脂联素/AMPK在有氧运动预防ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用研究

目的:观察有氧运动对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)的预防效果,探讨脂联素/AMPK的作用机制。方法:采用8周龄雄性C57BL/6J和ApoE~(-/-)小鼠进行运动预防AS实验,分为14周对照组(C,10只)、14周模型组(H,10只)、14周运动组(HE,10只)。运动干预结束后取材比较各组小鼠主动脉管壁的病理变化,检测各组小鼠血脂、血糖和血清脂联素,脂肪组织脂联素m RNA表达,以及腓肠肌Adipo R1、AMPK蛋白表达水平。结果:(1)C组小鼠体重和脂体比显著低于H组(P0.01),脂体比HE组小鼠显著低于H组小鼠(P0.01);(2)C组小鼠主动脉结构正常,HE组小鼠主动脉管壁纤维弹力板和内膜较H组小鼠完好;(3)C组小鼠血清TC、TG、FFA及FBG水平均显著低于H组小鼠(P0.01),HE组小鼠FFA、FBG水平均显著低于H组小鼠(P0.01);(4)C组小鼠脂肪组织脂联素m RNA表达及血清水平显著高于H组小鼠(P0.01),H组小鼠脂肪组织脂联素m RNA表达及血清水平显著低于HE组小鼠(P0.05);(5)C组小鼠腓肠肌Adipo R1、AMPK蛋白表达均显著高于H组小鼠(P0.01),HE组小鼠腓肠肌Adipo R1和AMPK蛋白表达均显著高于H组(P0.05)。结论:有氧运动具有降低ApoE~(-/-)高脂饮食小鼠AS发生程度的作用,可能与脂肪组织分泌脂联素增多,通过骨骼肌Adipo R1受体/AMPK调节糖脂代谢有关。     

有氧运动对载脂蛋白E基因缺陷小鼠主动脉C反应蛋白表达水平的影响

摘要 目的：本实验以载脂蛋白基因缺陷（ApoE-/-）小鼠为研究对象,观察其在动脉粥样硬化（AS）发病过程中有氧运动对脂联素和C反应蛋白（CRP）的影响,以期探讨有氧运动通过脂联素-CRP发挥抗AS作用的机制。 方法：8周龄雄性ApoE-/-小鼠20只,随机分为安静组（C）10只和运动组（E）10只。两组小鼠均饲以高脂饲料,C组不训练,E组小鼠进行14周跑台运动。14周末取材比较两组小鼠主动脉管壁及斑块的病理变化,检测比较其脂肪组织脂联素mRNA表达、血清脂联素水平及主动脉CRP表达、血清CRP水平。 结果：E组小鼠与C组小鼠相比,主动脉血管壁纤维弹力板和内膜较完整,AS斑块面积相对较小。E组小鼠脂肪组织脂联素mRNA表达及血清水平较C组显著增加,主动脉CRP的表达及血清水平较C组小鼠则有显著降低,且主动脉CRP的表达与脂联素mRNA表达及血清水平呈显著负相关。 结论：有氧运动可以通过提高血清脂联素、脂联素mRNA表达水平的途径,有效降低血清CRP和主动脉CRP的表达,从而发挥延缓AS发展的作用,这可能是运动通过脂联素-CRP发挥抗AS作用的另一机制。     

胰岛素抵抗小鼠脂肪组织肿瘤坏死因子α和脂联素mRNA表达与有氧运动的影响

背景:有研究表明有氧运动可通过调节脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ及其相关脂肪因子进而影响胰岛素敏感性,但其影响结果及作用机制至今少有报道。目的:观察有氧运动后,胰岛素抵抗C57BL/6小鼠脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ、肿瘤坏死因子α和脂联素mRNA及蛋白表达水平的变化,分析有氧运动对胰岛素抵抗小鼠影响的作用机制。方法:C57BL/6小鼠经高脂饮食喂养10周后建立胰岛素抵抗动物模型,建模后将小鼠随机分为安静组与运动组。运动组进行为期6周,75%VO2max强度跑台运动;安静组同等条件下饲养不运动。使用RT-PCR和Western blot法检测两组脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ,脂联素、肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白表达。结果与结论:6周有氧跑台运动对小鼠脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ表达差异无显著性意义(P>0.05),但可显著增加小鼠脂肪组织脂联素的表达(P<0.01),降低肿瘤坏死因子α的表达(P<0.05);并且可显著降低血液中三酰甘油、游离脂肪酸水平(P<0.05,P<0.01)。结果提示有氧运动可能通过调节过氧化物酶体激活物增殖受体γ相关脂肪因子-脂联素和肿瘤坏死因子α的表达来间接调节脂肪组织对胰岛素的敏感性。有氧运动可以显著增加机体组织对胰岛素的敏感性,从而改善C57BL/6小鼠胰岛素抵抗的症状。     

西格列汀联合依折麦布抗apoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的:观察西格列汀联合依折麦布对高脂饮食诱导的apoE~(–/–)小鼠动脉粥样硬化形成的影响,并初步探讨其作用机制。方法:50只6周雄性apoE~(–/–)小鼠随机分为5组:对照组、高脂喂养组、西格列汀组、依折麦布组和联合治疗组。采用生化检测仪检测小鼠血糖和血脂水平;油红O染色法观察小鼠主动脉斑块沉积情况;免疫酶联反应测定炎症因子血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(monocy te chemoattractant protein-1,MCP-1)和TNF-α含量水平;Western印迹检测主动脉NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与单用西格列汀或依折麦布相比,两种药物联用可更显著抑制高脂喂养所诱导的小鼠总胆固醇(total cholesterol,TC)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)水平的升高(P0.05),增加高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的含量(P0.05)。同时,西格列汀联用依折麦布进一步减少小鼠主动脉斑块的沉积,降低VCAM-1,MCP-1,TNF-α含量和NF-κB p65蛋白表达水平的增加(P0.05)。结论:西格列汀联合依折麦布能进一步调节血脂代谢,抑制炎症因子表达和NF-κB信号激活,减少血管脂质沉积,从而更好地起到延缓动脉粥样硬化的作用。     

胰岛素抵抗小鼠脂肪组织肿瘤坏死因子α和脂联素mRNA表达与有氧运动的影响

背景：有研究表明有氧运动可通过调节脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ及其相关脂肪因子进而影响胰岛素敏感性,但其影响结果及作用机制至今少有报道。目的：观察有氧运动后,胰岛素抵抗C57BL/6小鼠脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ、肿瘤坏死因子α和脂联素mRNA及蛋白表达水平的变化,分析有氧运动对胰岛素抵抗小鼠影响的作用机制。方法：C57BL/6小鼠经高脂饮食喂养10周后建立胰岛素抵抗动物模型,建模后将小鼠随机分为安静组与运动组。运动组进行为期6周,75%VO2max强度跑台运动;安静组同等条件下饲养不运动。使用RT-PCR和Western blot法检测两组脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ,脂联素、肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白表达。结果与结论：6周有氧跑台运动对小鼠脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ表达差异无显著性意义（P〉0.05）,但可显著增加小鼠脂肪组织脂联素的表达（P〈0.01）,降低肿瘤坏死因子α的表达（P〈0.05）;并且可显著降低血液中三酰甘油、游离脂肪酸水平（P〈0.05,P〈0.01）。结果提示有氧运动可能通过调节过氧化物酶体激活物增殖受体γ相关脂肪因子-脂联素和肿瘤坏死因子α的表达来间接调节脂肪组织对胰岛素的敏感性。有氧运动可以显著增加机体组织对胰岛素的敏感性,从而改善C57BL/6小鼠胰岛素抵抗的症状。     

六氟化硫微泡介导人脂联素基因兔主动脉内转染及表达

背景:超声微泡载基因传输技术是一种新兴起的定向传输基因技术。目的:构建含人脂联素基因脂联素的真核表达载体,采用六氟化硫微泡介导脂联素基因进行兔主动脉转染及表达,为脂联素用于体内干预动脉粥样硬化的研究奠定基础。方法:人心外膜脂肪组织提取总RNA构建pcDNA3.1-脂联素重组体,通过瞬时转染人脐静脉内皮细胞验证载体构建是否成功。21只大白兔随机分成对照组(n=6)和脂联素转基因组(n=15),脂联素转基因组经兔耳缘静脉注射pcDNA3.1-脂联素与六氟化硫微泡的混合物,诊断超声仪照射兔胸腹主动脉区域,于照射后2,7,14d取兔主动脉血管及血清,检测主动脉血管壁中脂联素基因的表达及血清中脂联素蛋白水平。结果与结论:pcDNA3.1-脂联素瞬时转染入人脐静脉内皮细胞可有效表达。六氟化硫微泡传输脂联素基因2d后即可检测到兔主动脉血管壁脂联素基因高表达,持续至14d,且兔血清脂联素蛋白水平显著增加(P<0.01)。说明pcDNA3.1-脂联素重组体构建成功,六氟化硫微泡可在快速血流状态下,安全、高效传输脂联素基因入兔主动脉血管壁并有效表达与分泌至血浆。     

氨茶碱对肥胖哮喘大鼠脂联素表达及气道炎症的干预作用

目的:观察肥胖哮喘大鼠体内脂联素表达水平的变化及氨茶碱对脂联素表达及气道炎症的影响.方法:将大鼠随机分为正常体重对照组(A组)、哮喘组(B组)、茶碱干预组(C组)和肥胖对照组(D组)、哮喘组(E组)、茶碱干预组(F组),建立肥胖、哮喘模型.计数支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数,图像分析软件测定气道壁厚度,ELISA测定血清、BALF脂联素浓度,RT-PCR测定脂肪组织脂联素mRNA的表达.结果:(1)BALF细胞总数和支气管壁厚度,E组较B组均有所升高,C、F组分别较B、E组明显降低.(2)脂肪组织脂联素mRNA表达及血清、BALF脂联素浓度,E组较B组明显降低,C、F组分别较B、E组明显升高.结论:脂联素表达显著降低是肥胖哮喘大鼠气道炎症更为明显的重要原因.氨茶碱能抑制气道炎症并部分恢复哮喘大鼠脂联素表达.     

脂联素对重症急性胰腺炎的保护作用及其机制

目的:探讨脂联素在重症急性胰腺炎发生发展中的重要作用及其相关机制。方法:60只C57小鼠随机分为脂联素预处理组、脂联素治疗组和对照组,每组20只。以雨蛙肽连续腹腔注射建立重症急性胰腺炎模型,采用病理评分及检测血清淀粉酶、脂肪酶评估胰腺炎症程度,检测血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平以评估全身炎症状态,确定脂联素对重症急性胰腺炎的重要作用。对胰腺腺泡细胞AR42J使用脂联素预处理后建立胰腺炎模型,检测通路蛋白NF-κB和促炎因子TNF-α的表达水平,研究脂联素的可能作用通路。结果:建模后,脂联素预处理组和脂联素治疗组小鼠的病理评分显著低于对照组,且血清淀粉酶、脂肪酶及血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平也均显著低于对照组(P0.05)。脂联素预处理后AR42J细胞表达NF-κB及TNF-α水平显著降低(P0.05)。结论:脂联素可抑制重症急性胰腺炎炎症发展,其可通过下调NF-κB通路及抑制促炎因子TNF-α发挥抗炎作用。     

运动对动脉粥样硬化小鼠细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附-1表达的影响

目的观察在动脉粥样硬化（AS）形成过程中,运动对实验小鼠主动脉细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及血管细胞黏附分子-l（VCAM-1）表达的影响。 方法选取8周龄ApoE基因敲除小鼠饲以“西方饮食”饲料建立AS模型,将其分为ApoE-/-安静组及ApoE-/-运动组,ApoE-/-运动组给予持续12周中等强度跑台运动;另同时选取C57BL/6J小鼠作为空白对照组（C57安静组）,给予普通生长繁殖饲料喂养。于实验进行12周时采用免疫组化法检测各组小鼠主动脉ICAM-1及VCAM-1表达情况。 结果C57安静组主动脉无ICAM-1、VCAM-1阳性表达,ApoE-/-安静组小鼠主动脉可见大量ICAM-1、VCAM-1阳性表达,在AS早期阶段,以内皮层阳性表达较明显;在纤维斑块及粥样斑块阶段,阳性染色则主要分布于斑块深部脂质核心区,内皮层呈低水平表达,ICAM-1、VCAM-1阳性表达面积相近;运动可促使ApoE-/-小鼠ICAM-1、VCAM-1阳性表达面积明显减少（P＜0.05）。 结论运动能下调AS小鼠主动脉ICAM-1、VCAM-1表达,这可能是运动抗AS的重要机制之一。     

甘氨酸对非酒精性脂肪性肝病大鼠CMKLR1及脂联素表达的影响及意义

目的探讨甘氨酸对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏趋化因子样受体1(CMKLR1)及脂联素表达的影响及作用机制。方法选取36只10~12周龄雄性SD大鼠,适应性喂养1周后,随机分为三组:对照组、高脂组和甘氨酸组。分别在第8、12周末处死大鼠。测量大鼠的体重及肝重,计算其肝指数;采集大鼠的腹主动脉血液检测血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及脂联素水平;取肝组织行HE染色、免疫组化和RT-PCR检测肝脏脂联素及CMKLR1蛋白和基因水平的表达。结果 (1)随着饲养时间的延长,各组大鼠体重及肝指数增加,高脂组大鼠体重和肝指数明显高于同期对照组和甘氨酸组(P<0.05)。(2)高脂组大鼠ALT、AST、TG及TNF-α高于同期对照组,甘氨酸组低于同期高脂组(P<0.05)。(3)肝脏免疫组化检测结果显示:在8周、12周,高脂组大鼠的血清脂联素水平低于同期对照组(P<0.05),甘氨酸组高于高脂组(P<0.05);肝组织CMKLR1在同期高脂组高于对照组,甘氨酸组低于高脂组(P<0.05)。(4)PCR结果显示:肝组织中脂联素基因表达在甘氨酸组高于高脂组(P<0.05),CMKLR1的基因表达在甘氨酸组低于高脂组(P<0.05)。(5)血清脂联素与肝组织CMKLR1 m RNA呈负相关(r=-0.527,P=0.001);肝脏脂联素m RNA与肝脏CMKLR1 m RNA呈负相关(r=-0.529,P=0.001)。结论 (1)在NAFLD发生发展中肝组织中CMKLR1水平逐渐升高,可能起到加重炎症程度的作用。(2)甘氨酸可下调肝组织中CMKLR1的表达,上调血清脂联素的表达从而保护肝脏。