采用蛋白指纹图谱技术筛选大肠癌特异性相关蛋白

目的探讨大肠癌血清蛋白质指纹图谱的变化,企以建立诊断模型寻找早期诊断大肠癌的方法。方法利用CM10蛋白芯片和表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELD1-TOF-MS)技术对48例大肠癌患者和34例健康人的蛋白质谱进行分析;运用Ciphergen Protein Chipsoftware5.1软件分析处理数据和筛选标志物,建立蛋白指纹图谱诊断模型。随机另选33例大肠癌患者和34例健康人血清盲法验证大肠癌早期诊断模型。结果(1)48例大肠癌患者与34例健康人血清蛋白质在质荷比(M/N)为2770.34~16061.26间有27个蛋白质含量差异有统计学意义(P0.05),其中18个M/Z峰在大肠癌中高表达,9个M/Z峰在健康人中高表达。(2)经分析获得由M/Z为2770.34,7971.57,11493.00 3个质谱峰建立的诊断模型,在48例大肠癌患者中有38例被正确分组,34例健康人中32例被正确分组,灵敏度和特异性分别为79.17%(38/48)和94.12%(32/34)。(3)验证研究中经盲法测定灵敏度和特异性分别为72.73%(24/33)和91.18%(31/34)。结论SELD1-TOF-MS技术具有快速、准确、灵敏度和特异性高的优点,通过蛋白芯片仪发现的特异性相关蛋白,有望成为大肠癌早期诊断中有应用价值的临床检测指标。     

应用2D-DIGE及MALDI-TOF-MS筛选胰腺癌血清标志物

目的 利用比较蛋白质组学的方法对胰腺癌患者血清和对照组血清例进行分析,寻找胰腺癌潜在的特异性候选标志物.方法 采用双向差异凝胶电泳分离40例胰腺癌患者、10例慢性胰腺炎患者、10例良性肿瘤患者和40例健康体检者外周血清蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对差异显著的蛋白进行鉴定.结果 成功鉴定出2个胰腺癌差异表达蛋白:转甲状腺素蛋白和载脂蛋白E.该组蛋白在胰腺癌组中呈高表达,在正常对照组、慢性胰腺炎组和良性肿瘤组中呈低表达.结论 双向差异凝胶电泳联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术筛选胰腺癌患者外周血清中的特异性生物标志物的方法具有较好的重复性和稳定性.检测鉴定的差异蛋白质载脂蛋白E、转甲状腺素蛋白可能是胰腺癌早期诊断潜在的血清特异性生物标志物.     

结直肠癌肿瘤标记物的筛选及其表达变化

目的筛选结直肠癌肿瘤标记物,探讨其在术前、术后患者血清中的表达变化。方法用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测87例结直肠癌、68例结直肠良性病、56例正常人血清中的差异蛋白,进而检测87例结直肠癌术前及术后15d内血清中的差异蛋白,从而筛选出结直肠癌肿瘤标记物。结果筛选出质荷比为5955Da、5972Da的2种蛋白,与结直肠良性病组和正常人组比较,其在结直肠癌患者血清中高表达（P〈0．01）;与结直肠癌术前组比较,术后1d其表达水平明显增高（P〈0．01）,术后4d已经降至术前水平（P〉0．05）;与术后1d组比较,术后4d至15d其表达水平基本处于下降趋势（P〈0．01）,但术后15d仍未降至正常水平（P〈0．01）。结论质荷比为5955Da、5972Da的2种蛋白可作为结直肠癌肿瘤标记物,其在术前、术后15d内血清中的表达有一定的变化规律。     

血清蛋白指纹图谱筛选胃癌血清标志物的初步探讨

目的 利用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱仪及其配套蛋白质芯片筛选胃癌生物学标志物,初步探讨建立的诊断模型在胃癌诊断中的临床意义.方法 用美国Ciphergen公司研制的蛋白指纹图谱仪和蛋白质芯片检测40例胃癌患者、20例胃溃疡患者和20例正常人血清蛋白质的相对含量,用SPSS 11.5软件分析处理数据,筛选标志物,建立诊断模型.结果 在正常人中未发现差异蛋白质峰表达; 胃溃疡患者中仅1例有差异蛋白质峰表达,质荷比分别为5 910和4 095; 在胃癌中共发现5个差异有统计学意义的蛋白质峰表达,质荷比分别为: 3 300、5 329、4 095、5 910 和8 691.筛选质荷比为4 095、5 910和8 691建立诊断模型,诊断灵敏度和特异度分别为92.5%和97.5%.结论 蛋白指纹图谱技术在胃癌的早期诊断及筛选生物学标志物方面有很大的价值,值得进一步研究及推广应用.     

食管癌血清差异表达蛋白的研究

目的 探讨食管癌患者和健康人群蛋白表达的差异,筛选用于早期诊断的肿瘤标志物并建立诊断模型.方法 回顾性分析2008年1月至8月新疆医科大学第一附属医院收治的127例原发性食管癌患者(食管癌组)和63例健康体检者(健康对照组)的临床资料.采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,应用弱阳离子交换蛋白芯片检测和分析两组受试者的血清蛋白表达谱,筛选可以用于临床食管癌早期诊断新的肿瘤标志物,建立蛋白质指纹图诊断模型.采用秩和检验分析数据.结果 食管癌组与健康对照组血清蛋白质荷比(M/Z)峰值图谱明显不同.得到差异性较大的10个蛋白中,有6个在食管癌组呈高表达,M/Z为4488、5495、15964、3948、8154、8166;4个呈低表达,M/Z为8789、6682、8714、6650.建立由6个蛋白组成的蛋白质指纹图诊断模型,食管癌组患者中124例判定正确,3例误判;健康对照组患者中60例判定正确,3例误判,其准确度为96.8%(184/190),敏感度为97.6%(124/127),特异度为95.2%(60/63).结论 应用SELDI-TOF-MS技术筛选食管癌肿瘤标志物建立的蛋白质指纹图诊断模型灵敏度高、特异性强.     

SELDI-TOF-MS在筛选结直肠癌相关生物标记物中的应用

表面增强激光解吸/电离-飞行时间-质谱(surface-enhanced laser desorption/ionizationtime of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)是一项新的蛋白质组学技术,近年来运用该技术发现了一些能用于结直肠癌早期诊断、术前分期或预测放化疗疗效的新的牛物标记物,其敏感性和特异性均高于传统的生物标记物.SELDI-TOF-MS可能会对结直肠癌的早期诊断和个体化治疗带来帮助.     

SELDI-TOF-MS在肿瘤性胆囊息肉样病变诊断中的作用

目的 寻找肿瘤性胆囊息肉样病变(PLG)患者血清中的特异性蛋白,并建立诊断模型.方法 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和WCX型磁珠检测23例肿瘤性PLG、21例非肿瘤性PLG和26例正常人的血清蛋白质指纹图谱,并联合应用Biomarker wizard及Biomarker Patterns Software软件分析处理数据.结果 初步筛选出对诊断肿瘤性PLG有代表性的22个特异性蛋白,分析系统在设定条件下筛选出3个特异性蛋白(5064.52 Da,7916.33 Da,7643.32 Da)用于建立肿瘤性PLG的诊断模型.此模型对肿瘤性胆囊息肉样病变诊断的敏感度为100%,特异度为89.4%.结论 SELDI-TOF-MS技术可筛选出肿瘤性PLG的特异性蛋白并建立起肿瘤性PLG的诊断模型.     

肺腺癌患者术后血清蛋白质组构型动态随访研究

目的用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionization time of flightmass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术建立肺腺癌患者血清蛋白质组构型,并筛选出相对特异标记物,随访分析其手术后的动态变化及意义。方法肺腺癌患者71例,均经手术病理证实;正常志愿者71例,按照性别、年龄、吸烟史与71例肺腺癌患者配对。用弱阳离子交换芯片(WCX2)检测各血清标本,筛选肺腺癌相对特异性蛋白质峰。随访分析71例肺腺癌患者手术后3个月、6个月和9个月血清蛋白质组构型变化。结果与正常志愿者比较发现肺腺癌患者有5个显著高表达的潜在标记物,相对分子量分别为4 047.79,4 203.99,4 959.81,5 329.30和7 760.12 Da;肺腺癌患者手术后血清蛋白质组构型变化的个体差异较大,并与患者病理分期密切相关。结论SELDI-TOF-MS蛋白质质谱技术是一种快速、简便易行且高通量的分析方法,能直接筛选出肺腺癌患者血清中相对特异的潜在标记物,且可能具有较好的临床应用前景。     

慢性肾衰竭患者尿液相关蛋白标志物研究

目的 采用表面增强激光解吸离子化-飞行时间-质谱（surface enhanced laser desorption and ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）技术研究慢性肾衰竭（CRF）患者的尿液相关蛋白标志物。 方法 采集150例CRF患者和50例健康人的尿液,采用H4蛋白芯片技术进行尿液蛋白质组学研究;用蛋白芯片阅读器PBSII对芯片进行扫描、分析。 结果 CRF组与健康对照组尿液样本的蛋白质图谱在质荷比（M/Z）1000~20 000范围内检测到141个差异有统计学意义的蛋白峰（均P < 0.01）。经生物信息学分析建立CRF尿液蛋白预测模型,得到M/Z 4649.81和M/Z 9536.92两个差异蛋白峰组成的生物标记物可以将CRF组和健康对照组样本较好地分类,其正确率为96.0%,敏感性为100.0%,特异性为94.7%。CRF组与健康对照组尿液中差异蛋白峰经SwissProt数据库鉴定,可能为17种蛋白质。 结论 筛选出CRF的尿液候选蛋白标志物并建立了CRF尿液蛋白预测模型,通过数据库对尿液候选蛋白标志物进行了鉴定,为CRF的早期临床诊断提供了依据。     

分化型甲状腺癌中TGF-β1和COX-2的表达及意义

目的：探讨TGF-β1及COX-2在分化型甲状腺癌形成中的表达及意义。 方法：用免疫组化法分别检测分化型甲状腺癌及癌旁组织中TGF-β1及COX-2表达及分布。 结果：癌组织和癌旁组织TGF-β1阳性细胞百分数均值分别为（67.20±11.08）%和（15.32±8.03）%，两组间差异有统计学意义（P<0.05）；癌组织和癌旁组织病例阳性率分别为83.75%，0%，两组间差异有统计学意义（P<0.01）；癌组织和癌旁组织COX-2阳性细胞百分数均值分别为（84.17±10.80）%和（11.53±6.70）%，两组间差异有统计学意义（P<0.05）；癌组织和癌旁组织病例阳性率分别为70%，0%，两组间差异有统计学意义（P<0.01）；染色阳性细胞主要表达于甲状腺癌细胞。 结论：TGF-β1及COX-2表达增高与分化型甲状腺癌形成有关，TGF-β1可能通过调节COX-2表达，共同参与分化型甲状腺癌的形成。     

TGIF拮抗TGF-β诱导胃癌细胞的凋亡

目的探讨TGIF对TGF-β诱导胃癌细胞凋亡的影响。方法将pcDNA3.1-TGIF质粒稳定转染胃癌细胞BGC823细胞,然后以流式细胞术分析BGC823细胞凋亡率的改变,以western blot分析TGIF,caspase8和caspase9蛋白含量变化。结果TGF-β1作用后,BGC823细胞凋亡率明显增加,同时伴有caspase9的激活,但不伴caspase8的激活;与对照组相比,pcDNA3.1-TGIF质粒转染细胞对TGF-β诱导的细胞凋亡敏感性明显降低。结论TGF-β通过caspase9途径诱导BGC823细胞的凋亡;TGIF可抑制TGF-β诱导的细胞凋亡。     

全胃切除术后消化道重建术式的再探讨

近年来,全胃切除术在胃癌治疗中的应用日益增多,而全胃切除术后消化道重建始终是胃肠外科医生关注和难以割舍的话题,有关的纷争也一直未曾停息。迄今,文献报告的全胃切除术后消化道重建方式多达70余种,不同术式各有其优缺点,即便如此目前仍未获得一种真正理想的消化道重建术式。争论的核心是如何在保证手术根治效果和安全性的同时,提高患者术后生活质量;而其焦点主要围绕以下三个方面：（1）维持十二指肠生理通道是否必要;（2）是否需要构建食物贮袋;（3）哪种贮袋最为理想。要使这些争议获得较为明确的结论,我们应该正确运用循证医学的研究方法,以严谨的态度,增大研究的样本量,开展多中心前瞻性随机对照研究。     

SELDI-TOF-MS技术在胰腺癌诊断中的应用

目的 应用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)从胰腺癌患者血清中筛选标志蛋白,找出最佳的标志蛋白组合模式作为临床诊断指标.方法 收集29例胰腺癌患者血清标本和57例年龄、性别相匹配的非癌人群血清标本作为对照.采用SELDI技术检测其蛋白质指纹图谱表达,所得到的结果采用Biomarker Wizard及Biomarker Patterns system软件分析,筛选最终可能用于胰腺癌诊断的蛋白标志物并优化组合建立胰腺癌诊断模型.结果 发现胰腺癌患者和对照组血清蛋白质指纹图谱之间有26个差异表达特异性蛋白,分析系统筛选出一组包含4个标志蛋白(5705、4935、5318和3243 Da)建立起一个胰腺癌的诊断模型,对胰腺癌诊断的敏感性为100%,特异性97.4%.盲法验证此模型敏感性88.9%、特异性89.5%.结论 SELDI-TOF-MS技术的特异性及敏感性远远高于目前所采用的某一单独标志物的血清学诊断,其结果对进一步研究胰腺癌的蛋白质组学改变及其临床诊断应用可能具有重要意义.     

Intracorporeal Billroth 1 reconstruction by triangulating stapling technique after laparoscopic distal gastrectomy for gastric cancer

As the laparoscopic operations for gastric cancer have increased, the intracorporeal reconstruction of the digestive tract has received attention because the procedure offers a good visual field regardless of the patient's figure. We performed laparoscopic gastrectomies with regional lymph node dissection on 586 gastric cancer patients between March 1998 and June 2006: 465 distal gastrectomies, 42 proximal gastrectomies, and 79 total gastrectomies. Intracorporeal anastomosis was carried out in 303, 36, and 69 of the above cases, respectively. The intracorporeal Billroth 1 reconstruction was performed in 226 out of the 303 cases who underwent distal gastrectomy and intracorporeal anastomosis. The "triangulating stapling technique" (TST) that uses laparoscopic linear stapling devices was adopted for 196 of these 226 cases; in the remaining 30, circular stapling devices for conventional open gastrectomy (CEEA) were used. In the initial 115 cases of distal gastrectomy, hand-assisted laparoscopic surgery (HALS) was used, and then we shifted to totally laparoscopic distal gastrectomy (TLDG) without HALS. In this paper, we concentrated on the techniques and results of intracorporeal Billroth 1 reconstruction by TST. Reducing postoperative wounds was possible TLDG by TST, compared with HALS and the extracorporeal anastomosis, that is, laparoscopy-assisted distal gastrectomy. Complications from anastomosis resulted in leakage in 2 HALS-TST patients and in 1 TLDG-TST patient, and anastomotic stenosis and bleeding were observed in each 1 case of reconstruction that used CEEA. Intracorporeal Billroth 1 reconstruction by TST is a safe procedure that provides a good visual field regardless of the patient's figure and a feasible technique for reconstruction after laparoscopic distal gastrectomies.     

胃癌中溶血磷脂酸对血管内皮生长因子的调控研究

目的了解溶血磷脂酸（LPA）对胃癌腹膜间皮细胞（PMC）分泌血管内皮生长因子（VEGF）的调控关系。方法体外分离培养PMC并接受LPA的诱导，ELISA检测VEGF的分泌量，随后用LPA的两种拮抗剂PTX和Ki16425分别孵育，观察VEGF水平的变化。结果PMC在受到LPA的刺激，产生的VEGF呈剂量依赖性增长，经PTX或Ki16425的拮抗，LPA诱导PMC生成VEGF的量明显下降。结论LPA诱导VEGF的分泌在胃癌腹腔扩散中起着重要的作用。     

重组超抗原SEB-scFv融合蛋白体外靶向抑制胃癌细胞的研究

目的 观察SEB-scFv融合蛋白对人胃癌细胞的体外抑制作用.方法 噻唑蓝(MTT)法观察SEB-scFv融合蛋白对人胃癌细胞的增殖抑制作用;DNA ladder法观察融合蛋白对胃癌细胞凋亡的影响,电子显微镜法观察融合蛋白处理后胃癌细胞的形态变化;流式细胞仪分析胃癌细胞凋亡率.结果 胃癌细胞的增殖抑制率随SEB-scFv融合蛋白作用浓度的增加而逐渐增大,且对不表达MG7相关抗原的肿瘤细胞不表现杀伤效应.1.0、10 mg/L高浓度融合蛋白组DNA凝胶电泳呈现明显的梯状条带.被融合蛋白活化的免疫效应细胞攻击后的胃癌细胞表现出典型的凋亡特征性变化.融合蛋白0.1、1.0、10 mg/L组细胞G0/G1期前有明显的凋亡峰出现,三者凋亡率分别达到51.62%、54.21%和61.55%.而生理盐水组凋亡率仅为1.44%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SEB-scFv融合蛋白在效应细胞介导下,能对表达MG7相关抗原的胃癌细胞显示出有效的体外生长抑制作用,且在此过程中伴随有胃癌细胞的凋亡.     

胃癌乳斑微转移在胃癌干细胞及前驱细胞研究中的意义

目的：探讨胃癌乳斑微转移模型在胃癌干细胞及前驱细胞研究中的意义。方法：胃癌细胞系MFC,1×10~4细胞数量注射到小鼠腹腔内,72 h后取大网膜,收集乳斑微转移灶内的胃癌细胞团;以不同细胞数量进行NOD/SCID小鼠皮下注射,观察细胞的致瘤能力,移植瘤HE染色,免疫组化分析CEA、CK20表达;免疫细胞化学分析乳斑微转移灶内的胃癌细胞团干细胞相关标志物的表达。结果：皮下注射16周后,微转移灶内的胃癌细胞团组中,皮下注射数量为5×10~2个细胞有1个部位产生肿瘤组织：注射数量为1×10~3个细胞时,5个部位均能产生肿瘤组织。对照组皮下注射为5×10~4个细胞时,仅1个部位出现肿瘤,而注射部位全部出现肿瘤组织,需要5×10~6个以上的细胞数量。两组皮下肿瘤组织分别经HE染色和免疫组化分析CEA、CK20表达,与对照组比较无统计学差异。微转移灶内细胞团高表达CD133和CD44,而CD324的表达则明显下降。结论：胃癌乳斑微转移模型内存在丰富的胃癌于细胞及前驱细胞;大网膜乳斑微环境具有富集胃癌干细胞及前驱细胞的作用。CD133~＋、CD44~＋和CD324~-可能是胃癌干细胞的表面标志物。     

Yes相关蛋白在胃腺癌中的表达及其下调对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的 检测Yes相关蛋白(YAP)在人胃腺癌、胃腺瘤及正常胃黏膜组织中的表达,探讨YAP对胃癌细胞增殖和转移的作用及其分子机制.方法 免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测YAP在78例人胃腺癌、39例人胃腺瘤及46例正常人胃黏膜组织的表达.利用建立慢病毒小发夹RNA(shRNA)靶向YAP基因的胃癌SGC-7901细胞株,Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白表达水平.噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell试验检测YAP下调对胃癌细胞增殖和转移的影响.结果 YAP在69.23％的胃腺癌组织中高表达,与正常胃黏膜(0.33 ±0.15)和胃腺瘤(0.42 ±0.20)比较,YAP mRNA在胃腺癌(1.74±0.46)的表达水平明显增高(P＜0.001).体外实验显示,YAP下调减少PCNA和MMP-2蛋白的表达,并抑制胃癌细胞增殖活性和转移能力.结论 YAP在人胃腺癌组织中高表达,并且YAP下调抑制胃癌细胞的增殖和转移.     

Clinicopathological features of advanced gastric cancer detected by periodic mass screening

We have attempted to clarify the clinicopathologic features of advanced gastric cancers that were detected in periodic mass screening by comparing them with those of cancers detected by an initial mass screening. The macroscopic type of the cancers detected by periodic mass screening included Borrmann's type 3 in 47% of cases but was an unclassifiable type because of its resemblance to early cancer in gross appearance in another 47% of cases. The predominant histologic type of the cancers was found to be poorly differentiated adenocarcinoma with scirrhous growth. From these results, advanced gastric cancers that resemble early cancers of the depressed type, in gross morphology, and which are histologically diagnosed as poorly differentiated scirrhous carcinoma, are assumed to be rapidly growing tumors. Therefore, some of the cases that have these characteristics may, in fact, represent early-phase scirrhous carcinoma, diffuse carcinoma classified as Borrmann's type 4, of the stomach.