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1.
目的 利用基因工程方法重组表达神经突触结合蛋白Ⅰ的C2A片段,探讨其在心肌细胞凋亡显像中的应用价值.方法 （1）将C2A基因连接到含有谷胱甘肽转移酶（GST）的重组原核表达载体pGEX-6P-1上,转化感受态细菌BL21,异内基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后纯化.（2）用异硫氰酸荧光素（FITC）标记纯化的蛋白,通过细胞结合实验鉴定蛋白质活性.（3）采用2-亚氨基噻吩方法,进行99TcmO-4标记C2A-GST融合蛋白,标记后的蛋白质用纸层析法测定其放化纯.（4）制备大鼠心肌缺血-再灌注模型,通过尾静脉注射99Tcm-C2A-GST,1 h后用SPECT仪进行显像 显像结束后,处死大鼠,取出心肌,用氯化三苯基四氮唑（TTC）染色,分离缺血心肌和存活心肌,测质量及其放射性计数,比较缺血心肌与正常心肌每克组织百分注射剂量率（%ID/g）值之间差别.采用SPSS12.0软件行统计分析,数据间比较采用t检验.结果 （1）成功表达的C2A-GST蛋白,相对分子质量约为3.8×104.（2）荧光显微镜下观察FITC-C2A-GST具有结合凋亡细胞的功能.（3）标记后的99Tcm-C2A-GST放化纯为（98.90±0.43）%.（4）大鼠显像示缺血损伤心肌显影清晰,体外测定缺血心肌摄取99Tcm-C2A-GST为（2.41±0.32）%ID/g,对照组99Tcm-C2A-GST-N-羟基琥珀酰亚胺（C2A-GST-NHS）的摄取为（0.82±0.24）%ID/g,两者之间差别具有统计学意义（t=10.6,P＜0.01）.结论 通过基因工程方法重组神经突触膜蛋白Ⅰ的C2A区域,重组后其具有监测缺血-再灌注大鼠模型中的心肌凋亡的作用. 相似文献
2.
目的应用99^Tc^mO4^-标记突触结合蛋白Ⅰ-C2A片段（99^Tc^m-SytⅠ-C2A）评价缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法（1）采用2-亚氨基噻吩盐酸盐（2-IT）方法标记SytⅠ-C2A片段,纸层析法测定99^Tc^m-SytⅠ-C2A放化纯,用喜树碱处理的Jurket细胞测定标记蛋白质活性。（2）制备心肌缺血再灌注大鼠模型（A组）和心肌缺血预处理大鼠模型（B组）各6只,分别由尾静脉注射99^Tc^m-SytⅠ-C2A7．4MBq,注射后1h处死动物,取出心脏,用生理盐水将心肌冲洗干净,并进行氯化三苯基四氮唑（TTC）染色,根据染色结果,分别取2组缺血损伤心肌和正常心肌,测量质量及放射性计数,比较2组缺血损伤心肌和正常心肌的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）。采用SPSS12．0软件行统计分析,数据间比较用t检验。结果（1）标记后的99^Tc^m-SytⅠ-C2A放化纯为（98．90±0．43）％,标记蛋白质与喜树碱处理组细胞结合测定的放射性计数是未处理组细胞的（10．99±0．55）倍。（2）A组缺血损伤心肌摄取99^Tc^m-SytⅠ-C2A（2．41±0．32）％ID／g,正常心肌为（0．16±0．02）％ID／g;而B组缺血损伤心肌和正常心肌的放射性摄取则分别为（0．46±0．05）和（0．20±0．05）％ID／g。B组缺血损伤心肌的99^Tc^m-SytⅠ-C2A摄取量明显低于A组（t=8．52,P〈0．01）。结论99^Tc^m-SytⅠ-C2A可用于定量评价缺血预处理抑制心肌细胞凋亡而产生的对缺血再灌注致心肌损伤的保护作用。 相似文献
3.
目的 应用99TcmO-4标记突触结合蛋白I-C2A片段(99Tcm-Syt I-C2A)评价缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 (1)采用2-亚氨基噻吩盐酸盐(2-IT)方法标记Syt I-C2A片段,纸层析法测定99Tcm-Syt I-C2A放化纯,用喜树碱处理的Jurket细胞测定标记蛋白质活性.(2)制备心肌缺血再灌注大鼠模型(A组)和心肌缺血预处理大鼠模型(B组)各6只,分别由尾静脉注射99Tcm-syt I-C2A 7.4 MBq,注射后1h处死动物,取出心脏,用生理盐水将心肌冲洗干净,并进行氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,根据染色结果,分别取2组缺血损伤心肌和正常心肌,测量质量及放射性计数,比较2组缺血损伤心肌和正常心肌的每克组织百分注射剂量率(%ID/g).采用SPSS 12.0软件行统计分析,数据间比较用t检验.结果 (1)标记后的99Tcm-Syt I-C2A放化纯为(98.90±o.43)%,标记蛋白质与喜树碱处理组细胞结合测定的放射性计数是未处理组细胞的(10.99±O.55)倍.(2)A组缺血损伤心肌摄取99Tcm-Syt I-C2A(2.41±0.32)%ID/g,正常心肌为(O.16±O.02)%ID/g;而B组缺血损伤心肌和正常心肌的放射性摄取则分别为(0.46±0.05)和(0.20±0.05)%ID/g.B组缺血损伤心肌的99Tcm-Syt I.C2A摄取量明显低于A组(t=8.52,P相似文献
