舒洛地特对高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用研究

目的：观察舒洛地特对高糖培养基中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用,探讨舒洛地特对肾脏的保护作用。方法：培养大鼠肾小球系膜细胞24 h后,将培养的细胞分为对照组（C组,普通培养基,含5.6 mmol·L-1葡萄糖）,甘露醇组（M组,24.2 mmol·L-1甘露醇＋C组）,高糖组（H组,30 mmol·L-1高糖MEM培养基）、舒洛地特干预组（S组,H组＋1.0 LRU·ml-1舒洛地特）。培养24 h后,RT-PCR和Western blotting法检测各组CD36 mRNA及蛋白的表达。结果：对照组和甘露醇组CD36mRNA（0.24±0.07和0.21±0.06）及蛋白（0.26±0.08和0.22±0.07）的表达差异无统计学意义（P〉0.05）,高糖组CD36 mRNA（0.62±0.11和0.24±0.07）及蛋白（0.83±0.23和0.26±0.08）表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,舒洛地特干预组CD36 mRNA（0.36±0.13和0.62±0.11）及蛋白（0.42±0.15和0.83±0.23）表达显著低于高糖组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：舒洛地特可抑制高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原的表达,可能是舒洛地特发挥肾脏保护作用的机制之一。     

依普利酮对血管紧张素Ⅱ诱导心脏成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨依普利酮（eplerenone,EPL）对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）诱导心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）增殖的影响。方法：利用Ang Ⅱ刺激CFs建立心肌纤维化的细胞模型,并给予依普利酮、Nrf2抑制剂Brusatol干预,采用CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot法检测FN和CTGF、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果：1 μmol·L^-1 Ang Ⅱ刺激CFs 24 h,细胞增殖率、FN和CTGF蛋白表达显著升高,Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低（P<0.05）;给予依普利酮干预后,与Ang Ⅱ组比较,细胞增殖率、FN和CTGF蛋白表达显著降低,Nrf2和HO-1蛋白表达显著上调（P<0.05）;利用Brusatol抑制Nrf2活性,与Ang Ⅱ+EPL组比较,可逆转上述蛋白表达。结论：依普利酮能减轻Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化,其可能的机制与激活Nrf2/HO-1信号通路,降低FN和CTGF蛋白表达有关。     

舒洛地特对老龄糖尿病大鼠足细胞的保护作用

目的 探讨舒洛地特对老龄糖尿病大鼠足细胞的保护作用. 方法20个月龄SD大鼠制备链脲佐菌素（STZ）糖尿病模型后,随机分为糖尿病组和舒洛地特治疗组,另设对照组. 于4,8周末收集大鼠24 h尿,监测血压. 8周后处死大鼠,行组织病理学检查,检测24 h尿清蛋白、血肌酐、尿肌酐和肌酐清除率（Ccr）,应用免疫组化检测肾小球结蛋白表达. 结果 老龄糖尿病大鼠24 h的尿总蛋白、血压明显高于对照组（P<0.05）,且出现较为明显的病理学损害. 肾小球中结蛋白表达较对照组显著增加. 尿清蛋白程度与结蛋白表达成显著正相关（P<0.05）. 舒洛地特可明显减轻肾脏病理损害,降低结蛋白表达,减少尿清蛋白排泄. 结论 老龄糖尿病大鼠出现足细胞损伤,导致尿清蛋白排泄增加. 舒洛地特可以纠正这些改变,对足细胞损伤起保护作用.     

香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞黏附分子及基质金属蛋白酶表达的影响

目的：研究香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）黏附分子及基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响。方法：采用贴壁法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,以AngⅡ为诱导剂,建立VSMC细胞增殖的模型,分别应用10^-7 mol·L^-1AngⅡ以及AngⅡ+不同浓度香青兰总黄酮组（25,50,100 μg·mL^-1）作用24 h,并设空白对照组进行比较。采用免疫组化法检测细胞中细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管间黏附分子（VCAM-1）的表达水平。RT-PCR方法检测细胞MMP-2、MMP-9的mRNA表达水平。结果：与对照组比较,AngⅡ组能显著刺激大鼠VSMC细胞内ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、MMP-9的表达,香青兰总黄酮不同剂量组联合AngⅡ可在一定程度上抑制AngⅡ诱导的VSMC细胞内ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、MMP-9的表达,且呈现一定的剂量依赖关系趋势。结论：香青兰总黄酮具有抑制AngⅡ诱导VSMC黏附分子及基质金属蛋白酶表达的作用。     

活性维生素D3对肾小球上皮间质转化的影响研究

目的:观察活性维生素D₃（1,25-（OH）₂D₃）对糖尿病大鼠肾小球足细胞标志蛋白Nephrin,间质转化标志蛋白Snail及间质标志蛋白Desmin表达的影响,探讨1,25-（OH）₂D₃在上皮间质转化中的作用。方法:24只链脲菌素诱导的糖尿病大鼠随机分为糖尿病组（DM）和1,25-（OH）₂D₃治疗组（DD）,后者给与1,25-（OH）₂D₃按3 ng·100 g^-1·d^-1皮下注射。另以10只大鼠作为对照组（NC）。于6周检测血糖（BG）、24 h尿蛋白（24 h UP）、尿液足细胞（UPC）。处死大鼠,PT-PCR及Westernbolt分别测定肾小球Nephrin、Snail、Desmin mRNA和蛋白质的表达。结果:DM组BG、24 h UP较NC组显著升高,而UPC与NC组相比无显著差异。DM组肾小球Nephrin mRNA和蛋白质的表达水平较NC组显著降低,而Snail、Desmin mRNA和蛋白表达显著增加。DD组BG、UPC与DM组相比无显著差异,而24 h UP较DM组显著降低,肾小球Nephrin mRNA和蛋白质的表达较DM组升高,而Snail、Desmin mRNA和蛋白表达降低。结论:1,25（OH）₂D₃上调Nephrin的表达,并减少Snail、Desmin的表达,可抑制上皮间质转化,减轻肾损伤。     

来氟米特对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠足细胞Nephrin表达的影响

目的 观察来氟米特对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠足细胞相关蛋白nephrin表达的影响及机制.方法 体外培养大鼠足细胞,间接免疫荧光法鉴定nephrin、WT-1表达阳性的细胞为足细胞,建立AngⅡ足细胞损伤,RT-PCR法检测来氟米特治疗后nephrin mRNA表达变化.结果 Nephrin沿胞膜、细胞骨架、胞核分布,WT-1位于细胞核,ANGⅡ刺激足细胞后nephrin表达呈剂量及时间依赖性降低,来氟米特纠正这一下调作用,呈剂量依赖性.结论 AngⅡ下调大鼠足细胞nephrin表达导致足细胞损害,来氟米特阻断这一损害.     

归肾经方含药血清对阿霉素诱导的足细胞损伤及自噬相关蛋白的影响

目的：研究归肾经方对阿霉素（adriamycin,ADR）诱导的肾小球足细胞损伤标志蛋白nephrin及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p-mTOR等表达的影响。 方法：以ADR体外诱导的方法制作足细胞损伤的细胞模型。除空白组外均以ADR诱导足细胞,分为5组：空白组（control group,10%空白血清）、模型组（model group,10%空白血清+ADR 0.5 μg·mL^-1）、中药高剂量组（H-TCM group,10%高剂量归肾经方含药血清+ADR 0.5 μg·mL^-1）、中药低剂量组（L-TCM group,10%低剂量归肾经方含药血清+ADR 0.5 μg·mL^-1）、替米沙坦组（TMST group,10%替米沙坦含药血清+ADR 0.5 μg·mL^-1）。CCK-8检测各组细胞活性改变,Western blot法检测各组足细胞标志蛋白nephrin、desmin及自噬相关蛋白beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ等表达。 结果：①与空白组比较,模型组细胞活力显著降低（P<0.01）,与模型组比较,中药高剂量组及替米沙坦组细胞活性显著增高（P<0.05）;②Western blot检测结果显示,与control组比较,model组nephrin显著降低（P<0.01）,desmin、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p-Akt、p-mTOR显著增高（P<0.01）;与Model组比较,H-TCM组及TMST组nehprin表达显著增高（P<0.05）,desmin表达显著降低（P<0.05）,H-TCM、L-TCM及TMST组Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p-Akt、p-mTOR表达显著降低（P<0.01）;与H-TCM组比较,L-TCM组LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增高（P<0.05）。结论：归肾经方可以修复ADR诱导的足细胞损伤,改善细胞内的自噬水平,与上调细胞内nephrin、Beclin-1、p-Akt、p-mTOR的表达有关。     

帕立骨化醇抑制血管紧张素活性减轻足细胞损伤

目的：观察维生素D受体激动药帕立骨化醇对尿毒症大鼠肾脏的保护作用。方法：雄性SD大鼠切除右肾并结扎左肾动脉前支诱导尿毒症模型。将20只尿毒症鼠随机分为尿毒症组（UC组）、UC＋帕立骨化醇治疗组（UA组）。另设正常SD大鼠为对照组（NC组）。第10周检测大鼠血清Ca、P、1,25（OH）2D3、成纤维细胞生长因子23（FGF23）、甲状旁腺素（PTH）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血肌酐（Scr）、白蛋白（Alb）、24h尿蛋白（24hUP）。RT—PCR检测肾小球血管紧张素原（Ang）、血管紧张素转化酶（ACE）、nephrin、synaptopodin的表达。胞核WT-1阳性细胞计数测定每个肾小球足细胞数量。结果：UC组P、FGF23、PTH、AngⅡ、Scr、Alb、24hUP较NC组显著升高（P〈0．01）,Ca、1,25（OH）2D3、Alb降低（P〈0．05或0．01）。UC组Ang、ACE mRNA的表达较NC组显著增加（P〈0．01）;nephrin、synaptopodin mRNA的表达较NC组显著降低（P〈0．01）;肾小球足细胞数目减少。帕立骨化醇改善尿毒症鼠的矿物质代谢,下调AngⅡ水平,减少尿蛋白的排泄;抑制肾小球Ang、ACE mRNA的表达,恢复nephrin、synaptopodin的表达,并维持肾小球足细胞数量。结论：帕立骨化醇可抑制尿毒症鼠肾小球血管紧张素活性,减轻足细胞损伤和脱落。     

血管紧张素Ⅱ调控基质金属蛋白酶 9的表达在蛛网膜下腔出血发病中的机制研究

目的 探讨血管紧张素 Ⅱ(AngⅡ)调控基质金属蛋白酶 9(MMP?9)的表达在蛛网膜下腔出血( SAH)发病中的机制。方法人脑微血管内皮细胞( HBMEC)株分为 AngⅡ组、 AngⅡ+SB203580组和对照组。其中 AngⅡ组以 100 μg/L浓度 AngⅡ处理 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测; AngⅡ+SB203580组以 5 μΜ的 SB203580处理 20 min后以 100 μg/L浓度 AngⅡ处理 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;对照组加入 RPMI?1640培养液培养 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测。以酶联免疫吸附法( ELISA)检测各组细胞上清液 MMP?9水平,以实时荧光定量 PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶( p38 MAPK)的 mRNA和蛋白表达水平。结果并与对照组比较, AngⅡ组细胞上清液 MMP?9［处理 12 h:(4.21±1.36)μg/L比( 5.81±1.72)μg/L,P＜0.01］水平升高, AngⅡ+ SB203580组细胞上清液 MMP?9［处理 12 h:(4.21±1.36)μg/L比( 3.64±1.45)μg/L,P＜0.01］水平降低( P＜0.05)。与 AngⅡ组比较, AngⅡ+SB203580组细胞上清液 MMP?9水平降低( P＜0.001)。与对照组比较, AngⅡ组细胞 p38 MAPK的 mRNA［处理 12 h:(0.422±0.057)比( 0.538±0.071),P＜0.05)］和蛋白表达水平［( 0.452±0.105)比( 0.635±0.133)P＜0.001］升高, AngⅡ+ SB203580组细胞 p38 MAPK的 mRNA［处理 12 h:(0.422±0.057)比( 0.375±0.066),P＜0.05］和蛋白表达,水平［(0.452±0.105)比(0.276±0.081)P＜0.001］降低( P＜0.05)。与 AngⅡ组比较, AngⅡ+SB203580组细胞 p38 MAPK的 mRNA和蛋白表达水平降低( P＜0.001)。结论,AngⅡ可能通过激活 p38 MAPK信号通路上调 MMP?9表达从而促进 SAH发生发展。     

氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法将CFs随机分为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K组。A组未给予氟伐他汀和AngⅡ处理;B组用0.1μmol·L^-1 AngⅡ刺激细胞6 h; C、D、E组在0.1μmol·L^-1 AngⅡ刺激细胞6 h后,再分别用0.1,1.0和10.0μmol·L^-1氟伐他汀处理12 h; F组将miR-NC转染至0.1μmol·L^-1 AngⅡ处理6 h后的CFs细胞中;G组将miR-590-5p转染至0.1μmol·L^-1 AngⅡ处理6 h后的CFs细胞中;H、I、J、K组分别将anti-miR-NC、anti-miR-590-5p、pcDNA3.1和pcDNA3.1-STAT3转染至1.0μmol·L^-1氟伐他汀和0.1μmol·L^-1AngⅡ处理12 h后的CFs细胞中。用噻唑蓝法检测细胞增殖,用Transwell法检...     

香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖与迁移的影响

目的:研究香青兰总黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与迁移的作用。方法:采用贴壁法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,以Ang Ⅱ为诱导剂,建立VSMC细胞增殖的模型,分别应用质量浓度为10^-7 mol·L^-1 Ang Ⅱ以及Ang Ⅱ+不同浓度香青兰总黄酮组(25,50,100 mg·L^-1)作用24 h,并设空白对照组进行比较。采用MTT法检测细胞的增殖;transwell法检测细胞的迁移;免疫组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:与对照组比较,Ang Ⅱ组能显著刺激大鼠VSMC的增殖和迁移,香青兰总黄酮不同剂量组联合Ang Ⅱ可在一定程度上抑制Ang Ⅱ诱导的VSMC增殖,迁移以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定的剂量依赖关系趋势。结论:香青兰总黄酮具有抑制Ang Ⅱ诱导VSMC增殖与迁移的作用。     

替米沙坦对高血压大鼠Podocalyxin表达的影响及作用

目的:探讨替米沙坦对高血压大鼠肾组织podocalyxin（PCX）表达的影响及作用。方法:30只雄性SD大鼠随机分为高血压组（A组）、替米沙坦组（B组）、对照组（C组）。以改进的"两肾一夹"方法建立高血压大鼠模型。B组从造模后5周始给予替米沙坦5mg·kg^-1·d^-1混悬液灌胃,共用药6周。观察收缩压（SBP）,分别于实验前、用药前、用药后6周检测3组大鼠的尿β₂-微球蛋白（β₂-MG）、血尿素氮（BUN）及血肌酐（Scr）水平;免疫组化方法观察PCX在肾组织的表达,并分析PCX的积分吸光度（IA）值;观察肾脏病理及足细胞超微结构改变。结果:用药前A组及B组SBP较C组显著升高（P<0.01）;用药后B组SBP较A组显著降低（P<0.01）。A组β₂-MG显著高于C组（P<0.01）;用药后B组尿β₂-MG显著低于A组（P<0.01）,3组BUN、Scr在整个实验过程中无显著差异。A组、B组肾脏发生病理及足细胞超微结构改变。经替米沙坦治疗后,B组肾脏病理变化及足细胞超微结构改变均有缓解。并可上调PCX蛋白的表达。结论:替米沙坦可减少蛋白尿,缓解高血压肾损害和足细胞损伤。并可上调PCX蛋白的表达从而发挥保护足细胞的功能。     

TRPV1/SIRT1介导吴茱萸次碱抗AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞衰老

目的探讨吴茱萸次碱(rutaecarpine,Rut)对长寿蛋白SIRT1表达及AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)衰老的影响。方法采用AngⅡ(1μmol·L^-1)孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞72 h,预先加入不同浓度的Rut(0.3、1、3μmol·L^-1),采用TRPV1拮抗剂CAPZ(10μmol·L^-1)和AMPK抑制剂Compound C(1μmol·L^-1)探讨TRPV1/AMPK是否介导Rut的保护效应。SA-β-Gal测定衰老细胞数目,DCFH-DA法测定细胞ROS水平。划痕愈合结合Transwell检测VSMCs迁移。Western blot检测VSMCs中长寿蛋白SIRT1和衰老相关蛋白p53、p21的表达以及p-AMPK水平。结果Rut明显地抑制AngⅡ诱导的VSMCs衰老和ROS生成,并抑制VSMCs迁移。预先给予TRPV1拮抗剂可取消Rut这一保护作用。AngⅡ可降低SIRT1的表达,给予Rut可剂量依赖性地恢复SIRT1的表达,且下调其下游衰老相关蛋白p53和p21的表达。AngⅡ可抑制p-AMPK,加入Rut能恢复p-AMPK水平。CAPZ和Compound C可消除Rut升高SIRT1表达的效应。结论Rut可上调SIRT1表达,抑制AngⅡ诱导的VSMCs衰老和迁移,其机制可能激活TRPV1/AMPK信号途径。     

川芎嗪对肥大心肌细胞中钙调神经磷酸酶信号转导通路的干预作用

目的 探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine, TMP） 抑制血管紧张肽Ⅱ（AngⅡ）诱导心肌细胞肥大的作用机制. 方法 应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞,应用AngⅡ刺激培养的心肌细胞制作肥大心肌细胞模型,采用相差显微镜测量细胞大小及测定心肌细胞3H 亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标;fura-3/AM孵育心肌细胞,利用荧光显微镜及Felix软件分析测定细胞内钙离子浓度（［Ca²⁺］i）;Western blot 检测钙调神经磷酸酶（calcineurin, CaN） 蛋白表达. 结果 与正常对照组比较,AngⅡ组心肌细胞明显肥大（P＜0.01）,3H-亮氨酸掺入量明显增加（P＜0.01）,川芎嗪＋AngⅡ组心肌细胞肥大及3H-亮氨酸掺入量明显抑制（均P＜0.01）,与氯沙坦＋AngⅡ组差异无显著性. AngⅡ组较对照组细胞内Ca2+浓度及CaN 蛋白表达明显升高（P＜0.01或P＜0.05）,川芎嗪＋AngⅡ组较AngⅡ组Ca2+浓度及CaN 蛋白表达则受到明显抑制（P＜0.01或P＜0.05）,氯沙坦＋AngⅡ组与川芎嗪＋AngⅡ组差异无显著性. 结论 川芎嗪能明显抑制心肌细胞肥大,其机制与干预Ca2+/CaN信号转导通路有关.     

血管紧张素Ⅱ对足细胞Notch通路及Nephrin表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激小鼠足细胞对Notch通路、Nephrin表达的影响。方法 AngⅡ刺激小鼠足细胞并给予缬沙坦干预,采用免疫荧光化学、Western blot、Real-time PCR方法检测Notch1、Notch胞内域1(NICD1)、Hes1、Nephrin的表达情况。结果 AngⅡ呈时间依赖性增加足细胞Notch1、NICD1、Hes1表达,抑制Nephrin表达(P<0.01);缬沙坦可抑制AngⅡ对Notch通路的活化,增加Nephrin的表达(P<0.01)。结论 AngⅡ通过激活Notch通路降低足细胞Nephrin表达。     

TRV027在血管紧张素Ⅱ下调心肌细胞缝隙连接蛋白43表达中的作用

目的 探讨TRV027是否通过影响AngⅡ并激活β-arrestin蛋白,从而影响心肌细胞Cx43的表达。方法 通过培养大鼠心肌细胞（H9C2细胞）,将其分为四组：对照组（无药物干预）、AngⅡ组（1×10-5mol/L AngⅡ干预48h）、TRV027组（1×10-8mol/L TRV027干预24h）、AngⅡ+TRV027组（1×10-5mol/L AngⅡ干预24h后,1×10-8mol/L TRV027干预24h）。采用蛋白质印迹（WB）法检测Cx43和β-arrestin的蛋白表达水平,PCR法检测Cx43和β-arrestin的mRNA表达水平,免疫荧光法观察上述两种蛋白在细胞内的表达情况。应用ImageJ分析图像,SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果 WB结果显示,与对照组相比,AngⅡ组H9C2细胞Cx43和β-arrestin的蛋白表达量明显降低（P<0.01）;与AngⅡ组相比,AngⅡ+TRV027组和TRV027组H9C2细胞Cx43和β-arrestin的蛋白表达量明显升高（P<0.01）。PCR结果显示,与对照组相比,AngⅡ组H9C2...     

ACE-siRNA对人脐静脉内皮细胞MMP-9/TIMP-1及ET-1/NO表达的影响

目的：观察血管紧张素转化酶-小分子干扰RNA( ACE-siRNA)对原代培养人脐静脉内皮细胞( HU-VECs)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、一氧化氮(NO)、血管收缩因子内皮素-1(ET-1)表达的影响。方法培养原代HUVECs,脂质体转染ACE-siRNA入细胞,观察其对ACE mRNA和蛋白表达的影响。内皮细胞分为正常对照组,血管紧张素2刺激组( AngⅡ组)及AngⅡ刺激联合ACE-siRNA转染组( AngⅡ+siRNA组),采用半定量反转录聚合酶链反应( RT-PCR)法检测各组MMP-9及TIMP-1 mRNA表达变化,蛋白免疫印迹( West-ern blot)法检测各组MMP-9及TIMP蛋白表达;硝酸还原酶法检测NO浓度,酶联免疫吸附试验检测ET-1浓度。结果ACE-siRNA转染后48 h有效抑制ACE mRNA和蛋白表达(P<0．05)。与正常对照组比较,AngⅡ组MMP-9 mRNA、蛋白表达、MMP-9/TIMP-1比例和ET-1浓度增加,NO浓度降低(P<0．05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+siRNA组MMP-9 mRNA、蛋白表达、MMP-9/TIMP-1比例和ET-1浓度下降,NO表达增加(P<0．05)。结论特异性ACE-siRNA可有效沉默ACE表达,增加NO释放,减少ET-1表达,下调MMP-9/TIMP-1比例。     

氯沙坦对血管紧张肽Ⅱ诱导的心肌细胞肥大及 c-jun mRNA表达的作用

［摘要］目的观察氯沙坦对血管紧张肽Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的作用，并研究其对心肌细胞c jun mRNA表达的影响。方法应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞，胰酶消化，差数贴壁法体外分离培养大鼠心肌细胞。分为干预组和对照组。①对照组：不加任何干预因素；②10 6mol&#8226;L-1AngⅡ＋10 5mol&#8226;L-1氯沙坦组：用AngⅡ刺激心肌细胞肥大，氯沙坦进行干预；氯沙坦进行干预30 min后，加入AngⅡ刺激心肌细胞；③10 5mol&#8226;L-1氯沙坦组；④10 6mol&#8226;L-1 AngⅡ组。 采用相差显微镜测量细胞大小，测定心肌细胞3H 亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标；用逆转录聚合酶链式反应（RT PCR）检测心肌细胞c jun mRNA的表达。结果AngⅡ作用24 h后，AngⅡ组心肌细胞直径增大，与对照组比较差异有显著性（P＜0.05）；氯沙坦抑制AngⅡ介导的心肌细胞直径增大，与AngⅡ组相比差异有显著性（P＜0.05）。AngⅡ作用24 h后，心肌细胞合成速率AngⅡ组较对照组明显增加（P＜0.01），氯沙坦对心肌细胞蛋白质合成没有影响，但能抑制AngⅡ刺激的心肌蛋白质合成速率的增加（P＜0.01）。在培养液中加入AngⅡ作用30 min后，心肌细胞c jun mRNA表达明显增加（P＜0.01），预先加入氯沙坦作用30 min，可阻断AngⅡ的作用（P＜0.01）。结论氯沙坦可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，其机制可能与氯沙坦抑制了心肌细胞c jun mRNA的表达有关。     

钩藤提取物抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

目的探讨钩藤碱和异钩藤碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管成纤维细胞(VAF)增殖及胶原沉积的抑制效应及相关机制。方法建立AngⅡ诱导VAF增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、扫描电镜技术、流式细胞术、天狼猩红染色法和逆转录聚合酶链反应等观察钩藤碱和异钩藤碱对其增殖活性、细胞形态、细胞周期、细胞凋亡率、细胞c-myc蛋白表达、细胞培养液中羟脯氨酸含量、细胞间胶原蛋白含量、细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA的影响。结果AngⅡ刺激VAF增殖,钩藤碱和异钩藤碱抑制AngⅡ诱导VAF增殖;在钩藤碱和异钩藤碱作用下VAF处于G0/G1期的细胞数增多、S期的细胞数减少、细胞凋亡率增加、细胞c-myc蛋白表达降低、细胞培养液中羟脯氨酸含量降低、细胞间胶原表达降低、细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA转录也降低。结论钩藤碱和异钩藤碱对AngⅡ诱导VAF增殖和胶原沉积有抑制效应,部分机制与其阻滞VAF G0/G1期向S期转化、诱导细胞凋亡、下调细胞c-myc蛋白表达和细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA转录有关。     

血管紧张素Ⅱ对RIN-m细胞胰岛素基因表达的影响及其分子机制研究

摘 要 目的： 探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ, AngⅡ）对RIN-m细胞胰岛素基因表达的影响及其相关分子机制。方法: 常规培养大鼠胰岛素瘤RIN-m细胞,分为3组：空白对照组、100 nmol·L^-1 AngⅡ组和氯沙坦预处理组,干预24 h,采用RT-PCR法检测胰岛素基因表达,流式细胞仪检测2’,7’-二氯荧光素（DCF）的平均荧光强度,RT-PCR法检测胰十二指肠同源盒-1（ PDX-1）及肌腱膜纤维肉瘤肿瘤基因同系物A（MafA）mRNA表达,Western blot法检测PDX-1及MafA蛋白表达。结果: 100 nmol·L^-1 AngⅡ组与空白组和氯沙坦预处理组间的胰岛素mRNA表达、活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平、PDX-1、MafA mRNA及蛋白表达均有显著差异（P＜0.05）,后两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:AngⅡ可能通过氧化应激途径下调β细胞的PDX-1及MafA活性,进而抑制β细胞胰岛素基因表达。氯沙坦预处理可以拮抗AngⅡ对β细胞的氧化应激损伤,从而在胰岛素基因表达方面对β细胞起到保护作用。