Cox-2/PGE-2及IL-6在Wnt/β连环蛋白-骨代谢信号通路中的作用机制

<正>Wnt/β连环蛋白信号通路在Wnt信号通路中最为经典,其对应力刺激敏感,能够将机械信号转化为生物化学信号,并对OPG/RANKL/RANK骨代谢信号进行调控。COX-2/PGE-2作为Wnt/β连环蛋白信号对骨代谢信号通路调控的中间途径,     

阿伦膦酸钠对去势大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的 探讨阿伦膦酸钠(Alendronate,Aln)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响,并阐明丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在该过程中的作用. 方法 BMSCs取自9个月龄去势SD大鼠,分别暴露于0.01,0.1,1,10 μmol/L Aln.成脂诱导2周后进行油红O染色和镜下计数分析,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(PPARγ2)表达;使用MAPK通路特异性抑制剂并诱导2周后再观察PPARγ2表达情况,Western blot观察Aln对MAPK通路表达的影响. 结果 BMSCs成脂诱导2周后,油红O染色阳性细胞数随着药物浓度的增高而显著减少(P<0.01).PPARγ2表达随着药物浓度的增高而显著降低.分别使用ERK1/2、JNK抑制剂PD98059和SP600125并诱导2周后,PPARγ2表达上调;使用p38抑制剂SB203580并诱导2周后,PPARγ2表达下调.Western blot结果显示,Aln在5,15,30 min时上调P-ERK1/2和P-JNK的表达,分别使用抑制剂后,表达下调. 结论 Aln通过激活ERK1/2和JNK信号通路,而不是p38,发挥抑制去势大鼠来源的BMSCs成脂分化作用,其效应具有浓度依赖性.     

回转模拟失重对心肌成纤维细胞生长因子及ERK信号传导的影响

目的研究回转模拟失重条件下,心肌成纤维细胞中某些生长因子表达与分泌的变化,以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路的活化状态.方法通过新生大鼠原代培养获取心肌成纤维细胞,利用水平回转器模拟失重效应,对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达进行蛋白质印迹(western blotting)分析,以放射免疫检测方法测定细胞培养上清液中血管紧张素II(Ang II)浓度的变化;利用western blotting对ERK1/2及磷酸化ERK1/2分别进行检测并分析其活化状态. 结果与对照组比较,回转后心肌成纤维细胞的bFGF表达增加,TGFβ1表达没有明显变化,Ang II分泌增加;ERK1/2表达总量增加,但其磷酸化水平下降.结论不同的生长因子对回转模拟失重有不同的响应;作为生长因子的重要下游信号通路,ERK1/2的活化受到抑制.     

血管生成素通过ERK信号通路促进HeLa细胞的增殖

目的通过细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路及NF-кB信号途径探讨血管生成素(angiogenin,Ang)对HeLa细胞的促增殖及抗凋亡作用机制。方法用不同浓度的重组人Ang刺激HeLa细胞,MTT法分析Ang对HeLa细胞的促增殖作用,蛋白质印迹实验检测ERK信号通路相关分子的表达情况。U0126抑制ERK信号通路,检测Ang诱导的ERK1/2的磷酸化及c-myc的表达情况,同时检测Ang对细胞增殖的影响。敲低Ang的表达,检测细胞的凋亡情况。双荧光素酶报告基因检测Ang对NF-κB报告基因的激活。蛋白水平检测Ang刺激的HeLa细胞后,NF-κB通路相关分子的表达。结果 Ang能促进HeLa细胞增殖,ERK1/2的磷酸化水平及c-myc的表达随重组人Ang浓度的升高而增加。U0126能抑制Ang诱导的ERK1/2的磷酸化、c-myc的上调及细胞的增殖。Ang的低表达促进HeLa细胞的凋亡,但不影响NF-κB报告基因的激活及NF-κB通路上相关分子的表达。结论 Ang能够促进HeLa细胞增殖,并通过活化ERK通路促进细胞的增殖,但其抑凋亡作用与NF-κB通路无关。     

红景天甙对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞ERK活性的影响

目的：探讨红景天甙对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellste cell,HSC)增殖、细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)磷酸化蛋白表达水平的影响。方法：采用MTT比色及Westemblot法分别检测细胞增殖及磷酸化ERK2蛋白。结果：乙醛刺激HSC增殖、处于活化状态的磷酸化ERK2蛋白表达水平增加；红景天甙0．25mg/ml，0．5mg/ml，1．0mg／ml，1．5mg/ml，2．0mg／ml，2．5mg/ml均能抑制乙醛刺激HSC增殖，1．5mg/ml红景天甙可明显抑制乙醛刺激的P-ERK2蛋白水平。结论：红景天甙明显抑制乙醛刺激的HSC内P-ERK2水平可能为其抑制HSC增殖的重要机理之一。     

甲状腺素通过ERK1/2通路促进整合素αvβ3阳性分化型甲状腺癌进展的研究

目的探讨甲状腺素(T4)能否通过整合素αvβ3影响分化型甲状腺癌(DTC)细胞增殖、转移潜能及其分子机制。方法体外培养甲状腺乳头状癌TPC-1、K1及甲状腺滤泡状癌(FTC)133细胞株, 采用免疫荧光和流式细胞术分析细胞表面整合素αvβ3的表达水平。给予T4、四碘甲状腺乙酸(Tetrac)、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽单独或联合处理DTC细胞后, 应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法及Transwell小室迁移和侵袭实验检测细胞增殖和转移潜能的变化。通过小干扰RNA(siRNA)转染模型验证整合素αv或β3亚基沉默能否逆转T4对DTC细胞的作用。利用Western blot法检测下游信号蛋白磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)1/2、总细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的表达水平。应用丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)1/2的抑制剂GSK1120212阻断ERK1/2磷酸化, 检测其对T4处理细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。多组间比较采用单因素方差分析, 组间两两比较采用Tukey法。结果 TPC-1、K1和FTC133细胞整合素αvβ3表达均呈阳性, 相对平均荧光强度...     

创伤后单核巨噬细胞集落刺激因子调控新生血管化的分子机制

目的 观察创伤愈合过程中单核巨噬细胞集落刺激因子(granuiocyte/macrophage colony - stimulating factor,GMCSF)经ERK通路活化核因子(nuclear factor,NF) - Κb诱导创伤后人皮肤成纤维细胞（human dermal fibroblasts,HDFs）生成血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),并探讨相关机制。方法 分离培养创伤部位HDFs,并用GMCSF处理。作用不同时间后,采用RT - PCR和ELISA分别检测HDFs VEGF Mrna和蛋白水平;应用GMCSF作用HDFs后,采用Western blot观察ERK磷酸化水平的改变;进一步应用ERK通路特异性抑制剂PD98059预处理HDFs。再用GMCSF刺激已预处理过的细胞,收集细胞和上清液,采用Western blot检测VEGF蛋白水平的变化;进一步通过抑制ERK信号通路,采用免疫荧光检测NF - Κb的活化。另外,应用核质抽提试剂盒分离胞质和胞核,采用Western blot检测NF - Κb的活化。结果 随着GMCSF浓度的增加,VEGF Mrna及蛋白水平也逐步增加,呈一定的剂量依赖性;GMCSF作用于HDFs 2 h后,VEGF Mrna水平开始升高,至4～6h达到峰值。GMCSF能够显著活化ERK磷酸化过程;与GMCSF组相比,ERK信号通路特异性抑制剂PD98059能显著抑制GMCSF诱导VEGF的表达(P＜0.05)。免疫荧光和Western blot结果显示,抑制ERK后NF - Κb的活化受到显著抑制。结论 GMCSF可通过ERK信号通路活化NF - Κb从而诱导HDFsVEGF的表达。     

负重爬梯运动调节去卵巢大鼠OPG/Ikkα/Runx2基因表达以及对股骨结构和生物力学的影响

目的:探讨负重爬梯运动对去卵巢大鼠OPG/Ikkα/Runx2基因表达调控以及对股骨微结构与生物力学特征变化的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为3组,假手术组(CON组,10只)、去卵巢手术组(OVX组,10只)和去卵巢手术运动组(OVX-CL组,10只)。OVX-CL组进行85°、梯阶间距2 cm、总高1 m、负重量为自身体重15%的爬梯训练。8周实验干预后称重,并检测血清中磷(P)、钙(Ca)、碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸性磷酸酶(StraCP)、破骨细胞分化因子(RANKL)、骨保护素(OPG)等含量;qRT-PCR检测RANKL、OPG、IkB激酶α(Ikkα)、核因子κB2(NFκB2)和Runt相关转录因子2(Runx2)表达量,并对股骨的微结构参数(Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp、BMD~(trab)、BMD~(cort)、BV/TV、和SMI)和生物力学特性(ML、Stiffness、EAC和MOE)进行检测。结果:OVX-CL组血清中钙(Ca)和RANKL含量均低于OVX组(P<0.05),ALP水平与OPG/RANKL比值均高于OVX组(P<0.05);OVX-CL组股骨组织RANKL、Ikkα及NFκB2的基因表达量与OVX组相比降低(P<0.05),OVX-CL组与OVX组相比,OPG和Runx2基因的表达量增加(P<0.01);MicroCT检测结果显示,OVX-CL组与OVX组相比,骨小梁数量与松质骨矿密度增加(P<0.05),骨小梁分离度、结构模型指数均降低(P<0.05);OVX-CL组最大载荷及刚度均增加(P<0.05)。结论:负重爬梯运动可通过对OPG/Ikkα/Runx2的基因调控改善成骨与破骨之间的平衡状态,对提高去卵巢大鼠骨微结构和力学特征有积极作用。     

TNF-α对体外培养人牙囊细胞表达RANKL、OPG的影响

目的研究不同浓度的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养人牙囊细胞中核因子-κB受体活化子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨牙齿萌出过程中TNF-α对破骨细胞形成的作用。方法原代培养人牙囊细胞,取生长状态良好的第5代人牙囊细胞分别与浓度为0(对照)、5、10、25、50、100ng/ml的TNF-α共同孵育6h,提取细胞RNA,RT-PCR检测RANKL、OPG的mRNA表达。以β-actin作内参物,比较各组PCR产物的光密度比值。结果与对照组(TNF-α 0ng/ml)比较,5ng/ml TNF-α可降低人牙囊细胞中OPG的表达(P<0.05),其他不同浓度TNF-α作用后OPG的表达与对照组比较无显著性差异。TNF-α浓度为25、50、100ng/ml时RANKL的表达增强,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论TNF-α可增强人牙囊细胞RANKL的表达,降低OPG的表达,提高RANKL/OPG的比值,提示TNF-α在牙齿萌出过程中对破骨细胞的形成有重要作用。     

脱氧佛波醇乙酸酯通过激活PKC/ERK通路诱导急性髓系白血病细胞分化

目的研究脱氧佛波醇乙酸酯（12-deoxyphorbol 13-acetate,Prostratin,DPA）对人急性髓系白血病（AML）细胞株HL-60、NB4和U937细胞分化的影响,并证明其通过激活蛋白激酶C/胞外信号调节激酶（PKC/ERK）通路诱导细胞分化。方法 1μmol/L DPA作用HL-60细胞3 d后观察细胞形态的改变;不同剂量的DPA作用HL-60、NB4、U937细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞分化表面标志变化;Western印迹检测ERK蛋白磷酸化的改变;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）抑制剂和PKC抑制剂对细胞分化表面标志的影响;Western印迹检测MEK抑制剂和PKC抑制剂对ERK蛋白磷酸化的影响。结果 DPA可诱导HL-60细胞出现白血病细胞分化的形态。DPA剂量依赖性地诱导AML细胞CD11b表达。DPA在诱导分化剂量范围内可剂量依赖性地引起ERK磷酸化。MEK化学小分子抑制剂U0126可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达;PKC非选择性抑制剂GFX可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达。结论 DPA其通过激活PKC/ERK通路能够明显诱导白血病细胞分化。     

模拟微重力效应对骨细胞Wnt/β-catenin通路的影响

目的探究模拟微重力效应对骨细胞Wnt/β-catenin信号通路活性的影响,以阐明微重力导致骨质丢失的发生机制。方法将骨细胞MLO-Y4分为两组:模拟微重力组和静置对照组。细胞旋转培养以模拟微重力效应,利用RT-PCR和Western blot法检测细胞Wnt/β-catenin信号通路相关组分的基因和蛋白表达水平。结果 RT-PCR结果显示,模拟微重力组的Cyclin D1和Lef-1 mRNA水平显著低于对照组(P0.05),CX43和抑制剂SOST的mRNA水平显著高于对照组(P0.05),而两组的Wnt3a、Lrp5和β-catenin的mRNA水平无显著性差异。Western blot结果显示,模拟微重力组的β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平显著低于对照组(P0.05),Lef-1和抑制剂SOST蛋白质的表达水平显著高于对照组(P0.05),而两组Wnt3a、Lrp5/6和CX43的蛋白表达水平无显著性差异。结论模拟微重力效应下骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活性有所下降。     

MEBT/MEBO在慢性难愈合创面治疗中的基础与临床研究进展

烧伤创疡再生医疗技术(MEBT/MEBO)立足中西医结合理论,秉承中医整体观念,为创面营造生理性湿润环境的同时,通过转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)等多种信号通路调控血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等多种细胞因子的表达,在糖尿病足、压...     

NICD表达下调对辐射损伤小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖和功能基因表达的影响

目的利用RNA干扰抑制小鼠成骨细胞系MC3T3-E1表达Notch信号通路胞内结构域（NICD）,探讨靶向抑制NICD表达对辐射损伤MC3T3-E1细胞的增殖和相关功能基因表达的影响。方法建立抑制NICD表达的MC3T3-E1细胞株,利用实时定量PCR（qRT-PCR）和Western blot法检测其NICD基因的表达。MC3T3-E1细胞和NICD RNA干扰MC3T3-E1细胞经2 Gy γ射线照射后,用BrdU掺入法和qRT-PCR法检测上述细胞的增殖及相关功能基因的表达水平。使用Student-Newman-Keuls进行组间差异分析,两组间比较采用t检验。结果用RNA干扰技术可靶向抑制MC3T3-E1细胞表达NICD。抑制NICD表达可干扰前体成骨细胞和成骨细胞的增殖。2 Gy照射后,前体成骨细胞和成骨细胞以及NICD RNA干扰的成骨细胞的增殖明显下降,各靶细胞的相关功能基因与照射前相比的变化如下:①2 Gy照射后的前体成骨细胞成骨特导性转录因子（Runx2）表达上调,差异有统计学意义（t=2.353,P < 0.05）,NICD RNA干扰的前体成骨细胞Runx2表达下调,差异有统计学意义（t=2.353,P < 0.05）;②2 Gy照射后的前体成骨细胞和成骨细胞以及NICD RNA干扰的前体成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）表达上调,差异有统计学意义（t=3.182、3.345、3.555,均P < 0.05）,NICD RNA干扰的成骨细胞ALP表达下调,差异有统计学意义（t=5.045,P < 0.01）;③2 Gy照射后前体成骨细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）表达下调,差异有统计学意义（t=2.541,P < 0.05）,成骨细胞和NICD干扰的前体成骨细胞RANKL表达上调,差异有统计学意义（t=3.299,P < 0.05;t=10.212,P < 0.01）,而抑制NICD表达则发生相反变化,差异无统计学意义（t=0.765,P>0.05）;④2 Gy照射后的前体成骨细胞和成骨细胞骨保护素（OPG）表达下调,差异有统计学意义（t=2.994、2.782,均P < 0.05）,抑制NICD表达使前体成骨细胞OPG表达上调,差异有统计学意义（t=5.841,P < 0.01）,成骨细胞OPG表达下调,差异有统计学意义（t=2.544,P < 0.05）;⑤2 Gy照射后各靶细胞巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）表达变化趋势与RANKL表达变化情况一致。结论在不同阶段的成骨细胞中抑制NICD表达对辐射损伤表现出的作用是不同的:①可降低前体成骨细胞和成骨细胞的增殖,对辐射损伤后的前体成骨细胞的增殖有保护作用;②可通过调节Runx2从而明显抑制辐照后前体成骨细胞分化,减少骨质丢失;③辐照后各成骨细胞不会通过RANKL/OPG/RANK系统表现出对破骨细胞功能的调节作用;④成骨细胞经过调节M-CSF表现出对破骨细胞的功能抑制作用。     

137 Cs γ射线对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的 探讨137Cs γ射线对成骨细胞形态、增殖、分化、矿化及细胞因子的影响及分子机制.方法 将成骨细胞分为对照组(0 Gy)及0.5、1.0、2.0和5.0 Gy组,分别接受137Cs γ射线照射,倒置相差显微镜观察各组细胞形态,MTT法测定细胞增殖,PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色法观察矿化功能,RT-PCR半定量检测ALP、骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)、护骨素(OPG)和NF-kB受体活化因子配体(RANKL)等基因mRNA表达量.结果 1.0 Gy以上照射组抑制成骨细胞增殖(t=6.197～18.677,P＜0.05);2.0 Gy以上照射组致细胞数量减少,折光性减低,细胞间突起连接减少,并可抑制细胞ALP活性和矿化能力(t=2.790 ～ 21.374,P＜0.05).ALP和OC基因mRNA表达量在0.5 Gy以上剂量照射即明显下调(t=3.563～16.508,P＜0.05),OPG、OPG/RANKL在5.0 Gy剂量时表达明显下调(t=12.942、4.954,P＜0.05),Ⅰ型胶原和RANKL基因mRNA的表达未见明显改变.结论 137CsΥ射线照射致成骨细胞形态改变,增殖、分化和矿化能力下降,ALP、OC、OPG等相关基因表达下调,OPG/RANKL通路可能是大剂量电离辐射时骨损伤的主要作用途径之一.     

脂多糖作用巨噬细胞表面TLR4/CD14/MD-2受体复合物表达的变化

目的探讨脂多糖作用小鼠RAW264.7巨噬细胞24 h内细胞表面TLR4/CD14/MD-2受体复合物表达的变化特点。方法分别用低剂量(100 ng/ml)和高剂量(1 000 ng/ml)脂多糖刺激RAW264.7,应用RT-PCR检测TLR4、CD14、MD-2m RNA水平的变化,ELISA检测细胞上清TNF-α含量的变化。结果低剂量脂多糖下调TLR4 m RNA表达,14 h降至最低,24 h维持在低水平表达;CD14和MD-2 m RNA表达增加。高剂量脂多糖上调TLR4 m RNA表达,1 h上升至高峰,此后维持在高水平表达;CD14和MD-2 m RNA表达也明显增强。高剂量脂多糖作用后TNF-α含量显著高于低剂量脂多糖(P<0.05)。结论高剂量脂多糖逆转低剂量脂多糖下调的TLR4表达,提高TLR4/CD14/MD-2受体复合物的表达水平,放大下游信号转导通路的炎症效应。     

地塞米松对急性肺损伤大鼠细胞信号转导系统ERK和PI3-K的影响

目的 研究地塞米松对急性肺损伤（ALD）大鼠细胞信号转导系统中细胞外信号调节激酶（ERK）和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-K）的影响,为临床治疗提供理论依据。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为损伤组、地塞米松组（DEX组）和对照组,每组12只,损伤组和DEX组均在尾静脉注入油酸0．25ml／kg建立ALI模型：①DEX组在注入油酸后15min注入地塞米松1．0mg／k;②损伤组注入油酸后15min注入等量生理盐水;③对照组2次均注入等量生理盐水,各组均在用药后2h颈总动脉放血处死。观察各组PaQ2、左肺湿／干比、肺通透性指标、肺病理,免疫组化法和免疫印迹法测定肺内PI3K、ERK和磷酸化ERK（P-ERK）表达。结果损伤组大鼠PaO2明显降低,左肺湿／干比、肺通透性指标升高,肺病理肺水肿及透明膜形成;DEX组上述指标较损伤组有所减轻。损伤组支气管、肺泡上皮细胞,肺血管内皮细胞,肺泡巨噬细胞上表达PI3-K、ERK和P-ERK明显增多,DEX组表达PI3-K、ERK和P-ERK有所下降,但两组均明显高于对照组。结论P13-K和ERK信号通路参与调节ALI的早期病程,地塞米松可能通过抑制PI3-K和ERK的高表达,从而对ALI有一定的改善作用。     

辐射对体外培养的小鼠成骨细胞核因子κB 受体活化因子配体/骨保护素mRNA表达的影响

目的 通过对成骨细胞的RANKL和OPG的基因表达分析揭示辐射对成骨细胞功能的影响.方法 在体外诱导骨髓基质细胞生成成骨细胞,碱性磷酸酶(ALP)染色对其特性进行确定,用RT-PCR方法分析了0～4 Gy照射的早期成骨细胞和成熟成骨细胞的RANKL和OPG的表达.结果 骨髓基质细胞在体外被诱导成的成骨细胞,在0～4 Gy剂量照射下,早期成骨细胞中RANKL的mRNA表达在1 Gy照射时,与0 Gy时相比表达最高,达到2.83倍,但各剂量组明显高于成熟成骨细胞的表达(t=8.34～103.57,P＜0.05).早期成骨细胞各剂量组的RANKL/OPG比值,在1 Gy照射最高达0.225±0.018,但明显高于晚期成骨细胞(t=2.84～20.99,P＜0.05).结论 辐射能够增强早期成骨细胞对破骨细胞功能的调节作用,加重骨组织的损伤.

Abstract：

Objective To study the influence of irradiation on the osteoblast function by the gene expression changes of RANKL and OPG.Methods Bone marrow stromal cells were induced to develop into early and mature osteoblasts in vitro.The characterization of osteoblasts was indentified by ALP staining.The RANKL and OPG mRNA levels in early and mature osteoblasts, which exposed to 0 -4 Gy radiation were determined by RT-PCR.Results Bone marrow stromal cells had been induced to early and mature osteoblasts by osteoblast differentiation medium in vitro.In early stage of osteoblast, RANKL mRNA expression levels treated with 1Gy irradiation was 2.83-fold higher than those other irradiation dosage groups.The RANKL mRNA expression levels of each group in early stage of osteoblasts were significantly higher than those in the mature counterpart ( t = 8.34 - 103.57, P ＜ 0.05 ).The ratio of RANKL/OPG mRNA was obviously greater in early osteoblast compared with the mature cells ( t = 2.84 - 20.99, P ＜0.05 ), and it was the highest in 1Gy irradiation treated early osteoblast.Conclusions Radiation exposure of the early osteoblasts promotes osteoclasts function and results in the bone loss.     

咬合创伤大鼠牙槽骨中RANKL和OPG mRNA的表达

目的　研究NF κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护蛋白(OPG)) mRNA在咬合创伤大鼠牙槽骨组织中的相对表达水平,探讨RANKL和OPG在咬合创伤牙槽骨改建中的意义。方法　将30只大鼠随机分为对照组和实验组组。实验组大鼠左侧上颌第1磨牙咬合面上粘结厚度为1mm的方丝,用Super bond复合树脂堆积法粘结,形成同侧下颌第1磨牙的咬合创伤模型;对照组未作粘结处理。在1、3、7、14、28天处死大鼠后,提取其左下颌第1磨牙区牙槽骨组织总RNA。用RT PCR检测RANKL和OPGmRNA表达水平。结果　持续性咬合创伤导致牙槽骨内RANKL mRNA表达增强,与对照组在第1、7天比较,差异有统计学意义(P<0 05);OPG mRNA表达减弱,与对照组在第14、28天比较差异有统计学意义(P<0 05)。实验组RANKL/OPG mRNA值偏高,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0 05)。结论　咬合创伤后RANKL mRNA表达增强、OPG mRNA表达减弱,可能与牙周组织适应性改建有关。     

弥漫性脑损伤细胞外信号调节激酶1/2信号通路的激活及意义

目的探讨弥漫性脑损伤（DBI）时细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路激活特点及特异性阻滞剂U0126对损伤神经元的作用。方法制作大鼠DBI模型，Western blot法检测损伤脑组织磷酸化ERK1／2的表达，免疫组化法检测磷酸化ERK1／2、神经元特异性磷酸烯醇化酶（NSE）表达，透射电镜下观察U0126对损伤神经元的作用。结果DBI后磷酸化ERK1／2表达显著增高，持续高水平表达至72h。U0126剂量依赖性抑制磷酸化ERK1／2表达。U0126组12～24h时相点NSE较DBI组明显增高。透射电镜显示U0126组神经元损伤较轻。结论大鼠DBI后ERK1／2通路被过度和持久激活，阻滞其过度激活可减轻继发性神经元损伤。     

PI3K/Akt信号通路在磷酸三钙磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解中的作用

目的:研究PI3K/Akt信号通路在磷酸三钙(tricalcium phosphate,TCP)磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解中的作用。方法:36只雄性ICR小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(TCP)和LY294002处理组,每组12只。取TCP磨损颗粒30 mg置于颅顶后缝合皮肤构建小鼠颅骨溶解模型。LY294002处理组小鼠于术后第2天颅顶局部注射PI3K抑制剂LY294002(5 mg·kg~(-1)),每周3次;假手术组小鼠颅骨顶仅注射生理盐水,注射时间与LY294002一致。2周后处死动物取骨膜和颅骨。通过Micro-CT分析小鼠颅骨溶解情况、骨密度(bone mineral density,BMD)和骨矿含量(bone mineral content,BMC);HE染色观察颅骨表面炎症反应及破骨细胞(osteoclasts)形成;Real-time PCR检测骨组织中破骨细胞生成标志物抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,Cst K)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB kigand,RANKL)和c-Fos的m RNA水平;ELISA检测骨膜中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6等水平;Western Blotting检测颅骨组织Akt、p-Akt Ser473和p-AktThr308等蛋白表达变化。结果:Micro-CT和组织形态学分析结果显示,PI3K抑制剂LY294002能明显抑制TCP磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解和破骨细胞形成(P<0.05),增加BMD和BMC含量(P<0.05);下调破骨细胞生成标志物TRAP、Cst K、RANKL和c-Fos等m RNA水平(P<0.05),并抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的释放(P<0.05);而且LY294002显著减弱TCP磨损颗粒诱导的Akt信号蛋白活化,导致p-Akt S-er473和p-AktThr308等蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:PI3K/Akt信号通路参与调控TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解,可作为假体周围骨溶解和关节松动的治疗靶标。