3 对过氧化氢酶的抑制是非竞争性可逆作用于原酶和活性中间体———化合物Ⅰ的综合结果 ,抑制剂的半抑制浓度I50 为 8.5 1× 10 -6mol·L-1.     

泰和乌骨鸡及其黑素对小鼠红细胞过氧化氢酶及血浆过氧化脂质的影响

以泰和乌骨鸡及其黑素为药物直接喂养小鼠,测定实验鼠红细胞过氧化氢酶的活性及血浆过氧化脂质的含量,以探讨乌骨鸡是否具有抗衰老作用。实验结果表明：１）泰和乌骨鸡及其黑素有提高小鼠红细胞过氧化氢酶活性的趋势,但其提高的幅度尚未达到显著水平;２）泰和乌骨鸡及其黑     

银鲳不同消化器官中消化酶活性的分布及其比较

为了解野生与养殖条件下银鲳不同消化器官中消化酶活性的分布,比较研究了野生银鲳成鱼和养殖银鲳幼鱼的消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)活性.结果表明:(1)成鱼胃中蛋白酶活性最大,为0.47U·mg-1,侧囊中蛋白酶活性最小,仅有0.05 U·mg-1;成鱼肝中淀粉酶活性最大,为0.08U·mg-1,直肠最小,为0.01 U·mg-1;肝的脂肪酶活性最大,为10.63 U·mg-1,中肠最小,肝脂肪酶活性约为中肠的9倍.(2)幼鱼三种消化酶活性均为:胃肝侧囊,且银鲳幼鱼各消化酶活性总体上高于成鱼,幼鱼胃中蛋白酶活性、淀粉酶活性、脂肪酶活性分别约为成鱼胃的3倍、12倍和1.5倍.(3)银鲳成鱼和幼鱼的A/P值都小于1,且幼鱼各消化器官的A/P值都大于成鱼,A/P值结果表明银鲳为偏肉食性鱼类,野生的成鱼比养殖的幼鱼更适应肉食性.此外,研究还发现银鲳的脂肪酶活性明显高于许多常见海水性鱼类,推断其对脂肪的利用效率较高,可以考虑在银鲳饲料的配制时适当提高饲料中脂肪的比例.     

水溶性壳聚糖浸种对小麦幼苗抗性相关酶活性的影响

利用0.5 g/L的5 种水溶性壳聚糖分别对小麦进行浸种处理,在幼苗发育的5 个时期对叶内苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性进行测定.壳聚糖处理降低叶内苯丙氨酸解氨酶活性.多酚氧化酶活性变化不显著,初期酶活性较对照高,随幼苗发育先降后升.壳聚糖浸种处理显著提高叶内过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性.5种分子量中以10×103的壳聚糖C浸种处理小麦幼苗叶内抗性相关酶活性强.     

温郁金对紫外线致雄性小鼠免疫遗传损伤的拮抗效应

以ICR雄性小鼠为实验动物、以紫外线为诱变剂,研究了温郁金对紫外线致ICR雄性小鼠免疫遗传损伤的拮抗效应.采用了小鼠骨髓嗜多染红细胞（polychromatic erythrocyte,简称PCE）微核实验等方法.测定了小鼠血象、血红蛋白含量、胸腺及脾指数,小鼠肝脏过氧化氢酶（catalase,简称CAT）活性,小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）的微核率等指标.结果显示：实验剂量的温郁金均能使紫外线引起脾脏指数和胸腺指数、红细胞数、白细胞数以及血小板数、血红蛋白含量和CAT活性的下降明显回升;实验剂量的温郁金则能使紫外线引起PCE微核率的上升明显回落.结论是温郁金对紫外线引起的小白鼠免疫遗传损伤具有一定的拮抗效应.     

水稻"斑马叶"叶绿素含量及几种酶活性的变化

以具“斑马叶”性状的水稻1103S、武金4B以及对照武金3B为材料,研究了该性状表达过程中叶片叶绿素、蛋白质含量及几种酶活性的变化．结果表明,性状表达期叶片叶绿素、蛋白质含量减少,过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性降低,过氧化物酶(POD)活性上升;随着叶片复绿,各项指标又回复到低温处理前的水平．该性状的表达是由于阶段性叶绿素代谢异常所致,它不仅与叶绿素含量有关而且与POD、CAT、SOD等几种酶活性之间存在一定关系．     

鲫鱼维隆气单胞菌和腐败希瓦菌的分离鉴定、致病性和药敏分析

从患病鲫鱼肝、肾、血体内分离到JYV1605101和JYF1605102 2株细菌,人工感染试验和溶血活性测定表明这2株菌对健康鲫鱼具有较强毒力,菌株JYV1605101对鲫鱼LD_(50)为3.31×10~3cfu·g~(-1),对绵羊、小鼠、乌鳢、鲫鱼、鲤鱼、加州鲈等6种动物血细胞呈β溶血;菌株JYF1605102对鲫鱼LD_(50)为1.48×10~2cfu·g~(-1),对乌鳢、鲫鱼、鲤鱼、加州鲈的血细胞呈β溶血,但对绵羊和小鼠血细胞呈α溶血.经形态学观察,生理生化试验及16S rDNA基因序列分析,鉴定菌株JYV1605101为维隆气单胞菌(Aeromonas veronii),菌株JYF1605102为腐败希瓦菌(Shewanella putrefaciens).菌株JYV1605101具有胞外蛋白酶、明胶酶、淀粉酶活性,不具有脲酶、脂酶和卵磷脂酶活性;菌株JYF1605102具有胞外蛋白酶、明胶酶活性,不具有脲酶、脂酶、淀粉酶和卵磷脂酶活性.药敏试验表明,2株菌都对其中的18种药物较敏感,根据渔业用药规定和常用药情况,氟苯尼考、四环素、米诺环素、强力霉素可作为鲫鱼维隆气单胞菌和腐败希瓦菌感染的候选控制药物.     

酶解法制备胶原蛋白肽及其抗氧化活性的研究

以浙东白鹅为研究对象,在木瓜蛋白酶和风味蛋白酶复合一次酶解鹅皮胶原蛋白基础上,选取4种常见蛋白酶对胶原蛋白酶解产物进行二次酶解,并优化二次酶解条件以提高其产物的抗氧化活性,以抗氧化能力为指标确定二次酶解中的最佳水解酶.在单因素试验基础上,以还原力为指标,选取p H、酶解温度和酶解时间为考察因素,利用响应曲面法确定最佳酶解条件.结果表明,在胶原蛋白的二次酶解中,以碱性蛋白酶酶解所得产物抗氧化活性较好,响应曲面法确定碱性蛋白酶最优酶解条件为p H 8.96、酶解温度49.3℃、酶解时间5.7 h,此时所得多肽还原力达到13.48×10-2,较优化前提高了3.51%.     

活性炭纤维阴极电-Fenton法降解艳红染料X3B

采用活性炭纤维作为电-Fenton反应的充氧阴极来降解水中活性艳红染料X3B,运用扫描电镜、紫外可见光谱、总有机碳分析等手段系统考察了电极形貌、底物吸附、铁离子初始价态、曝气等影响因素.实验结果表明,X3B在活性炭纤维表面的吸附符合Langmuir等温吸附模型,而X3B的电-Fenton降解反应则符合准一级反应动力学;通入空气能显著提高X3B的降解反应速率和矿化率,铁离子价态对此则无明显影响;X3B能被有效矿化,210min内矿化率为75.9%,表观电流效率达57.2%.     

CuO在CeO2和γ-Al2O3上的表面性质及对NO+CO反应性能的研究

在色谱-微反实验装置上考察了CuO/CeO2、CuO/γ-Al2O3及CeO2改性的催化剂对NO+CO的反应性能,并用TPR、XRD、XPS、BET和NO-TPD等技术对上述催化剂进行了表征.结果表明催化剂活性的提高与铜物种在两种载体(CeO2和γ-Al2O3)上的价态(Cu2+和Cu+)、分散状态和吸附特性有关.TPR实验显示CuO在CeO2上存在两种还原物种,而在γ-Al2O3上只有一种还原物种.XPS检测表明CuO/CeO2的Cu2p3/2结合能值与Cu2+和Cu+的标准结合能基本吻合,而CuO/γ-Al2O3的Cu2p3/2结合能值接近或略低于Cu2+的标准结合能. NO-TPD实验表明催化剂表面的NO脱附峰温低于载体表面的NO脱附峰温,而CuO/CeO2表面的NO脱附峰温低于CuO/γ-Al2O3表面的NO脱附峰温,说明NO在CuO/CeO2表面的分解活性大于CuO/γ-Al2O3,而NO在催化剂表面的分解活性大于载体.     

Salen双核Cu2+配合物的合成及催化染料降解

以水杨醛、N,N'-二胺丙基乙二胺和CuCl₂为原料得到了双核配合物Cu₂ClL·6H₂O,并进行了表征.利用UV-Vis研究了Cu₂ClL·6H₂O催化甲基橙和酸性蓝9的降解性能,利用GraphPad Prism 5软件绘制了染料降解的V-S曲线,利用HPLC研究了染料的降解产物.结果发现：（1）Cu₂ClL·6H₂O能有效催化甲基橙和酸性蓝9的氧化降解,10 h后酸性蓝9和甲基橙的降解率分别达到90%与60%;（2）染料的降解动力学符合酶促动力学过程,V-S曲线符合米氏动力学方程,Cu₂ClL·6H₂O催化甲基橙和酸性蓝9降解米氏常数K_m分别为3.29×10^-2 和1.93×10^-1 mmol·L^-1;（3）降解产物有马来酸,并给出了催化剂的催化机理和染料的降解机理.说明Cu₂ClL·6H₂O可以作为仿酶催化剂,与底物甲基橙和酸性蓝9有较好的结合效果.这为设计作用底物广、效果好的仿酶催化剂提供了理论基础,为染料降解新方法和新技术的开发提供了实践依据.     

矮壮素处理对青花菜生长状态及春化关键酶活性的影响

以中早熟品种‘元绿701’青花菜为试材,当植株长至3片真叶时叶面喷施不同浓度(2 000、3 000、4 000mg·L-1)的矮壮素溶液,在其长到6片真叶时进行低温春化处理(昼温/夜温=(13.3±0.5)℃/(6.3±0.5)℃),研究矮壮素处理对青花菜生长状态及春化相关酶活性的影响.结果表明:喷施矮壮素后,改变了植株的营养生长状态,使株高显著降低、茎粗显著增加;降低了转化酶和硝酸还原酶的活性,提高了谷氨酰胺合成酶活性.低水平的转化酶、硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶活性有利于春化的完成.     

不同调理剂作用下的污泥生物干化有机质降解研究

为探讨不同调理剂作用下污泥生物干化过程中的有机质降解情况, 分别使用可循环调理剂(T1组)、负载TiO2的可循环调理剂(T2组)、陶粒(T3组)对污泥进行生物干化, 分析各阶段挥发分、E4/E6等常规理化指标, 探究了水解酶类和过氧化物酶活性, 以及相应降解底物蛋白质、脂肪酶、纤维素和木质素等的含量变化. 结果表明, 各组关键酶活性与相应底物降解率呈正相关, 在生物干化前期水解酶类发挥主导作用, 后期过氧化物酶活性逐渐增强. 经生物干化后, T1组木质素、碳水化合物降解程度最高, T2组蛋白质、纤维素降解程度最高, T3组脂肪降解程度最高. 因此, 可循环调理剂对有机质降解促进效果更好, 可作为污泥生物干化调理剂使用, 以促进污泥减量化.     

CuO在CeO2和γ—A12O3上的表面性质及对NO＋CO反应性能的研究

在色谱—微反实验装置上考察了CuO/CeO2、CuO／γ—Al2O3及CeO2改性的催化剂对NO CO的反应性能，并用TPR、XRD、XPS、BET和NO—TPD等技术对上述催化剂进行了表征．结果表明催化剂活性的提高与铜物种在两种载体(CeO2和γ—Al2O3)上的价态(Cu^2 和Cu^ )、分散状态和吸附特性有关．TPR实验显示CuO在CeO2上存在两种还原物种，而在γ—Al2O3上只有一种还原物种．XPS检测表明CuO/CeO2的Cu2p3／2结合能值与Cu^2 和Cu^ 的标准结合能基本吻合，而CuO／γ—Al2O3的Cu2p3/2结合能值接近或略低于Cu^2 的标准结合能．NO—TPD实验表明催化剂表面的NO脱附峰温低于载体表面的NO脱附峰温，而CuO/CeO2表面的NO脱附峰温低于CuO／γ—Al2O3表面的NO脱附峰温，说明NO在CuO/CeO2表面的分解活性大于CuO／γ-Al2O3，而NO在催化剂表面的分解活性大于载体．     

草酸预处理对辣椒叶片抗热性的影响

研究了 40℃热胁迫下辣椒叶片中膜透性、膜脂过氧化、抗坏血酸 (ascorbate,As A)和还原态谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量以及过氧化物酶、草酸氧化酶活性的变化 .在热胁迫处理前 3d用草酸溶液 (p H6 .5 )喷洒叶片 .结果表明 :草酸预处理能减轻热胁迫对细胞膜的伤害 (以电解质渗漏表示 ) ,在一定程度上能抑制丙二醛(malondialdehyde,MDA)和 H2 O2 的产生 ;草酸预处理能使辣椒叶片在 40℃热处理下保持较高水平的 As A、GSH含量和过氧化物酶活性 (peroxidase,POD) ;在常温下 ,草酸预处理能诱导 POD活性 ,但是对草酸氧化酶活性没有影响 .这些结果提示 ,草酸预处理能增强辣椒叶片的内在抗热性 ,但与草酸氧化酶活性无关     

太阳能光催化降解水面石油的研究

制备了一种负载有纳米TiO2微粒能漂浮在水面与原油接触的光活性催化剂.测定了用这种光催化剂在紫外光源照射下对水面原油的光催化降解速率.报道了直接在太阳光照射下对水面原油的光催化降解实验结果.实验表明,TiO2光催化不仅能有效的降解水面石油污染物,并能抑制原油在自然氧化过程中形成的有害共聚物.     

芜菁拮抗交通性污染物致小鼠遗传毒性效应的初步研究

以清洁级ICR小白鼠为实验动物,选择温州市鹿城区十里亭、火车站、南站交通岗亭为处理现场,采用小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)的微核试验、小鼠精子畸形试验以及分光光度法测定小鼠肝脏过氧化氢酶(CAT)活性等实验方法,研究温州市区交通污染物对小鼠的遗传毒性及芜菁块根汁对它的拮抗效应.结果表明:经交通污染物处理的小鼠,其PCE的微核率、精子畸形率以及肝脏过氧化氢酶活性均明显高于阴性对照组;灌芜菁块根汁均可使小鼠PCE微核率、精子畸形率以及CAT活性明显下降,微核抑制率分别为62.96%、80.18%、87.36%,精子畸形抑制率分别为21.88%、45.89%、40.65%,CAT活性抑制率分别为17.27%、31.36%、37.76%.结论是交通性污染物对小鼠具有明显的遗传毒性效应;芜菁块根汁对交通性污染物引起小鼠遗传毒性效应具有显著的拮抗效应.